C3肾小球病患者血清MASP2、MASP3水平检测

C3肾小球病患者血清MASP2、MASP3水平检测
刘冬雨;刘璐;张颖;邢国兰
【摘要】目的:探讨甘露糖结合凝集素(MBL)途径相关蛋白甘露糖结合丝氨酸蛋白酶-2(MASP2)、MASP3在C3肾小球病(C3G)患者血清中的表达及其在C3G发病中的作用.方法:回顾性分析15例C3G患者(14例C3肾小球肾炎和1例致密物沉积病)的临床资料,用ELISA测定肾活检当天血清MASP2、MASP3水平,分析MASP2、MASP3与临床及病理指标的关系.10名健康志愿者为对照.结果:C3G患者血清MASP2、MASP3水平均高于对照组(P<0.05).血清MASP2、MASP3水平与肾小球滤过率及血清补体C3水平均无关(P>0.05),血清MASP3水平与24 h 尿蛋白定量呈正相关(r=0.563,P=0.036).C3荧光强度高或有基底膜内电子致密物沉积的C3G患者血清MASP2水平较低(P<0.05).结论:C3G患者尿蛋白量随着血清MASP3的升高而升高,提示MBL途径可能参与该病的发生发展;MASP2水平的异常降低可能与C3G病理损伤程度加重有关.
【期刊名称】《郑州大学学报（医学版）》
【年(卷),期】2018(053)006
【总页数】5页(P800-804)
【关键词】C3肾小球病;甘露糖结合丝氨酸蛋白酶;补体
【作者】刘冬雨;刘璐;张颖;邢国兰
【作者单位】郑州大学第一附属医院肾脏内科郑州450052;郑州大学第一附属医院肾脏内科郑州450052;郑州大学第一附属医院肾脏内科郑州450052;郑州大学第一附属医院肾脏内科郑州450052
【正文语种】中文
【中图分类】R692.3
C3肾小球病(C3 glomerulopathy,C3G)是一个总括性概念，也是新近提出的一种疾病分类，它包括几种相对罕见的肾小球肾炎，如致密物沉积病和C3肾小球肾炎,这些疾病均以单纯补体C3沉积于肾小球为重要的组织特征。

补体有三大激活途径：经典途径、甘露糖结合凝集素(mannan-binding lectin，MBL)途径、旁路途径，其中旁路途径目前被认为与C3G发病机制关系最密切。

在过去的10 a里，补体
旁路途径的异常调控已作为本病发生的常见病因之一被多次阐述[1]，而其他两种
补体活化途径是否参与C3G的发生与发展却少见报道。

MBL途径由MBL识别病
原体甘露糖残基启动[2]，通过激活甘露糖结合丝氨酸蛋白酶-2(mannan-binding lectin serine peotease-2，MASP2)，进一步裂解C4和C2，形成MBL途径C3转化酶[3]。

C3转化酶裂解C3为C3a和C3b，进一步形成C5转化酶，最终形成膜攻击复合物，导致细胞溶解死亡。

有研究[4]发现在C3肾小球肾炎患者的血浆
中补体片段C4a的水平高于健康对照组，而C4a则是由补体C4经MASP2裂解
而产生，表明MBL途径的活化很可能在一定程度上参与C3G的发生。

MASP3是近年新发现的MASP家族成员。

有研究[5]显示MAPS3参与补体旁路途径活化关键酶D因子的活化，从而通过旁路途径参与C3G的发生，是连接MBL途径和旁
路途径的桥梁。

本研究旨在通过分析血清MASP2、MASP3水平与C3G患者临床表现及病理改变的关系，探讨MBL途径在C3G发病中的作用。

1 对象与方法
1.1 研究对象选取2012年1月至2017年6月在郑州大学第一附属医院肾脏内科行肾活检及外院会诊，并经临床和病理诊断为C3G的患者15例(C3G组)。

诊断
标准[6]:①光镜下可见肾小球系膜增生、膜增生、毛细血管内皮增生或新月体。

②
免疫荧光显示显著C3沉积，C3含量至少比其他免疫球蛋白和补体成分高2个级别，可伴少量免疫球蛋白(IgA、IgM、IgG)。

③电镜下多数病例有电子致密物沉积于肾小球基底膜，也可沉积于系膜区、毛细血管袢和肾小管基膜等。

排除感染后肾小球肾炎、系统性红斑狼疮、冷球蛋白血症、淀粉样变性、慢性乙型或丙型肝炎病毒感染、甲状腺相关疾病及恶性肿瘤等。

C3G组中男11例，女4例；14例为C3肾小球肾炎，1例为致密物沉积病。

对照组为与C3G患者年龄、性别相匹配的健
康志愿者10名。

该研究经医院伦理委员会批准，受试者均签署知情同意书。

1.2 一般及临床资料收集收集肾活检时的临床资料，包括性别、年龄、BMI、血压、血脂、血糖、24 h尿蛋白定量、血尿、肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate，eGFR)等指标。

1.3 血清MASP2、MASP3水平测定收集患者肾活检当天的EDTA抗凝分离血清，-80 ℃保存。

使用美国BD公司商品化试剂盒，以ELISA法测定血清MASP2、MASP3水平。

1.4 肾活检病理检查①免疫荧光检查：观察免疫球蛋白IgG、IgM、IgA及补体
C3、C1q有无沉积及其沉积的程度，以-、±、+～表示。

②光镜检查：常规制备
石蜡切片进行HE、PAS、Masson和PASM染色，观察肾小球形态、细胞增生程度，是否有球性或局灶节段性硬化及坏死，基底膜是否增厚，及肾小管间质、小动脉病变的程度。

③电镜检查:观察肾小球、肾小管及鲍曼囊有无电子致密物沉积及
沉积的部位、程度。

1.5 统计学处理采用SPSS 21.0处理数据。

采用两独立样本t检验比较C3G组和
对照组各指标的差异以及不同病理改变的C3G患者血清MASP2、MASP3水平的差异。

采用Pearson相关分析C3G患者血清MASP2、MASP3与重要临床指标
的相关性。

检验水准α=0.05。

2 结果
2.1 2组一般及临床资料的比较与对照组相比，C3G组血清C3水平、24 h尿蛋白定量、尿RBC、eGFR差异均具有统计学意义，余指标差异无统计学意义。

见表1。

2.2 2组血清MASP2、MASP3水平比较 C3G组血清MASP2、MASP3水平均高于对照组，见表2。

2.3 C3G患者血清MASP2、MASP3与重要临床指标的相关性血清MASP2、MASP3水平与eGFR及血清C3水平均无关，血清MASP3水平与24 h尿蛋白定量呈正相关。

见表3。

2.4 不同病理改变的C3G患者血清MASP2、MASP3水平比较 C3荧光强度低的C3G患者血清MASP2水平高于荧光强度高者，无基底膜内电子致密物沉积的
C3G患者血清MASP2水平高于有基底膜内沉积者，见表4、5。

表1 2组一般及临床资料的比较组别nρ(C3)/(g/L)24 h尿蛋白定量/(g/24 h)尿RBC/(μL-1)eGFR/[mL/(min·1.73 m2)]平均动脉压/mmHgc(血糖)/(mmol/L)C3G 组151.02±0.412.42±1.2994.93±64.9284.22±42.56102.44±12.134.67±1.28对照组
101.38±0.150.09±0.044.80±2.78113.80±11.3694.28±9.824.22±0.76t2.6197. 0115.3692.1341.7710.993P0.015<0.001<0.0010.0440.0900.078
1 mmHg=0.133 kPa
表2 2组血清MASP2、MASP3水平比较μg/L组别nMASP2MASP3C3G组151 400.77±904.661 595.26±1 038.28对照组10688.65±322.88463.08± 249.13t2.7933.925P0.0120.001
表3 C3G患者血清MASP2、MASP3水平与临床指标相关性分析 r(P)项目 C3 24 h尿蛋白定量 eGFR血清MASP20.241(0.386)-0.450(0.093) 0.129(0.647)血清
MASP30.088(0.766)0.563(0.036) -0.217(0.455)
表4 C3荧光强度不同情况下血清MASP2、MASP3比较μg/LC3荧光强度nMASP2MASP3111 683.54±852.661 390.32±796.114623.18±544.482 100.03±1 443.44t 2.2921.235P 0.0390.239
表5 有无电子致密物基底膜内沉积时血清MASP2、MASP3比较μg/L基底膜内
沉积nMASP2MASP3无91 771.74±908.101 212.35±764.75有
6844.32±594.012 130.41±1 127.22t 2.1941.891 P 0.0470.081
3 讨论
C3G是罕见的肾小球疾病之一，其发病机制一直是国内外专家探索的热点。

众所
周知，补体有三大激活途径：经典途径、MBL途径、旁路途径，其中旁路途径目
前被认为是与C3G发病机制关系最密切的途径，主要是考虑旁路途径中补体C3
自主活化而形成的正反馈过程参与了C3G的发生[7]。

有研究[4]发现在C3肾小球肾炎患者血浆中补体片段C4a的水平高于健康对照组，而C4a则是由补体C4经MASP2裂解而产生，表明MBL途径的活化很可能在一定程度上参与C3G的发生。

MBL由肝细胞合成和分泌，是急性期蛋白的一种，可直接识别细胞表面的甘露糖，进而可依次活化MASP1、MASP2、C4、C2、C3，形成一系列酶促反应，从而特异性识别病原微生物，利用补体活化来消灭病原微生物。

亦有研究[2]表明，MBL
通过与细胞表面的碳水化合物相结合激活MASP1、MASP2、MASP3，从而特异性识别病原微生物，其中MASP2则接着裂解C2和C4，从而激活补体的级联反应。

本研究发现，与对照相比，C3G患者血清MASP2和MASP3水平升高。

高
水平的MASP2被MBL激活后形成大量的MBL-MASP复合物，从而加强了C4
的裂解过程，产生更多的C4b和C4a，进一步形成C3转化酶(C4bC2a)，再通过把C3水解为C3a及C3b，激活补体级联反应，最终进入终末通路，在免疫过程
中发挥重要作用。

这种突出的改变使肾脏出现大量的C3沉积，同时循环中的C3
浓度也会因消耗而下降，余下的裂解片段C4a在循环中的水平也会相应处于高水
平状态，这与之前报道显示C3肾小球肾炎患者血清C4a浓度高于正常人相一致，这一系列过程提示C3G肾病的发生存在MBL途径的参与。

对于MASP3的活化
机制目前尚未研究清楚，但曾有研究[5]显示血清MASP3可能是补体D因子的独
特激活因子，而D因子作为补体旁路途径的关键酶，可以裂解B因子，形成旁路
途径中的C3转化酶C3H20-Bb，从而使其过度活化，C3被裂解为C3a和C3b，C3bBb再反过来促进C3分解，由此形成正反馈，最终造成对肾脏的损伤。

因此
我们推断MASP3的主要作用是将补体旁路途径与MBL途径联系起来，利用补体途径的过度激活，进而发挥重要的免疫作用。

另外，我们还发现，虽然MASP3相对来说没有MASP2的作用更明确，但血清MASP3水平与24 h尿蛋白定量呈正
相关，提示MBL途径与C3G活动程度可能存在密切联系。

此外，我们还发现C3荧光强度强或有基底膜内沉积的C3G患者血清MASP2水
平较低，这一结果和之前ELISA的结果C3G患者血清MASP2水平升高矛盾，推测可能与本研究样本量偏小有关，也或许是由于MBL途径异常激活过程中，MASP2活化裂解C4能力增强，因MASP2进一步的消耗增多而导致最终血清MASP2水平下降，从而造成病理改变程度加重反而出现低水平的MASP2，其具
体作用机制有待以后更深入的研究。

总之，本研究发现MBL途径很可能参与C3G的发生，其中MASP3与24 h尿蛋白定量呈正相关，提示MASP3可能在C3G的病情评估及预后判断中具有潜在价值；另外，MASP2与C3荧光强度、基底膜内电子致密物沉积之间的关系为以后
对该病免疫病理方面的深入探索提供了线索。

但因该病发病率较低，样本量较少，使研究结果具有一定的局限性，以后拟开展更大样本的研究来进一步验证本研究结果。

另外，目前补体抑制剂已经广泛应用于临床[8]，如采用竞争性抑制MBL与MASP之间结合的方式阻断MBL途径的补体活化，有可能减轻或阻断C3G的慢
性化发展，开创C3G生物制剂的新领域，改善C3G患者的预后。

致谢：感谢权松霞老师在工作中给予的支持和帮助！
参考文献
【相关文献】
[1]FAKHOURI F,FRMEAUX-BACCHI V,NOL LH,et al.C3 glomerulopathy: a new classification[J].Nat Rev Nephrol,2010,6(8):494
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[3]陈政良.补体激活第三条途径:凝集素途径[J].国外医学:分子生物学分册,1999,21(5):295
[4]喻小娟,刘刚,赵明辉.12例C3肾小球肾炎的临床病理特点及其血浆补体活化分析[J].中华肾脏病杂志,2011,27(11):797
[5]DOB J, SZAKCS D,OROSZLN G,et al.MASP-3 is the exclusive pro-factor D activator in resting blood: the lectin and the alternative complement pathways are fundamentally linked[J].Sci Rep,2016,6:31877
[6]PICKERING MC,D′AGATI VD,NESTER CM,et al.C3 glomerulopathy：consensus
report[J].Kidney Int,2013，84(6):1079
[7]SERVAIS A, FRÉMEAUX-BACCHI V, LEQUINTREC M,et al.Primary glomerulonephritis with isolated C3 deposits:a new entity which shares common genetic risk factors with haemolytic uraemic syndrome[J].J Med Genet,2007,44(3):193
[8]VIVARELLI M,EMMA F.Treatment of C3 glomerulopathy
with complement blockers[J].Semin Thromb Hemost,2014,40(4):472。