哮喘气道重塑中钙调神经磷酸酶与蛋白激酶 活性的相互调节

A= 77.2 ? P $ 巯基乙醇） 透析过夜。 ! 标记底物置于 B
（ &4-5&6 -+7.(+0 : : 哮喘反复发作可伴有气道重塑 24’8） ， 引起不可逆性气流阻塞及持续性非特异性支 气管高反应性。后者是导致哮喘患者对常规治疗手 段效果不好的重要原因之一
［ <］
。目前关于气道重
塑的分子机制尚未完全阐明。 近年发现， 体内唯一的 #&= > ? 钙调素依赖的蛋 参与 白磷酸酶钙调神经磷酸酶 （ ,&2,4’+;-4’，#&@ ） 多种细胞功能的调节， 除引起免疫细胞活化、 调节神 经递质释放和突触可塑性外， 还能介导心肌肥大、 成 纤维细胞增殖等
基金项目： 国家自然科学基金 （ ’%AA%%9’ 和 ’%’%%!A’ ） 资 助 0RUU;VWO\ bY WBO *)W?;@)< *)WRV)< 0‘?O@‘O/ a;R@\)W?;@ ;X (B?@) （ ’%AA%%9’ )@\ ’%’%%!A’ ） / OG:)?<，‘BO@Y)B;@Kd [?U5 /?@)5 ‘;: "(;VVO/U;@\?@K )RWB;V’
・ 622・
・论著・
哮喘气道重塑中钙调神经磷酸酶与蛋白激酶 活性的相互调节
陈亚红!" ，姚婉贞! ，赵鸣武! ，庞永政" ，唐朝枢"
（ !# 北京大学第三医院呼吸科， 北京$ !%%%&’ ； " 北京大学第一医院心血管研究所） 研究钙调神经磷酸酶 （ ()*） 信号途径与蛋白激酶 ( （ +,(） 、 丝裂素活化蛋白激酶 （ -.+, ） 和蛋白 ［ 摘$ 要］ 目的： 激酶 . （ +,.） 的相互调节在哮喘气道重塑发病中的作用。方法： 建立卵蛋白诱导的哮喘豚鼠模型， 实验分为： 哮喘 组、 ()* 抑制剂环孢霉素 . （ (/.） 组和对照组， 采用磷酸化和去磷酸化方法测定肺组织 ()* 活性、 -.+, 活性、 +,( 活性、 +,. 活性。在离体培养的大鼠气道平滑肌细胞 （ .0-(） 中， 以尾加压素 ! （ 1!） 为刺激因素， 测定 ()*， +,( 和 -.+, 活性以及它们之间的相互调节。结果： （!） 哮喘组 ()* 活性、 -.+, 活性和 +,( 活性分别较对照组高 !23 （ ! 4 %5 %! ） 、 "&3 （ ! 4 %5 %! ） 和 ’63 （ ! 4 %5 %6 ） ， +,. 活性较对照组低 6’3 （ ! 4 %5 %! ） 。 (/. 组 ()* 活性、 -.+, 活性和 +,( 活性分别较哮喘组低 6"3 （ ! 4 %5 %! ） 、 !&3 （ ! 4 %5 %6 ） 和 6"3 （ ! 4 %5 %! ） ， +,. 活性较哮喘组高 "5 76 倍 （ ! 4 %5 %! ） 。 （"） 1 ! !% 8 9 :;< = > 孵育 "% :?@ 引起 .0-( +,( 和 -.+, 活性分别较对照组增加 AA3 和 "A3 （ ! 4 %5 %! ） ， 并呈时间依赖性引起 .0-( 中 ()* 活性增加， "A B 为对照组的 !5 79 倍 （ ! 4 %5 %! ） 。 （’） 与单用 1! !% 8 9 :;< = >组比， ()* 抑制剂 (/. !% 8 7 :;< = > 使 ()* 活性降低了 A63 （ ! 4 %5 %! ） ， -.+, 抑制剂 +C2&%62 6% （ ! D %5 %6 ） ， +,( 抑制剂 E9 6% ":;< = > 使 ()* 活性下降 "!3 （ ! 4 %5 %6 ） 。 （A） (/. ":;< = > 对 ()* 活性无明显影响 !% 8 7 :;< = > 作用使 1! !% 8 9 :;< = > 刺激的 .0-( +,( 活性下降了 !A3 （ ! 4 %5 %6 ） ， 对 -.+, 活性无明显影响 （! D %5 %6 ） 。结论： 在哮喘气道重塑的发生过程中， ()* 与 -.+,、 +,( 和 +,. 之间存在相互调节。 ［ 关键词］ 哮喘； 钙神经素； 蛋白激酶类 ［ 中图分类号］F67"# "6$ $ ［ 文献标识码］.$ $ ［ 文章编号］!79!G!79H （ "%%6 ） %7G%622G%A
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［ =］
。我们以前的工作发现， 肺组织
［ A， B］
并具有磷酸酶活性； 而 #&@ 信号途径参 表达 #&@， 与哮喘豚鼠气道重塑 。 #&@ 信号途径与其他调 增殖的蛋白激酶如蛋白 节气道平滑肌细胞 （ %C$# ） 激酶 # （ !"# ） 、 丝裂素活化蛋白激酶 （ $%!" ） 和蛋 白激酶 % （ !"%） 之间的交联目前尚未阐明。本工作 在卵蛋白诱导的哮喘豚鼠模型和离体培养的大鼠 %C$# 上， 研究 #&@ 信号途径与 !"# 、 $%!" 和 !"% 之间的相互调节， 以阐明哮喘气道重塑的分子机制。 )* 材料与方法 ) 9 )* 材料 雄性健康豚鼠和 D4/1&- 大鼠购自北京大学医学 部实验动物中心。所有动物实验均遵循中华人民共 和国动物实验管理规定。卵蛋白、 钙调素 （ ,&27.(;0 24’，#&$ ） 、 !"%、 %E!0@&= 、 !"# 底 物 肽 等 为 美 国 C487& 公司产品， #&@ 抑制剂环孢霉素 % （ #/% ） 为瑞 士 C&’(.F 产品， ［ !0A= ! ］ %E! 购自 @G@ H;I.’1 公司 （ 比放射活性为 A9 J K <L 3NO ? 7P ） ， 其他试剂为市 售分析纯产品。 ) 9 +* 哮喘豚鼠模型的制备
我们以前的工作发现哮喘豚鼠存在明显的气道重塑表现在大气道平滑肌细胞合成增加外周肺组织气道壁和气道平滑肌增厚同时气管和肺组织能减轻哮喘豚鼠气道重塑并抑制增殖和碱性成纤维细胞生长因子zm诱导的肺成纤维细胞增殖胶原合成和分泌提示信号途径参与哮喘豚鼠气道重塑2
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