IMViC

歐普氏試驗(VP test):
• 自營養瓊脂斜面上釣菌接種於甲基紅-歐普氏
培養 基中,並置於35 ℃培養箱培養48土2小時後,取1ml 培養液至另一已滅菌之試管中,加入0.6ml歐普氏試 劑之溶液A及 0.2ml歐普氏試劑之溶液B後,再加入 少許肌酸,輕輕搖勻,經2~4小時後觀察結果,若呈現 粉紅色,則為正反應(+)否則為負反應(-)。大腸桿菌 為負反應。
試驗方法

Indole試驗(lndole test):
• 自營養瓊脂斜面上釣菌接種於胰化蛋白凍肉羹
中,並置於 35℃ 培養箱培養24士2小時後加入 0.2ml 柯瓦克氏試劑,輕輕搖動後靜置10分鐘, 若上層呈現紅色,則為正反應(+);否則為負反應()。大腸桿菌通常為正反應,有時亦呈負反應
試驗方法
試驗方法

甲基紅試驗(MP test):
•
將剩餘之甲基紅-歐普氏培養液再培養48 ± 2小 時後,加入0.3ml甲基紅指示劑,輕輕搖勻,若仍為 紅色,則為正反應(+);否則為負反應(-)大腸桿菌 Citrate utilization test):
• 自營養瓊脂斜面上釣菌接種於柯塞爾氏檸檬酸

在醱酵的過程中可能產生不同的終產物， 此乃與受質、微生物種類與培養狀況有 關。有時有些菌利用glucose時會產生大 量的酸，但有些菌則會產生中性物質 acetoin。因此為區分此種現象，使用 MRVP test來進行測試。
Voges-Proskauer

此種測試是利用含glucose的培養液培養， 當 菌產生大量的酸時便會使得加入的甲 基紅仍維 持紅色，若產生中性物質，甲 基紅則由紅轉 黃，產生acetoin可利用VP test來檢測，藉由 加入potassium hydroxide和-naphthol來區別，若有 acetoin存在，會使得培養液上層轉變成 紅 色 ， 若 無 則 是 淡 棕 色
判 定


大腸桿菌陽性者應符合下列之試驗結果 革蘭氏染色陰性，無芽胞桿菌者 乳糖產氣試驗為正反應者
判 定
吲哚 IMViC 乳糖產氣 試驗為正 反應者 ＋ 甲基紅 ＋ 歐普氏 檸檬酸鹽
＋
＋
－
－
實驗結果
Indole production test
Methyl red test
實驗結果
試 劑

甲基紅指示劑:
全量為500ml
• 取0.1g甲基紅液於300ml之95%乙醇中,然蒸餾水至
試 劑

歐普氏試劑(Voges-Proskauer reagent,簡 稱 VP reagent):
• 溶液A:取5gα-奈酚溶於100ml無水乙醇中。 • 溶液B:取40g氫氧化鉀溶於蒸餾水中,使成100ml
Indole 反應


當Indole遇到科瓦克Kovac）試劑時即生成紅色，因此 可以此方式測得。 此檢驗的特點是可以分辨出與E.coli相似之菌。
Indole 反應
甲基紅(Methyl red)反應

此種測試是利用含glucose的培養液培養，當菌產生大 量的酸時便會使得加入的甲基紅仍維持紅色，若產生 中性物質，甲基紅則由紅轉黃
3g
加熱沸騰溶解後,分裝於試管或三角瓶內,以 121℃滅菌15分鏤,最後pH值為6.8±0.2;分裝於試 管者,作成斜面培養基。
培養基
胰化蛋白腖肉羹(Tryptone of Tryptophane Broth)
胰化蛋白腖 10g
蒸餾水
1000m1
溶解後,分取5m1住人試管內,以121℃滅菌15分鐘, 最後pH值為6.9士0.2
Voges-Proskauer test
Citrate test
培養基
甲基紅-歐普式培養基(MR-VP Medium) 胰化蛋白腖
葡萄糖(Dextrose) 磷酸氫二鉀(K3HPO4) 蒸餾水
7g
5g 5g 1000m1
溶解後,分取5ml注入試管內,以121℃滅菌15分鐘, 最後pH值為6.9士0.2
培養基
柯塞爾氏檸檬酸鹽肉羹(Koser's Citrate Broth)
IMViC試驗
食品檢驗分析乙級
IMViC試驗


腸桿菌中主要組別之鑑定，可依其對特異受質之生化 性質與酵素反應而定定 I:指Indole反應 M:指Methyl red反應 Vi:指Voges-Proskauer反應 C:即Citrare test
Indole 反應

E. coli 具有可將胺基酸的一種－色氨酸水解為 indole 及焦葡萄酸的能力，因為其具 有色氨酸分解。
磷酸氫銨鈉(NaNH4HPO4.4H2O) 1.5g 磷酸氫二鉀(K3HPO4) 1g 硫酸鎂(MgSO4.7H20) 0.2g 檸檬酸鈉(Na3C6H507.2H20) 3g 蒸餾水 1000m1 溶解後,分取10ml注入試管內,以121℃滅菌15分 鐘,最後pH值為6.7士0.2。
試 劑

柯瓦克氏試劑(Kovacs reagent):取5g對-二甲 胺基苯甲醛溶於75ml戊醇或異戊醇中,再徐徐 加入25ml濃鹽酸,混合均勻後應呈黃色,並須保 存於4℃冰箱中
Voges-Proskauer
Voges-Proskauer
Citrare test


有些細菌，能利用檸檬酸鹽為其生長之碳源，結果使 培養基之pH升高，指示劑變色 陰性反應為：表示無菌體生長

陽性反應為：
Citrare test
Citrare test
培養基
•營養瓊脂(Nutrient Agar) •牛肉抽出物(Beef extract) •蛋白腖(Peptone) 5g •洋菜(Agar) 15g •蒸餾水 1000ml
甲基紅(Methyl red)反應
Voges-Proskauer



當細菌利用葡萄糖產生酸性產物時若加入 甲基紅指示劑則有紅色生成。如果產物 為中 性的acetoin(acetyl methyl-carbinol) 時，加入KOH和a -naphthol時則呈粉紅 色
Voges-Proskauer
鹽肉羹中,並置於35℃培養箱培養96± 2小時後, 若呈現混濁狀,則為正反應(+);若仍持維原澄清 狀,則為負反應(-)大腸桿菌為負反應。
乳酸產氣試驗

自營養瓊脂斜面上釣菌接種於硫酸月桂酸胰 化蛋白肉羹中，並置於35℃培養箱培養48± 2 小時內，若產生氣體者，則為正反應(+)；若 未產生氣體者，則為負反應(-)。大腸桿菌為正 反應