第七章 基因治疗
合集下载
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
寡聚脱氧核苷酸（ODN）以DNA双螺旋分子 的专一性序列为靶子，通过与该序列形成 三螺旋DNA来阻止转录
㈡作用机制
合成脱氧寡核苷酸（ODN）（同聚嘌 呤或同聚嘧啶）
DNA分子中同聚嘌呤 ·同聚嘧啶 ODN也被称为TFO(triplex-forming oligo)
㈢技术关键 TFO 的设计与合成 1. 专一性 2. 稳定性 3. 摄取与分布
2.非生物学方法 脂质体，直接注射，受体介导基 因转移技术
一、基因转移的生物学方法
㈠逆转录病毒载体：
1. 逆转录病毒载体的结构
将前病毒DNA经适当改造并插入质粒后构建 而成 5′LTR/ 3′LTR 包装信号（ψ序列） Neo基因/ Ampr 酶切位点（多克隆位点）
2.包装细胞(packaging cell)
-------矮牵牛花的故事
1995年，美国康乃尔大学的Su Guo博 士 和Kemphues试图利用反义RNA技术阻断 秀丽新小杆线虫（C.elegans）中的par-1基 因，但却得到了一个意想不到的结果。在 对照实验中给线虫注射正义RNA（sense RNA）以期观察到基因表达的增强。但得 到的结果是二者都同样地切断了par-1基因 的表达途径。这是与传统上对反义RNA技 术的解释正好相反的。当时Guo等没能给出 合理的解释.
interference，简称RNAi）。
----- RNA干扰（RNA interference,RNAi）的首次命名
(Fire, 1998)
Par-1 Gene
线虫（C. elegans) +
Sense RNA
Expression Down
线虫（C. elegans)
Par-1 Gene Disruption
2. 其结构和性质与细胞膜极为相似， 二者易于融合，DNA由于细胞的内 吞作用进入细胞。
3.脂质体介导基因转移的方法
1.脂质体－DNA复合物的制备
用250µl DMEM培养基稀释1 µg外源基因，再 用250µl DMEM培养基稀释9µl脂质体，在5分钟 内和外源基因溶液混合，25℃孵育20分钟促使 DNA-脂质体混合物的形成。
基因治疗（gene therapy）——就是向有
功能缺陷的靶细胞补充相应功能基因， 以纠正或补偿其基因缺陷，或采用特定 的方式关闭、抑制异常表达的基因，从 而达到治疗的目的。
对象： 体细胞 生殖细胞
二、基因治疗的必要条件
1. 发病机制在DNA水平上已经清楚 2. 要转移的基因已经克隆分离，其表达
产物有详尽的了解
种ATP依赖的方式逐步切割成siRNA； 这种双链siRNA包括约20个碱基对， 且每条链的3’末端都悬垂着2个未配 对碱基。
③逆转录病毒在靶细胞基因组上的整合
破坏细胞正常生长的必须基因 破坏抑癌基因 LTR激活原癌基因 染色体重排激活原癌基因
二、基因转移的非生物学方法
㈠脂质体 ㈡直接注射 ㈢受体介导基因转移技术 ㈣其它方法
㈠脂质体( liposome )
1. 脂质体是磷脂在一定条件下在水中 形成的由脂质双分子层组成的内部 为水相的闭合囊泡。
第七章 基因治疗
1990.9.14 美国国立卫生研究院（NIH）的 布雷斯和安德森 首例基因治疗
4岁 女孩 严重免疫缺陷症(SCID) 缺乏腺苷酸脱氨酶(ADA) 2--脱氧腺苷含
量升高 毒性 严重破坏免疫功能
ADA基因 LN逆转录病毒载体 靶细胞为病人淋巴细胞
第一节 概 述
一、基因治疗的概念
第三节 反义RNA、核酶、三链 DNA、RNAi在基因治疗中的作用
一、反义RNA
1.反义RNA(anti sense RNA)是指 与mRNA互补的RNA分子 。
2.反义RNA与特异的mRNA结合而调 控其翻译。
㈠反义RNA在基因治疗中的意义及需解决 的问题
利用反义RNA进行基因治疗的方法： 1. 体外合成反义RNA，注射细胞 2. 构建转录反义RNA的重组质粒，转入
(一)ＲＮＡ干扰的历史
1995：矮牵牛花的故事 1995：线虫中的基因沉默现象 1998：RNA干扰（RNA interference,RNAi）
的首次命名 2000：哺乳动物细胞中基因沉默的实现 2001：被《科学》评为当年十大科技突破之一 2002 ：被《科学》评为当年十大科技突破之首 2003：动物体内观察到ＲＮＡ干扰作用 2004：在恒河猴上的ＳＡＲＳ病毒
-----线虫中的基因沉默现象
(Guo & Kemphues, 1995)
线虫（C. elegans)
Par-1 Gene
Expression
+
Antisense RNA Dow or Sense RNA n
-----线虫中的基因沉默现象
直到1998年华盛顿卡耐基研究院的Andrew Fir 和马萨诸塞大学医学院的Craig Mello等首次揭开这 个悬疑之谜。他们证实，Guo等遇到的正义RNA抑 制基因表达的现象，以及过去的反义RNA技术对基 因表达的阻断，都是由于RNA中污染了微量双链 RNA而引起。当他们将单链RNA纯化后注射线虫时 发现，基因抑制效应变得十分微弱，而经过纯化的双 链RNA却正好相反，能够高效特异性阻断相应基因的 表达，他们将这一现象称为RNA干扰（RNA
导入寡核苷酸抑制内源基因表达的方法：
1. 反义核酸 封闭基因表达
2. 核酶
裂解特异的靶mRNA
第二节 基因转移技术和靶细胞
基因治疗的基本方式：
1.体内直接转基因
体内法 ( in vivo)
2.体细胞介导的基因治疗
回体法 ( ex vivo)
基因转移的方法：
1.生物学方法 逆转录病毒载体，腺病毒载体， 腺病毒相关病毒载体，单纯疱疹病 毒载体
将缺失了包装信号及相关序列的缺 陷型逆转录病毒导入哺乳动物细胞， 这种细胞携带有逆转录病毒基因组， 从而能产生大量病毒包装蛋白。
逆转录病毒载体导入包装细胞后，载体转 录出的RNA(病毒基因组的部分序列、 标记基因、外源基因)被包装成病毒颗粒。
缺陷型的逆转录病毒颗粒(假病毒颗粒)
一次性感染
3.逆转录病毒载体的特点：
+
Antisense RNA
Expression
Down
(Fire, 1998)
Par-1 Gene
Expression
线虫（C. elegans) +
Double Strand RNA Down
线 虫， 果 蝇 微生物， 植 物
(三)RNAi作用的原理：
1.启动阶段：dsRNA被Dicer酶以一
理想的基因治疗还必须：
1. 外源基因可有效导入靶细胞 2. 外源基因能在靶细胞中长期稳定存留 3. 导入基因能适量表达 4. 导入基因的方法及载体对宿主细胞安
全无害
三、基因治疗的主要内容或策略
㈠基因标记 ㈡基因置换（基因矫正） ㈢基因添加（基因增补） (四)基因干预
㈠基因标记(gene labeling)
度敏感性，能适应不同的生理要求
㈡直接注射
方法：注射，包埋 注入外源基因的量与其表达量成正比 溶液类型对基因表达有影响： ① TE 损伤肌纤维
②生理盐水或PBS ③ 5%~30%的蔗糖溶液中
㈢受体介导基因转移技术
受体介导的细胞内吞作用 特点：
1. 具有细胞、组织或器官专一性，配 体只能被一些特异的细胞吞噬
细胞 问题： 1.降解 2.非专一性
㈡受体介导反义RNA转移技术
ASGP—PL—反义RNA
二、核 酶
具有催化活性的RNA。
核酶的二级结构对于催化活性很重要。 “锤头” 结构。
三个螺旋区；13（或11）个保守核苷酸 序列。
核酶的作用机制： 见课本 P16
三、三链DNA
㈠三链DNA在基因治疗中的意义
㈢基因添加（基因增补）
导入外源基因使靶细胞表达其本 身 不表达的基因。 类型： 1.导入正常的基因补偿缺陷基因的功 能 2.导入新的基因，利用表达产物治疗
(四)基因干预(gene interference)
指采用特定的方式抑制某个基因的表达，
或者通过破坏某个基因而使之不表达，以
达到治疗Байду номын сангаас病的目的。
* dsRNA 的核酸酶
属于RNase III 核酸酶家族成员，称为Dicer， 是一种ATP依赖性核酸内切酶。它包括2 个催化 区、1个解旋酶区及dsRNA 结合区域，在进化过 程中高度保守。该酶将dsRNA切割成长21-23 nt, 此片段的3`端有2nt的突出尾。
* RNA诱导的沉默复合物
称为RNA-induced silencing complex (RISC)，复合物由21-23 nt dsRNA、核酸酶和 mRNA。当RISC 复合物形成，核酸酶降解 mRNA。
– 基因标记实验验证两个问题：
① 外源基因能否安全地转移到患者体内 ②能否在患者体内的细胞中检测到外源基因的
存在
neo基因(新霉素磷酸转移酶II,NPI II)， 逆转录病毒载体
肿瘤浸润淋巴细胞(TIL) 黑色素瘤
㈡基因置换（基因矫正）
定位重组或同源重组纠正缺陷基因或异常序列 必要条件： ①了解要导入的基因及其产物 ②外源基因能有效地导入靶细胞 ③外源基因能在靶细胞中长期稳定存留 ④导入基因能适量表达 ⑤导入基因的方法及载体对宿主细胞安全无害
假病毒感染细胞：
RNA进入靶细胞后，变成前病毒并整 合
到宿主细胞的染色体上，可稳定表达
只能感染处于增殖期的细胞
4.安全性问题
逆转录病毒感染的可能性 污染的可能性 逆转录病毒在靶细胞基因组上的整合
①逆转录病毒感染的可能性
患者已受到逆转录病毒的感染 包装信号序列和不含包装信号序列的假病
毒发生重组。
②污染的可能性
四、RNA干扰
RNA 干扰 (RNA interference, RNA i) 将与mRNA编码区某段序列相对
应的正义RNA 和反义RNA 组成的 双链RNA (double-stranded RNA, dsRNA)导入细胞，使mRNA发生特 异性的降解，被称为RNAi。
RNA干扰是由双链RNA诱导的。在细胞内，双 链RNA(dsRNA)前体由核酸酶III(RNase III) －Dicer处理为21一23个碱基的小RNA，才能 诱发RNA干扰。因此，称这类小RNA为小干扰 RNA (small interfering RNA,siRNA)。小 干扰RNA是由21-23个碱基配对形成的双链， 并在其3’末端有两个游离未配对的核苷酸。 它与解螺旋酶、核酸酶等结合形成RNA诱导 的沉默复合物(RNA-inducing－silencing complex, RISC)后，能引导RISC与互补mRNA 结合，将mRNA降解。
2. 配体进入细胞的转移效率较高
核酸运载工具：
配体+多聚赖氨酸（PL）
配体—PL—核酸
脱唾液酸血清类粘蛋白（ASGP）配体
肝细胞
受体
方法：
配体(蛋白质) +多聚赖氨酸（PL）
配体- PL复合物 中性条件下加入核酸
配体- PL-核酸复合物
细胞内吞
例：
肝细胞表面有：脱唾液酸血清类粘蛋白 （ASGP）的受体
2.脂质体介导外源基因转染
混合物与细胞共培养
4. DNA-脂质体混合物与细胞膜的作用方式 膜相互融合
5.人工脂质体膜的特点：
1.与体细胞相容，无毒性和免疫原性 2.可生物降解，不会在体内堆积 3.可制成球状(0.03~50 m)，包容大小不
同的生物活性分子 4.可带有不同的电荷 5.具有不同的膜脂流动性、稳定性、及温
配体：ASGP-PL -质粒 受体 肝细胞
㈣其它方法
显微注射法 基因枪法……
三、基因转移的靶细胞
靶细胞的选择须考虑：
1. 最好为组织特异性细胞 2. 细胞较易获得，且生命周期较长 3. 离体细胞较易受外源基因转化 4. 离体细胞一定经转染和时间培养后再植回
体内，仍较易成活
目前常用的靶细胞有：
1. 造血干细胞 2. 皮肤成纤维细胞 3. 肝细胞 4. 血管内皮细胞 5. 淋巴细胞 6. 肌肉细胞 7. 肿瘤细胞 8. 脂肪干细胞
(二)RNAi 现象的发现
20世纪90年代，Arizona大学的Rich Jorgensen和他的同事们试图加深矮牵牛花 的紫色，就将一个强启动子控制下的色素 基因转入，但结果非常惊奇，许多花并不 是紫色而是杂色，甚至是白色。转基因的 植株不仅没有新基因的表达，反而使原有 的色素基因表达也受到了抑制. Rich称这种 现象为共抑制（cosuppression），即转入 的外源基因和其本身的同源基因都被抑制-出现基因沉默（gene silencing）.
㈡作用机制
合成脱氧寡核苷酸（ODN）（同聚嘌 呤或同聚嘧啶）
DNA分子中同聚嘌呤 ·同聚嘧啶 ODN也被称为TFO(triplex-forming oligo)
㈢技术关键 TFO 的设计与合成 1. 专一性 2. 稳定性 3. 摄取与分布
2.非生物学方法 脂质体，直接注射，受体介导基 因转移技术
一、基因转移的生物学方法
㈠逆转录病毒载体：
1. 逆转录病毒载体的结构
将前病毒DNA经适当改造并插入质粒后构建 而成 5′LTR/ 3′LTR 包装信号（ψ序列） Neo基因/ Ampr 酶切位点（多克隆位点）
2.包装细胞(packaging cell)
-------矮牵牛花的故事
1995年，美国康乃尔大学的Su Guo博 士 和Kemphues试图利用反义RNA技术阻断 秀丽新小杆线虫（C.elegans）中的par-1基 因，但却得到了一个意想不到的结果。在 对照实验中给线虫注射正义RNA（sense RNA）以期观察到基因表达的增强。但得 到的结果是二者都同样地切断了par-1基因 的表达途径。这是与传统上对反义RNA技 术的解释正好相反的。当时Guo等没能给出 合理的解释.
interference，简称RNAi）。
----- RNA干扰（RNA interference,RNAi）的首次命名
(Fire, 1998)
Par-1 Gene
线虫（C. elegans) +
Sense RNA
Expression Down
线虫（C. elegans)
Par-1 Gene Disruption
2. 其结构和性质与细胞膜极为相似， 二者易于融合，DNA由于细胞的内 吞作用进入细胞。
3.脂质体介导基因转移的方法
1.脂质体－DNA复合物的制备
用250µl DMEM培养基稀释1 µg外源基因，再 用250µl DMEM培养基稀释9µl脂质体，在5分钟 内和外源基因溶液混合，25℃孵育20分钟促使 DNA-脂质体混合物的形成。
基因治疗（gene therapy）——就是向有
功能缺陷的靶细胞补充相应功能基因， 以纠正或补偿其基因缺陷，或采用特定 的方式关闭、抑制异常表达的基因，从 而达到治疗的目的。
对象： 体细胞 生殖细胞
二、基因治疗的必要条件
1. 发病机制在DNA水平上已经清楚 2. 要转移的基因已经克隆分离，其表达
产物有详尽的了解
种ATP依赖的方式逐步切割成siRNA； 这种双链siRNA包括约20个碱基对， 且每条链的3’末端都悬垂着2个未配 对碱基。
③逆转录病毒在靶细胞基因组上的整合
破坏细胞正常生长的必须基因 破坏抑癌基因 LTR激活原癌基因 染色体重排激活原癌基因
二、基因转移的非生物学方法
㈠脂质体 ㈡直接注射 ㈢受体介导基因转移技术 ㈣其它方法
㈠脂质体( liposome )
1. 脂质体是磷脂在一定条件下在水中 形成的由脂质双分子层组成的内部 为水相的闭合囊泡。
第七章 基因治疗
1990.9.14 美国国立卫生研究院（NIH）的 布雷斯和安德森 首例基因治疗
4岁 女孩 严重免疫缺陷症(SCID) 缺乏腺苷酸脱氨酶(ADA) 2--脱氧腺苷含
量升高 毒性 严重破坏免疫功能
ADA基因 LN逆转录病毒载体 靶细胞为病人淋巴细胞
第一节 概 述
一、基因治疗的概念
第三节 反义RNA、核酶、三链 DNA、RNAi在基因治疗中的作用
一、反义RNA
1.反义RNA(anti sense RNA)是指 与mRNA互补的RNA分子 。
2.反义RNA与特异的mRNA结合而调 控其翻译。
㈠反义RNA在基因治疗中的意义及需解决 的问题
利用反义RNA进行基因治疗的方法： 1. 体外合成反义RNA，注射细胞 2. 构建转录反义RNA的重组质粒，转入
(一)ＲＮＡ干扰的历史
1995：矮牵牛花的故事 1995：线虫中的基因沉默现象 1998：RNA干扰（RNA interference,RNAi）
的首次命名 2000：哺乳动物细胞中基因沉默的实现 2001：被《科学》评为当年十大科技突破之一 2002 ：被《科学》评为当年十大科技突破之首 2003：动物体内观察到ＲＮＡ干扰作用 2004：在恒河猴上的ＳＡＲＳ病毒
-----线虫中的基因沉默现象
(Guo & Kemphues, 1995)
线虫（C. elegans)
Par-1 Gene
Expression
+
Antisense RNA Dow or Sense RNA n
-----线虫中的基因沉默现象
直到1998年华盛顿卡耐基研究院的Andrew Fir 和马萨诸塞大学医学院的Craig Mello等首次揭开这 个悬疑之谜。他们证实，Guo等遇到的正义RNA抑 制基因表达的现象，以及过去的反义RNA技术对基 因表达的阻断，都是由于RNA中污染了微量双链 RNA而引起。当他们将单链RNA纯化后注射线虫时 发现，基因抑制效应变得十分微弱，而经过纯化的双 链RNA却正好相反，能够高效特异性阻断相应基因的 表达，他们将这一现象称为RNA干扰（RNA
导入寡核苷酸抑制内源基因表达的方法：
1. 反义核酸 封闭基因表达
2. 核酶
裂解特异的靶mRNA
第二节 基因转移技术和靶细胞
基因治疗的基本方式：
1.体内直接转基因
体内法 ( in vivo)
2.体细胞介导的基因治疗
回体法 ( ex vivo)
基因转移的方法：
1.生物学方法 逆转录病毒载体，腺病毒载体， 腺病毒相关病毒载体，单纯疱疹病 毒载体
将缺失了包装信号及相关序列的缺 陷型逆转录病毒导入哺乳动物细胞， 这种细胞携带有逆转录病毒基因组， 从而能产生大量病毒包装蛋白。
逆转录病毒载体导入包装细胞后，载体转 录出的RNA(病毒基因组的部分序列、 标记基因、外源基因)被包装成病毒颗粒。
缺陷型的逆转录病毒颗粒(假病毒颗粒)
一次性感染
3.逆转录病毒载体的特点：
+
Antisense RNA
Expression
Down
(Fire, 1998)
Par-1 Gene
Expression
线虫（C. elegans) +
Double Strand RNA Down
线 虫， 果 蝇 微生物， 植 物
(三)RNAi作用的原理：
1.启动阶段：dsRNA被Dicer酶以一
理想的基因治疗还必须：
1. 外源基因可有效导入靶细胞 2. 外源基因能在靶细胞中长期稳定存留 3. 导入基因能适量表达 4. 导入基因的方法及载体对宿主细胞安
全无害
三、基因治疗的主要内容或策略
㈠基因标记 ㈡基因置换（基因矫正） ㈢基因添加（基因增补） (四)基因干预
㈠基因标记(gene labeling)
度敏感性，能适应不同的生理要求
㈡直接注射
方法：注射，包埋 注入外源基因的量与其表达量成正比 溶液类型对基因表达有影响： ① TE 损伤肌纤维
②生理盐水或PBS ③ 5%~30%的蔗糖溶液中
㈢受体介导基因转移技术
受体介导的细胞内吞作用 特点：
1. 具有细胞、组织或器官专一性，配 体只能被一些特异的细胞吞噬
细胞 问题： 1.降解 2.非专一性
㈡受体介导反义RNA转移技术
ASGP—PL—反义RNA
二、核 酶
具有催化活性的RNA。
核酶的二级结构对于催化活性很重要。 “锤头” 结构。
三个螺旋区；13（或11）个保守核苷酸 序列。
核酶的作用机制： 见课本 P16
三、三链DNA
㈠三链DNA在基因治疗中的意义
㈢基因添加（基因增补）
导入外源基因使靶细胞表达其本 身 不表达的基因。 类型： 1.导入正常的基因补偿缺陷基因的功 能 2.导入新的基因，利用表达产物治疗
(四)基因干预(gene interference)
指采用特定的方式抑制某个基因的表达，
或者通过破坏某个基因而使之不表达，以
达到治疗Байду номын сангаас病的目的。
* dsRNA 的核酸酶
属于RNase III 核酸酶家族成员，称为Dicer， 是一种ATP依赖性核酸内切酶。它包括2 个催化 区、1个解旋酶区及dsRNA 结合区域，在进化过 程中高度保守。该酶将dsRNA切割成长21-23 nt, 此片段的3`端有2nt的突出尾。
* RNA诱导的沉默复合物
称为RNA-induced silencing complex (RISC)，复合物由21-23 nt dsRNA、核酸酶和 mRNA。当RISC 复合物形成，核酸酶降解 mRNA。
– 基因标记实验验证两个问题：
① 外源基因能否安全地转移到患者体内 ②能否在患者体内的细胞中检测到外源基因的
存在
neo基因(新霉素磷酸转移酶II,NPI II)， 逆转录病毒载体
肿瘤浸润淋巴细胞(TIL) 黑色素瘤
㈡基因置换（基因矫正）
定位重组或同源重组纠正缺陷基因或异常序列 必要条件： ①了解要导入的基因及其产物 ②外源基因能有效地导入靶细胞 ③外源基因能在靶细胞中长期稳定存留 ④导入基因能适量表达 ⑤导入基因的方法及载体对宿主细胞安全无害
假病毒感染细胞：
RNA进入靶细胞后，变成前病毒并整 合
到宿主细胞的染色体上，可稳定表达
只能感染处于增殖期的细胞
4.安全性问题
逆转录病毒感染的可能性 污染的可能性 逆转录病毒在靶细胞基因组上的整合
①逆转录病毒感染的可能性
患者已受到逆转录病毒的感染 包装信号序列和不含包装信号序列的假病
毒发生重组。
②污染的可能性
四、RNA干扰
RNA 干扰 (RNA interference, RNA i) 将与mRNA编码区某段序列相对
应的正义RNA 和反义RNA 组成的 双链RNA (double-stranded RNA, dsRNA)导入细胞，使mRNA发生特 异性的降解，被称为RNAi。
RNA干扰是由双链RNA诱导的。在细胞内，双 链RNA(dsRNA)前体由核酸酶III(RNase III) －Dicer处理为21一23个碱基的小RNA，才能 诱发RNA干扰。因此，称这类小RNA为小干扰 RNA (small interfering RNA,siRNA)。小 干扰RNA是由21-23个碱基配对形成的双链， 并在其3’末端有两个游离未配对的核苷酸。 它与解螺旋酶、核酸酶等结合形成RNA诱导 的沉默复合物(RNA-inducing－silencing complex, RISC)后，能引导RISC与互补mRNA 结合，将mRNA降解。
2. 配体进入细胞的转移效率较高
核酸运载工具：
配体+多聚赖氨酸（PL）
配体—PL—核酸
脱唾液酸血清类粘蛋白（ASGP）配体
肝细胞
受体
方法：
配体(蛋白质) +多聚赖氨酸（PL）
配体- PL复合物 中性条件下加入核酸
配体- PL-核酸复合物
细胞内吞
例：
肝细胞表面有：脱唾液酸血清类粘蛋白 （ASGP）的受体
2.脂质体介导外源基因转染
混合物与细胞共培养
4. DNA-脂质体混合物与细胞膜的作用方式 膜相互融合
5.人工脂质体膜的特点：
1.与体细胞相容，无毒性和免疫原性 2.可生物降解，不会在体内堆积 3.可制成球状(0.03~50 m)，包容大小不
同的生物活性分子 4.可带有不同的电荷 5.具有不同的膜脂流动性、稳定性、及温
配体：ASGP-PL -质粒 受体 肝细胞
㈣其它方法
显微注射法 基因枪法……
三、基因转移的靶细胞
靶细胞的选择须考虑：
1. 最好为组织特异性细胞 2. 细胞较易获得，且生命周期较长 3. 离体细胞较易受外源基因转化 4. 离体细胞一定经转染和时间培养后再植回
体内，仍较易成活
目前常用的靶细胞有：
1. 造血干细胞 2. 皮肤成纤维细胞 3. 肝细胞 4. 血管内皮细胞 5. 淋巴细胞 6. 肌肉细胞 7. 肿瘤细胞 8. 脂肪干细胞
(二)RNAi 现象的发现
20世纪90年代，Arizona大学的Rich Jorgensen和他的同事们试图加深矮牵牛花 的紫色，就将一个强启动子控制下的色素 基因转入，但结果非常惊奇，许多花并不 是紫色而是杂色，甚至是白色。转基因的 植株不仅没有新基因的表达，反而使原有 的色素基因表达也受到了抑制. Rich称这种 现象为共抑制（cosuppression），即转入 的外源基因和其本身的同源基因都被抑制-出现基因沉默（gene silencing）.