实验四维生素AD中维生素A测定

实验四、维生素AD滴剂中维生素A的鉴别与含量测定
一、目的要求
1. 掌握维生素A鉴别反应的实验原理；
2. 掌握紫外-三点校正法测定维生素A含量的原理和操作方法；
3. 掌握三点校正法的计算方法；
4. 掌握胶囊型滴剂的含量测定处理及其计算方法。

二、实验原理
维生素A的结构为一个具有共轭多烯醇侧链的环己烷，能与氯仿、乙醚、环己烷或石油醚任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶，，由于其中有多个不饱和键，性质不稳定，易被空气中氧或氧化剂氧化，易被紫外光裂解，并且其对酸不稳定。

其醋酸酯比维生素A稳定，临床使用一般将本品或棕榈酸酯溶于植物油中应用。

因此，维生素A及其制剂除需密封在凉暗处保存外，还需充氮或加入合适的抗氧剂。

1. 鉴别反应
维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液中即显蓝色，渐变紫红色。

反应机理为维生素A 与三氯化锑中存在的亲电试剂氯化高锑反应，生成不稳定的蓝色碳正离子。

2. 含量测定
维生素A具有紫外吸收特征，在325 nm～328 nm的范围内有最大吸收；但由于维生素A制剂中含有稀释用油，且维生素A原料药中混有其他杂质，因此测得吸光度中含有无关吸收引入的误差，需用校正公式法校正以得到正确结果。

本实验采用三点校正法。

三点校正法是在三个波长处测得吸收度，根据校正公式计算吸收度A校正值后，再计算含量，故本法称为“三点校正法”。

该原理主要基于（1）杂质的无关吸收在310 nm～340 nm的波长范围内几乎呈一条直线，且随波长的增长吸收度下降。

（2）物质对光吸收呈加和性的原理。

即在某一样品的吸收曲线上，各波长处的吸收度是维生素A与杂质吸收度的代数和，因而吸收曲线也是二者的叠加。

三点波长的选择采用等波长差法，即在λ1的左右各选一点为λ2和λ3，使λ3-λ1=λ1-λ2。

中国药典规定λ1=328 nm，λ2=316 nm，λ3=340 nm。

三、仪器及试药
紫外分光光度仪，50 mL容量瓶，烧杯若干个，剪刀、镊子、万分之一天平；
维生素AD滴剂，环己烷，三氯化锑，三氯甲烷（无水无醇），乙醚。

四、实验内容及步骤
1.鉴别
25%三氯化锑的三氯甲烷溶液的配制：取三氯化锑25 g，加三氯甲烷使溶解成100 mL。

取维生素AD滴剂，加三氯甲烷稀释成每1 mL含维生素A10～20 U的溶液；取1 mL，加25%三氯化锑的三氯甲烷溶液1 mL，观察实验现象。

2. 含量测定
取本品数粒，精密称定，倾出内容物，混合均匀。

囊壳用乙醚洗净，置通风处使溶剂自然挥尽，再精密称定囊壳质量，求得内容物的装量。

取内容物适量精密称定，置50 mL容量瓶中，用环己烷溶解并稀释到每1 mL含维生素A 9～15 U的溶液。

照紫外-可见分光光度法，扫描400～250 nm波长范围内维生素AD滴剂的吸光度，并选点测定λ300、λ316、λ328、λ340、λ360处的吸光度。

中国药典（2010）规定，本品含维生素A应为标示量的90.0%~120.0%。

紫外操作方法：打开电脑及仪器电源→点电脑桌面上的软件快捷方式→“连接”仪器自检→自检完成后，点“确定”→在样品池中放入参比溶液（两个全参比），注意：光路要对准！→点“自动调零”和“基线”→把其中一个参比液换成样品（靠近身体的放样品，远离人的放参比）注意：光路要对准！→“编辑”→“方法”→“设波长范围”→“图象”→“自定义”→“限制”→改X、Y轴范围→点“开始”→扫描结束后，点“操作”→“选点操作”，输入对应波长→打印→“断开”→关工作站→关仪器和电脑.
五、数据记录及处理
（1）供试品来源及规格：。

（2）粒数= ;m
总= g；m
壳
= g；m
内
= g。

（3）m= g，稀释方法：。

A328是否需要校正及如何校正，具体请参考教科书。

部分公式如下:
①求
%
1
1cm
E
表观：由A=
%
1
1cm
E
×C×L，求得
%
1
1cm
E
表观=A /（C×L）。

A328(校正)=3.52(2A328－A316－A340)
%11cm E : 表观百分吸收系数
A: 328 nm 处直接测得的吸光度或校正后的吸光度
C: 以供试品为纯品而计算得到的供试品浓度, g/100 mL
L: 光程长,1 cm
② 求效价（IU/g ）：效价指每克供试品中所含维生素A 的国际单位数（IU/g ）。

计算公式IU/g = %11cm E (328 nm)表观×F
F ：换算因数，维生素A 醇，1830 ；维生素A 醋酸酯，1900
③ 求标示量%，标示量：供试品标签上注明的每克或每胶丸含有的维生素A 的国际单位数。

标示量%= 【%11cm E (328 nm)表观×F×D×M 】/标示量
D ：供试品的稀释倍数（本实验D=1）；
M ：对维生素A 原料为1g ，对维生素A 胶丸为平均内容物重量，g ；
六、注意事项
1.维生素A 遇光易氧化变质，故测定应在半暗室中尽快进行。

2.三点校正法测定时，除其中一点在最大吸收波长测定外，其余两点均在最大吸收的两侧上升或下降陡部的波长处进行，若仪器波长不够准确时，即会带入较大误差，故测定前应对所用仪器进行波长校正。

3. 鉴别反应时所有仪器均需干燥。

4. 为防止污染环境，环己烷应回收至指定的回收处。

七、思考题
1.为何不直接以紫外-可见分光光度法测定维生素A 的含量,而要采用较为繁琐的三点校正法?用于测定的三点该如何选择?
2.计算式中的参数1900是如何得来的?
3.鉴别实验时为什么要求在无水无醇条件下进行？。