EBV血清学诊断及临床应用欧盟ppt课件

EBNA (IgG) 阴性 早期?
EBV抗体谱检测: 示例
亲和力检测
EBV-CA (IgG) EBV-CA (IgG)
w/o urea
with urea
早期 EBV-CA (IgM) EBV-EA (IgG)
晚期或既往 EBNA (IgG)
EBV-CA (IgM) 阳性 早期
• IgM-持续存在? • 亲合力检测 • 高亲和力 anti-EBV-CA (IgG) ➢ 晚期或既往感染
EBV-EA IgG
positive reaction
Hale Waihona Puke negative reaction
Virus serology IIFT EBV 荧光模式 (4)
positive reaction
EBNA negative reaction
Virus serology IIFT EBV亲合力检测
Test A 样本缓冲液温育
实用儿科临床杂志第二十二卷第二十二期，儿童EB病毒传染性单核细胞增多症临床特征及诊断标准，谢正德 首都医科大学二附属北京儿童医院
欧蒙EBV产品系列
完 整 的 解 决 方 案
EUROIMMUN
欧蒙EBV荧光产品
FI 2799-1 FI 2799-1x
Virus serology IIFT EBV 荧光模式 (1)
infection symptoms
course of disease
Anti-EBV antibodies: Anti-EBV-CA (IgG)
antibody titer
[weeks]
[months]
symptoms
course of disease
Anti-EBV antibodies: Anti-EBV-EA (IgG)
EA-IgA
优势： • 研究较早，且验证充分
Int J Cancer. 1976 Jan 15;17(1):1-7.
• 极高的特异性（接近100%）
J Clin Virol. 2007 Dec;40(4):284-8. Epub 2007 Oct 31
EA-IgA 特点： • 特异性高，敏感性一般
• 方案2： CA-IgA用于初筛，必要时采用EA-IgA用于验证。
欧蒙解决方案
• ELISA
靶抗原 抗体类型
抗原及来源
CA IgA/IgG/Ig 感染EBV的人B
M
细胞裂解物
(IgM-天然
gp125)
EA
IgA/IgG/Ig 大肠杆菌表达的
M
重组EA-D
• IFT
靶抗原
抗体类型 抗原及来源
CA
IgA/IgG/IgM 表达细胞
• 发病人群 发达国家：15 ~ 25岁 中国：学龄或学龄前少儿
EBV相关疾病
鼻咽癌 (nasopharyngeal carcinoma)
• 发生于鼻咽粘膜的上皮性 恶性肿瘤
• 具有明显的区域性和人种 倾向性
• 东南亚国家常见癌症之一， 发病率10~53/100,000人 • 中国南部发病率 15~30/100,000
样本温育(两次) 清洗
Test B 尿素溶液温育
Test A
Test B
清洗 酶结合物温育
Test A
Test B
滴度改变
清洗
滴度相似
低亲合力抗体:
Anti-EBV-CA
+ Buffer
+ Urea
高亲合力抗体:
Anti-EBV-CA
+ Buffer
+ Urea
EBV抗体谱检测: 示例
亲合力检测
EBNA (IgG) 阳性 晚期 或既往
欧蒙EBV ELISA产品
EI 2791 EI 2795 EI 2793
靶抗原
CA EA NA
抗体类型
抗原及来源
IgA/IgG/IgM IgA/IgG IgG
感染EBV的人B细胞裂解物 (IgM-天然gp125) 大肠杆菌表达的重组EA-D
昆虫细胞表达的重组蛋白
EBV-CA (IgG) EBV-CA (IgG)
w/o urea
with urea
早期 EBV-CA (IgM) EBV-EA (IgG)
晚期或既往 EBNA (IgG)
Patient 1
新近感染
Patient 2
既往感染
EBV抗体谱检测: 示例
亲和力检测
EBV-CA (IgG) EBV-CA (IgG)
亲合力检测
提供 不提供 不提供
欧蒙EBV 膜条产品：EUROLINE EBV Profile 2
DN 2790
早期
早期或晚期 晚期 晚期
• 所有相关抗原包被在同一膜条 • 可提供IgG和IgM抗体检测 • 可实现全自动操作
• 可通过EUROLineScan软件进行数字化结 果分析
鼻咽癌 (nasopharyngeal carcinoma)
w/o urea
with urea
早期 EBV-CA (IgM) EBV-EA (IgG)
晚期或既往 EBNA (IgG)
EBV-CA (IgM) 阴性 晚期或 既往?
1. EBNA 阴性是由于EBNA缺失? 2. CA-IgM阴性是由于5%的新近感染不产生IgM?
• 亲合力检测 • 低亲合力 anti-EBV-CA (IgG) ➢ 早期感染
EBV（Epstein-Barr Virus）
• 一种常见的人疱疹病毒 • 结构特点：
内核：缠绕DNA的核心蛋白 中环：衣壳蛋白（二十面体） 外环：包膜（上面有刺突）
EBV相关疾病
传染性单核细胞增多症 (Infectious Mononucleosis,IM)
• EBV原发感染急性发作的疾病
• 在少儿或青春期初次感染EBV，部分个体会 出现 IM 病症
疱疹病毒家族
Cytomegalievirus (CMV)
Epstein-Barr Virus (EBV)
Varicella-Zoster Virus (VZV)
Herpes Virus Family
Human Herpes Virus (HHV-6, -7, -8)
Herpes simplex virus (HSV-1, HSV-2)
EBV-CA IgG
positive reaction
negative reaction
Virus serology IIFT EBV 荧光模式 (2)
EBV-CA IgM
positive reaction
negative reaction
Virus serology IIFT EBV荧光模式 (3)
early phase
late phase
antibody titer
[weeks]
[months]
symptoms
course of disease
Anti-EBV antibodies: Avidity
Anti-EBV antibodies: Early phase
early phase
antibody titer
Everything is possible!
结论：单纯依靠抗EBV-CA-IgM阳性来诊断传单，敏感性较低，结合 EBV抗体谱和亲合力检测可提高诊断的敏感性
临床检验杂志2005年第23卷第5期，谢正德等，抗体亲合力检测对诊断儿童EBV相关性传染性单核细胞增多 症的意义
CA-IgA
推荐检测策略
CA-IgM CA-IgG
移） 高发区人群中的例行筛查意义重大 找到合适的早期诊断指标至关重要
筛查手段
• NPC临床诊断标准：组织活检
• EBV血清学诊断的作用凸显 优势：便于体检操作，技术成熟 问题：如何选择标志性抗体
优势：
• 研究较早
VCA-IgA
VCA-IgA
优势：
• 验证充分
2004 年第三届中国肿瘤学 术大会
EBCA-IgA是目 前唯一进行过大 样本量普查研究 的筛查指标
优势：
• 权威支持
VCA-IgA
N Engl J Med. 2001 Dec 27;345(26):1877-82.
优势：
• 高灵敏度
VCA-IgA
J Clin Virol. 2007 Dec;40(4):284-8. Epub 2007 Oct 31
——与EBV有明确关联的肿瘤
NPC 病因
遗传因素（家族与种族聚集现象） 环境与饮食（甲醛接触、咸鱼与腌制食品） 与EBV感染联系紧密（相关度100%） （所有NPC患者体液及血清中均存在EBV的DNA与高于正常滴度值的 抗体。
NPC 诊断
早期基本无症状，出现症状就医时基本已到晚期 早期治疗，5年生存率可达90%以上。晚期治疗，不超过20%（癌转
血清学检测的复杂性
5% 的EBV新近感染不产生anti-CA (IgM) Anti-CA (IgM)在少数 病例中可以持续存在
20-30% 的新近感染不产生 Anti-EA (IgG)
Anti-EBNA (IgG) 阴性，由于： - 慢性活动性EBV感染 - 细胞免疫抑制
亲合力检测的必要性
• 对临床明确确诊的58例传单患者进行EBV多种抗体检测，结果：
antibody titer
[weeks]
[months]
symptoms
course of disease
Anti-EBV antibodies: Anti-EBNA (IgG)
antibody titer
[weeks]
[months]
symptoms
course of disease
Anti-EBV antibodies: Early and Late Phase
CA (IgM)
CA (IgM + IgG) EA (IgG)
CA (IgM) + CA (IgG, low avidity)
Antibody titer
Anti-EBV antibodies: Late phase
late phase
CA (IgG, high avidity) + EBNA (IgG)
J Clin Virol. 2007 Dec;40(4):284-8. Epub 2007 Oct 31
NPC检测策略
CA IgA • 研究得较早 • 在中国唯一经过大样本量普查
• 临床症状前3年（平均）即可显 阳性 • 灵敏度高
EA IgA • 研究得较早 • 特异性极高 • 灵敏度一般
• 方案1：CA-IgA、EA-IgA同时检测，最大限度保证检出率与可靠性。
聚合酶链反应（PCR）
受病毒载量变化影响检出
EBV抗原
• 主要关注的抗原类型 VCA(CA): 衣壳抗原 EA：早期抗原 EBNA：核抗原
• 主要关注的抗体类型 IgG IgM
Anti-EBV antibodies: Anti-EBV-CA (IgM)
antibody titer
[weeks]
[months]
EA
IgA/IgG
表达细胞
CA+EA IgA/IgG
表达细胞
EI 2791 EI 2795
FI 2791-2
CA/EA
欧蒙EBV产品线
可实现一次检测多个指标 - EBV Sequence IIFT - ELISA VCA, EBNA, EA - EUROLINE EBV Profile 2
Thanks & any questions
多个指标同时检测，综合判断
NA-IgG
EA-IgG
诊断标准
国内学者提出针对中国患者的诊断标准
国内诊断标准（需同时满 临床症状 足两个方面）
发热，咽峡炎，颈淋巴结大，肝大， 脾大中任3项
原发性EBV感染的血清学证 据（满足两项中任一项）
1.抗EBV-CA-IgM和抗EBV-CA-IgG 阳性，且抗EBV-NA-IgG阴性 2.抗EBV-CA-IgM阴性，而抗EBVCA-IgG阳性，且为低亲和力抗体
传染性单核细胞增多症 (Infectious Mononucleosis,IM)
——EBV原发感染导致的疾病
检测方法
血涂片检测活化淋巴细胞
敏感性及特异性较差
嗜异性抗体检测
多克隆B细胞活化 特异性较差，易与其他感染发生交叉反应 小于5岁儿童无法检测，不适于中国
血清学检测抗EBV相关抗原抗体
主流方法，保证敏感性和特异性