富含脯氨酸的酪氨酸激酶2（pyk2）介导离子霉素诱导的神经递质释放

逆转脓毒症内毒素耐受创新药物发现
殷　武１，卞金俊２
（１ 南京大学生命科学学院，江苏南京　２１００１６；２．第二军医大学长海医院，上海　２２００１５）
摘要：目的　内毒素耐受是脓毒症死亡重要病理机制，但治疗手段，尤其是小分子药物严重匮乏，该研究旨在发现能逆转脓毒症内毒素耐受的小分子化合物，为脓毒症治疗提供新的理论依据与策略。

方法　建立从细胞模型到动物模型、临床标本的药物活性评价体系，筛选小分子化合物库，发现能逆转脓毒症内毒素耐受的化合物，并采用分子生物学方法研究该化合物的作用机制。

结果　强心苷类化合物，如哇巴因具有逆转脓毒症内毒素耐受，提高存活率的新药理学活性。

作用机制与转录后精密调控ＴＨ１细胞因子ｍＲＮＡ稳定性相关，且该类化合物具有干扰素样新活性。

结论　强心苷类化合物是内外兼具的能用于脓毒症免疫治疗的候选药物（ＥＭＢＯｍｏｌＭｅｄ，２０１４）。

关键词：脓毒症；内毒素耐受；强心苷化合物；哇巴因；细胞因子；转录后调节
资助基金：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ３１０７１２５０，８１４７３２９３）
作者简介：殷　武，
博士，教授，主要研究方向：肿瘤耐药作用机制与药物发现；内毒素耐受作用机制与药物发现；脂肪发育与分化，Ｔｅｌ：０２５ ６６０９９００６，Ｅ ｍａｉｌ：ｗｙｉｎ２００３＠１６３．ｃｏｍ
富含脯氨酸的酪氨酸激酶２（Ｐｙｋ２）
介导离子霉素诱导的神经递质释放
张　钊１，楚世峰１，２，陈乃宏１
（１．中国医学科学院北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室，北京　１０００５０；
２．湖南中医药大学中医学院，湖南长沙　４１０２０８）
摘要：目的　富含脯氨酸的酪氨酸激酶２（ｐｒｏｌｉｎｅ ｒｉｃｈｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅ２，Ｐｙｋ２）属于非受体型酪氨酸蛋白激
酶，其虽在中枢神经系统中高表达，但甚少见其功能的相关报道。

Ｐｙｋ２可被细胞内升高的Ｃａ２＋激活，而细胞
内Ｃａ２＋浓度升高可触发突触前膜的神经递质释放，但Ｐｙｋ２是否参与中枢神经系统中突触前膜的神经递质释放过程并不清楚。

因此本研究旨在探索Ｐｙｋ２在神经递质释放中的作用。

方法　该研究采用钙离子载体
离子霉素诱导大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞（ＰＣ１２细胞）Ｃａ２＋浓度升高，进而触发多巴胺（ＤＡ）释放及Ｐｙｋ２的激
活。

并采用Ｐｙｋ２ｓｉＲＮＡ干扰内源性Ｐｙｋ２表达，构建Ｐｙｋ２各磷酸化位点的突变体观察其对递质释放的影
响。

结果　Ｃａ２＋引起的Ｐｙｋ２磷酸化与ＰＣ１２细胞释放多巴胺具有时间同步性，提示其可能参与了神经递质
释放过程。

采用Ｐｙｋ２ｓｉＲＮＡ干扰内源性Ｐｙｋ２表达后可明显抑制Ｃａ２＋诱发的ＰＣ１２细胞ＤＡ释放，表明Ｐｙｋ２
在Ｃａ２＋介导的ＤＡ释放过程中具有重要的作用。

进一步的研究发现Ｐｙｋ２的磷酸化改变具有位点特异性，即仅４０２位酪氨酸发生明显磷酸化改变，我们采用Ｙ４０２位点特异性磷酸化抗体发现Ｐｙｋ２时间依赖性的改变
来源于其Ｙ４０２位点的磷酸化改变，而过表达Ｐｙｋ２Ｙ４０２Ｆ突变体可明显抑制Ｃａ２＋浓度升高诱导的ＤＡ释放。

结
论　上述实验结果表明Ｐｙｋ２Ｙ４０２位点磷酸化在离子霉素诱导的多巴胺释放中发挥了重要作用。

提示我们对其有效调控可能是治疗神经递质释放紊乱的有效途径。

关键词：Ｐｙｋ２；Ｙ４０２；Ｃａ２＋；离子霉素；神经递质；多巴胺
基金项目：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ８１２７４１２２，Ｎｏ８１０７３０７８，Ｎｏ８１００１４８７，Ｎｏ８１３７３５１０，重点项目Ｎｏ９０７１３０４５）；国家科技部“重大新
药创制”科技重大专项（（Ｎｏ２０１２ＺＸ０９３０１００２ ００４，Ｎｏ２０１２ＺＸ０９１０３１０１ ００６）；国家８６３项目（Ｎｏ２０１２ＡＡ０２０３０３）；长江学者和创新团队发展计划（ＮｏＩＲＴ１００７）；北京自然科学基金（Ｎｏ７１３１０１３）；教育部博士点基金（Ｎｏ２０１２１１０６１３０００１）
·６０２·中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０１５Ｎｏｖ；３１（Ｓｕｐｐｌ）
作者简介：张　钊，助理研究员，研究方向：神经药理学和神经分子生物学，Ｔｅｌ／Ｆａｘ：０１０ ６３１６５１８２，Ｅ ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｚｈａｏ＠ｉｍｍ．ａｃ．ｃｎ；
陈乃宏，研究员，博士生导师，研究方向：神经系统疾患创新药物开发及作用机制，Ｔｅｌ／Ｆａｘ：０１０ ６３１６５１７７，Ｅ ｍａｉｌ：ｃｈｅｎｎｈ＠ｉｍｍ．ａｃ．ｃｎ
糖尿病并发症候选药物ＤＬ ０６０８的一般药理学研究
张惠芳，陈俞材，王丹姝，王月华，方莲花，杜冠华
（中国医学科学院北京协和医学院药物研究所，药物靶点研究和新药筛选北京市重点实验室，北京　１０００５０）
摘要：目的　ＤＬ ０６０８是本实验室通过高通量和高内涵技术筛选得到的活性化合物，是一种晚期糖基化终末产物（ａｄｖａｎｃｅｄｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎｅｎｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ，ＡＧＥｓ）裂解剂，在前期药效学研究中发现其具有一定的治疗糖尿病并发症的作用。

本实验通过观察ＤＬ ０６０８对整体动物心血管系统、呼吸系统和神经系统的影响，对其进行安全药理学研究，为今后药物的研究和开发提供实验依据。

方法　采用十二指肠给药方式观察ＤＬ ０６０８对
麻醉大鼠血压、心电图、心功能、呼吸幅度和频率的影响；采用灌胃给药的方式观察Ｄ
Ｌ ０６０８对小鼠自主活动、协调运动和戊巴比妥钠协同睡眠的影响。

结果　ＤＬ ０６０８对麻醉大鼠的心血管系统和呼吸系统无显著影响；ＤＬ ０６０８对小鼠的中枢神经系统无明显影响。

关键词：一般药理学；ＤＬ ０６０８；糖尿病并发症；心血管系统；呼吸系统；神经系统
基金项目：国家科技重大专项（Ｎｏ２０１３ＺＸ０９１０３００１ ００８，２０１２ＺＸ０９１０３１０１ ０７８，），国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ８１５７３６４５）
作者简介：张惠芳，硕士生，研究方向：心脑血管药理学与新药发现，Ｔｅｌ：０１０ ６３１３１５７１，Ｅ ｍａｉｌ：ｈｕｉｆａｎｇｚｈａｎｇ＠ｉｍｍ．ａｃ．ｃｎ；
方莲花，博士，研究员，博士生导师，研究方向：心脑血管药理学与新药发现，通讯作者，
Ｔｅｌ：０１０ ６３１６５３１３，Ｅ ｍａｉｌ：ｆａｎｇｌｈ＠ｉｍｍ．ａｃ．ｃｎ
；杜冠华，博士，研究员，博士生导师，研究方向：神经药理学与新药发现，通讯作者，Ｔｅｌ：０１０ ６３１６５１８４，Ｅ ｍａｉｌ：ｄｕｇｈ＠ｉｍｍ．ａｃ．ｃｎ
秀丽隐杆线虫在医学领域的研究进展
张建琴
（山西大学中医药现代研究中心，山西太原　０３０００６）
秀丽隐杆线虫（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓｅｌｅｇａｎｓ）是世界公认的，用于研究衰老相关疾病机制及新药研发的模式生物。

这得益于线虫独特的特征：个体小，易于培养、冻存及观察，生命周期短，基因组信息明确，灵活多样的遗传学可操作性。

不少国外的科学家和医药企业以线虫为平台筛选治疗人类疾病的化合物。

目前，在国内已有学者将模式生物线虫用于中药活性成分和中药复方等药理和毒理学研究。

虽然线虫作为新药研发的工具存在一定的缺陷，但是只要加以合理的应用，相信线虫将为我国的医药工作者提供良好的平台，用以研发具有自主知识产权的新药。

关键词：秀丽隐杆线虫；疾病；中药；药理
基金项目：２０１４中央提升张建琴项目（Ｎｏ２２６５４５００７）
作者简介：张建琴，博士，讲师，研究方向：动物生化与分子生物学，Ｅ ｍａｉｌ：ｊｉａｎｑｉｎｚｈ３＠１６３．ｃｏｍ·
７０２·中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０１５Ｎｏｖ；３１（Ｓｕｐｐｌ）。