杜仲雄花中抗皮肤光老化活性成分分析

第二章杜仲雄花抗皮肤光老化活性部位的研究
２．２．５标本取材
在第４３天将全部的小鼠用乙醚麻醉，剃毛，取下背部脱毛区的皮肤（不含皮下脂肪组织），用生理盐水洗干净，分别置于１０％水合氯醛中，做好标记后冷冻于．的℃冰箱内保存备用。

２．２．６检测指标及方法
（１）皮肤病理切片观察
取上述已备好的皮肤组织中的一部分，用纱布包好，注名，用流水洗２４个小时，
再对组织进行脱水包埋（脱水的目的是将皮肤组织内的水分用乙醇或其他溶剂置换出来，使组织变硬，便于油类或透明剂的浸入，为已熔化石蜡浸渗到组织中创造条件），过程如下：７０％乙醇（１小时）一８０％乙醇（１小时）—９０％乙醇（１小时）一１００％乙醇（１小时）一ｌｏｏ％乙醇（１小时）一二甲苯（３０分钟）～二甲苯（３０分钟）一石蜡（３个小时），包埋完成。

对已包埋好的皮肤组织进行４ｌａｍ连续切片，常规ＨＥ染色，用倒置的光学显微镜观察皮肤内部组织形态学变化特点。

观察指标：基底层细胞排列分布、真皮层成纤细胞形态、表皮厚度、细胞层数、皮孔毛囊形态及数目。

（２）小鼠组织匀浆制各
取２．２．５制备好的组织用生理盐水再次清洗（除去皮下脂肪和其他结缔组织），用滤纸拭千称重（重量均在０．２ｇ左右），‘用眼科剪刀将组织剪碎，量筒量取该组织９倍量的预冷生理盐水，共同置于玻璃匀浆器中进行匀浆（在冰浴中进行），充分研磨至所有细
胞完全破碎，冰箱．８０＂Ｃ冷冻备用。

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在实验过程中，每隔２０天（实验前测一次，实验第２０天测一次，实验第４２天测一次），用皮肤水分测定仪对小鼠的皮肤含水量进行考察，并记录数据。