《尿液蛋白质检查》幻灯片
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定义：微量白蛋白是指尿中白蛋白含量超过 安康人水平，但常规尿蛋白试验为阴性的低 浓度白蛋白。 检测方法：染料结合法、放射免疫分析、 酶
联免疫吸附、免疫比浊分析、胶体金纸片
报告方式：定时留尿法〔μg/ml ; mg/24h)
晨尿法(mg/L)
随机留尿法(mg/mmol
Cr ;mg/g Cr)
国际上以尿白蛋白排泄率>20 mg/L 或尿总
肌红蛋白能溶于0.8饱和度的硫酸铵溶液 中 ➢ 免疫法：利用单克隆抗体 ELISA、
3.hemosiderin 当发生血管内溶血时，大局部血
红蛋白随尿排出，其中一局部血红蛋白 被肾小管上皮细胞再吸收后在肾小管上 检皮测细方法胞：内Pr分uss解ian形反响成，血当尿铁中黄含有素铁，血黄再素随时，细其胞 中脱高落铁离至子尿与亚中铁排氰化出钾。作用，在酸性环境下，产生蓝
色的亚铁氰化钾沉淀。
本卷须知：1.防止铁污染；2.清晨第一次尿阳性率较高
临床意义：血管内溶血、行进性血红蛋白尿。
.porphyrin
δ-氨基酮戊酸、卟胆原
卟啉
粪卟啉
啉+Fe
血红素
尿 原卟
卟啉尿是指尿中排出过多的卟啉或者其前 体
测定方法：酸萃取后，紫外线进展检测
临床意义：先天性卟啉病、肝性卟啉病
五、Tamm—Horsfall protein
2.α-葡萄糖苷酶〔 α-glucosdiase, α-GLU〕
α-GLU主要存在于肾小管上皮细胞刷状缘，在血 清中的含量极低，且分子量大〔9万〕，不易通过肾小 球，因而尿中的α-GLU主要来自肾小管上皮细胞。
测定：用麦芽糖做底物，经α-GLU的水解作用生 成葡萄糖，再用葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖的生成率。
TH蛋白由Henle袢升支与远曲小管的上皮细胞的高尔 基复合体产生，是一种肾特异性蛋白质。是构成管型 的一种重要蛋白。 检测方法：酶联免疫吸附法、放射免疫法 临床意义：协助诊断上尿路疾患
有助于泌尿系统结石形成机制的研究。
六、尿液酶测定
尿液酶的来源： 血液的酶：淀粉酶、溶菌酶 肾实质的酶：肾小管刷状缘〔γ-GT、AAP、LAP、 ALP、α-GLU〕、溶菌体〔NAG、ACP、β-葡萄糖醛 酸苷酶〕、胞浆〔LDH〕及线粒体〔AST〕 尿路及生殖系统的酶：前列腺〔ACP、NAG〕、精液 〔LDH、hyaluronic acid〕、肿瘤细胞
❖蛋白电泳时可在α2至γ球蛋白区带间的某个部位出
现M区带。
检测方法： 对甲苯磺酸沉淀筛选实验：灵敏度3mg/L 热沉淀法验证 乙酸纤维素膜电泳或者聚丙烯酰胺凝胶电泳：M带 免疫固定电泳：区带电泳别离蛋白后，立即将浸有 特异抗L链血清的薄膜条直接放到预计出现异常蛋白 带的位置上，使之产生抗原抗体的复合物反响。
临床意义：肾小管损伤的敏感指标
3.谷氨酰转移酶〔γ-glutamyl transferase，γGT〕
γ-GT广泛存在于人体各组织中，以肾、肝、胰等 组织含量最高。
尿中γ-GT浓度较高，原尿无需预先浓缩。
用γ-谷氨酰对硝基苯胺做底物，测定游历的对硝基 苯胺量。
临床意义：
γ-GT常作为药物性肾损害的诊断指标。
尿液酶测定时尿液标本的处理方法：
尿液通常为弱酸性，且蛋白质浓度较低，不利 于尿酶活力的保存，因此必须及时测定和处理。
大局部尿酶活性比血浆酶活性低，在测定时适 当加大标本用量或延长酶作用时间。
尿液中含有较高浓度的低分子物质，如尿素、 尿酸、肌酐、硫酸盐、磷酸盐等，他们可能是 某些酶的抑制剂，因此必须对尿液标本进展预 处理：超滤法、透析法、凝胶过滤法
临床意义：肾小管疾病、血清β2-M异常增高
四、尿液血红蛋白、肌红蛋白及其代谢产物检查
1.hemoglobin
正常人血浆中游离血红蛋白与珠蛋白结合，以复 合物的形式运转至单核-巨噬细胞系统被代谢， 不能从尿液中排出。
疾病时尿液中血红蛋白有两个来源：1.发生血管 内溶血，超过珠蛋白的结合能力，游离血红蛋 白从尿液中排出。2.尿路〔尤其是上尿路〕出 血，红细胞在低渗或者高渗的环境下破坏逸出 的血红蛋白。
《尿液蛋白质检查》幻灯 片
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一、尿液微量白蛋白的测定
安康人的尿液白蛋白一般小于20mg/L,大于 30mg/L时即提示异常。
蛋
白>30mg/24h作为尿微量白蛋白的临界值。
临床意义： ❖尿微量白蛋白在糖尿病肾病中的应用 ❖尿微量白蛋白在心血管疾病中的应用 ❖尿微量白蛋白在炎症方面的应用 ❖其他
二、 Bence-Jones protein：
❖实质是免疫球蛋白轻链或其聚合物，单聚体分子量 为2.3万。
❖凝溶蛋白：pH4.5~5.5，56℃条件加热出现白色 混浊及凝固，100 ℃煮沸以后混浊消失或明显减退， 再冷却时又可重新凝固。
1.N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶
(N-acetyl- β –D-glucosaminidase, NAG〕
NAG是一种位于溶酶体内的酸性水解酶， 存在于所有组织中，以前列腺和肾近球肾小管 溶酶体含量最高。
临床应用：
各种肾脏疾病：急慢性肾功能不全、肾病综合 症
肾移植排斥反响：早期诊断
药物性肾损害：
γ-GT在急性肾炎、肾盂肾炎、肾结石时升高
γ-GT在慢性肾衰、肾癌时降低。
免疫扩散实验：用特异的L链血清进展免疫扩散实验。
临床意义：多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症
三、β2-microglobulin
性质：一种低分子量的蛋白质〔1.18万〕，是 细胞膜上完整组织相溶性抗原HLA的一局部。
检测方法：放射免疫分析〔RIA〕、酶免疫分 析〔EIA〕
参考值: 血β2-M <3.0mg/L 尿β2- M<0.2 mg/L
检测方法：
试纸法：利用血红蛋白中亚铁血红素具有 类过氧化物酶作用，在邻联甲苯胺等供 氢体存在下，使过氧化物复原为水，而
临床邻意联义甲：苯胺被氧化成有色物质。
➢免血疫管内测溶定血方法：利用抗人血红蛋白单克隆 ➢ 泌抗尿体道出血
2.myoglobin
肌红蛋白是横纹肌、心肌细胞内的一种含亚 铁血红素的蛋白质，分子量小，易通过肾小球。 测定方法： ➢ 纸片法：原理与血红蛋白测定类似。
联免疫吸附、免疫比浊分析、胶体金纸片
报告方式：定时留尿法〔μg/ml ; mg/24h)
晨尿法(mg/L)
随机留尿法(mg/mmol
Cr ;mg/g Cr)
国际上以尿白蛋白排泄率>20 mg/L 或尿总
肌红蛋白能溶于0.8饱和度的硫酸铵溶液 中 ➢ 免疫法：利用单克隆抗体 ELISA、
3.hemosiderin 当发生血管内溶血时，大局部血
红蛋白随尿排出，其中一局部血红蛋白 被肾小管上皮细胞再吸收后在肾小管上 检皮测细方法胞：内Pr分uss解ian形反响成，血当尿铁中黄含有素铁，血黄再素随时，细其胞 中脱高落铁离至子尿与亚中铁排氰化出钾。作用，在酸性环境下，产生蓝
色的亚铁氰化钾沉淀。
本卷须知：1.防止铁污染；2.清晨第一次尿阳性率较高
临床意义：血管内溶血、行进性血红蛋白尿。
.porphyrin
δ-氨基酮戊酸、卟胆原
卟啉
粪卟啉
啉+Fe
血红素
尿 原卟
卟啉尿是指尿中排出过多的卟啉或者其前 体
测定方法：酸萃取后，紫外线进展检测
临床意义：先天性卟啉病、肝性卟啉病
五、Tamm—Horsfall protein
2.α-葡萄糖苷酶〔 α-glucosdiase, α-GLU〕
α-GLU主要存在于肾小管上皮细胞刷状缘，在血 清中的含量极低，且分子量大〔9万〕，不易通过肾小 球，因而尿中的α-GLU主要来自肾小管上皮细胞。
测定：用麦芽糖做底物，经α-GLU的水解作用生 成葡萄糖，再用葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖的生成率。
TH蛋白由Henle袢升支与远曲小管的上皮细胞的高尔 基复合体产生，是一种肾特异性蛋白质。是构成管型 的一种重要蛋白。 检测方法：酶联免疫吸附法、放射免疫法 临床意义：协助诊断上尿路疾患
有助于泌尿系统结石形成机制的研究。
六、尿液酶测定
尿液酶的来源： 血液的酶：淀粉酶、溶菌酶 肾实质的酶：肾小管刷状缘〔γ-GT、AAP、LAP、 ALP、α-GLU〕、溶菌体〔NAG、ACP、β-葡萄糖醛 酸苷酶〕、胞浆〔LDH〕及线粒体〔AST〕 尿路及生殖系统的酶：前列腺〔ACP、NAG〕、精液 〔LDH、hyaluronic acid〕、肿瘤细胞
❖蛋白电泳时可在α2至γ球蛋白区带间的某个部位出
现M区带。
检测方法： 对甲苯磺酸沉淀筛选实验：灵敏度3mg/L 热沉淀法验证 乙酸纤维素膜电泳或者聚丙烯酰胺凝胶电泳：M带 免疫固定电泳：区带电泳别离蛋白后，立即将浸有 特异抗L链血清的薄膜条直接放到预计出现异常蛋白 带的位置上，使之产生抗原抗体的复合物反响。
临床意义：肾小管损伤的敏感指标
3.谷氨酰转移酶〔γ-glutamyl transferase，γGT〕
γ-GT广泛存在于人体各组织中，以肾、肝、胰等 组织含量最高。
尿中γ-GT浓度较高，原尿无需预先浓缩。
用γ-谷氨酰对硝基苯胺做底物，测定游历的对硝基 苯胺量。
临床意义：
γ-GT常作为药物性肾损害的诊断指标。
尿液酶测定时尿液标本的处理方法：
尿液通常为弱酸性，且蛋白质浓度较低，不利 于尿酶活力的保存，因此必须及时测定和处理。
大局部尿酶活性比血浆酶活性低，在测定时适 当加大标本用量或延长酶作用时间。
尿液中含有较高浓度的低分子物质，如尿素、 尿酸、肌酐、硫酸盐、磷酸盐等，他们可能是 某些酶的抑制剂，因此必须对尿液标本进展预 处理：超滤法、透析法、凝胶过滤法
临床意义：肾小管疾病、血清β2-M异常增高
四、尿液血红蛋白、肌红蛋白及其代谢产物检查
1.hemoglobin
正常人血浆中游离血红蛋白与珠蛋白结合，以复 合物的形式运转至单核-巨噬细胞系统被代谢， 不能从尿液中排出。
疾病时尿液中血红蛋白有两个来源：1.发生血管 内溶血，超过珠蛋白的结合能力，游离血红蛋 白从尿液中排出。2.尿路〔尤其是上尿路〕出 血，红细胞在低渗或者高渗的环境下破坏逸出 的血红蛋白。
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一、尿液微量白蛋白的测定
安康人的尿液白蛋白一般小于20mg/L,大于 30mg/L时即提示异常。
蛋
白>30mg/24h作为尿微量白蛋白的临界值。
临床意义： ❖尿微量白蛋白在糖尿病肾病中的应用 ❖尿微量白蛋白在心血管疾病中的应用 ❖尿微量白蛋白在炎症方面的应用 ❖其他
二、 Bence-Jones protein：
❖实质是免疫球蛋白轻链或其聚合物，单聚体分子量 为2.3万。
❖凝溶蛋白：pH4.5~5.5，56℃条件加热出现白色 混浊及凝固，100 ℃煮沸以后混浊消失或明显减退， 再冷却时又可重新凝固。
1.N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶
(N-acetyl- β –D-glucosaminidase, NAG〕
NAG是一种位于溶酶体内的酸性水解酶， 存在于所有组织中，以前列腺和肾近球肾小管 溶酶体含量最高。
临床应用：
各种肾脏疾病：急慢性肾功能不全、肾病综合 症
肾移植排斥反响：早期诊断
药物性肾损害：
γ-GT在急性肾炎、肾盂肾炎、肾结石时升高
γ-GT在慢性肾衰、肾癌时降低。
免疫扩散实验：用特异的L链血清进展免疫扩散实验。
临床意义：多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症
三、β2-microglobulin
性质：一种低分子量的蛋白质〔1.18万〕，是 细胞膜上完整组织相溶性抗原HLA的一局部。
检测方法：放射免疫分析〔RIA〕、酶免疫分 析〔EIA〕
参考值: 血β2-M <3.0mg/L 尿β2- M<0.2 mg/L
检测方法：
试纸法：利用血红蛋白中亚铁血红素具有 类过氧化物酶作用，在邻联甲苯胺等供 氢体存在下，使过氧化物复原为水，而
临床邻意联义甲：苯胺被氧化成有色物质。
➢免血疫管内测溶定血方法：利用抗人血红蛋白单克隆 ➢ 泌抗尿体道出血
2.myoglobin
肌红蛋白是横纹肌、心肌细胞内的一种含亚 铁血红素的蛋白质，分子量小，易通过肾小球。 测定方法： ➢ 纸片法：原理与血红蛋白测定类似。