加味清心莲子饮治疗阿霉素肾病综合征大鼠的实验研究

加味清心莲子饮治疗阿霉素肾病综合征大鼠的实验研究
作者：张永政王海陈雁雁徐永亮杨顼邓夏烨
来源：《世界中医药》2021年第16期
摘要目的：探讨加味清心莲子饮对阿霉素肾病综合征大鼠的疗效及对尿蛋白、血液生化指标、炎症介质的影响。

方法：利用尾静脉注射阿霉素建立大鼠肾病综合征模型，分别给予泼尼松灌胃和加味清心莲子饮灌胃，同时设置对照组、模型组。

实验过程中对大鼠进行一般形态学观察，每周检测24 h蛋白尿;实验末采血分離血清，对血清中清蛋白（ALB）、总蛋白（TP）、三酰甘油（TG）、胆固醇（TC）、血尿素氮（BUN）、血清肌酐（Scr）水平进行检测;利用ELISA法对血清炎症介质白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-8（IL-8）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）水平进行检测。

结果：模型组的24 h尿蛋白水平与对照组比较，差异有统计学意义（P<0.01）。

给药后，激素组、中药组大鼠24 h尿蛋白含量均明显降低（均P<0.01）。

与对照组比较，模型组血清TG、TC、BUN、Scr水平均明显升高（均P<0.01）;血清ALB、TP水平均明显降低（均P<0.01）。

给药后，激素组、中药组血清TG、TC、BUN、Scr水平均降低（均P<0.01，P<0.05）;血清ALB、TP水平均明显升高（均P<0.01）。

与对照组比较，模型组血清IL-1β、IL-8、TNF-α、MCP-1水平均升高（均P<0.05）;给药后，激素组、中药组血清IL-1β、IL-8、TNF-α、MCP-1水平均降低（均
P<0.05）。

结论：加味清心莲子饮能够治疗阿霉素肾病综合征，作用机制为调节炎症介质的表达，改善病理损伤，恢复肺、脾、肾脏的功能。

关键词加味清心莲子饮;肾病综合征;大鼠;实验研究;24 h尿蛋白;血液生化指标;炎症介质;白细胞介素-1β、白细胞介素-8、肿瘤坏死因子-α、单核细胞趋化蛋白-1
Experimental Study on the Treatment of Adriamycin Nephrotic Syndrome in Rats with Jiawei Qingxin Lianzi Drink
ZHANG Yongzheng1，WANG Hai1，CHEN Yanyan1，XU Yongliang1，YANG Xu1，DENG Xiaye2
（1 The First Affiliated Hospital，Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China; 2 Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China）
Abstract Objective：To investigate the therapeutic effect of Jiawei Qingxin Lianzi Drink on the curative effects of adriamycin nephrotic syndrome（NS） rats and its effects on proteinuria，blood biochemical indexes and inflammatory factors.Methods：The nephrotic syndrome model of rats was established by injecting adriamycin into tail vein.The rats were given prednisone and modified Jiawei Qingxin Lianzi Drink by gavage respectively，and the control group and model group were set up at the same time.During the experiment，the general morphology of rats was observed，24-hour proteinuria was detected every week.At the end of the experiment，blood was collected to separate serum，and the contents of ALB，TP，TG，TC，BUN and Scr in serum was detected，and the contents of IL-1 β，IL-8，TNF-α a nd MCP-1 in serum was detected by ELISA.Results：Compared with the control group，the 24 h urine protein content of the model group was significantly different （P<0.01）.After administration，the 24 h urine protein content of the hormone group and Chinese medicinal group was significantly reduced（P<0.01）.Compared with the blank group，the serum TG，TC，BUN，and Scr levels in the model group were significantly increased（all P<0.01）; the serum ALB and TP levels were significantly decreased（P<0.01）.After administration，serum TG，TC，BUN，and Scr levels in the hormone group and Chinese medicine group decreased
（P<0.01，P<0.05）; serum ALB and TP levels increased significantly（all P<0.01）.After administration，serum TG，TC，BUN，and Scr levels in the hormone group and Chinese medicinal group decreased（all P<0.01，P<0.05）; serum ALB and TP levels increased significantly（all
P<0.01）.Compared with the control group，the serum levels of IL-1β，IL-8，TNF-α，and MCP-1 in the model group increased（all P<0.05）; after administration，the serum IL-1β，IL-8，NF-α，MCP-1 levels in the hormone group and the Chinese medicinal group decreased（all
P<0.05）.Conclusion：Modified Qingxin Lianzi Drink can treat adriamycin nephrotic syndrome.The mechanism of action is to regulate the expression of inflammatory factors，improve pathological damage，and restore lung，spleen，and kidney functions.
Keywords Modified Qingxin Lianzi Drink; Nephrotic syndrome; Rat; Experimental study; 24-hour proteinuria; Blood biochemical indexes; Inflammatory factors; IL-1 β; IL-8; TNF-α; MCP-1
中图分类号：R285.5;R692.6文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.16.008
肾病综合征（Nephrotic Syndrome，NS）是以大量蛋白尿、低蛋白血症、水肿、高脂血症为基本特征的一类临床综合征，儿童期发病率较高。

其主要发病机制为肾脏滤过膜的正常电荷屏障和分子屏障功能发生障碍，肾小球对血浆中蛋白质的通透性增加，血浆清蛋白从尿中大量流失，超出承受极限，从而出现一系列症状[1-2]。

在治疗NS的药物中，糖皮质激素（Glucocorticoid，GCs）为首选药物之一，是治疗规范的最成熟、最有经验的药物，但是在治疗NS过程中使用糖皮质激素亦可引起一系列的不良反应[3]。

NS属中医学“水肿”“尿浊”等范畴。

在轻证NS治疗中，单纯应用中药治疗，可以达到促使蛋白尿转阴、病情缓解的治疗效果，避免了应用糖皮质激素的不良反应。

而在已应用糖皮质激素治疗NS的情况下，加用中医辨证治疗，亦具有明显的增效减毒作用。

加味清心莲子饮是“国医大师”张琪教授经验名方，其是在清心莲子饮原方基础上加用益母草、白花蛇舌草、萆薢组成，该方加减用于治疗NS，疗效显著。

本研究在此基础上探讨加味清心莲子饮对阿霉素NS 大鼠的疗效及对尿蛋白、血液生化指标、炎症介质的影响。

1 资料与方法
1.1 材料
1.1.1 动物 SPF级健康雄性SD大鼠32只，体质量（200±20）g，由黑龙江中医药大学药物安全性评价中心提供（动物许可证号：SCXK（黑）2013-004）。

经黑龙江中医药大学附属第一医院伦理委员会批准（伦理审批号：HZY201911005），将动物饲养于黑龙江中医药大学实验动物研究中心，普通饲料，自由饮水，环境温度25 ℃，湿度40%～70%。

1.1.2 药物阿霉素注射用干粉（海正辉瑞制药有限公司，批号：190318），用注射用水溶解为2 mg/mL的药液。

泼尼松（天津天药药业股份有限公司，批号：CP190129），用生理盐水（哈尔滨三联药业股份有限公司，批号：20190116）溶解成0.6 g/mL的药液备用[4]。

中药饮片购于黑龙江中医药大学附属第一医院。

中药饮片：黄芪（批號：200118）、麦冬（批号：191204）、党参（批号：200314）、地骨皮（批号：201021）、黄芩（批号：200527）、车前子（批号：200608）、柴胡（批号：200507）、石莲子（批号：200419）、茯苓（批号：200226）、白花蛇舌草（批号：200330）、萆薢（批号：200409）、益母草（批号：200205）、炙甘草（批号：200610）。

将加味清心莲子饮（黄芪30 g、麦冬15 g、党参20 g、地骨皮20 g、黄芩15 g、车前子15 g、柴胡15 g、石莲子15 g、茯苓20 g、白花蛇舌草30 g、萆薢20 g、益母草30 g、炙甘草10 g）加水浸泡1 h后加热煮沸，文火保持30 min的沸腾，搅拌后趁热将药液滤出;再加水煮沸，文火进行60 min的续煎后将药液滤出，将2次药液合并，浓缩成2.6 g/mL的药液，在4 ℃的冰箱中放置冷藏备用。

1.1.3 试剂与仪器考马斯亮蓝G250蛋白染色剂（上海迈联生物工程有限公司，货号：LM-445）;IL-1β试剂盒、IL-8试剂盒、TNF-α试剂盒、MCP-1试剂盒（上海源叶生物科技有限公司，货号：H20200725、H20200817、H20200829、H20200709）;全自动生化分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司，型号：BS-270）;高速冷冻离心机（科大创新股份有限公司中佳分公司，型号：KDC-160HR）。

1.2 方法
1.2.1 分组与模型制备将大鼠适应性喂养1周后，收集尿液，检测大鼠尿蛋白，剔除尿蛋白定性>“++”的大鼠。

采用随机数字表法将大鼠分为对照组、模型组、激素组、中药（加味清心莲子饮）组。

除对照组外，其余3组大鼠经尾静脉注射浓度为2 mg/mL的阿霉素注射液，注射剂量为6.5 mg/kg[5]，对照组大鼠注射等剂量的生理盐水，均以尾部无迂曲、肿胀为注射成功。

于造模前1 d和造模后第7天，收集24 h尿液，对各组大鼠24 h尿蛋白含量进行测定，验证大鼠NS造模是否成功。

1.2.2 给药方法于造模后第7天开始按照下列方式给药，共给药4周。

1）对照组、模型组：生理盐水10 mL/kg灌胃，1次/d。

2）激素组：泼尼松6 g（10 mL）/kg灌胃，1次/d。

3）中药组：按26 g（10 mL）/kg生药量加味清心莲子饮灌胃，1次/d。

1.2.3 检测指标与方法 1）一般形态学观察。

每周观测各组大鼠的精神状态、体质量、体毛、爪、耳色泽、进食水量及活动情况。

2）24 h尿蛋白检测。

各组大鼠在给药治疗后每周收集24 h尿液，记录尿量，共4次，用考马斯亮蓝法测定OD值，计算24 h尿蛋白含量。

3）血液生化指标检测。

于末次给药后48 h，以摘除眼球的方法取血，采血后静置15 min，以转速3 000 r/min，离心半径10 cm，离心5 min，取上清液，利用全自动生化分析仪对血清中白蛋白（ALB）、总蛋白（TP）、三酰甘油（TG）、胆固醇（TC）、血尿素氮（BUN）、血清肌酐（Scr）的含量进行检测。

4）血清炎症介质检测。

利用ELISA法检测血清中IL-1β、IL-8、TNF-α、MCP-1的水平。

Keywords Modified Qingxin Lianzi Drink; Nephrotic syndrome; Rat; Experimental study; 24-hour proteinuria; Blood biochemical indexes; Inflammatory factors; IL-1 β; IL-8; TNF-α; MCP-1
中图分类号：R285.5;R692.6文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.16.008
肾病综合征（Nephrotic Syndrome，NS）是以大量蛋白尿、低蛋白血症、水肿、高脂血症为基本特征的一类临床综合征，儿童期发病率较高。

其主要发病机制为肾脏滤过膜的正常电荷屏障和分子屏障功能发生障碍，肾小球对血浆中蛋白质的通透性增加，血浆清蛋白从尿中大量流失，超出承受极限，从而出现一系列症状[1-2]。

在治疗NS的药物中，糖皮质激素（Glucocorticoid，GCs）为首选药物之一，是治疗规范的最成熟、最有经验的药物，但是在治疗NS过程中使用糖皮质激素亦可引起一系列的不良反应[3]。

NS属中医学“水肿”“尿浊”等范畴。

在轻证NS治疗中，单纯应用中药治疗，可以达到促使蛋白尿转阴、病情缓解的治疗效果，避免了应用糖皮质激素的不良反应。

而在已应用糖皮质激素治疗NS的情况下，加用中医辨证治疗，亦具有明显的增效减毒作用。

加味清心莲子饮是“国医大师”张琪教授经验名方，其是在清心莲子饮原方基础上加用益母草、白花蛇舌草、萆薢组成，该方加减用于治疗NS，疗效显著。

本研究在此基础上探讨加味清心莲子饮对阿霉素NS 大鼠的疗效及对尿蛋白、血液生化指标、炎症介质的影响。

1 资料与方法
1.1 材料
1.1.1 动物 SPF级健康雄性SD大鼠32只，体质量（200±20）g，由黑龙江中医药大学药物安全性评价中心提供（动物许可证号：SCXK（黑）2013-004）。

经黑龙江中医药大学附属第一医院伦理委员会批准（伦理审批号：HZY201911005），将动物饲养于黑龙江中医药大学实验动物研究中心，普通饲料，自由饮水，环境温度25 ℃，湿度40%～70%。

1.1.2 药物阿霉素注射用干粉（海正辉瑞制药有限公司，批号：190318），用注射用水溶解为2 mg/mL的药液。

泼尼松（天津天药药业股份有限公司，批号：CP190129），用生理盐水（哈尔滨三联药业股份有限公司，批号：20190116）溶解成0.6 g/mL的药液备用[4]。

中药饮片购于黑龙江中医药大学附属第一医院。

中药饮片：黄芪（批号：200118）、麦冬（批号：191204）、党参（批号：200314）、地骨皮（批号：201021）、黄芩（批号：200527）、车前子（批号：200608）、柴胡（批号：200507）、石莲子（批号：200419）、茯苓（批号：200226）、白花蛇舌草（批号：200330）、萆薢（批号：200409）、益母草（批号：200205）、炙甘草（批号：200610）。

将加味清心莲子饮（黄芪30 g、麦冬15 g、党参20 g、地骨皮20 g、黃芩15 g、车前子15 g、柴胡15 g、石莲子15 g、茯苓20 g、白花蛇舌草30 g、萆薢20 g、益母草30 g、炙甘草10 g）加水浸泡1 h后加热煮沸，文火保持30 min的沸腾，搅拌后趁热将药液滤出;再加水煮沸，文火进行60 min的续煎后将药液滤出，将2次药液合并，浓缩成2.6 g/mL的药液，在4 ℃的冰箱中放置冷藏备用。

1.1.3 试剂与仪器考马斯亮蓝G250蛋白染色剂（上海迈联生物工程有限公司，货号：LM-445）;IL-1β试剂盒、IL-8试剂盒、TNF-α试剂盒、MCP-1试剂盒（上海源叶生物科技有限公司，货号：H20200725、H20200817、H20200829、H20200709）;全自动生化分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司，型号：BS-270）;高速冷冻离心机（科大创新股份有限公司中佳分公司，型号：KDC-160HR）。

1.2 方法
1.2.1 分组与模型制备将大鼠适应性喂养1周后，收集尿液，检测大鼠尿蛋白，剔除尿蛋白定性>“++”的大鼠。

采用随机数字表法将大鼠分为对照组、模型组、激素组、中药（加味清心莲子饮）组。

除对照组外，其余3组大鼠经尾静脉注射浓度为2 mg/mL的阿霉素注射液，注射剂量为6.5 mg/kg[5]，对照组大鼠注射等剂量的生理盐水，均以尾部无迂曲、肿胀为注射成功。

于造模前1 d和造模后第7天，收集24 h尿液，对各组大鼠24 h尿蛋白含量进行测定，验证大鼠NS造模是否成功。

1.2.2 给药方法于造模后第7天开始按照下列方式给药，共给药4周。

1）对照组、模型组：生理盐水10 mL/kg灌胃，1次/d。

2）激素组：泼尼松6 g（10 mL）/kg灌胃，1次/d。

3）中药组：按26 g（10 mL）/kg生药量加味清心莲子饮灌胃，1次/d。

1.2.3 检测指标与方法 1）一般形态学观察。

每周观测各组大鼠的精神状态、体质量、体毛、爪、耳色泽、进食水量及活动情况。

2）24 h尿蛋白检测。

各组大鼠在给药治疗后每周收集24 h尿液，记录尿量，共4次，用考马斯亮蓝法测定OD值，计算24 h尿蛋白含量。

3）血液生化指标检测。

于末次给药后48 h，以摘除眼球的方法取血，采血后静置15 min，以转速3 000 r/min，离心半径10 cm，离心5 min，取上清液，利用全自动生化分析仪对血清中白蛋白（ALB）、总蛋白（TP）、三酰甘油（TG）、胆固醇（TC）、血尿素氮（BUN）、血清肌酐（Scr）的含量进行检测。

4）血清炎症介质检测。

利用ELISA法检测血清中IL-1β、IL-8、TNF-α、MCP-1的水平。

Keywords Modified Qingxin Lianzi Drink; Nephrotic syndrome; Rat; Experimental study; 24-hour proteinuria; Blood biochemical indexes; Inflammatory factors; IL-1 β; IL-8; TNF-α; MCP-1
中图分类号：R285.5;R692.6文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.16.008
肾病综合征（Nephrotic Syndrome，NS）是以大量蛋白尿、低蛋白血症、水肿、高脂血症为基本特征的一类临床综合征，儿童期发病率较高。

其主要发病机制为肾脏滤过膜的正常电荷屏障和分子屏障功能发生障碍，肾小球对血浆中蛋白质的通透性增加，血浆清蛋白從尿中大量流失，超出承受极限，从而出现一系列症状[1-2]。

在治疗NS的药物中，糖皮质激素（Glucocorticoid，GCs）为首选药物之一，是治疗规范的最成熟、最有经验的药物，但是在治疗NS过程中使用糖皮质激素亦可引起一系列的不良反应[3]。

NS属中医学“水肿”“尿浊”等范畴。

在轻证NS治疗中，单纯应用中药治疗，可以达到促使蛋白尿转阴、病情缓解的治疗效果，避免了应用糖皮质激素的不良反应。

而在已应用糖皮质激素治疗NS的情况下，加用中医辨证治疗，亦具有明显的增效减毒作用。

加味清心莲子饮是“国医大师”张琪教授经验名方，其是在清心莲子饮原方基础上加用益母草、白花蛇舌草、萆薢组成，该方加减用于治疗NS，疗效显著。

本研究在此基础上探讨加味清心莲子饮对阿霉素NS 大鼠的疗效及对尿蛋白、血液生化指标、炎症介质的影响。

1 资料与方法
1.1 材料
1.1.1 动物 SPF级健康雄性SD大鼠32只，体质量（200±20）g，由黑龙江中医药大学药物安全性评价中心提供（动物许可证号：SCXK（黑）2013-004）。

经黑龙江中医药大学附属第一医院伦理委员会批准（伦理审批号：HZY201911005），将动物饲养于黑龙江中医药大学实验动物研究中心，普通饲料，自由饮水，环境温度25 ℃，湿度40%～70%。

1.1.2 药物阿霉素注射用干粉（海正辉瑞制药有限公司，批号：190318），用注射用水溶解为2 mg/mL的药液。

泼尼松（天津天药药业股份有限公司，批号：CP190129），用生理盐水（哈尔滨三联药业股份有限公司，批号：20190116）溶解成0.6 g/mL的药液备用[4]。

中药饮片购于黑龙江中医药大学附属第一医院。

中药饮片：黄芪（批号：200118）、麦冬（批号：191204）、党参（批号：200314）、地骨皮（批号：201021）、黄芩（批号：200527）、车前子（批号：200608）、柴胡（批号：200507）、石莲子（批号：200419）、茯苓（批号：200226）、白花蛇舌草（批号：200330）、萆薢（批号：200409）、益母草（批号：200205）、炙甘草（批号：200610）。

将加味清心莲子饮（黄芪30 g、麦冬15 g、党参20 g、地骨皮20 g、黄芩15 g、车前子15 g、柴胡15 g、石莲子15 g、茯苓20 g、白花蛇舌草30 g、萆薢20 g、益母草30 g、炙甘草10 g）加水浸泡1 h后加热煮沸，文火保持30 min的沸腾，搅拌后趁热将药液滤出;再加水煮沸，文火进行60 min的续煎后将药液滤出，将2次药液合并，浓缩成2.6 g/mL的药液，在4 ℃的冰箱中放置冷藏备用。

1.1.3 试剂与仪器考马斯亮蓝G250蛋白染色剂（上海迈联生物工程有限公司，货号：LM-445）;IL-1β试剂盒、IL-8试剂盒、TNF-α试剂盒、MCP-1试剂盒（上海源叶生物科技有限公司，货号：H20200725、H20200817、H20200829、H20200709）;全自动生化分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司，型号：BS-270）;高速冷冻离心机（科大创新股份有限公司中佳分公司，型号：KDC-160HR）。

1.2 方法
1.2.1 分组与模型制备将大鼠适应性喂养1周后，收集尿液，检测大鼠尿蛋白，剔除尿蛋白定性>“++”的大鼠。

采用随机数字表法将大鼠分为对照组、模型组、激素组、中药（加味清心莲子饮）组。

除对照组外，其余3组大鼠经尾静脉注射浓度为2 mg/mL的阿霉素注射液，注射剂量为6.5 mg/kg[5]，对照组大鼠注射等剂量的生理盐水，均以尾部无迂曲、肿胀为注射成功。

于造模前1 d和造模后第7天，收集24 h尿液，对各组大鼠24 h尿蛋白含量进行测定，验证大鼠NS造模是否成功。

1.2.2 给药方法于造模后第7天开始按照下列方式给药，共给药4周。

1）对照组、模型组：生理盐水10 mL/kg灌胃，1次/d。

2）激素组：泼尼松6 g（10 mL）/kg灌胃，1次/d。

3）中药组：按26 g（10 mL）/kg生药量加味清心莲子饮灌胃，1次/d。

1.2.3 检测指标与方法 1）一般形态学观察。

每周观测各组大鼠的精神状态、体质量、体毛、爪、耳色泽、进食水量及活动情况。

2）24 h尿蛋白检测。

各组大鼠在给药治疗后每周收集24 h尿液，记录尿量，共4次，用考马斯亮蓝法测定OD值，计算24 h尿蛋白含量。

3）血液生化指标检测。

于末次给药后48 h，以摘除眼球的方法取血，采血后静置15 min，以转速3 000 r/min，离心半径10 cm，离心5 min，取上清液，利用全自动生化分析仪对血清中白蛋白（ALB）、总蛋白（TP）、三酰甘油（TG）、胆固醇（TC）、血尿素氮（BUN）、血清肌酐（Scr）的含量进行检测。

4）血清炎症介质检测。

利用ELISA法检测血清中IL-1β、IL-8、TNF-α、MCP-1的水平。