灭活剂、保护剂和免疫佐剂PPT.ppt
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04第四章 灭活剂、保护剂和免疫佐剂(兽医生物制品学)
(四)温度
温度越高，灭活越快，灭活作用随温度上升而加速。在低温时，温 度每上升10C，细菌死亡率可成倍增加。每升高10C，金属盐类的灭菌 作用增加2-5倍，石炭酸的杀菌作用增加5-8倍。但是，如果温度超过 40C 或更高，对微生物的抗原性将有不利影响。
(五)pH
在微酸性时灭活速度慢，抗原性保持较好，在碱性时灭活速度快，但 抗原性易受破坏。灭活初期损失较快，以后逐渐减慢，尤其甲醛溶液浓度 高时，在碱性溶液中抗原性损失更大。
附：
用乙烯亚胺衍生物对病毒进行灭活，当灭活结束时，应中止灭活并 除去其残存物，以免继续作用而损害疫苗的免疫原性。采用的方法是： 在乙烯亚胺衍生物灭活的病毒液中加入过量的硫代硫酸钠或亚硫酸钠， 不论是0.05%AEI或0.02%BEI，病毒液中硫代硫酸钠最终浓度均为2%， 以中断灭活剂灭活作用。
此外，-丙内脂（-propiolactone）也是一种良好的病毒灭活剂， 它是一种不稳定的液体，于37C 2h后能自行水解为无毒物质。
注意：这里指的是甲醛的浓度，并非福尔马林的浓度！
(二) 苯酚
酚类是以羟基取代苯环上的氢而形成一类化合物。苯酚(phenolum)， 又称石炭酸(acidum carbolicum)，为具有特殊气味的无色结晶，易潮解， 溶于水及有机溶剂，见光则颜色变深，置于空气中易被氧化，颜色也变深， 所以应避光保存。
三、影响灭活作用的因素
(一) 灭活剂的特异性
某些灭活剂只对一部分微生物有明显的灭活作用，而对另一些微生物 则效力很差。如酚类能抑制和杀灭大部分细菌的繁殖体，5%石炭酸溶液 于数小时内能杀死细菌的芽胞。阳离子表面活性剂抗菌谱广，效力快，对 组织无刺激性，能杀死多种革兰氏阳性菌和阴性菌，但对绿脓杆菌和细菌 芽胞作用弱。
温度越高，灭活越快，灭活作用随温度上升而加速。在低温时，温 度每上升10C，细菌死亡率可成倍增加。每升高10C，金属盐类的灭菌 作用增加2-5倍，石炭酸的杀菌作用增加5-8倍。但是，如果温度超过 40C 或更高，对微生物的抗原性将有不利影响。
(五)pH
在微酸性时灭活速度慢，抗原性保持较好，在碱性时灭活速度快，但 抗原性易受破坏。灭活初期损失较快，以后逐渐减慢，尤其甲醛溶液浓度 高时，在碱性溶液中抗原性损失更大。
附：
用乙烯亚胺衍生物对病毒进行灭活，当灭活结束时，应中止灭活并 除去其残存物，以免继续作用而损害疫苗的免疫原性。采用的方法是： 在乙烯亚胺衍生物灭活的病毒液中加入过量的硫代硫酸钠或亚硫酸钠， 不论是0.05%AEI或0.02%BEI，病毒液中硫代硫酸钠最终浓度均为2%， 以中断灭活剂灭活作用。
此外，-丙内脂（-propiolactone）也是一种良好的病毒灭活剂， 它是一种不稳定的液体，于37C 2h后能自行水解为无毒物质。
注意：这里指的是甲醛的浓度，并非福尔马林的浓度！
(二) 苯酚
酚类是以羟基取代苯环上的氢而形成一类化合物。苯酚(phenolum)， 又称石炭酸(acidum carbolicum)，为具有特殊气味的无色结晶，易潮解， 溶于水及有机溶剂，见光则颜色变深，置于空气中易被氧化，颜色也变深， 所以应避光保存。
三、影响灭活作用的因素
(一) 灭活剂的特异性
某些灭活剂只对一部分微生物有明显的灭活作用，而对另一些微生物 则效力很差。如酚类能抑制和杀灭大部分细菌的繁殖体，5%石炭酸溶液 于数小时内能杀死细菌的芽胞。阳离子表面活性剂抗菌谱广，效力快，对 组织无刺激性，能杀死多种革兰氏阳性菌和阴性菌，但对绿脓杆菌和细菌 芽胞作用弱。
最新灭活剂、保护剂和免疫佐剂
第三节 免疫佐剂
一、佐剂概念与作用机理
1. 佐剂（新概念）：凡是可以增强抗原特异性免疫应答的物 质称为佐剂。
佐剂（旧概念）：当一种物质先于抗原或与抗原混合或同 时注射于动物体内，能非特异性地改变或增强机体对该抗 原的特异性免疫应答,发挥其辅佐作用的物质.
以前作为佐剂使用时没有免疫原性，但现在有所改变，如 IL-2是佐剂和IL-8一类细胞因子佐剂却不一样, 具有免疫调 节和免疫增强作用,单独使用时却具有免疫原性。
2．明胶蔗糖保护剂
明胶 2%~3%（g/m1）、蔗糖5%（g/m1）、硫脲 1%~2%（g/m1）。先 将12%~18%明胶液、30%蔗糖液和6%~12%硫脲液加热溶解，116℃高压 灭菌30~40min；
3．SPGA保护剂
蔗糖 76.62g、磷酸二氢钾0.52g、磷酸氢二钾1.64g、谷氨酸钠0.83g、牛血 清白蛋白10g、加去离子水至1000ml，混合溶解，过滤除菌。
• 注意:佐剂和免疫增强剂的关系?
•
有时佐剂也是免疫增强剂.
作用特点：
① 明显增强抗原性微弱的物质诱导机体产生 特异性免疫应答。
② 用最少的抗原和最少的接种次数，产生足 够的免
① 改变正常免疫机能，吸引大量巨噬细胞以吞噬抗原； ② 改变抗原的构型，使抗原物质降解，并加强其免疫原性； ③ 延长抗原在组织内的贮存时间，使抗原缓慢降解和缓释，
助于抗原性物质在胞内被加工，被MHC分子特异性的结合、保护、运输并递 呈给效应细胞。
②抗原寻的（antigen targeting）
指抗原传递给免疫系统中适当效应细胞的效率。包括 吸引巨噬细胞到达组织部位、活化吞噬细胞、促进抗原 与细胞受体的结合等有重要作用。
③免疫调节（immune modulation） 是指任何可以修饰的免疫效应细
项目四 灭活剂、保护剂与免疫佐剂
三、影响灭活作用的因素
⒈灭活剂特异性：石炭酸对真菌和病毒效果差，甲醛 最常用。 ⒉微生物的种类和特性：一般含氮量越高，甲醛等灭 活剂的消耗量就越大，灭活脱毒速度越慢。 ⒊灭活剂浓度（一定要合适） ⒋灭活温度（具体不同病原体和或毒素，其灭活时间 和温度不一致）。 ⒌灭活时间：随灭活剂浓度及温度升高，灭活时间则 缩短。 ⒍PH：微酸时灭活速度慢，抗原性保持较好。 ⒎有机物的存在：被灭活的病毒或细菌液中，如果含 有血清或其它有机物质，会影响灭活剂的灭活能力。
当以水为分散相，以加有乳化剂的油为连续相时，制
成的乳剂为油包水型乳剂（水／油或W／O），是生物 制品采用的主要剂型。
白油佐剂
一种好的乳剂苗，应该是W／O或O／W型，粘度较低， 颗粒大小均匀，稳定性良好，呈乳白色。
（四） 蜂胶佐剂 （五）ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ生物佐剂
三、新型免疫佐剂
1、细胞因子类 2、免疫刺激复合物
二、常用灭活剂的应用
⒈甲醛溶液：最常用 2.苯酚（石炭酸）：用于防腐，很少用于疫苗研制。 3.结晶紫：蛋白质变性。（溶于有机溶剂）用于诊断抗原 的制备：鸡白痢抗原 4.β-丙内酯 狂犬病灭活苗制备所用 5 烷化剂 乙酰基乙烯亚胺 二乙烯亚胺 缩水甘油醛 6 硫柳汞 用于生物制品的防腐和消毒。 7 缩水甘油醛 注意：灭活剂对人有害，有时对皮肤黏膜有强烈刺激性。
④干扰素类生物活性物质的保存：加葡聚糖。
二、冻干保护剂的组成
⒈低分子物质（营养液）：
营养液：脱脂乳、蛋白胨、氨基酸、和糖类 等 ⒉赋形剂(高分子物质）骨架
赋形剂：蔗糖、山梨醇、乳糖、PVP、葡聚 糖等 ⒊抗氧化剂 抗氧化剂：Vit.C、Vit.E和硫代硫酸钠等
兽医生物制品学 第三章灭活剂、保护剂和免疫佐剂
1）乙酰基乙烯亚胺（N-acetyl ethylenimine，AEI） ）乙酰基乙烯亚胺（ ， ） •淡黄色澄明液体，有轻微氨臭味，能与水或醇任意混合。 淡黄色澄明液体，有轻微氨臭味，能与水或醇任意混合。 淡黄色澄明液体 •0～4℃可保存 年，在-20℃可保存 年 ～ ℃可保存1年 ℃可保存2年 •AEI功能基团是乙烯亚胺基，可用于口蹄疫灭活苗。 功能基团是乙烯亚胺基，可用于口蹄疫灭活苗。 功能基团是乙烯亚胺基 •口蹄疫病毒液 终浓度 口蹄疫病毒液: 终浓度0.05％，30℃8h, 加2％硫代硫酸钠阻断 口蹄疫病毒液 ％ ℃ ％ 2）二乙烯亚胺（binary ethylenimine，BEI） ）二乙烯亚胺（ ， ） •市购商品为 ％的BEI溶液，在0～4℃可保存 个月 市购商品为0.2％ 溶液， 个月; 市购商品为 溶液 ～ ℃可保存1个月 •终浓度 终浓度0.02%, 加入 ％硫代硫酸钠中断灭活。 加入2％硫代硫酸钠中断灭活。 终浓度
3）缩水甘油醛（glycidaldchyde，GDA） ）缩水甘油醛（ ， ） •大肠杆菌、噬菌体、新城疫病毒灭活效果优于甲醛。 大肠杆菌、噬菌体、新城疫病毒灭活效果优于甲醛。 大肠杆菌 •本品易挥发，水溶液含量为15～31mg/ml。 本品易挥发，水溶液含量为 ～ 本品易挥发 。 •0～4℃ 3个月含量渐下降，约半年失效；20℃只能保存 ～ ℃ 个月含量渐下降 约半年失效； ℃只能保存10d。 个月含量渐下降， 。
三、常用的冻干保护剂（稳定剂） 常用的冻干保护剂（稳定剂） 明确不同种类微生物需要添加不同保护剂 （一）细菌的保护剂 需氧或兼氧厌氧菌： 蔗糖脱脂乳或５ 蔗糖、 ① 需氧或兼氧厌氧菌：５％蔗糖脱脂乳或５％蔗糖、 1.5％明胶； 1.5％明胶； 厌氧性细菌： 1.5％谷氨酸钠的１ 乳糖或10％ ② 厌氧性细菌：含1.5％谷氨酸钠的１％乳糖或10％脱 脂乳或7.5％葡糖血清。 脂乳或7.5％葡糖血清。 脱脂乳：20％脱脂奶粉溶于水配制而成。 注：脱脂乳：20％脱脂奶粉溶于水配制而成。 （二）病毒的保护剂 5%蔗糖 脱脂乳； ① 5%蔗糖 脱脂乳； 马立克814活细胞疫苗 保存液氮.稳定剂为10%二 活细胞疫苗: ② 马立克814活细胞疫苗:保存液氮.稳定剂为10%二 甲基亚砜和50%犊牛血清的 犊牛血清的199液 甲基亚砜和50%犊牛血清的199液。 注意: 微生物保护剂缓冲液的组成比例， 注意: 微生物保护剂缓冲液的组成比例，不同厂家有 不同的配方。 不同的配方。
兽医生物制品学 第三章灭活剂、保护剂和免疫佐剂
一些常用的冷冻干燥保护剂
分类 复合物 糖类 盐类 醇类 酸类 聚合物 保 护 剂 脱脂乳、明胶、蛋白质、蛋白胨、糊精、血清、 脱脂乳、明胶、蛋白质、蛋白胨、糊精、血清、甲基纤维素等 蔗糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、 蔗糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖等 乳酸钙、谷氨酸钠、氯化钠、氯化钾、醋酸铵、 乳酸钙、谷氨酸钠、氯化钠、氯化钾、醋酸铵、硫代硫酸钠等 山梨醇、甘油、甘露醇、肌醇、木糖醇等 山梨醇、甘油、甘露醇、肌醇、 柠檬酸、酒石酸、 柠檬酸、酒石酸、氨基酸等 葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮 葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等 等
三、常用的冻干保护剂（稳定剂） 常用的冻干保护剂（稳定剂） 明确不同种类微生物需要添加不同保护剂 （一）细菌的保护剂 需氧或兼氧厌氧菌： 蔗糖脱脂乳或５ 蔗糖、 ① 需氧或兼氧厌氧菌：５％蔗糖脱脂乳或５％蔗糖、 1.5％明胶； 1.5％明胶； 厌氧性细菌： 1.5％谷氨酸钠的１ 乳糖或10％ ② 厌氧性细菌：含1.5％谷氨酸钠的１％乳糖或10％脱 脂乳或7.5％葡糖血清。 脂乳或7.5％葡糖血清。 脱脂乳：20％脱脂奶粉溶于水配制而成。 注：脱脂乳：20％脱脂奶粉溶于水配制而成。 （二）病毒的保护剂 5%蔗糖 脱脂乳； ① 5%蔗糖 脱脂乳； 马立克814活细胞疫苗 保存液氮.稳定剂为10%二 活细胞疫苗: ② 马立克814活细胞疫苗:保存液氮.稳定剂为10%二 甲基亚砜和50%犊牛血清的 犊牛血清的199液 甲基亚砜和50%犊牛血清的199液。 注意: 微生物保护剂缓冲液的组成比例， 注意: 微生物保护剂缓冲液的组成比例，不同厂家有 不同的配方。 不同的配方。
• 谷氨酸钠 • 乌苷酸钠 呈味核苷酸二钠 • “超鲜味精”。它的主要化学成分是2—甲基呋喃苷酸。 它比味精要鲜上600多倍！ • 现代的味精商业化生产是通过淀粉、甜菜、甘蔗或糖蜜培 养基发酵生产的。 • 氨酸钠对婴儿生长发育有不良影响，它能同婴儿血液中的 锌发生特异性结合，生成不能被机体吸收的谷氨酸锌，随 尿排出体外，导致婴儿缺锌，进而造成婴儿味觉变差，智 力减退，厌食，生长发育迟缓及性晚熟等。因此，哺乳期 妇女应尽量少食味精，三个月龄的婴儿应忌食味精，一周 岁以内也不食味精为宜。成人的味精摄入量以每天每公斤 体重不超过dchyde，GDA） ）缩水甘油醛（ ， ） •大肠杆菌、噬菌体、新城疫病毒灭活效果优于甲醛。 大肠杆菌、噬菌体、新城疫病毒灭活效果优于甲醛。 大肠杆菌 •本品易挥发，水溶液含量为15～31mg/ml。 本品易挥发，水溶液含量为 ～ 本品易挥发 。 •0～4℃ 3个月含量渐下降，约半年失效；20℃只能保存 ～ ℃ 个月含量渐下降 约半年失效； ℃只能保存10d。 个月含量渐下降， 。
生物制品生产工艺—灭活剂、保护剂和免疫佐剂
用途:羊痘、鸡新城疫、鸡痘和鸭瘟等病毒性活疫苗 的保护剂
2.明胶蔗糖保护剂
明胶2-3%(g/ml),蔗糖5%(g/ml),硫脲1%-2%(g/ml) 先将12%-18%明胶液,30%蔗糖液和6-12%硫脲液加 热溶解,116℃高压灭菌30-40min;或100℃灭菌3 次,每次30min.
用途:猪肺疫和猪丹毒等细菌性活疫苗保护剂
广义上讲：保护剂是保护微生物和寄生虫等活
力和免疫原及酶和激素等生物活性的一类物质，
还包括细菌或病毒的营养液、赋形剂和抗氧化剂。来自一些常用的冷冻干燥保护剂
分类
保护剂
复合物 糖类 盐类 醇类 酸类 聚合物
脱脂乳、明胶、蛋白质、蛋白胨、糊精、血清、甲基纤维素等 蔗糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖等 乳酸钙、谷氨酸钠、氯化钠、氯化钾、醋酸铵、硫代硫酸钠等 山梨醇、甘油、甘露醇、肌醇、木糖醇等 柠檬酸、酒石酸、氨基酸等 葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等
3.聚乙烯吡咯烷酮乳糖保护剂 取聚乙烯吡咯烷酮K30-35g和乳糖10g,加蒸馏水至 100ml,混合溶解,120℃高压灭菌20min
4.SPGA保护剂
蔗糖76.62g,磷酸二氢钾0.52g,磷酸氢二钾1.64g, 谷氨酸钠0.83g,牛血清白蛋白10g,加去离子水至 1000ml,混合溶解,过滤除菌.
四、常用的冻干保护剂
各种微生物适用的保护剂甚多，各国的配制方法 也各异。即使同一种制品所使用的保护剂组分也 不一样。
如：鸡新城疫弱毒疫苗，5%蔗糖脱脂乳；日本用 5%乳糖，0.15%聚乙烯吡咯烷酮,1%马血清或0.4% 蔗糖脱脂乳,0.2%聚乙烯吡咯烷酮
猪丹毒弱毒菌苗,我国用5%蔗糖,1.5%明胶冻干剂;
5.立克次氏体
10%脱脂乳
2.明胶蔗糖保护剂
明胶2-3%(g/ml),蔗糖5%(g/ml),硫脲1%-2%(g/ml) 先将12%-18%明胶液,30%蔗糖液和6-12%硫脲液加 热溶解,116℃高压灭菌30-40min;或100℃灭菌3 次,每次30min.
用途:猪肺疫和猪丹毒等细菌性活疫苗保护剂
广义上讲：保护剂是保护微生物和寄生虫等活
力和免疫原及酶和激素等生物活性的一类物质，
还包括细菌或病毒的营养液、赋形剂和抗氧化剂。来自一些常用的冷冻干燥保护剂
分类
保护剂
复合物 糖类 盐类 醇类 酸类 聚合物
脱脂乳、明胶、蛋白质、蛋白胨、糊精、血清、甲基纤维素等 蔗糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖等 乳酸钙、谷氨酸钠、氯化钠、氯化钾、醋酸铵、硫代硫酸钠等 山梨醇、甘油、甘露醇、肌醇、木糖醇等 柠檬酸、酒石酸、氨基酸等 葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等
3.聚乙烯吡咯烷酮乳糖保护剂 取聚乙烯吡咯烷酮K30-35g和乳糖10g,加蒸馏水至 100ml,混合溶解,120℃高压灭菌20min
4.SPGA保护剂
蔗糖76.62g,磷酸二氢钾0.52g,磷酸氢二钾1.64g, 谷氨酸钠0.83g,牛血清白蛋白10g,加去离子水至 1000ml,混合溶解,过滤除菌.
四、常用的冻干保护剂
各种微生物适用的保护剂甚多，各国的配制方法 也各异。即使同一种制品所使用的保护剂组分也 不一样。
如：鸡新城疫弱毒疫苗，5%蔗糖脱脂乳；日本用 5%乳糖，0.15%聚乙烯吡咯烷酮,1%马血清或0.4% 蔗糖脱脂乳,0.2%聚乙烯吡咯烷酮
猪丹毒弱毒菌苗,我国用5%蔗糖,1.5%明胶冻干剂;
5.立克次氏体
10%脱脂乳
灭活剂、保护剂与免疫佐剂 ppt课件
第二章
灭活剂、保护剂与免疫佐剂
ppt课件
1
本章内容
第一节 灭活剂
第二节 保护剂
第三节 免疫佐剂
ppt课件
2
第一节 灭活剂
1
灭活与灭活剂概念
2 常用灭活剂的灭活机理与应用
3 影响灭活作用的因素
ppt课件
3
第一节 灭活剂
一
灭活与灭活剂 灭活:
是指破坏微生物的生物学活性、繁殖能力和致病 性，但尽可能不影响其免疫原性，被灭活的微生物主 要用于生产灭活疫苗；或指破坏 诊断血清或待检血 清中的补体活性，以避免补体对诊断试验的干扰作用。
静置沉淀，弃上清后加入约5倍量软 化水，搅拌洗涤、弃上清，如此3～ 5次，检查至硫酸盐合格为止。 用铜纱筛滤过，用布袋脱水过夜， 收存于容器内，可约得600kg铝胶。
ppt课件 31
第三节
注意事项
免疫佐剂
氢氧化铝吸附力较强，所以要用软化水或去离子水 洗涤。
氢氧化铝胶为两性化合物，过酸或过碱都会失去胶
（2）用明矾加碳酸钠合成法
2KAl(SO4)2+3Na2CO3+3H2O→2Al(OH)3+3Na2SO4+3CO2↑ （3）用三氯化铝与氢氧化钠合成
A1C13+3NaOH→Al(OH)3↓+3NaCl
ppt课件 30
第三节
免疫佐剂
用铝粉加烧碱合成法： 2Al(OH)3+12H2O+3H2SO4→Al2(SO4)3· 18H2O A12(SO4)3· 18H2O+6NaOH→2Al(OH)3+2Na2SO4+18H2O
3.SPGA保护剂
蔗糖76.62g、磷酸 二氢钾0.52g、磷酸 氢二钾1.64g、谷氨 酸钠0.83g、牛血清 白蛋白10g、加去离 子水至1000ml，混 合溶解,过滤除菌。
灭活剂、保护剂与免疫佐剂
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1
本章内容
第一节 灭活剂
第二节 保护剂
第三节 免疫佐剂
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2
第一节 灭活剂
1
灭活与灭活剂概念
2 常用灭活剂的灭活机理与应用
3 影响灭活作用的因素
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3
第一节 灭活剂
一
灭活与灭活剂 灭活:
是指破坏微生物的生物学活性、繁殖能力和致病 性，但尽可能不影响其免疫原性，被灭活的微生物主 要用于生产灭活疫苗；或指破坏 诊断血清或待检血 清中的补体活性，以避免补体对诊断试验的干扰作用。
静置沉淀，弃上清后加入约5倍量软 化水，搅拌洗涤、弃上清，如此3～ 5次，检查至硫酸盐合格为止。 用铜纱筛滤过，用布袋脱水过夜， 收存于容器内，可约得600kg铝胶。
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第三节
注意事项
免疫佐剂
氢氧化铝吸附力较强，所以要用软化水或去离子水 洗涤。
氢氧化铝胶为两性化合物，过酸或过碱都会失去胶
（2）用明矾加碳酸钠合成法
2KAl(SO4)2+3Na2CO3+3H2O→2Al(OH)3+3Na2SO4+3CO2↑ （3）用三氯化铝与氢氧化钠合成
A1C13+3NaOH→Al(OH)3↓+3NaCl
ppt课件 30
第三节
免疫佐剂
用铝粉加烧碱合成法： 2Al(OH)3+12H2O+3H2SO4→Al2(SO4)3· 18H2O A12(SO4)3· 18H2O+6NaOH→2Al(OH)3+2Na2SO4+18H2O
3.SPGA保护剂
蔗糖76.62g、磷酸 二氢钾0.52g、磷酸 氢二钾1.64g、谷氨 酸钠0.83g、牛血清 白蛋白10g、加去离 子水至1000ml，混 合溶解,过滤除菌。
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不损害其蛋白衣壳，保留其保护性抗原。
三、影响灭活作用的因素
1、灭活剂特异性：石炭酸对真菌和病毒效果差，甲醛 最常用。 2、微生物种类和特性 3、灭活剂浓度（一定要适合） 4、灭活温度（具体不同病原体或毒素，其灭活时间和 温度不一致） 5、灭活时间 6、灭活PH值 7、有机物存在
第二节 保护剂（稳定剂）
• 注意:佐剂和免疫增强剂的关系?
•
有时佐剂也是免疫增强剂.
作用特点：
① 明显增强抗原性微弱的物质诱导机体产生 特异性免疫应答。
② 用最少的抗原和最少的接种次数，产生足 够的免疫应答。
疫苗冻干保护剂组成
1. 营养液： • 可修复因冻干而受损的细胞，使冻干制品含有一定量水分； • 可促进高分子物质形成骨架，使冻干制品呈多孔的海绵状， 增加溶解度 2. 赋形剂： • 防止低分子物质的碳化和氧化，保护活性物质不受加热影响 • 使冻干制品形成多孔性、疏松的海绵状物，增加溶解度 3. 抗氧化剂： • 抑制冻干制品中的酶作用，增加生物活性物质在冻干后贮存 期间的稳定性，如维生素C、维生素E和硫代硫酸钠等。
激性如：甲醛、β-丙酰内酯
甲醛溶液：
•《规程》（2000）中的26种灭活疫苗
• 灭活机理：
甲醛 醛基
氨基 羧基 羟基 巯基
甲基胺 亚甲基二醇单酯 羟基甲酚 亚甲基二醇
• 灭活浓度：多数为0.1％～0.3％
• 灭活原则：低浓度、短时间而又能达到彻底灭活目的；
必要时可在灭活后加入硫代硫酸钠，以中断其反应。
烷化剂（alkylating agent）
乙酰基乙烯亚胺（AEI)、二乙烯亚胺(BEI) 、缩水甘油醛
• 灭活机制： 1. 烷化DNA分子中的鸟嘌呤或腺嘌呤等，引起单链断裂
或双螺旋链交联，因改变DNA的结构而破坏其功能，妨碍 RNA的合成，从而抑制细胞的有丝分裂。
2. 与酶系统和核蛋白起作用而干扰核酸代谢。 • 优点：能破坏病毒的核酸芯髓，使病毒完全丧失感染力，而
2．明胶蔗糖保护剂
明胶 2%~3%（g/m1）、蔗糖5%（g/m1）、硫脲 1%~2%（g/m1）。先 将12%~18%明胶液、30%蔗糖液和6%~12%硫脲液加热溶解，116℃高压 灭菌30~40min；
3．SPGA保护剂
蔗糖 76.62g、磷酸二氢钾0.52g、磷酸氢二钾1.64g、谷氨酸钠0.83g、牛血 清白蛋白10g、加去离子水至1000ml，混合溶解，过滤除菌。
冻干保护剂作用机制
① 防止活性物质失去结构水及阻止结构水形成结晶而导致生 物活性物质的损伤；
② 降低细胞内外的渗透压差、防止细胞内结构水结晶，以保 持细胞的活力；
③ 保护或提供细胞复苏所需的营养物质，有利于生活力的复 苏和迅速修复自身。
二、影响保护剂效能的因素
1、保护剂种类: 根据微生物种类或者用途来添加不同种 类保护剂。
一些常用的冷冻干燥保护剂
分类
保护剂
复合物 糖类 盐类 醇类 酸类 聚合物
脱脂乳、明胶、蛋白质、蛋白胨、糊精、血清、甲基纤维素等 蔗糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖等 乳酸钙、谷氨酸钠、氯化钠、氯化钾、醋酸铵、硫代硫酸钠等 山梨醇、甘油、甘露醇、肌醇、木糖醇等 柠檬酸、酒石酸、氨基酸等 葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等
保护剂：又称稳定剂（stabilizer） ，是指一类能防止生 物活性物质在冷冻真空干燥时受到破坏的物质。（指对疫 苗生产、血清制备等） 保护剂用途（不同用途加不同保护剂, 主要针对活的微生 物或细胞）
① 菌种或毒种保存：常用甘油作保护剂 ② 细胞株保存：常用二甲基亚砜(DMSO)
DMSO:二甲基亚砜，一种细胞的保护剂 ③ 疫苗冷冻真空干燥制备时：加脱脂乳（或二甲基亚
灭活剂、保护剂和免疫佐剂
二、常用灭剂的灭活机理与应用
(一) 灭活剂种类 1、甲醛溶液：
①蛋白质 ②核酸烷基化（不加中断剂）
2、烷化剂
乙酰基乙烯亚胺（AEI） 二乙烯亚胺(BEI) 缩水甘油醛 （使微生物核酸烷基化,灭活后加2%硫代 硫酸钠中断灭活） 3、苯酚（石炭酸）：用于防腐， 很少用于疫苗研制 4、结晶紫：蛋白质变性。（溶于有机溶剂） 用于诊断抗原的制备：鸡白痢抗原 5、β-丙酰内酯 病毒灭活剂，为狂犬病灭活苗制备所用. 注意：灭活剂对人有害， 有时对皮肤粘膜有强烈刺
砜）和蔗糖等（不同国家有不同配方） ④ 干扰素类生物活性物质的保存：加葡聚糖
保护剂（protector）的分类
分类： •（根据其作用机理） ——渗透剂：如二甲基亚砜（DMSO）、甘油和蔗糖等 ——非渗透剂：如聚乙烯吡咯啶酮(PVP)和蛋白质等 •（根据其分子量大小） ——高分子物质、低分子物质。 •（按其化学性质） ——复合物、糖类、盐类、醇类、酸类和聚合物
（二）病毒的保护剂 ① 5%蔗糖 脱脂乳； ② 马立克814活细胞疫苗:保存液氮.稳定剂为10%二 甲基亚砜和50%犊牛血清的199液。 注意: 微生物保护剂缓冲液的组成比例，不同厂家有 不同的配方。
兽医生物制品常用的保护剂
1．5%蔗糖（乳糖）脱脂乳保护剂
蔗糖（或乳糖）5g，加脱脂乳至100ml，充分溶解后，110~116℃高压灭菌 30~40 min。
２、保护剂浓度：严格按照配方执行。 ３、保护剂配制方法：糖类不能用121℃高压灭菌处理。 ４、保护剂酸碱度（PH值）：主要对M的影响。
三、常用的冻干保护剂（稳定剂） 明确不同种类微生物需要添加不同保护剂
（一）细菌的保护剂 ① 需氧或兼氧厌氧菌：５％蔗糖脱脂乳或５％蔗糖、 1.5％明胶； ② 厌氧性细菌：含1.5％谷氨酸钠的１％乳糖或10％脱 脂乳或7.5％葡糖血清。 注：脱脂乳：20％脱脂奶粉溶于水配制而成。
第三节 免疫佐剂
一、佐剂概念与作用机理
1. 佐剂（新概念）：凡是可以增强抗原特异性免疫应答的物 质称为佐剂。
佐剂（旧概念）：当一种物质先于抗原或与抗原混合或同 时注射于动物体内，能非特异性地改变或增强机体对该抗 原的特异性免疫应答,发挥其辅佐作用的物质.
以前作为佐剂使用时没有免疫原性，但现在有所改变，如 IL-2是佐剂和IL-8一类细胞因子佐剂却不一样, 具有免疫调 节和免疫增强作用,单独使用时却具有免疫原性。
三、影响灭活作用的因素
1、灭活剂特异性：石炭酸对真菌和病毒效果差，甲醛 最常用。 2、微生物种类和特性 3、灭活剂浓度（一定要适合） 4、灭活温度（具体不同病原体或毒素，其灭活时间和 温度不一致） 5、灭活时间 6、灭活PH值 7、有机物存在
第二节 保护剂（稳定剂）
• 注意:佐剂和免疫增强剂的关系?
•
有时佐剂也是免疫增强剂.
作用特点：
① 明显增强抗原性微弱的物质诱导机体产生 特异性免疫应答。
② 用最少的抗原和最少的接种次数，产生足 够的免疫应答。
疫苗冻干保护剂组成
1. 营养液： • 可修复因冻干而受损的细胞，使冻干制品含有一定量水分； • 可促进高分子物质形成骨架，使冻干制品呈多孔的海绵状， 增加溶解度 2. 赋形剂： • 防止低分子物质的碳化和氧化，保护活性物质不受加热影响 • 使冻干制品形成多孔性、疏松的海绵状物，增加溶解度 3. 抗氧化剂： • 抑制冻干制品中的酶作用，增加生物活性物质在冻干后贮存 期间的稳定性，如维生素C、维生素E和硫代硫酸钠等。
激性如：甲醛、β-丙酰内酯
甲醛溶液：
•《规程》（2000）中的26种灭活疫苗
• 灭活机理：
甲醛 醛基
氨基 羧基 羟基 巯基
甲基胺 亚甲基二醇单酯 羟基甲酚 亚甲基二醇
• 灭活浓度：多数为0.1％～0.3％
• 灭活原则：低浓度、短时间而又能达到彻底灭活目的；
必要时可在灭活后加入硫代硫酸钠，以中断其反应。
烷化剂（alkylating agent）
乙酰基乙烯亚胺（AEI)、二乙烯亚胺(BEI) 、缩水甘油醛
• 灭活机制： 1. 烷化DNA分子中的鸟嘌呤或腺嘌呤等，引起单链断裂
或双螺旋链交联，因改变DNA的结构而破坏其功能，妨碍 RNA的合成，从而抑制细胞的有丝分裂。
2. 与酶系统和核蛋白起作用而干扰核酸代谢。 • 优点：能破坏病毒的核酸芯髓，使病毒完全丧失感染力，而
2．明胶蔗糖保护剂
明胶 2%~3%（g/m1）、蔗糖5%（g/m1）、硫脲 1%~2%（g/m1）。先 将12%~18%明胶液、30%蔗糖液和6%~12%硫脲液加热溶解，116℃高压 灭菌30~40min；
3．SPGA保护剂
蔗糖 76.62g、磷酸二氢钾0.52g、磷酸氢二钾1.64g、谷氨酸钠0.83g、牛血 清白蛋白10g、加去离子水至1000ml，混合溶解，过滤除菌。
冻干保护剂作用机制
① 防止活性物质失去结构水及阻止结构水形成结晶而导致生 物活性物质的损伤；
② 降低细胞内外的渗透压差、防止细胞内结构水结晶，以保 持细胞的活力；
③ 保护或提供细胞复苏所需的营养物质，有利于生活力的复 苏和迅速修复自身。
二、影响保护剂效能的因素
1、保护剂种类: 根据微生物种类或者用途来添加不同种 类保护剂。
一些常用的冷冻干燥保护剂
分类
保护剂
复合物 糖类 盐类 醇类 酸类 聚合物
脱脂乳、明胶、蛋白质、蛋白胨、糊精、血清、甲基纤维素等 蔗糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖等 乳酸钙、谷氨酸钠、氯化钠、氯化钾、醋酸铵、硫代硫酸钠等 山梨醇、甘油、甘露醇、肌醇、木糖醇等 柠檬酸、酒石酸、氨基酸等 葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等
保护剂：又称稳定剂（stabilizer） ，是指一类能防止生 物活性物质在冷冻真空干燥时受到破坏的物质。（指对疫 苗生产、血清制备等） 保护剂用途（不同用途加不同保护剂, 主要针对活的微生 物或细胞）
① 菌种或毒种保存：常用甘油作保护剂 ② 细胞株保存：常用二甲基亚砜(DMSO)
DMSO:二甲基亚砜，一种细胞的保护剂 ③ 疫苗冷冻真空干燥制备时：加脱脂乳（或二甲基亚
灭活剂、保护剂和免疫佐剂
二、常用灭剂的灭活机理与应用
(一) 灭活剂种类 1、甲醛溶液：
①蛋白质 ②核酸烷基化（不加中断剂）
2、烷化剂
乙酰基乙烯亚胺（AEI） 二乙烯亚胺(BEI) 缩水甘油醛 （使微生物核酸烷基化,灭活后加2%硫代 硫酸钠中断灭活） 3、苯酚（石炭酸）：用于防腐， 很少用于疫苗研制 4、结晶紫：蛋白质变性。（溶于有机溶剂） 用于诊断抗原的制备：鸡白痢抗原 5、β-丙酰内酯 病毒灭活剂，为狂犬病灭活苗制备所用. 注意：灭活剂对人有害， 有时对皮肤粘膜有强烈刺
砜）和蔗糖等（不同国家有不同配方） ④ 干扰素类生物活性物质的保存：加葡聚糖
保护剂（protector）的分类
分类： •（根据其作用机理） ——渗透剂：如二甲基亚砜（DMSO）、甘油和蔗糖等 ——非渗透剂：如聚乙烯吡咯啶酮(PVP)和蛋白质等 •（根据其分子量大小） ——高分子物质、低分子物质。 •（按其化学性质） ——复合物、糖类、盐类、醇类、酸类和聚合物
（二）病毒的保护剂 ① 5%蔗糖 脱脂乳； ② 马立克814活细胞疫苗:保存液氮.稳定剂为10%二 甲基亚砜和50%犊牛血清的199液。 注意: 微生物保护剂缓冲液的组成比例，不同厂家有 不同的配方。
兽医生物制品常用的保护剂
1．5%蔗糖（乳糖）脱脂乳保护剂
蔗糖（或乳糖）5g，加脱脂乳至100ml，充分溶解后，110~116℃高压灭菌 30~40 min。
２、保护剂浓度：严格按照配方执行。 ３、保护剂配制方法：糖类不能用121℃高压灭菌处理。 ４、保护剂酸碱度（PH值）：主要对M的影响。
三、常用的冻干保护剂（稳定剂） 明确不同种类微生物需要添加不同保护剂
（一）细菌的保护剂 ① 需氧或兼氧厌氧菌：５％蔗糖脱脂乳或５％蔗糖、 1.5％明胶； ② 厌氧性细菌：含1.5％谷氨酸钠的１％乳糖或10％脱 脂乳或7.5％葡糖血清。 注：脱脂乳：20％脱脂奶粉溶于水配制而成。
第三节 免疫佐剂
一、佐剂概念与作用机理
1. 佐剂（新概念）：凡是可以增强抗原特异性免疫应答的物 质称为佐剂。
佐剂（旧概念）：当一种物质先于抗原或与抗原混合或同 时注射于动物体内，能非特异性地改变或增强机体对该抗 原的特异性免疫应答,发挥其辅佐作用的物质.
以前作为佐剂使用时没有免疫原性，但现在有所改变，如 IL-2是佐剂和IL-8一类细胞因子佐剂却不一样, 具有免疫调 节和免疫增强作用,单独使用时却具有免疫原性。