HIV实验室标准操作规程

H I V实验室标准操作规程
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沙洋县人民医院
艾滋病筛查实验室
作业指导书
编制人：王笑石
审核人：王笑石
批准人：李克华
批准日期：2016/1/1
实施日期：2016/1/1
G
受控编号：
输血科
修订页
CHEMCLIN 600全自动化学发光仪
标准化操作规程（SOP）
一．工作环境
温度：10℃—30℃
湿度：小于70%
电源：220V，50Hz
二．开机前的的准备工作
1．确保废液桶已清空；
2．配制洗针液，确保洗针液的量足够做完一批试验；配置方法见附录1；
3．配制洗板液，并装入洗板液桶中，确保洗板液的量足够做完一批试验（每整板微孔板实验需准备洗板液500ml左右）；配置方法见附录2；
4．准备好试剂和标本。

三．开机
1．打开仪器电源开关（仪器正面左侧）
2．打开打印机电源
3．打开显示器及电脑主机电源，待电脑启动后双击桌面图标，即可启动仪器。

四．开机维护
在运行实验之前，需要对仪器做一次日常维护，具体步骤如下：
1.点击主界面中的“维护”按钮，就进入到维护界面，如下图所示：
图1 维护界面
1.准备好洗针液、洗板液及酒精等系统液体，确保洗板液管路在洗板液桶中，点击
“开机维护”按钮，仪器开始执行开机维护动作；
2.开机维护完成后，点击窗口右上角“关闭”按钮，即可退出维护界面；
3.将酒精溶液收好并盖好瓶盖。

五．选择项目和样本
在仪器进行完日常维护后，就可以编制工作列表，具体流程如下：
1.点击主界面中的“项目”按钮，进入“项目选择”界面中选择此次试验需要做
的项目，点击“确认”返回到主界面；
2.在主界面的样本输入框中输入此次试验需要做的样本数，点击按钮，就能将
所需做样本添加到项目中；
3.预选择样本对应的项目。

在样本和项目对应表中可通过点击或拖住鼠标左键来选
择，被选中的样本列表变为黄色；也可通过再次点击左键来取消预选的样本；可
通过点击按钮选定所有的样本，同样可通过点击按钮取消所有的选择；
4.确认样本和项目对应表。

检查无误后点击对应表中项目的名称栏，被选中的项目
列表则变为深绿色。

六．运行检测样本
在选择好检测项目和样本后，就可以进行如下操作：
1.在主界面点击“运行”按钮，系统会弹出一对话框，提示选择试剂批号。

若为
默认批号直接点“确定”按钮，若需更改试剂批号或质控品、校准品重复孔数，可点击“更改”按钮进行更改。

2.根据软件提示的标本、微孔板、试剂、校准品的位置来摆放这些组分的位置。

（注意：一定按照仪器提示的位置来摆放）
3.点击“运行”按钮，仪器开始工作。

（注意：当仪器检测到有的试剂量或样本量
不够时，仪器会弹出提示框，按提示补充试剂或样品后再点击“重试”）。

4.当所有实验结束后，仪器提示“实验已完成”，点击“确定”；再点击“退出”
按钮回到主界面。

5.通过点击主界面的“结果”按钮可进入到数据处理界面，在此界面可进行数据的
结果的显示、查询、打印等功能。

七．关机维护
在测试结束后，需要对仪器再进行一次日常维护，具体步骤基本与第四部分“开机维护”相同，唯一不同的是确保洗板液管路在去离子水桶中，点击“关机维护”功能按钮。

将微孔板盖用酒精擦拭干净。

八．关机
点击主界面中“退出”按钮即可退出测试软件，之后关闭电脑。

九．保养
1.日保养
A.每次实验前后都需要执行维护程序，具体参照第四部分“开机维护”和第七
部分“关机维护”；
B.做完试验后请用酒精擦拭台面，保持台面清洁；
C.每次实验后需要执行维护程序，要将微孔板盖用酒精擦拭干净；
D.做完实验后，关闭电源，用棉签蘸上酒精分别对四根加样针的外壁进行擦
拭。

2.周保养
在日保养的基础上增加管路消毒和试剂瓶清洗，具体按如下步骤进行操作：
A.将置于去离子水中的洗板机管路放置到保养液中（二氧化氯，配置方法见附
录3），多次执行维护程序中的“洗板机维护液灌洗”；然后再将管路放回到去离子水瓶中，再反复执行“洗板机维护液灌洗”，直至冲洗干净。

B.将盛放A、B底物、稀释液等通用试剂瓶用去离子水进行清洗并晾干备用。

3.月保养
在周保养的基础上增加对试剂桶的维护保养，倒掉残余的洗针液和洗板液，用去
离子水进行涮洗，直至桶内无异物。

十．注意事项
1、为确保实验的顺利进行，在实验过程中请关闭仓门；
2、仪器运行时，请不要操作电脑运行其它程序，也不能使用U盘或其他即插即
用设备，否则会造成仪器运行错误；
3、载架放置一定要正确，注意观察指示灯，灯亮表示放置正确；灯不亮表示放
置不正确，需重新放置；
4、摆放试剂一定要注意位置编号，不要放错；试剂量要足够，禁止液面有气
泡；
5、试剂瓶瓶内液体不能加注得过满，以免在分配试剂的过程中吸入空气，造成
部分孔加不上试剂；
6、标本一定要处理好，切忌有血凝块及纤维蛋白原；
7、血清的最少量为 (300+*A)ul A为标本所做项目的所需血清数量之和；
8、拼板时，不够8孔时一定要用废孔填充，且要平，以达到最佳效果；
9、确保洗针台的废液管路通畅，废液管路不能深入到废液桶内过长；
10、仪器进行日维护，要确保针管路中无气泡。

CHEMCLIN 600化学发光仪器溶液配制规程
洗针液配制方法
1、将去离子水加入到配液桶内，加至接近2L刻度处；
2、取20mL专用洗针浓缩液加到配液桶中；
3、再加去离子水定容至2L刻度处；
4、盖紧配液桶盖，摇匀待用；
5、从洗针液传感器秤上取出洗针液桶，倒立后拧开瓶盖，将配好的洗针液倒入
该桶中；
6、依据上述方法，将洗针液桶灌满；
7、拧紧洗针液桶瓶盖，将管路和瓶盖装好，配制工作结束。

附录2
洗板液配制方法
1、将去离子水加入到配液桶内，加至接近2L刻度处；
2、取1瓶（每瓶100ml）专用洗板浓缩液加到配液桶中；
3、再加去离子水定容至2L刻度处；
4、盖紧配液桶盖，摇匀倒入到洗板液桶中；
5、配制工作结束。

附录3
洗板机管路冲洗液二氧化氯溶液配制方法
1、将去离子水加入到桶内，加至1L刻度处；
2、取两粒二氧化氯的片剂置于桶中；
3、盖紧配液桶盖，摇匀直至片剂完全溶解，待用；
4、配制工作结束。

生物安全柜(BSC-1500ⅡA2-X型)标准操作规程1．目的
为规范BSC-1500ⅡA2-X型生物安全柜的操作，确保该仪器的正确使用，依据《输血实验室管理程序》条款的要求制定本规程。

2．适用范围
适用于输血科（血库）技术人员进行实验技术操作。

3．职责
输血科（血库）技术人员负责BSC-1500ⅡA2-X型生物安全柜的操作。

4．原理（略）
5．所需设备和材料（略）
6．环境条件（略）
7．操作步骤
实验前，先用75%乙醇擦拭操作台表面以去除污染，划分好生物安全柜内的清洁区、半污染区与污染区，将仪器的“Light”按钮按到“.”标志处，打开紫外灯消毒
30min，然后将实验全部物品按照相应分区分别移入生物安全柜内。

消毒结束后，将“Light”按钮按到“ON”标志处，关闭紫外灯，开启实验照明灯。

将“Blower”按钮按到“ON”位置，打开鼓风机，然后把生物安全柜前玻璃窗拉升到适当位置（不能高于,否则仪器会报警），待鼓风机运转15min后，将双臂缓缓伸入安全柜内，静止1min,待压力指示仪表稳定以后，再进行实验操作。

操作时应按照从清洁区到污染区进行，以避免交叉污染。

为防止可能溅出的液滴，可在操作台面上铺一层用消毒剂浸泡过的纱布，但不能覆盖生物安全柜气流通道。

实验完成后，先用消毒液溶液擦拭操作台面，然后关闭玻璃窗，保持风机继续运转10～15min，同时打开紫外线灯，消毒30min。

消毒30min后，关闭紫外灯和鼓风机。

8．注意事项
生物安全柜内不得放入与本次实验无关的物品，物品放置不得挡住气道口，以免干扰气流正常流动。

操作时，严禁使用酒精灯等明火，以避免产生的热量干扰柜内气流稳定，且明火可能损坏高效过滤器。

操作时，尽量减少实验室内人员走动，以防止柜内气流不稳定。

在实验操作时，操作者应保证脸部在工作窗口之上，动作应轻柔、舒缓，防止柜内气流受到影响。

生物安全柜应定期进行检测与保养。

工作中一旦发现生物安全柜运行异常，应立即停止使用，采取相应处理措施，并通知相关人员检查维修。

9．相关文件及表单（略）
人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（化学发光法）
临床检验标准操作规程
一、项目名称：人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（化学发光法）
二、实验原理：
采用双抗原夹心（两步法）分析模式，预先采用基因工程HIV(1+2) 特异性蛋白抗原包被固相发光微孔板。

加入血清或血浆标本后，待测抗体与包被抗原形成复合物，再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的相同抗原，三者结合形成双抗原夹心结构，洗涤除去未结合的酶标抗原，加入HRP化学发光底物液，测定其发光强度（RLU），根据临界值判断样本中是否含有HIV特异性抗体。

三、试剂：
为北京科美生物技术有限公司提供人类免疫缺陷病毒抗体化学发光诊断试剂盒，规格为96T，2-8℃贮存，有效期6个月；在效期内使用试剂。

四、仪器：
可适用北京科美生物技术有限公司提供的GloRun、CDM-I发光分析仪、ECLIA-II发光分析仪、CHEMCLIN-600全自动发光仪、CHEMCLIN-1500全自动发光仪。

五、操作步骤：
自4℃冰箱中取出试剂盒，室温(18～25℃)平衡20分钟。

将发光板从密封袋中取出，设空白对照一孔，不加样本稀释液和样本，设阴性对照3孔，阳性对照2孔，取阴性对照和阳性对照分别加入100μl 于相对应对照孔中。

其余每孔先加样本稀释液50μl，再加入样本50μl。

微量震荡器充分振荡混匀，用不干胶片封盖反应板。

发光板置37℃温育30分钟，小心甩去反应液，用稀释后的洗涤液洗板5次，每孔加满洗涤液，每次浸泡10秒，最后在干净的吸水纸上拍干。

空白孔除外，每孔加入酶结合物100μl，轻轻振荡混匀后，用不干胶片封盖反应板。

发光板置37℃温育30分钟，洗板5次，操作同上，拍干。

将发光底物A液与B液 1:1混合后，每孔加入底物工作液100μl。

置室温避光反应5分钟后，须于加化学发光底物液后的第5-30分钟内用发光仪测定各孔RLU值（测量时间1秒/孔）。

六、质量控制：
质控血清符合规定；
一旦发现失控，应即时查找和分析原因，并在该结果栏作详细的批注和记录解决的过程；失控情况处理及原因分析按照实验室内失控分析程序进行。

七、结果计算
临界值（CUTOFF）＝×阴性对照孔平均RLU值。

待测样品RLU值≥临界值为HIV抗体阳性。

待测样品RLU值＜临界值为HIV抗体阴性。

对呈阴性反应的样品，可由实施检测的实验室出具HIV抗体阴性报告；对呈阳性反应的样品，须进行复检，不能出阳性报告。

阳性样品的复检试验：对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。

如两种试剂复测均呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确认实验室进行确认（见图1）。

八、性能指标：
精密性：分析内 CV% ≤15%（n=10）
有效期：在2～8℃贮存，有效期12个月。

交叉反应：对临床确诊的22例风疹病人血清、13例类风湿关节炎病人血清、15例系统红斑狼疮病人血清、16例干燥综合症病人血清、8例多肌炎病人血清进行HIV1+2型抗体检测未出现阳性。

九、方法局限性：
本试剂盒仅用于血清或血浆样本的测定，对其它体液样本测定的可靠性尚未得到充分的实验确认。

此试剂不能用于HIV抗原的筛查。

低滴度的HIV抗体在感染的初期不能被检出，阴性结果不能排除HIV1、HIV2的感染。

变异的HIV1型（M群和O群）HIV2型可能出现假阴性，已知检测方法中，尚无法完全保证消除漏检。

加热标本可以影响结果。

十、临床意义：
HIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。

以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势而进行的检测，检测的人群包括各类高危人群和一般人群。

以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况而进行的检测，包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。

以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。

十一、标本采集及处理：
1 检测标本种类要求：静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本；溶血、脂血、黄疸血不宜使用，如需使用，应在报告单上注明“标本溶血/脂血/黄疸”。

2 受检者准备：受检者无需做特殊准备；
3 标本采集及处理：宜空腹采集静脉血，无需抗凝，采用离心方法分离血清，分离血清应彻底，不含纤维蛋白；病人标本无需特殊制备处理，采用正确医用技术收集全血标本，离心分离后提取血清用于检测。

使用抗凝剂（浓度为L枸橼酸钠，5mmol/L EDTA-Na，15IU/ml肝素，10mmol/L草酸钠）不影响检测结果。

4 标本保存：留取的标本最好在当天检测，不能立即检测的应放置于2-8℃不应超过3天，血清置于-20℃以下可长期保存，但应避免反复冰融。

5. 同规格的塑料离心管；
6 标本外送：如涉及到需要外送的标本，必须以规定的容器（塑料离心管）存放并密封，并根据邮寄规则和要求进行包装，运送时还要放入冰袋（2-8℃）或干冰（-10℃）由专人运送至指定地点指定接收人。

7 标本拒收：凡与以上所述内容不符的标本，检验人员应向临床或就诊者说明拒收标本的原因，并提出解决的方案或建议。

十二、注意事项：
1 84消毒液等强氧化剂能引起发光底物液发生反应，导致结果误判，故发光操作实验室应禁止使用此类消毒剂.
2 检测必须符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染。

所有样品、洗弃液和各种废弃物都应当按传染物处理。

3 不要使用过期的试剂，操作前应仔细阅读使用说明书，严格按照说明书的操作程序进行，不同批号的试剂和包被板不能混用。

包被板要干燥保存，用完后立刻放回密封袋中封严后保存。

4 各试剂必须摇匀后使用，用前应平衡到室温，严格控制每步反应的时间和温度。

5 加样操作应快速准确手法一致，慢吸快打，不要使溶液粘到孔壁上，尽量缩短整个加样时间。

6 每次加样完毕后，应用微量震荡器充分振荡混匀，并避免产生气泡防止溶液溅出。

7 以洗板机洗板时，每孔注液量不应少于400μl，洗板次数不少于5次，浸泡时间不短于10秒，并注意检查加液头是否堵塞。

洗板完后还应在干净的吸水纸上扣干。

8 以手工洗板时，每次洗液都应加满微孔，最后应在干净的无纸屑吸水纸上扣干以防止外源性过氧化物酶类似物或氧化还原物质与底物发生反应，影响检测结果的准确性。

9 加发光底物液的加样器应专用，加样吸头应确保干净无污染，在加发光底物液的过程中应避免加样吸头与板孔或手指接触，以防底物受到污染而造成本底升高。

10 为防止样品蒸发及避免污染，温育时应将反应板放于密闭干净的塑料袋内或用不干胶覆盖。

11血样品应充分离心，3000转/分钟离心6分钟以上，使血清（浆）不含纤维蛋白及红、白细胞，否则会引起假阳性结果。

十三、参考文献：
1 WS/T227-200
2 临床检验操作规程编写要求
2 Boscato LM,Stuart MC. Heterophilic antibodies; a problem for all Chem 1988:34:27-33
3 全国艾滋病检测技术规范（2004年版）中国疾病预防控制中心。