动物粪便检查—粪便寄生虫检查

1、离心漂浮法
操作方法： 把3-5g（一茶勺）粪便放入纸杯或者塑料杯
中。猫的粪便和小反刍动物的粪便比较硬，很难 破碎，可以粉碎或者用水侵泡进行软化，如果粪 便中含有大量的脂肪或者粘液，可以用水进行清 洗。清洗后可以改变粪便的正常外观。
❖ 尽量搅拌混匀粪便和漂浮液，通过双层纱布 过滤，滤茶器进行过滤。
病毒、细菌及螺旋体检查
❖ 引起肝脏破裂，应激治病性病毒，戊型肝炎病毒在 粪便中的检出率最高；没有腹泻症状的动物，粪便 病毒量高；
❖ 引起腹泻的病毒性疾病，如猪流行性腹泻，轮状病 毒感染，猪德尔塔冠状病毒；
❖ 引起腹泻的大肠杆菌、梭菌性肠炎、沙门氏菌、胞 内劳森菌；
❖ 螺旋体，腹泻粪便样品（直肠）。
寄生虫寄生部位
❖ 吸虫类：姜片吸虫 、华支睾吸虫 、片形吸虫 、分体吸虫 、后睾吸虫、横川后殖吸虫 、胰 阔盘吸虫。（虫卵较重，漂浮不起来）
粪便沉淀原理
粪便沉淀法浓缩寄生虫卵，卵囊和其他的寄生虫材 料，让这些材料沉淀到离心管的底部，通常用水。这 个方法主要用于，不能在溶液中漂浮起来虫卵，或者 是虫卵在漂浮液中容易变形。吸虫虫卵比较重，在漂 浮方法中漂不起来。
体内寄生虫主要寄生在：口腔、食道、胃、小肠、 大肠，还有其他的内部器官。通过粪便排出，收集 粪便，显微镜检查。
诊断是在粪便中发现寄生虫生活周期的不同阶段： 卵，卵囊，幼虫，节片（绦虫），成虫。兽医人员 根据这些诊断是否存在寄生虫感染。
常见寄生虫检查
❖ 仔猪等孢子球虫、隐孢子虫、结肠小袋纤毛虫 、蛔虫、食道口线虫、肺线虫、绦虫、毛尾线 虫（鞭虫）、棘头虫。利用漂浮法检查。
❖ 也有大于1.300比重的溶液，可以用来漂浮虫 卵，不过，由于盐溶液浓度太高容易导致虫 卵形态改变。
沉淀法检查的不足
❖ 缺点：大量的粪便碎片同寄生虫材料混合 在一起，增加显微镜检查的难度。沉淀法 没有漂浮法灵敏，检出率没有漂浮法高。
粪便沉淀检查项目
❖ 沉淀法一般用来分离不能用漂浮法漂浮起来的吸虫 卵。
❖ 盖上盖子摇晃大约50次，500 × g离心（同 漂浮离心法的转速，2500）3–5分钟。
❖ 从离心机中取出试管，分为三层，（1）上 层包括乙酸乙酯、脂肪和碎片；（2）中层为 福尔马林或者水，还有颗粒物质；（3）最底 层是沉淀。倾倒上层，仅留下管底的沉淀。
用一点水重悬沉淀，然后放1滴或者2滴 沉淀到载波片上，盖上盖玻片，利用10×物镜 进行检查
毛圆线虫种类（Trichostrongyle species）：
仰口线虫（Bunostomum）,夏柏特线虫（Chabertia）,古柏线虫（ Cooperia）,血矛线虫（Haemonchus）,结节线虫（ Oesophagostomum，食道口线虫）, 胃线虫（Ostertagia）, 毛圆线 虫（Trichostrongylus） (图4.37)
猪场寄生虫病的特点
（引自会议报告）
规模化猪场常见寄生有
猪蛔虫的危害
（引自会议报告）
猪蛔虫
（引自会议报告）
鞭虫的危害
引自会议报告
猪鞭虫（毛首线虫）
（引自会议报告）
猪结肠小袋纤毛虫
（引自会议报告）
猪等孢球虫
（引自会议报告）

食道口线虫对猪的危害
（引自会议报告）
食道口线虫
（引自会议报告）
coccidian parasites)
粪便直接涂片 （Examination of direct smear)
❖ 粪便直接涂片镜检能够快速的检测到有没有寄生虫 ，也能用来检查粪便中是否有运动的原虫。
优势：准备时间短，需要的设备少； 缺点：由于用到的粪便量比较少，因此检出率低；大量粪便中 的外来碎片影响检查结果。
如果使用漂浮法收集虫卵，使用盐溶液和 糖溶液的比重大概在1.200～1.250g/mL（寄生 虫虫卵或者卵囊比重在1.100～1.200g/mL）, 在这个范围内比较重的粪便碎片沉到容器底部 ，然而寄生虫卵就漂浮到溶液的表面。
饱和食盐水漂浮法： 饱和食盐水是比较好的漂浮溶液。优势，便宜，
方便，可行性比较强。缺点，饱和食盐水在实验室能 够形成结晶，一部分虫卵的性状能够被改变。饱和盐 水溶液（最大比重是1.200g/mL）也不是很好的漂浮 溶液，有些虫卵可能浸没在漂浮溶液中，浮不起来。
沟口线虫
鞭虫
鞭虫：主要寄生大肠 和盲肠，主要是吸血。 主要临床症状，虫体 量大时，引起腹泻， 体重减轻，体弱。治 疗用苯硫哒唑。
鞭虫及虫卵
Trichuris vulpis and the eggs
❖ 寄生虫有哪些分类？ ❖ 动物体内寄生虫主要有哪些？ ❖ 人畜共患的寄生虫有哪些? ❖ 肠道粪便中能够检测到哪些寄生虫？ ❖ 粪便中能够检测到哪些寄生虫卵？
❖ 兽医练习人员，一般不适用离心漂浮程序， 主要依赖传统的桌面静止程序，降低了检查 的灵敏度。
一、漂浮法（Flotation ）
漂浮法收集虫卵及卵囊原理： 粪便漂浮法收集虫卵及卵囊原理是，寄生
虫和食物碎片相对于等体积的水有特殊的比 重，大多数寄生虫虫卵的比重在1.100～ 1.200g/mL，然而水的比重是1.000g/mL.
❖ 倾倒混合液到15mL的离心管中，倒入离心管 中液面形成一个弧度，盖上盖玻片，然后放 入离心机上进行离心。
❖ 离心转速一般为：500g~650g(2500转），进 行血清分离的转速就可以了。
❖ 离心机停下的过程中不可以使用刹车。刹车 引起的震动可能让寄生虫离开表层。
取下盖玻片，放到载玻片上进行显微镜检查。
离心沉淀检查法（CENTRIFUGAL SEDIMENTATION TEST）
❖ 混和1g 的粪便与10mL 10%的福尔马林溶液或者水 ，倒混合液于15 mL的离心管中，到一半或者3/4的 容积。
❖ 添加乙酸乙酯或者Hemo-De，直到满管。有机溶 剂可能会溶解塑料，推荐使用玻璃离心管和聚丙烯 离心管。
鸡粪便中的球虫虫卵
吸虫
并殖吸虫虫卵
重翼吸虫虫卵
羊毛圆线虫虫卵
刺球绦虫：
有盖绦虫
蛔虫
犬蛔虫
狮弓蛔线虫，椭圆 形外形，光滑的鸡 蛋一样的外壳，透 明的玻璃一样的卵 心。
猫球虫
粪便直接压片法
猫球虫
沟口线虫： 光滑的椭圆形鸡 蛋样的外壳的八 细胞桑葚胚。沉 淀法可能能够检 测到该虫卵.
❖ 大多数寄生虫虫卵的比重在1.100～1.200g/mL，然 而水的比重是1.000g/mL.
❖ 所以沉淀法可以检查所有的寄生虫卵。棘头虫卵、 线虫虫卵、绦虫虫卵、蛔虫、球虫等，在漂浮法中 可以漂浮起来的虫卵也可以用这种方法检查。
方法优缺点
❖ 简单的沉淀法测试，是自来水和粪便混和，然后静 置一段时间后去除上清。反复几次，清除部分不太 容易沉淀下来的杂志。允许清除部分颗粒物质，不 像漂浮法，沉淀法对虫卵浓缩能力有限。
2、桌面静置漂浮法
1、当不能进行离心漂浮法的时候，硝酸钠和 饱食盐水，可以用作桌面静止漂浮测试，这 种方法可能灵敏度会降低。 2、这种技术不推荐使用饱和硫酸锌和糖漂浮 测试。 3、把3-5g（一茶勺）粪便与漂浮液混合放 入纸杯或者塑料杯中。
❖ 搅拌混液，利用滤茶器进行过滤。 ❖ 将过滤混和液倒入漂浮管中，直到形成弧度
❖ 粪便直接涂片法需要样品比较少，可以直接 用棉签采样，或者进行直肠检查时带出的粪 便就可以做粪便涂片检查，直肠测量体温的 时候也可以利用带出来的粪便做直接涂片检 查。
引自书籍
❖利用直肠灌洗法收集到的样品，可以利用直 接检查法进行检查； ❖分为湿检查法和干检查法；
❖湿检查法，可以直接滴一滴，然后盖上盖玻 片进行检查，如果活的的寄生虫，可以观察到 寄生虫的运动； ❖干检查法，可以直接推片，干燥后，可以进 行染色，显微镜检查，可以观察滴虫的形态。
胎三毛
贾第虫
粪便浓缩法检查 （Concentration methods for fecal
examination)
❖ 采用浓缩技术，用到的粪便量比较大，即使粪 便中寄生虫比较少，浓缩后也容易检测到。
1、漂浮发（Flotation ） 2、沉淀法（Sedimentation ）
❖ 无论是什么样的漂浮检查程序，原则都是一 样的。混合漂浮溶液和粪便后，小密度的物 质漂浮到上面。可以有两种方法，一种是让 混合物在面桌面上静置一段时间；另一种是 通过离心进行漂浮，这样更加快速和有效。
实验目的
❖ 1、掌握粪便沉淀法检查的应用范围； ❖ 2、掌握沉淀法的操作流程； ❖ 3、掌握沉淀法中试剂的处理及试剂的危害 。
设备及耗材
❖粪便、烧杯、一次性杯子、水（乙酸 乙酯）、金属过滤器、离心管、盖玻片 、载玻片、离心机、废液或者试剂回收 缸、小竹板、胶头滴管。
操作
1、收集30日龄猪/鸡粪便、羊粪。 2、取大约10g左右的粪便于一次性的塑料杯中，加 入大约100ml的水，添加1滴洗洁精，到测试粪水混 合液，帮助虫卵从周围的碎片中分离出来。 4、用小竹板将水和粪便充分搅匀，然后将混合液倒 入滤茶器内进行过滤。
育肥猪，消化功能紊乱，消瘦，结膜苍白，生 长缓慢，病程持续时间较长。
106、若该病由球虫引起，适宜的粪便检查方 法是（ ）2017
A、肉眼观察 B、卵囊漂浮法 C、幼虫培养 法 D、幼虫分离法 E、毛蚴孵化法
❖ 对拉稀症状的粪便检查最主要检查： 细菌、病毒、寄生虫、螺旋体（痢疾螺旋体 同通过粪便可以检查以上病原引起的拉稀。 粪便浓缩法主要检查是否是寄生虫引起的腹 泻。 除吸虫虫卵，其他的大部分寄生虫卵都可以 检查。滴虫需要直接检查寄生虫。
❖ 也可以使用快速的商业化漂浮试剂盒法进行 样品的收集和执行测试。试剂盒检查可能没 有那么敏感，需要的粪便量比较少，还不能 进行离心。
❖ 离心漂浮法在诊断少量寄生虫感染比较敏感 ，也比较重要，例如，犬猫鞭毛虫感染和贾 第虫感染。在使用33%硫酸锌进行漂浮，或 者糖溶液进行漂浮的时候，需要利用离心漂 浮，因为糖的黏度比较高，阻碍漂浮程序， 虫卵比硫酸锌的比重稍微低一点，不容漂浮 起来。
❖ 6、混匀后静置10-60 min 然后倒上清液于 废液缸中（后进行医废处理）。 ❖ 7、向沉淀中加入更多的水，搅拌混匀，重 复沉淀程序。 ❖ 8、准备一干净的载玻片，在载玻片的磨砂 端写上样品信息。
9、 搅拌剩下的混合液，放一滴到显微镜的 载玻片上。如果有需要加一滴0.1%的甲基蓝 溶液，甲基蓝会把背景染成蓝色，吸虫虫卵 不会着色，呈现黄褐色。 10、盖上盖玻片，利用10×物镜进行扫描。
❖ 如果使用乙酸乙酯进行离心沉淀，就可以去 除粪便中的脂肪和粘液。不过乙酸乙酯有毒 ，同时容易燃烧，应该贮存在防火柜中，使 用时应在通风厨内进行。
❖ 也可以使用Hemo-De进行替代，这一试剂通 常是安全的，在离心中可以完全替代乙酸乙 酯，与之同样有效。
❖ Flukefinder®是商业化的检查试剂盒，可以在 实验室内进行沉淀检查。
简单的粪便沉淀测试（SIMPLE SEDIMENTATION TEST）
1、混和100 mL的水与大约10 g 的粪便，加入一小滴洗洁精 （或肥皂水）搅拌混匀，并用滤器（3-4层纱布）过滤。 2、过滤液倒入透明离心管中，放桌面上静置。30min-1 h， 看到有明显上清，然后弃上清液于废液缸中（回收处理）。 加入更多自来水混匀，重复沉淀程序。
注意
❖ 操作中注意事项； ❖ 时刻警惕人畜共患病，做个自身防护
粪便检查
粪便直接涂片（Examination of direct smear) 粪便浓缩法检查（Concentration methods for fecal
examination) 特殊染色法进行球虫检查（Special staining for
3、重复两次后，弃上清。搅拌剩下的混合液，放一滴到显 微镜的载玻片上，显微镜检查。
❖ 4、如果有需要，加一滴0.1%的甲基蓝溶液， 甲基蓝会把背景染成蓝色，吸虫虫卵不会着 色，呈现黄褐色，便于观察。
盖上盖玻片，利用10×物镜进行扫描。 如果使用少量的粪便和水混和，可以放在测 试管内进行，然后每次静置3-5分钟，倒掉上 清。可以额外的添加一滴洗碗的肥皂到测试 水里帮助虫卵从周围的碎片中分离出来。
，放上盖玻片。 ❖ 然后静止10min,取下盖玻片，放到载玻片上
进行显微镜检查。可以漂浮的时间更长一些 ，10-40min.
育肥猪，消化功能紊乱，消瘦，结膜苍白，生 长缓慢，病程持续时间较长。
105、若该病由吸虫引起，适宜的粪便检查方 法是（ ）2017
A、 直接涂片法 B、虫卵漂浮法 C、虫卵沉 淀法 D、幼虫分离法 E、幼虫培养法