酶解辅助提取伊贝母总生物碱的方法与制作流程

本技术涉及一种酶解辅助提取伊贝母中总生物碱的方法，该方法将伊贝母干燥粉碎过筛，称取伊贝母粉末，加入pH=36的酸水，再加入纤维素酶，水浴搅拌进行反应，过滤，收集提取液，将经酶解的伊贝母置于室温下，用乙醇或酸水提取，收集、合并提取液，减压浓缩即得伊贝母总生物碱。本技术将纤维素酶应用于伊贝母生物碱的提取中，在优选的常规提取工艺前加上酶解步骤，以期达到提高提取率，并为生物酶解技术在中药有效成分提取方面的应用提供依据。本技术提取率高，工艺简单，易于工业化生产，是提取生物碱的理想方法之一。

技术要求

1.一种酶解辅助提取伊贝母总生物碱的方法，其特征在于按下列步骤进行：

a．将伊贝母粉碎，过60-80目筛，得伊贝母药材粉末；

b．将步骤a所得伊贝母粉末按料液比1:7-1:10 加入pH=3-6的酸水，再加入纤维素酶，于水浴25-50℃中酶解1-4h，过滤，收集提取液，其中纤维素酶的加入量为伊贝母药材重量的0.5-2%；

c．将步骤b经酶解后的伊贝母置于室温下，用6-30倍的体积浓度0.1-1%的酸水提取2-4

次，每次0.5-3h，收集，合并提取液，减压浓缩即得伊贝母总生物碱；

或将步骤b经酶解后的伊贝母按料液比为1:10-40，用体积浓度为65-95%的乙醇加热回流提取，提取温度50-80℃，提取2-4次，每次0.5-3h，收集，合并提取液，减压浓缩即得伊贝

母总生物碱。

技术说明书

一种酶解辅助提取伊贝母总生物碱的方法

技术领域

本技术涉及一种酶法与传统方法相结合，从伊贝母鳞茎中高效提取生物碱的方法，该提

取物可作为治疗或预防咳嗽相关的药物制备原料，属于医药技术领域。

背景技术

伊贝母是《中国药典》收载的常用药材，为百合科植物伊犁贝母Fritillariapallidiflora Schrenk或新疆贝母F.walujewii的干燥鳞茎。具有清热润肺、化痰止咳的功效，在临床应用方面与药材川贝母相媲美，具有“止咳圣药”之称，是中医处方和中成药生产常用的药材。其野生品种唯独生长在中国新疆，目前大规模种植伊贝母产业己成为拉动新疆当地农牧民收入的重要途径，为新疆特色药材。

利用酶制剂或酶工程法转化天然产物中的有效成份的研究是在20世纪90年代兴起的新技术。目前,酶法在中药转化中的应用主要是纤维素酶的应用。大部分中药材的细胞壁是由纤维素构成的,植物的有效成分往往包裹在细胞壁内，天然产物中植物药的有效成分存在于细胞质和细胞核内,极少数存在于细胞间隙中。新鲜药材经干燥后细胞萎缩,同时细胞液泡中的药用成分呈结晶或无定性状态沉积在细胞壁内,甚至形成空隙,细胞质膜的半透性丧失,提取这些有效成分时,多用溶剂法浸泡药材。在液体静压和毛细管的作用下,使溶剂透过药材空隙进入细胞组织内。此时,溶剂通过扩散、渗透作用透过细胞壁进入细胞组织内部,溶解有效成分,造成细胞内外的浓度差。有效成分接着随溶剂扩散至溶剂主体,从而达到提取目的。而在整个过程中,植物细胞壁不溶于大部分溶剂,像屏障一样阻碍了细胞壁内有效成分的溶出时间和溶出量。因此,在提取过程中,降解细胞组织尤其是不溶性的细胞壁是非常有意义的。

近年来,纤维素酶在各个领域的应用极为广泛,在中草药提取方面的工业化应用也已进入初开发阶段,国内已民用工业学者对其进行了初步探索。细胞壁的不溶性主要是由其结构决定的。细胞壁是原生质体生命活动的产物,是植物细胞周围没有生命的部分,具有一定的坚韧性。由于大部分天然产物的细胞壁都是由纤维素类物质构成的,用传统的热水、酸、碱、有机溶剂浸提法对其有效成分进行提取,受细胞壁主要成分纤维素的阻碍,提取效率较低。纤维素酶可以破坏尽葡萄糖链,改变细胞壁的通透性,以利于有效成分的溶出,提高药物成分的提取率。

技术内容

本技术目的在于，提供一种酶解辅助提取伊贝母总生物碱的方法，该方法将伊贝母干燥粉碎过筛，称取伊贝母粉末，加入pH＝3-6的酸水，再加入纤维素酶，水浴搅拌进行反应，过滤，收集提取液，将经酶解的伊贝母置于室温下，用乙醇或酸水提取，收集、合并提取液，减压浓缩即得伊贝母总生物碱。本技术将纤维素酶应用于伊贝母生物碱的提取中，在优选的常规提取工艺前加上酶解步骤，以期达到提高提取率，并为生物酶解技术在中药有效成分提取方面的应用提供依据。本技术提取率高，工艺简单，易于工业化生产，是提取生物碱的理想方法之一。

本技术所述的一种酶解辅助提取伊贝母总生物碱的方法，按下列步骤进行：

a.将伊贝母粉碎，过60-80目筛，得伊贝母药材粉末；

b.将步骤a所得伊贝母粉末按料液比1:7-1:10加入pH＝3-6的酸水，再加入纤维素酶，于水浴25-50℃中酶解1-4h，过滤，收集提取液，其中纤维素酶的加入量为伊贝母药材重量的0.5-2％；

c.将步骤b经酶解后的伊贝母置于室温下，用6-30倍的体积浓度0.1-1％的酸水提取2-4次，每次0.5-3h，收集，合并提取液，减压浓缩即得伊贝母总生物碱；

或将步骤b经酶解后的伊贝母按料液比为1:10-40用体积浓度为65-95％的乙醇加热回流提取，提取温度50-80℃，提取2-4次，每次0.5-3h，收集，合并提取液，减压浓缩即得伊贝母总生物碱。

本技术所述的一种酶解辅助提取伊贝母总生物碱的方法，该方法将纤维素酶应用于伊贝母生物碱的提取中，在优选的常规提取工艺前加上酶解步骤，将经酶解后的伊贝母用0.1-1％(v/v)的酸水提取时，出膏率为21.1-29.4％，含总生物碱以西贝素计为0.7-5.2％；或将酶解后的伊贝母用乙醇进行加热回流提取时，出膏率为23-30.2％，含总生物碱以西贝素计为0.5-5.4％。其提取率较无酶解时提高10％-50％，此为生物酶解技术在中药有效成分提取方面的应用提供依据。本技术提取率高，工艺简单，易于工业化生产，是提取生物碱的理想方法之一。

具体实施方式

实施例1

a.将5g伊贝母粉碎，过60目筛，得伊贝母药材粉末；

b.将步骤a所得伊贝母粉末按料液比1:7加入pH＝4的酸水，再加入纤维素酶，纤维素酶用量为伊贝母药材重量的2％，于水浴温度40℃中酶解3h后，过滤，收集提取液；

c.将步骤b经酶解后的伊贝母置于室温下，用10倍量的体积浓度0.5％的酸水，提取3次，每次2.5h，收集、合并提取液，减压浓缩及得伊贝母总生物碱，其出膏率为24.4％，含总生物碱以西贝素计为4.8％。

实施例2

a.将5g伊贝母粉碎，过80目筛，得伊贝母药材粉末；

b.将步骤a所得伊贝母粉末按料液比加入1:10pH＝5的酸水，再加入纤维素酶，纤维素酶用量为伊贝母药材重量的2％，于水浴温度25℃中酶解2h后，过滤，收集提取液；

c.将步骤b经酶解后的伊贝母按料液比为1:10，用体积浓度85％的乙醇进行加热回流提取，提取温度70℃，提取3次，每次3h，收集、合并提取液，减压浓缩即得伊贝母总生物碱，其出膏率为29.4％，含总生物碱以西贝素计为4.4％。

实施例3

a.将5g伊贝母粉碎，过60目筛，得伊贝母药材粉末；

b.将步骤b所得伊贝母粉末按料液比1:8加入pH＝3的酸水，再加入纤维素酶，纤维素酶的加入量为伊贝母药材重量的0.5％，于水浴温度25℃中酶解1h，过滤，收集提取液；

c.将步骤b经酶解后的伊贝母置于室温下，用6倍的体积浓度0.1的酸水提取2次，每次

0.5h，收集，合并提取液，减压浓缩即得伊贝母总生物碱；出膏率为21.1％，含总生物碱以西贝素计为0.7％。

实施例4

a.将5g伊贝母粉碎，过80目筛，得伊贝母药材粉末；