胎盘生长因子在非小细胞肺癌胸腔积液中的临床价值

胎盘生长因子在非小细胞肺癌胸腔积液中的临床价值
王静
【摘要】目的探讨检测胎盘生长因子(PIGF)在非小细胞肺癌胸腔积液中的临床价值.方法选择在我医院就诊的非小细胞肺癌合并胸腔积液的患者117例的资料进行分析,对PIGF在非小细胞肺癌胸腔积液中的表达及其对临床疗效的影响进行探讨.结果 117例患者中,按照PIGF表达结果分为PIFG阳性组51名,PIFG阴性组66名,PIFG阴性组患者的胸腔积液治疗效果优于PIFG阳性组,PIFG阴性组患者的微血管密度值低于PIFG阳性组患者,PIFG阳性组患者的无进展生存时间与总生存时间均低于PIFG阴性组患者(P<0.05),年龄,TNM分期,淋巴转移,手术切除和PIGF表达是否阳性均为非小细胞肺癌并发胸腔积液患者死亡的独立危险因素(P<0.05).结论对于胎盘生长因子表达阳性的非小细胞肺癌患者,其胸腔积液的治疗效果相对较差,而胎盘生长因子表达阳性也是非小细胞肺癌患者治疗效果的独立影响因素,可以作为精准医疗的一个新靶点进行开发.%Objective To investigate the clinical value of placental growth factor(PIGF) detection in pleu-ral effusion of non-small cell lung cancer. Methods The data of 117 patients with non small cell lung cancer com-plicated with pleural effusion in our hospital were analyzed, and the expression of PIGF in pleural effusion of non-small cell lung cancer and its influence on clinical efficacy were investigated. Results Among the 117 patients,51 cases were PIFG-positive,and 66 cases were PIFG-negative. The clinical effiecacy of the PIFG-negative group was better than that of the PIFG-positive group.The microvessel density of PIFG-negative patients was lower than that of PIFG-positive patients. The progression-free survival time and total survival time of the PIFG-positive
group were low-er than those of the PIFG-negative group (P<0.05). Age, TNM stage, lymph node metastasis, surgical resection and positive expression of PIGF were independent risk factors for non-small cell lung cancer complicated with pleural effusion (P<0.05). Conclusion The treatment effect of pleural effusion is relatively poor for positive placenta growth factor expression in non-small cell lung cancer patients, and the independent risk factor is positive placenta growth factor expression in treatment of patients with non-small cell lung cancer,which can also be used as a new tar-get for the development of precision in medical care.【期刊名称】《临床肺科杂志》
【年(卷),期】2018(023)006
【总页数】5页(P1017-1021)
【关键词】胎盘生长因子;非小细胞肺癌;胸腔积液
【作者】王静
【作者单位】061000 河北沧州,沧州市人民医院呼吸内科
【正文语种】中文
在我国人群中的肺癌分类中，最主要的病理学种类是非小细胞肺癌，其占据的比例往往在五分之四左右，在所有的中晚期肺癌中，非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer，NSCLC)的比例也超过了70%[1-2]。

NSCLC的组织侵袭性较强，患者的预后一般较差，而且NSCLC所引起的胸腔积液占据所有成人恶性胸腔积液
的20%到50%之间，大多数均为肺腺癌转移所导致[3]。

目前临床上一般认为NSCLC的细胞对胸膜产生侵袭时导致恶性胸腔积液产生的主要原因，但是具体的
作用机制和发病原理尚没有定论。

有研究结果认为血管内皮生长因子(Vaccular endothelial growth factor，VEGF)在NSCLC侵犯胸膜的过程中起到了促进的作用[4]，而胎盘生长因子(Placental growth factor，PIGF)属于VEGF体系中的一员，该因子的氨基酸序列与VEGF之间的同源性将近70%，可以特异性的与VEGFR-1/Flt-1进行结合，在人体的血管生长和炎症反应过程中扮演着重要的角
色[5]。

目前已有研究证明，PIGF在NSCLC患者的血清和肿瘤组织中的表达程度
显著高于健康者[6]，但对于PIGF在NSCLC患者的恶性胸腔积液中的表达情况和在导致NSCLC患者出现胸腔积液并发症的作用机制尚不清楚。

本研究为2010年
1月到2014年8月在我医院就诊的非小细胞肺癌合并胸腔积液患者117例的资
料分析，对胎盘生长因子在非小细胞肺癌胸腔积液中的表达及对临床疗效的影响进行探讨，报告如下。

资料与方法
一、临床资料
选择2010年1月到2014年8月在我医院就诊的非小细胞肺癌(NSCLC)合并胸腔积液患者117例的资料分析，年龄分布在36岁到72岁，平均年龄54.01±15.29岁，本研究已经过我医院医学伦理委员会的批准和通过，所有患者和家属都签署了知情同意书。

纳入标准：①手术患者经过病理证实，未手术患者经过支气管镜检查证实，确诊为NSCLC；②患者合并有胸腔积液；③患者或者家属可以提供治疗3
年后的随访信息；④患者及家属对本研究知情同意并且签署知情同意书。

排除标准：①患者病灶没有经过病理学或临床诊断，无法确诊是否为NSCLC；②患者拒绝接
受治疗；③患者合并有消化系统、神经系统、免疫血液系统等疾病，可能对研究的结果造成影响；④患者对研究中所使用的药物和器材有过敏现象。

二、研究方法
1 NSCLC合并胸腔积液的治疗方法：患者入院后进行B超探查液性暗区并对穿刺
点进行标注，使用ARROW管进行胸腔引流，首次积液的引流量要求低于1L，之后根据患者的耐受情况进行2至3天的引流，利用B超探查显示积液排尽后利用
留置的ARROW管分两次注入顺铂50mg，药品注入后休息2h，每20min变化
一次体位，保证药物与胸腔的充分接触，闭管48h后开放引流。

在治疗期间注意
对患者肝脏，肾脏等重要脏器的保护，及时进行对症的支持治疗。

完成治疗后对血常规，肝肾功能和胸部B超进行复查，记录胸腔积液的变化情况和患者的不良反应。

2 患者的分组方法：利用微波抗原修复SP免疫组织化学染色的方法，参考文献[7]中的技术，对肿瘤组织中的PIGF抗体进行染色。

PIGF阳性染色均在细胞质，每
张切片在阳性染色较高的区域选择10个高倍视野(×400)，连续计数至少1000个肿瘤细胞，计算阳性细胞的比率。

将阳性肿瘤的比例高于5%定义为PIFG表达阳
性(PIFG阳性组)，将阳性肿瘤的比例小于或者等于5%定义为PIFG表达阴性(PIFG阴性组)。

3 微血管密度值(MVD)检查：利用CD31染色血管内皮细胞，计算微血管密度值。

CD31染色阳性在血管内皮细胞的胞浆内，进行微血管计数时，首先在低倍视野(×100)下选择肿瘤组织切片中血管密度最高的区域，再利用高倍视野(×400)选择
边界清晰，非连续的管腔结构进行计数，取4个视野的平均值作为肿瘤组织的MVD值。

4 主要试剂：鼠抗人CD31单克隆抗体购自北京中杉公司，工作浓度是1:100，PIGF多克隆抗体购自Santa Cruz公司，工作浓度是1:100，SP染色试剂盒购自
北京中杉公司。

三、观察指标
1 入组患者的分组结果。

2 两组患者的胸腔积液治疗效果比较，治疗效果判定标准参考英国胸科学会胸膜疾病指南(BTS Pleural Diseasse Guideline)中的标准[8]分为：完全缓解，部分缓解
和无效三个级别，其中完全缓解的标准为患者临床症状完全消失，B超探查结果胸腔积液消失，胸膜腔闭合或大部分粘连，维持时间超过4周；部分缓解的标准为
患者的临床症状出现缓解，B超探查结果胸腔积液降低量高于原始量的50%，胸
膜腔为纤维素包裹，分割，剩余的量维持4周没有增加；无效的标准为患者的临
床症状无任何改善甚至出现加重，B超探查结果胸腔积液降低量低于原始量的50%或者出现增加，或者在4周内出现复发的情况。

3 对两组患者的微血管密度值(MVD)检查结果进行比较。

4 对两组患者的无进展生存时间与总生存时间进行比较。

5 以患者完成治疗后3年的时间内是否出现死亡为标准，分为死亡组与存活组，对两组的情况进行比较，筛选NSCLC并发胸腔积液患者死亡的独立影响因素。

四、统计学分析
采用SPSS20.0软件进行统计学处理，对数据进行描述性分析,计量资料结果使用
表示，两组计量数据比较采用t检验，两组计数数据比较采用χ2检验，两组等级资料比较采用秩和检验中的Wilcoxon检验，生存分析采用Kaplan-Meier法进行计算，并利用Log-rank检验，利用Logistic多因素回归分析筛选独立的危险因素，P<0.05为差异有统计学意义。

结果
一、入组患者的分组结果
PIGF阳性表达可以看到棕黄色颗粒充满细胞质，如图1所示。

根据免疫组化染色结果，在117例NSCLC并发胸腔积液患者中，PIGF阳性表达
为51例，阳性率为43.59%，即PIFG阳性组51名患者，PIFG阴性组66名患者。

图1 PIGF在非小细胞肺癌中的阳性表达(×200)
二、两组患者的胸腔积液治疗效果比较结果
PIFG阴性组患者的治疗效果分布如下：完全缓解37人，占56.06%，部分缓解
27人，占40.91%，无效2人，占3.03%；PIFG阳性组患者的治疗效果分布如下：完全缓解24人，占47.06%，部分缓解22人，占43.14%，无效5人，占
9.80%，PIFG阴性组患者的胸腔积液治疗效果优于PIFG阳性组，数据差异具有
统计学意义(Z=8.959，P<0.05)。

三、两组患者的微血管密度值(MVD)比较结果
PIFG阴性组患者的MVD为20.31±7.02个，PIFG阳性组患者的MVD为
27.43±8.57个，PIFG阴性组患者的MVD低于PIFG阳性组患者，数据差异具有统计学意义(t=4.939，P<0.05)。

四、两组患者的无进展生存时间比较结果
PIFG阳性组患者的无进展生存时间中位数为19.980个月，95%CI为14.645-25.315个月，PIFG阴性组患者的无进展生存时间中位数为23.495个月，95%CI 为19.750-27.241个月，两组数据差异具有统计学意义(χ2=4.172，P<0.05)。

(见图2)。

图2 两组患者无进展生存曲线
五、两个组患者的总生存时间比较结果
PIFG阳性组患者的总生存时间中位数为25.757个月，95%CI为21.013-30.501
个月，PIFG阴性组患者的总生存时间中位数为32.354个月，95%CI为28.218-36.490个月，两组数据差异具有统计学意义(χ2=3.996，P<0.05)。

(见图3)。

图3 两组患者患者总生存曲线
六、NSCLC并发胸腔积液患者死亡的单因素分析
117名患者中，共有44名患者死亡(死亡组)，73名患者存活(存活组)，对两组患
者的资料进行比较，进行NSCLC并发胸腔积液患者死亡的单因素分析，结果表明年龄，TNM分期，淋巴转移，手术切除和PIGF表达是否阳性可能与患者死亡有
关(P<0.05)。

(见表1)。

表1 非小细胞肺癌并发胸腔积液患者死亡的单因素分析项目存活组(n=73)死亡组(n=44)统计量P值年龄
( x±s)(岁)51．03±15．3458．81±14．02t=2．7430．007性别
χ2=0．4200．517 男(n)4122 女(n)3222TNM分期
( x±s)(期)1．42±0．462．07±0．62χ2=6．480<0．001癌症类型
χ2=0．3490．951 鳞癌(n)1511 腺癌(n)3420 鳞腺癌(n)116 大细胞癌(n)137淋
巴转移χ2=34．460<0．001 是(n)1231 否(n)6113手术切除
χ2=13．178<0．001 是(n)5317 否(n)2027PIGF表达是否阳性
χ2=64．217<0．001 是(n)1140 否(n)624
七、NSCLC并发胸腔积液患者死亡的多因素分析
将NSCLC并发胸腔积液患者是否死亡作为因变量，其中0=存活，1=死亡，对以上单因素分析中出现阳性结果的项目进行多因素分析，赋值如下：淋巴转移(0=否，1=是)，手术切除(0=是，1=否)，PIGF表达是否阳性(0=否，1=是)，变量纳入方法为“进入”，结果显示，年龄，TNM分期，淋巴转移，手术切除和PIGF表达
是否阳性均为NSCLC并发胸腔积液患者死亡的独立危险因素(P<0.05)。

(见表2)。

表2 非小细胞肺癌并发胸腔积液患者死亡的多因素分析相关因素回归系数β标准
误Waldχ2P值OR值(95%CI)年龄0．2650．0869．4520．0021．303(1．134-1．472)TNM分期0．9540．27911．700<0．0012．596(2．049-3．142)淋巴转移2．3140．38236．629<0．00110．114(9．365-10．864)手术切除1．2530．31216．098<0．0013．500(2．888-4．112)PIGF表达是否阳性
3．2680．58930．752<0．00126．258(25．103-27．413)
讨论
在诸多因素的共同作用下，非小细胞肺癌(NSCLC)目前已经成为对我国人群健康构成严重威胁的重大公共卫生问题之一，在世界范围内，该疾病无论是在发达国家还是发展中国家，也都对人群的健康形成巨大的威胁。

尽管对于NSCLC的研究已经进行多年，也取得了若干令人鼓舞的结果，但是对于该种疾病的研究尚存在很多的疑点，其中对于血管生长因子与肿瘤所导致的胸腔积液之间的关联就是其一[9]。

现有研究结果已经证明，在肿瘤内新生血管的生成过程，在肿瘤的生长，复发和转移过程中发挥着相当重要的作用，从数字上看，在肿瘤组织的生长超过2mm的情况下，就会有新生的血管生成[10]。

在正常的人体中，脉管系统是处于各类血管生长因子与抑制因子相对平衡的状态下，以一种网络化的负反馈机制维持着稳态，但是在病理状态之下，特别是恶性肿瘤发生的情况，这种稳态被打破，血管生成的一方占据了上风。

对于血管生长因子与抑制因子的肿瘤的发生发展过程中所起的作用已经在世界范围内成为肿瘤学研究的焦点问题之一。

而对于两种因子的平衡对于NSCLC患者产生恶性胸膜积液的关系也成为研究的方向。

肿瘤细胞的转移，侵犯胸膜一般被认为是恶性胸腔积液生成的主要原因，但是由于发病机制比较复杂，所以很难找到单独的理论对其进行解释。

其涉及到病理改变有肿瘤新生血管增多，毛细血管的通透性上升，血管和淋巴的回流受阻等等。

已有的研究结果[4]证明VEGF是一种具有内皮细胞特异性的有丝分裂原，能够直接促进肿瘤血管的生成，而且在增强血管通透性的作用下强于组胺，并且在肿瘤的胸膜转移和恶性胸腔积液形成中起到关键作用。

在NSCLC转移或者侵润到胸膜之后，VEFG的水平显著提升，对癌症患者的治疗效果也构成了直接影响[11]。

PIGF是VEFG家族中的重要一员，专家最早发现该因子是在人类胎盘的cDNA文库中分离纯化得到。

已经证明PIFG具有诱导血管内皮细胞的增殖与迁移功能，还具有促
进内皮细胞游走与增加血管通透性的作用，在于较低浓度的VEFG协同作用下，可以使VEFG的生物学功能进一步增强，而且已经在多种肿瘤的组织中发现其表达程度较高，被认为是肿瘤生长过程中重要的促血管生长因子[12]。

已经有研究结果显示NSCLC患者体内血清中的PIGF含量明显高于健康人。

Zhang[13]等人的研究结果表明，PIGF可以激活MAPK-p38的信号通路，使基质金属蛋白酶9的表达水平上升，促使NSCLC患者的癌细胞侵袭与转移的能力增加。

在本研究中，按照免疫组化染色的方法定义NSCLC患者是否为PIGF阳性，并且分为两个组别，对两组患者的肿瘤组织中的微血管密度值与恶性胸腔积液的治疗效果进行了对比。

数据显示，PIGF阴性组患者的微血管密度值显著低于PIGF阳性组的患者，数据差异具有统计学意义(P<0.05)，此结果证明了PIGF的肿瘤血管生长促进作用，在阳性率高的肿瘤组织中，自然微血管密度更高，组织生长也更为迅速，对人体造成创伤的可能性也就越高。

而PIGF阴性组患者的治疗效果显著优于PIGF阳性组的患者，形成此结果的可能原因如下：PIGF属于肿瘤血管生成的促进因子，同时该因子对于肿瘤细胞所产生的炎症介质也非常敏感，会直接促进血管的通透性增加，使粘连的效果降低，最终导致胸水增长速度过快，可以认为随着PIGF阳性率表达的上升，利用含铂类化疗药物治疗的效果也就越差。

在本研究中采用了顺铂进行胸腔灌注的方法对积液进行治疗，该种药物为化疗方案中的常用药物，其效果已经得到肯定，不仅可以直接对肿瘤细胞造成杀伤，而且还具备温和胸膜硬化剂的作用，可诱导胸膜粘连，减少毛细血管的渗出[14]。

临床上认为恶性胸腔积液的治疗效果与胸膜的血管形成与血管渗透性之间有关，而Gkiozos[15]等人的研究结果已经表明VEGF在NSCLC合并胸腔积液患者体内表达水平显著增高，并且与治疗效果负相关，在利用VEGF抑制剂的情况下，可以对胸水的渗出起到一定的抑制作用。

本研究结果显示，PIGF阴性组患者的无进展生存时间与总生存时间数据均显著优于PIGF阳性组的患者，可以认为PIGF表达阳性预示着患者的
远期治疗效果较差。

在按照患者是否出现死亡进行分组后的危险因素分析中，最终PIGF表达阳性与患者的年龄，淋巴转移，TNM分期，手术切除均称为了独立危
险因素(P<0.05)，此结果表明肿瘤新生血管情况是NSCLC患者预后的重要影响因素，而PIGF在血管生成中所起到的作用很重要，提示需要对新确诊的NSCLC患
者进行PIGF表达情况筛查，也有理由相信针对PIGF的靶向治疗不仅可以改善NSCLC患者胸腔积液的治疗效果，还可以延长患者的生存时间，值得在将来进行
深入研究。

综上所述，对于胎盘生长因子表达阳性的NSCLC患者，其胸腔积液的治疗效果相对较差，而胎盘生长因子表达阳性也是NSCLC患者治疗效果的独立影响因素，可以作为精准医疗的一个新靶点进行开发。

参考文献
[1] 曹建忠,欧广飞,梁军,等.三维适形放疗治疗局部晚期非小细胞肺癌的疗效[J].中华肿瘤杂志,2011,33(7):529-534．
[2] 赵静,武二伟,邢爱民,等.119例局部晚期非小细胞肺癌放化疗后预后分析[J].临床肺科杂志,2017,22(8):1481-1485.
[3] Froudarakis ME．Pleural effusion in lung cancer:more question than answers[J]．Respiration，2012，83(5):367-376．
[4] Sandler AB,Johnson DH,Herbst RS.Anti-vascular endothelial growth factor monoclonals in non-small cell lung cancer[J].Clin Cancer Res，2004，10(12 Pt 2)：4258s-4262s.
[5] Kleinrouweler CE,Wiegerinck MM,Ris-Stalpers C,et al.Accuracy of circulating placental growth factor,vascular endothelial growth
factor,soluble fms-like tyrosine kinase 1 and soluble endoglin in the prediction of pre-eclampsia:a systematic review and meta-analysis[J].BJOG，
2012，119(7)：778-787.
[6] 王丽红,刘巍,刘华.肺癌患者血清VEGF-B和PIGF的表达及临床意义[J].国际呼吸杂志,2013,33(4):254-257.
[7] 张力建,陈晋峰,陆爱萍,等.胎盘生长因子和色素上皮衍生因子在非小细胞肺癌中的表达及其与预后的关系[J].中华医学杂志,2005,85(47):3328-3331.
[8] Roberts ME,Neville E,Berrisford RG,et al．Management of a malignant pleural effusion:British Thoracic Society Pleural Diease Guideline
2010[J]．Thorax，2010，65(Suppl 2):ii32-ii40．
[9] 桂萍,宋盈,郭光云.恩度联合顺铂腔内化疗对中晚期非小细胞肺癌患者外周血sPD-L1、CEA水平的影响[J].临床肺科杂志,2017,22(7):1218-1221.
[10] Jiménez B,Volpert OV.Mechanistic insights on the inhibition of tumor angiogenesis[J].J Mol Med,2001,78(l2):663-672.
[11] Yano S,Nishioka Y,Goto H,et al．Molecular mechanisms of angiogenesis in non-small cell lung cancer,and therapeutics targeting related molecules[J]．Cancer Sci，2003，94(6):479-485．
[12] Dewerchin M,Carmeliet P．PIGF:a multitasking cytokine with disease-restricted antivity[J]．Cold Spring Harb Perspect Med，2012，2(8):56．[13] Zhang W,Zhang T,Lou Y,et al．Placental growth factor promotes metastases of non-small cell lung cancer through MMP9[J]．Cell Physiol Biochem，2015，37(3):1210-1218．
[14] Gkiozos I,Tsagouli S,Charpidou A,et al．Levels of vascular endothelial growth factor in serum and pleural fluid are independent predictors of survival in advanced non-small lung cancer:results of a prospective study[J]．Anticancer Res，2015，35(2):1129-1137．
[15] 朱江红,高云,杨胜利,等.全身化疗联合顺铂胸腔灌注治疗非小细胞肺癌恶性胸腔积液的临床观察[J].西部医学,2013,25(7):1012-1014.。