质料的酶切与电泳检测

胶浓度（%） 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5
线性DNA分离范围 （kb) 5-60 1-20 0.8-10 0.5-7 0.4-6 0.2-4
2.0
0.1-3
影响迁移率的因素 DNA分子的大小 琼脂糖凝胶的浓度 DNA的构象 所加电压 一般5V/cm
常用电泳缓冲液 0.5 X TBE 1 X TAE 5X 储液 50X 储液
质粒DNA的电泳鉴定
1%琼脂糖凝胶 20mL (用buffer配)
0.5xTBE 2uL质粒DNA 80伏恒压电泳 结果用凝胶成像仪分析照相 100mL + 2uL 10xloading +号 核酸 10xbufferK ddH2O 酶 总体积 370C酶解2小时 将tube中的样品加入相应的加样BUFFER，用枪混匀后全部轻轻加入 胶孔中， 电泳到蓝色带距离胶顶端1/3处， 戴手套取胶到成象系统中观察。注意不要掉在地上 tube1 5uL 2uL 12uL 1uL 20uL
个磷酸解离，整个分子带正电； pH 8左右时，碱基几乎不解离，而磷酸
全部解离，整个分子带负电
在碱性环境下，不同的核酸
分子由于具有相同的磷酸戊 糖结构，几乎具有相同的电 荷密度，其电泳行为与SDSPAGE类似，线性分子在凝胶 中的迁移率与其所含碱基对 数目的对数值成反比。可以 近似用于估算分子的大小
质粒的酶切及电泳
核酸的凝胶电泳
电泳：带电粒子在电场中的涌动现象
丙烯酰胺凝胶电泳 5bp—500bp（分辨率高，1 bp) 琼脂糖凝胶电泳 200bp—50kb（分离范围广、方便）
琼脂糖介质结构均一，含水量大（98-99%），可通过调整琼脂糖的浓度改
变孔径的大小，起到分子筛的作用 核酸为两性分子，在pH 3.5时，碱基上的氨基解离而磷酸基团中只有第一
凝胶载样（上样）缓冲液 （loading buffer) 增加样品密度 使样品带颜色，起指示作用
电场方向
染料的存在与否 电泳缓冲液的组成
胶浓（%） 0.6 1 1.4 2
溴酚蓝 1kb 0.6kb 0.2kb 0.15kb
二甲苯青
2kb 1.6kb
常用染料
EB: 溴化乙锭，加入胶中或电泳后染色。 EB插入核酸碱基平 面，吸收紫外光的能量产生荧光，荧光的强度与DNA的量 在一定范围内成正相关 SYBR: 新型低毒，高灵敏度荧光染料，可直接加入样品中， 价格较昂贵
实验安排
• 两人一组，酶切一管，按照步骤加样，注 意确定是否已经加入。稍许离心后放入恒 温浴槽120分钟。 • 电泳（将所提取的质粒与酶切样品分开电 泳） • 酶切过程中学习制作琼脂糖胶。