一株鸭源恶臭假单胞菌16S rDNA的序列测定与分析

物 ，用 细 菌 １Ｓｒ Ａ 通 用 引 物 扩增 出约 １５０ｂ ６ ＤＮ ０ ｐ的条 带 ，经 Ｄ ＮＡ 测 序得 到一 条 长 １ ９ ｐ的 １Ｓｒ Ａ 序 列 ， ９ｂ ４ ６ ＤＮ 与 Ｇｅｅ ａ ｋ已提 交 的 序 列 进 行 Ｂ Ａ Ｔ 相 似 性 搜 索 表 明 该 微 生 物 应 归 属 于 假 单 胞 菌 属 （ ｓｕ ｏ ｎ ｓ ，并 用 ｎＢ ｎ Ｌ Ｓ Ｐ ｅｄ ｍｏａ ）
１ 南 大 学 动 物科 技 学 院 ， 庆 ４ ０ １ ； ． 庆 出 入 境 检验 检 疫 局 ， 庆 ４ ０ ２ ； ．西 重 ０ ７ ２ 重 ５ 重 ０ ０ ０ ３ 西 南 大 学 荣 昌 校 区 ， 庆 ４ ２ ６ 重 ０００ 摘 要 ：从 病鸭 翅 静 脉 无 菌 采 集抗 凝 血 ，直 接 镜 检 和 姬姆 萨染 色 镜 检 ，微 生 物 感 染 呈 阳性 ． 从 血 液 中 分 离 出该
Ｖ ｏ１ ３ ．３
ＮＯ ３ ．
西 南 师 范 大 学 学 报 （ 自然 科 学 版 ）
Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆ ｏ ｔｗｅｔＣ ｉａＮｏｍａ Ｕｎｖ ｒｉ （ ｔｒｌ ｃｅ ｃ ｄｔ ｎ ｏ ｒａ ｕｈ ｓ ｈｎ ｒ ｌ ｉｅｓ ｙ Ｎａｕａ Ｓ ｉ ｅＥ ｉｏ ） ｏＳ ｔ ｎ ｉ
文 献 标 识 码 ：Ａ 中 图分 类 号 ：Ｑ９ ９ １ ２ ３．ｌ
假单 胞菌属 （ ｓｕ ｏ ｎ ｓ位于变 形菌 纲 一 ７亚 纲 ，假 单 胞 菌科 （ ｓｕ ｏ ｎ ｄ ｃ ａ） 的一 个 属．本 Ｐ ｅｄ ｍｏ ａ ） Ｐ ｅ ｄ ｍｏ ａ ａｅｅ 下 菌属 为革 兰 氏阴性 菌 ， 种类繁 多 ， 广泛 存在 于土壤 、水 、 动植 物体 表及各 种含蛋 白食 品中 ， 有些 种对人 或动 物 致病 ，为人或 动物源 性或机 会性 致病 菌．恶 臭 假 单胞 菌 （ ｅｄ ｍｏ ａ ｕ ｉａ 主要 引起 鱼 类 的烂 鳃 病． Ｐｓｕ ｏ ｎ ｓ ｔ ） ｐ ｄ 有关其致 病性研究 报道较 少 ，国 内尚无其对 鸭致病 性 的相 关报道 ． 重 庆荣 昌县某 养殖 户 ４ ０日龄本地 土鸭大 量发病 （ ２ ０只 ） 约 ０ ，临床症 状表 现为精 神沉郁 ， 毛粗乱 ，卧 羽 地不起 ，眼 睑苍 白 ， 间歇性 张 口呼吸 ，拉水样 粪便．笔者 随机抽取 病鸭 血液 ，从 中分离 出病 原微 生物 ，抽提 基 因组 ， 采用 真细菌 １Ｓ ｒ Ｎ 基 因的通 用引物 进行 Ｐ Ｒ扩增 ，再通 过克 隆测 序及 １Ｓ ｒ ＮＡ 序列分析 ． ６ Ｄ Ａ Ｃ ６ Ｄ
１ 材 料 和 方 法
１ １病 料 来 源 ．
重 庆市荣 昌县某养殖 户 随机 选取病 鸭 １ ３只 （ 鸭 ５只 ，母 鸭 ８只 ） 公 ，分别 翅静 脉 无 菌采 血 ３ｍＬ（ Ｄ ＡＣ
抗凝剂抗 凝 ） ． １ ２ 主 要 试 剂 ．
ＡＣ Ｄ抗 凝剂 （ ． ８ 柠 檬酸 、１ ３ 柠檬 酸钠 、１ ４ 葡萄 糖） Ｂ — （ Ｂ 、含 ０ １ ｔ ｅ ０ ４ ．２ ．７ ，Ｐ ＳＴＥ Ｐ Ｓ ． ５ ｗｅｎ一２ 、 ０ ３ Ｅ Ｔ Ｄ Ａ、ｐ Ｈ一７ ２ ，ＵＮＩ ．） Ｑ一１ ０柱式 临 床样品 基因组 Ｄ ＮＡ 小量抽 提试 剂盒 ， ＵＮＩ Ｑ一１ ０柱式质 粒 小量
１ ３ 镜 ． 检
鲜血压 片镜 检和姬 姆萨染 色镜检 ．
收 稿 Ｅ期 ：２ ０ ｔ ０ ７—１ —０ １ ９
作 者 简介 ：於
通 讯 作 者 ：聂
剑（９２ ） １ ８ 一 ，男 ， 重庆 巴南 人 ，硕 士 研 究 生 ， 主要 从 事 动 物传 染 病 学 与 寄 生虫 病 学 研 究．
Ｄ ＮＡＳａ 进 行 同 源性 分 析 并 构 建 系统 进 化树 ，显 示 与 恶 臭 假 单 胞 菌 （ ｅ ｄ ｍｏ ａ ｕｉ ａ 同 源 性 最 近 ，首 次 发 ｔｒ Ｐｓ ｏ ｎ ｓ ｔ ） ｕ ｐ ｄ 现 恶 臭 假 单胞 菌可 能 感 染 家 鸭 关 键 词 ： ；恶臭 假 单 胞 菌 ；１ Ｓ ｒ 鸭 ６ ＤＮＡ；系 统 进 化 树
２０ ０ ８年 ６月
Ｊ ｎ ２ ０ ｕ． ０８
文 章 编 号 ：ｌ Ｏ Ｏ Ｏ一５ ７ （０ ８ ０ ４ １ ２ ０ ） ３—０ ９ ０ ９—０ ６
一
株 鸭 源 恶 臭 假 单 胞 菌 １ ｒ ＤＮＡ ６ Ｓ 的序 列 测 定 与 分 析
於 剑 ， 聂 奎 密金 玲。 ， ， 周 作 勇。 ， 罗洪林 刘 勤 妮 唐 远 菊 ， ， ，
抽提试 剂盒 ， ＤＨ５ ． ｏｉ 通 用 引 物 ： Ｆ５ 一 ａＥ ｃｌ ， Ｐ ’ ＡＧＡＧ ＴＧ ＴＴ ＡＴＣＣ ＧＧＣ ＡＧ 一 ’ Ｐ ’ Ｃ Ｃ ＡＣ Ｔ ＴＣ ３ ， Ｒ ５ 一 ＧＧ Ｔ —
Ｃ ＴＧ ＡＣ ＡＣ Ｔ一３ （ 海 生 工 生 物 技 术 服 务 有 限 公 司 ） Ｔ ＴＴ Ｇ Ｔ ’上 ，Ａｘ Ｐ ｅ Ｄ ｙ ｒｐ ＮＡ 凝 胶 回 收 试 剂 盒 （ ＡＸＹ — ＧＥ ， Ｎ ｘ ｔｑ （ ｒｍｅａ ，限制 酶 Ｅ ｏ Ｉ Ｎ） ｄ ＴＰ Ｍｉ ， ａ 酶 Ｐ ｏ ｇ ） ｃ Ｒ ，ＨｉｄＩ，载体 ｐ ｎｌ Ｉ ＭＤ１一 ｅｔｒ（ ａ Ｒ ） ８Ｔ ｖ ｃｏ Ｔ Ｋａ ａ ．
奎 ，教 授 ．
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西南师 范大 学学报 （ 自然 科 学 版 ）
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第３ ３卷
１ ４ 病 原 的 分 离 纯 化 ．
选 鲜血 压片 和姬姆 萨 染 色 镜 检 都 为 阳 性 的 血 样 分 离 纯 化 ，即 ：将 抗 凝 血 于 １ ０ｍＬ离 心 管 中 ，ｌ５ ０ ０ ｒｍｉ 心 ２ ｉ， 血浆 及 白细胞 ， ／ ｎ离 Ｏ ｎ 弃 代之 以等 体积 的分 离 液 Ｐ ＳＴ 离 心管 平放 于 摇 床 ３ ／ ｎ震摇 Ｂ － Ｅ； ０ｒｍｉ ４ ｎ ２０ ０ｒ ｍｉ 心 ２ ｎ 将上 清转 移到 １ ５ｍＬ的离心管 中 ， ５０ ０ｒｍｉ ５ｍｉ ， ０ ／ ｎ离 ０ｍｉ ， ． １ ０ ／ ｎ离心 ｌｈ 弃上 清 ， ， 加 入 ０ ３ｍＬ Ｐ Ｓ液混匀 ，于一２ ． Ｂ Ｏ℃冻 存．