实验一、蛋白质的两性电离及等电点测定

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（2）用细滴管缓慢加入0.02mol/L盐酸溶液，、边滴边摇， 直至有明显的大量沉淀发生，此时溶液的pH值接近酪蛋 白的等电点。观察溶液颜色的变化，记录，分析原因。
（3）继续滴入0.02mol／L盐酸溶液，观察沉淀和溶液颜色 的变化，记录，分析原因。
（4）再滴入0.02mol／L氢氧化钠溶液进行中和，观察是否
➢ 3、通过往五支不同pH值溶液的试管内加入酪蛋 白，观察沉淀出现的情况，确定其等电点。
➢ 4、共同讨论测定等电点的原理。
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一、蛋白质的两性电离 多肽链中氨基酸残基中有可解离基团，
如 ： 末 端 -COO- 、 -NH3+ ， 酸 性 氨 基 酸 侧 链- COO- ，Lys的ε-NH3+，Ar现方式做保护处理对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑并不能对任何下载内容负责
实
验
一
蛋
白
质
两
性
电
离
与
等
电
点
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【教学目标】
➢ 1、独立操作，一丝不苟地作实验。 ➢ 2、仔细观察不同阶段试剂颜色变化及沉淀的出
现和消失，通过现象观察能分析蛋白质两性电离 的性质，正确填写实验报告。
出现沉淀，记录，解释原因。当继续滴入0.02mol／L氢
氧化钠溶液时，观察沉淀和溶液颜色的变化。解释其原因。
作好记录。
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结果及分析
操作
在酪蛋白溶液中加入 指示剂 滴入HCL至出现大量 沉淀 继续滴入HCL
滴入NaOH溶液
继续滴入NaOH溶液 至沉淀溶解
实验结果
精选2
【实验原理】
蛋白质分子是两性电解质。蛋白质在溶液的 pH值为等电点时游离为两性离子，溶解度 最低，容易沉淀析出。若在大于或小于等 电点的溶液中，因蛋白质分子带有同种电 荷而相互排斥，不易产生沉淀。
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【试剂】
➢ 1、0.5％酪蛋白醋酸钠
➢ 2、0.01％溴甲酚绿指示剂 变色范围是 pH3.8～5.4。指示剂的酸色型为黄色，碱色型 为蓝色。
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（3）该实验要求各种试剂的浓度和加入量必须相 当准确。除了需要精心配制试剂以外，实验中应 严格按照定量分析的操作进行。
思考题
• 根据实验观察结果，指出哪一支试管的pH是酪 蛋白的等电点？在等电点时蛋白质的溶解度为什 么最低？请结合你的实验结果和蛋白质的胶体性 质加以说明。
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4.0 1.0
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_
1.0mol/L醋酸溶液
2.4
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酪蛋白醋酸钠溶液 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
溶液的最终pH
3.2 4.1 4.7 5.3 5.9
沉淀出现的多少
(2)静置约20 min，观察每支试管中溶液的混浊度，以-，
+，++，+++，++++符号表示沉淀的多少，将结果记录
于上表中。
*蛋白质的等电点(pI) 当蛋白质溶液处于兼性离子，净电荷为 零，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。
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蛋白质的性质之一：两性电离与等电点
NH3+
P
+OH-
COOH +H+
正离子
pH＜pI
P NH3+ +OH-
+H+
COO--
兼性离子 pH=pI
NH2
P
COO-
负离子 pH＞pI
各种蛋白质的氨基酸组成不同，解离情况不同，等 电点不同。多数接近5.0。
➢ 3、0.02mol／L盐酸溶液
➢ 4、0.02mol／L氢氧化钠溶液
➢ 5、1.00mol／L乙酸溶液
➢ 6、0.10mol／L乙酸溶液
➢ 7、0.01mol／L乙酸溶液
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【操作】
1、蛋白质的两性电离
（1）取一支试管，加入0.5％酪蛋白醋酸钠溶液20滴和 0.01％溴甲酚绿指示剂2滴，摇匀。观察溶液颜色，记录， 并分析原因。
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2、酪蛋白等电点的测定
（1）取5支试管，编号后按下表的顺序准确地加入 各种试剂，．然后混合均匀(每管加入酪蛋白醋酸 钠溶液后，须立即摇匀该管)。
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试剂(ml)及管号
1
2
3
4
5
蒸馏水（ml)
1.6
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3.0 1.5 3.4
0.01mol/L醋酸溶液
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_
_
2.5 0.6
0.10mol/L醋酸溶液