白细胞介素8基因多态性与呼吸道合胞病毒诱发的小儿急性支气管炎发生发展的相关性

换气功能障碍，再加上神经元性肺水肿的发生，使得机体无氧代谢导致的乳酸及代谢产物增多，氧合功能下降，OI水平显著降低，可作为重症手足口病患儿呼吸功能评价的重要标志[15-16]。

最后，本研究中显示，BNP联合OI诊断重症手足口病和预测此类患儿预后的AUC明显高于BNP、OI单独诊断和预测的AUC，提示在临床实践操作过程中，可尝试联合检测BNP和OI水平，以评估重症手足口病发生及预后不良的风险。

综上所述，BNP联合OI诊断重症手足口病和评估此类患儿预后不良的发生风险的价值均较高，建议推广使用。

此外，通过本次研究结果可以发现，在手足口病患儿临床治疗过程中应当将控制BNP水平、改善OI水平作为重要的任务，以期能够避免病情加重，获得良好的预后。

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DOI:10.3969/j.issn.1671-8348.2017.01.012.
（收稿日期：2018-11-22）
（责任校对：吴相思）
白细胞介素-8基因多态性与呼吸道合胞病毒
诱发的小儿急性支气管炎发生发展的相关性
周海澜
聊城市第三人民医院儿科　252000
【摘要】　目的　研究白细胞介素-8（IL-8）基因多态性与呼吸道合胞病毒（RSV）诱发的小儿急
性支气管炎发生发展的相关性。

方法　纳入2015年3月至2017年3月本院收治的70例急性支气管炎
患儿作为观察组，另纳入同期70例体检健康者作为对照组。

采用聚合酶链反应-限制性酶切片段长度
多态性（PCR-RFLP）法检测两组研究对象IL-8-251A/T和IL-8 781C/T位点基因多态性。

比较两组研究
对象IL-8基因多态性分布特点，并分析其与RSV诱导的急性支气管炎的关系。

比较出院后观察组不同
IL-8基因单体患儿1年哮喘发生率。

结果　观察组患儿IL-8-251A/T位点基因型频率AT位点占52.86%
（37/70），对照组为34.29%（24/70），两组分布差异有统计学意义（P＜0.05）；两组等位基因频率
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分布及IL-8 781C/T位点基因型频率分布比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

观察组不同严重程度患儿IL-8-251A/T位点基因型频率分布比较，差异有统计学意义（P＜0.05），不同病情患儿等位基因频率和IL-8 781C/T位点基因型频率分布比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

观察组患儿随访1年，IL-8-251A/T AT位点单体基因型患儿哮喘发生率为53.19%，AA位点为21.28%，TT位点25.53%，各位点单体基因型患儿哮喘发生率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。

结论　IL-8基因多态性与RSV诱导的急性支气管炎发生发展密切相关，检测IL-8基因多态性有助于指导临床，防止疾病进展。

【关键词】　IL-8基因多态性；呼吸道合胞病毒；急性支气管炎
DOI：10.3760/cma.j.issn.1007-1245.2019.04.017
The relevance between interleukin-8 gene polymorphism and the development of respiratory syncytial virus-induced acute bronchitis in children
Zhou Hailan
Department of Paediatrics, Liaocheng Third People's Hospital, Liaocheng 252000, China
【Abstract】Objective To study the relevance between interleukin-8 (IL-8) gene polymorphism and the development of respiratory syncytial virus (RSV) induced acute bronchitis in children. Methods 70 children with acute bronchitis admitted in our hospital from March 2015 to March 2017 were selected as the observation group, 70 healthy children during the same period as the control group. The polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) was used to detect the polymorphisms of IL-8-251A/T and IL-8 781C/T loci in the two groups. The distribution of IL-8 gene polymorphism was compared between the two groups, its relationship with RSV induced acute bronchitis was also analyzed. The incidence of asthma in children with different IL-8 genes within 1 year after discharge was observed. Results The genotype frequency AT locus of IL-8-251A/T locus was 52.86% in the observation group, and 34.29% in the control group, there was statistically significant difference in distribution between the two groups (P<0.05). There were no statistically significant differences in allele frequency distribution and genotype frequency distribution of IL-8 781C/T locus between the two groups (P>0.05). There was statistically significant difference in genotype frequency distribution of IL-8-251A/T locus of different severity children in the observation group (P<0.05); there were no statistically significant differences in allele frequencies and genotype frequencies of IL-8 781 C/T locus among children with different conditions (P>0.05). The observation group was followed up for 1 year, the incidence of asthma in children with IL-8-251A/T of AT genotype was 53.19%, that of the AA locus was 21.28%, that of the TT locus was 25.53%, there was statistically significant difference in the incidence of asthma in children with monosomic genotypes at various points (P<0.05). Conclusion The IL-8 gene polymorphism is closely related to the occurrence and development of RSV-induced acute bronchitis. It’s helpful to guide clinical practice and prevent the progress of diseases to detect IL-8 gene polymorphism.
【Key words】 IL-8 gene polymorphism; Respiratory syncytial virus; Acute bronchitis
DOI：10.3760/cma.j.issn.1007-1245.2019.04.017
急性支气管炎是临床小儿常见下呼吸道感染性疾病，部分患儿可诱发肺炎，导致不良预后。

呼吸道合胞病毒（RSV）是非节段性RNA病毒，是急性支气管炎主要的病原体[1]。

RSV可造成气道高反应性和反复的喘息哮喘，有研究还表明RSV感染引起的炎症-免疫反应是疾病进展的重要病理环节，成为小儿哮喘的高危因素[2]，但目前临床对其具体病理机制尚不明确。

白介素-8（IL-8）是趋化因子CXC亚家族典型代表，在急性支气管炎炎症进展中发挥重要作用[3]。

本研究纳入70例急性支气管炎患儿和70例健康儿童作为研究对象，探讨IL-8基因多态性与RSV诱导的急性支气管炎的相关性，为临床干预提供理论依据，报道如下。

1　资料与方法
1.1　一般资料　纳入2015年3月至2017年3月本院收治的70例急性支气管炎患儿作为观察组，其中男37例，女33例；年龄（10.54±3.61）个月；体重指数（BMI）为（20.33±
2.17）kg/m2。

另纳入同期体检健康者作为对照组，其中男38例，女32例；年龄（9.78±
3.55）个月；BMI（20.48±2.31）kg/m2。

两组研究对象性别、年龄及BMI等基本资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2　入选标准　纳入标准：（1）观察组患儿均符合第7版诸福棠实用儿科学有关急性支气管炎诊断标准[4]；（2）对照组经X线和胸部CT检查无明显异常，体检合格；（3）两组研究对象家属均知晓此
560
561
次研究且签署知情同意书。

排除标准：（1）合并有先天性心脏病和慢性肺疾病者；（2）既往有哮喘病史者；（3）早产儿。

1.3　检测方法　（1）聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性（PCR-RFLP）分析法：患儿入院后当天取外周静脉血0.5 ml，用乙二胺四乙酸抗凝后保存。

取150 μl 全血加入离心管中，并加入1.0 ml 红细胞裂解液，混匀后离心，弃上清液，加入PBS 1 ml，洗涤2次，取沉淀物5% Chelex -100，150 μl，混匀，再加热10 min，冷却，离心取上清液，-20℃保存。

（2）PCR 引物设计、PCR 扩增体系及酶切反应体系具体参数见表1，包括-251A/T 和781C/T 两个位点。

（3）酶切产物琼脂糖凝胶分析：取5 μl 酶切产物，加入适量载样缓冲液和琼脂糖凝胶，混匀后，连接电源，采用凝胶成像系统记录检测结果。

1.4　观察指标　记录并比较观察组和对照组两组研究对象IL-8-251A/T 和IL-8 781C/T 位点各单体基因型和等位基因分布情况，根据毛细支气管炎诊断、治疗与预防专家共识标准[5]，将观察组患儿分为轻度（33例）、中度（16例）及重度（21例）三组，比较三组患儿IL-8-251A/T 和IL-8 781C/T 位点各单体基因型和等位基因分布情况。

患儿出院后进入随访，每2周电话联系1次，排除失访患儿，记录患儿哮喘发生率，哮喘诊断标准按儿童哮喘国际共识标准执行[6]，比较IL-8-251A/T 和IL-8 781C/T 不同位点哮喘发生率。

1.5　统计学方法　选用SPSS17.0软件处理数据，计数资料组间比较行χ2检验，P ＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果
2.1　两组各位点基因型和等位基因频率分布　观察组患儿IL-8-251A/T 位点基因型频率AT 位点占52.86%（37/70），对照组为34.29%（24/70），两组间比较，差异有统计学意义（P ＜0.05）；两组等位基因频率分布及IL-8 781C/T 位点基因型频率分布比较，差异无统计学意义（P ＞0.05），见表2。

2.2　不同病情患儿各位点基因型和等位基因频率分布　观察组不同严重程度患儿IL-8-251A/T 位点基因型频率分布比较，差异有统计学意义（P ＜0.05），不同病情患儿等位基因频率和IL-8 781C/T 位点基因型频率分布比较，差异无统计学意义（P ＞0.05），见表3。

2.3　IL-8-251A/T 和IL-8 781C/T 不同单体患儿哮喘发生率比较　观察组患儿出院后随访1年，失访3例，47例发生哮喘，IL-8-251A/T 位点中AT 位点占5
3.19%（25/47），AA 位点为21.28%（10/47），TT 位点为25.53%（12/47），各单体患儿哮喘发生率比较，差异有统计学意义（P ＜0.05）。

IL-8 781C/T 位点基因型和等位基因频率各单体患儿哮喘发生率比较，差异无统计学意义（P ＞0.05），见表4。

表1　两引物位点参数信息
引物位点 Primer F Primer R 扩增片段 突变碱基　产物长度
IL-8-251位点 TGATTGGCTGGCTTATCTTCA GAGGAAATTCCACGATTTGC TGATTGGCTGGCTTATCTTCACCATCATGATAGCATCTGTAATTAACTGAAAAATAA A →T 354 bp IL-8 781位点 CTCTAACTCTTTATATAGGAAT TGATTTTATCAACAGGCACAGC CACAAGAGGGACTCATTCCAACTCATATCTTGTGAAAAGGTTCCCAATGCCCAGC C →T 200 bp
表3　不同病情患儿各位点基因型和等位基因频率分布（n ）
组别
基因型频率 等位基因频率
IL-8-251A/T 位点 IL-8 781C/T 位点 IL-8-251A/T 位点 IL-8 781C/T 位点 TT AA AT CC CT TT A T T C 轻度组（n ＝33） 4 5 24 10 12 11 10 23 15 18中度组（n ＝16） 6 4 6 5 7 4 9 7 7 9重度组（n ＝21） 8 6 7 11 6 4 8 13 4 17χ2值 10.383 3.471 3.065 4.221P 值
0.034 0.482 0.216 0.121
表2　两组各位点基因型和等位基因频率分布比较（n ）
组别 基因型频率 等位基因频率
IL-8-251A/T 位点 IL-8 781C/T 位点 IL-8-251A/T 位点 IL-8 781C/T 位点 TT AA AT CC CT TT A T T C 观察组（n ＝70） 18 15 37 26 25 19 27 43 26 44对照组（n ＝70） 32 14 24 29 21 20 19 51 21 49χ2值 6.725 0.537 2.072 0.801P 值
0.035 0.764 0.150 0.371
3　讨论
RSV诱导的急性支气管炎症以中性粒细胞浸润为主，中性粒细胞局部浸润、聚集及增殖直接导致炎症进展，造成患儿呼吸道症状的发生[7]。

IL-8是小儿急性支气管炎进展中重要的炎性因子，既往多项报道显示在RSV诱导的急性支气管炎患儿肺泡液和血清IL-8水平异常增加[8-9]。

基因多态性是指个体间基因核苷酸序列的差异性，IL-8基因定位于染色体4q12-q21，IL-8-251A/T和IL-8 781C/T分别位于启动子和内含子，其位点基因型的不同均影响IL-8的表达[10]。

研究还报道IL-8-251A/T与IL-8 781C/T基因多态性与急性胰腺炎、肠易激综合征及肺癌等多种疾病相关[11-13]，提示IL-8可能影响机体疾病的遗传易感性。

本研究观察IL-8-251A/T和IL-8 781C/T两个位点基因多态性在急性支气管炎患儿中的表达情况，发现观察组与对照组IL-8-251A/T基因型频率分布差异有统计学意义，提示IL-8-251A/T可能与RSV 诱导的急性支气管炎易感性有关，进一步随访观察发现IL-8-251A/T位点AT单体型患儿1年哮喘发生率最高，与其他单体患儿相比，差异有统计学意义，提示IL-8基因多态性可能影响患儿病情康复和预后，这与Pinto LA等[14]报道一致。

本研究还显示不同病情患儿IL-8-251A/T基因型频率分布差异有统计学意义，提示IL-8基因多态性可能与RSV诱导的急性支气管炎病情严重程度相关，这可为指导RSV支气管炎高危患儿的临床干预提供理论依据，进而阻断RSV诱导急性支气管炎的进展过程。

但本研究还显示IL-8-251位点与IL-8 781C/T 位点等位基因频率在不同病情患儿间及健康幼儿与患儿间分布差异均无统计学意义，这与Xu H等[15]报道相左，可能与样本量小及患儿地域差异有关。

对此，为排除假关联可能，有待于今后扩大样本量进一步验证。

综上，IL-8基因多态性与RSV诱导的急性支气管炎患儿的发生及病情严重程度有关，检测IL-8基因多态性有助于指导临床，防止RSV诱导的小儿急性支气管炎的发生。

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（收稿日期：2018-10-30）
（责任校对：吴相思）
表4　IL-8-251A/T和IL-8 781C/T不同单体患儿哮喘发生率比较（n）组别 基因型频率 等位基因频率
IL-8-251A/T位点 IL-8 781C/T位点 IL-8-251A/T位点 IL-8 781C/T位点
TT AA AT CC CT TT A T T C 哮喘组（n＝47） 12 10 25 18 10 19 28 19 17 30无哮喘组（n＝20） 12 5 3 9 6 5 8 12 6 14χ2值 9.637 1.535 2.162 0.237 P值 0.008 0.464 0.141 0.626
562。