青蒿素对人肝癌HepG2细胞增殖的影响

青蒿素对人肝癌HepG2细胞增殖的影响
岳小庆;徐春芳;胡小龙;谢丹;杨丹;朱文赫
【摘要】目的：研究不同浓度和作用不同时间的青蒿素对人肝癌细胞HepG2生
长的抑制作用。

方法取对数生长期的细胞接种于96孔板，给予不同浓度的青蒿素0．10．20．40．60．81．01．2 mmol／L）处理，给药24 h后在倒置显微镜
下观察细胞形态的改变，并用MTT法检测药物的细胞毒作用。

结果倒置显微镜下，细胞随药物浓度和作用时间的增加对细胞的毒性作用增强，细胞数目均有所减少，多数细胞体积固缩变小，失去原有肿瘤细胞形态而略呈圆形。

MTT结果显示，不同浓度青蒿素对肿瘤细胞的抑制效果呈现出浓度和时间的依赖性。

1．2 mmol／L 的青蒿素，作用细胞24 h后的抑制率达到了81．33％。

结论青蒿素在体外对肝HepG2细胞的增殖有明显的抑制作用，并呈现一定的时间和剂量依赖
性。

%Objective To explore the effects of artemisinin with various concentrations and at different time points on human hepatocellular carcinoma cells HepG2 ) .Methods HepG2 cells in logarithmic growth phase were seeded into 96-well plates and treated by artemisinin
0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2 mmol/L).Then the cell morphology changes were observed under the inverted microscope and the toxicity were detected by MTT measurement after 24 h. Results Under the inverted microscope,with the concentration increased and time went on,the toxic effects on cells can be enhanced,and the number of cells was reduced,most cell volume become shrinkage and small,losing their shape and getting slight rounded.MTT data showed that the artemisinin in different concentrations inhibited HepG2 proliferation in a dose-and time-dependent manner.The
concentration of ART was 1.2 mmol/L,the inhibition rates reached
81.33%.Conclusion Artemisinin have a significant inhibition on HepG2 cells proliferation in vitro in a dose-and time-dependent manner.
【期刊名称】《吉林医药学院学报》
【年(卷),期】2016(037)003
【总页数】3页(P191-193)
【关键词】青蒿素;增殖;人肝癌细胞
【作者】岳小庆;徐春芳;胡小龙;谢丹;杨丹;朱文赫
【作者单位】吉林医药学院，吉林吉林 132013;吉林医药学院，吉林吉林 132013;吉林医药学院，吉林吉林 132013;吉林医药学院，吉林吉林 132013;吉林医药学院，吉林吉林 132013;吉林医药学院，吉林吉林 132013
【正文语种】中文
【中图分类】R285.5
青蒿素(artemisinin)是我国科研人员于1972年首次从菊科植物黄花蒿中提取出来的一种具有过氧桥结构的倍半萜内酯化合物。

由于抗疟活性高、毒性小，已作为治疗疟疾的首选药物，根据其抗疟疾的机制之一与铁剂密切相关，学者们考虑将其运用于抗肿瘤[1-3]。

目前已有研究报道发现青蒿素及其衍生物具有明显的抗肿瘤活性，对多种肿瘤细胞的生长具有明显抑制作用[4]。

在我国，原发性肝癌主要以肝细胞发生为主，为常见的恶性肿瘤之一，发病呈逐年上升的趋势，其死亡率在全球恶性肿瘤中排第三位，目前尚未发现满意的治疗手段[5]。

本研究运用MTT法检测青蒿素对肝HepG2细胞增殖的影响，并在倒置显微镜下
观察不同浓度和作用时间，青蒿素对肝HepG2细胞的毒性作用。

1.1 主要试剂及仪器
青蒿素(Sigma公司)，二甲基亚砜将成品配制成0.5 mol/L母液保存于-4 ℃冰箱中，实验前用培养液将其稀释成所需浓度。

LDZ4-1.2低速自动平衡离心机(北京京立离心有限公司)，090-135 008-000倒置显微镜(Leica)，DL-CJ-1N医用型洁净工作台(北京东联哈尔仪器制造有限公司)，MCO-18AIC恒温CO2培养箱(Sanyo)，680型全自动酶标仪(Bio Rad)。

1.2 细胞及细胞的培养
人肝HepG2细胞由吉林医药学院生物化学教研室保存，细胞于含10%小牛血清、100 U/mL青霉素和100 μg链霉素的RPMI-1640培养液中，置37 ℃、5%
CO2饱和湿度的细胞培养箱中培养。

每2 d更换培养液1次，待细胞长满至培养
瓶底，以0.25%胰酶消化传代。

取对数生长期细胞进行实验。

1.3 青蒿素对人肝HepG2细胞增殖的影响
取对数生长期的细胞，调整细胞浓度为1×105个/mL接种于96孔培养板中，每
孔加200 μL细胞悬浊液，37 ℃、5% CO2恒温箱中孵育12 h后吸出原液，实验组加入不同浓度青蒿素(0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mmol/L)，每孔200 μL，对照组细胞加入200 μL培养液，每组设5个复孔。

于加药处理24 h。

每孔
加入20 μL MTT液(5 g/L),继续培养4 h后,吸取上清液。

每孔加入二甲基亚砜
150 μL,振荡10 min，使MTT完全溶解,波长定于570 nm,测定光密度值。

细胞生长抑制率%=(1-实验组吸光度值/对照组吸光度值)×100%。

1.4 倒置显微镜下观察细胞形态
细胞接种于96孔板，经不同浓度青蒿素处理细胞后24 h，置于倒置显微镜下，
观察不同浓度药物组及空白对照组细胞形态、大小及生长情况。

2.1 青蒿素对人肝癌HepG2细胞增殖的影响
MTT结果显示(图1)，不同浓度青蒿素(0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mmol/L)对人肝癌HepG2细胞增殖具有明显的抑制作用，24 h的抑制率为
6.48%、15.72%、22.99%、41.21%、5
7.08%、73.3%和81.33%。

随着药物浓
度和给药时间的增加，呈现一定的时间和剂量依赖性。

2.2 倒置显微镜观察细胞形态
倒置显微镜观察结果显示(图2)，对照组细胞呈现不规则多边形或梭形，贴壁生长，细胞间相互连接成片生长。

而实验组细胞数量形态有不同程度的变化，细胞数目均有所减少,多数细胞体积固缩变小,失去原有肿瘤细胞形态而略呈圆形、椭圆形，且
呈现一定的时间和剂量依赖性。

青蒿素的药理作用广泛，包括抗疟疾、抗肿瘤、免疫抑制、抗病毒、抗孕等。

其抗疟疾作用已得到公认，并且广泛应用于临床治疗[6-7]。

肿瘤作为威胁人类健康与
生命的恶性疾病，是医学界有待攻克的一大难题。

由于青蒿素具有毒性小的特点,
优于传统抗肿瘤药物，在抗肿瘤方面更加具有前景，目前也掀起了研究青蒿素及其衍生物抗肿瘤的热潮[8-9]。

本研究以人肝癌HepG2细胞为研究对象，探讨青蒿素的抗肿瘤作用。

MTT实验
结果显示，不同浓度青蒿素对肿瘤细胞的抑制效果呈现出浓度和时间的依赖性，与浓度和时间呈正相关关系。

1.2 mmol/L的青蒿素作用细胞24 h后的抑制率达到
了81.33%，展现了很好的抗肿瘤效果。

倒置显微镜观察结果显示，青蒿素作用细胞后，细胞数量形态有不同程度的变化，细胞数目均有所减少,多数细胞体积固缩
变小,失去原有肿瘤细胞形态而略呈圆形、椭圆形，且呈现一定的时间和剂量依赖性。

本实验结果证实，青蒿素对人肝癌HepG2细胞增殖具有明显的抑制作用，展现的很好的抗肿瘤效果，但是具体的机制仍需进一步的研究。

【相关文献】
[1]丁大鹏，马文丽，吴清华,等.青蒿素作用前后K562细胞基因表达谱的改变[J].实用医学杂
志,2009,25(6):852-854.
[2]邓小荣,余和平,王克强,等.青蒿素对肝癌抑制作用的实验研究[J].实用临床医学,2007,8(11):1-3.
[3]吕翠岩,陈信义,唐炳华.青蒿素及其衍生物逆转肿瘤耐药作用初探[J].中国中医药信息杂
志,2006,13(4):12-13.
[4]呼文亮,姚丽,谢红,等.青蒿素抗肿瘤作用机制研究[J].中国药房,2008,19(36):2804-2808.
[5]裴晶，朱宇同，宋健平,等.青蒿素及其衍生物抗肝癌研究进展[J].中医学报,2011,26(3):267-269.
[6]赵昉,郑绍琴.青蒿素衍生物对非小细胞肺癌A549细胞增殖的影响[J].浙江中西医结合杂
志,2012,22(2):94-96.
[7]郭燕,王俊,陈正堂.青蒿素类药物的药理作用新进展[J].中国临床药理学与治疗学,2006,11(6):615-620.
[8]李赟,王燕,关志男,等.四甲基偶氮唑蓝法考察青蒿素和双氢青蒿素对人肝癌细胞增殖的影响[J].中国药物与临床,2012,12(5):552-554.
[9]陈海金,张瑞琴.应用MTT法分析青蒿素对人癌细胞系Hella细胞的体外细胞毒作用[J].中国肿瘤临床与康复,2004,11(1):30-31.。