革兰氏阴性杆菌大肠杆菌介绍培训ppt课件
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蛋白质和脂多糖组成。 脂多糖是革兰氏阴性细菌的内毒素，也是革兰氏阴
性细菌细胞壁的特有成分，主要与抗原性、致病性 及对噬菌体的敏感性有关。
细胞质膜 Outer membrane
Periplasm
Cyloplasmic membrane
周质
外膜
hoyemadd
● Figure 4.36 The cell wall of Escherichia coli. High-magnification thin section of the cell envelope of E.coli showing the periplasmic gel bounded by the outer membrane and the cytoplasmic membrane. The large, dark particles in the cytoplasm are ribosomes.
(4)肠出血性大肠杆菌 (5)肠侵袭性大肠杆菌 (6)肠粘附性大肠杆菌
( EHEC ) ( EIEC ) ( EAEC)
肠产毒性大肠杆菌 ( ETEC)
ETEC是致人和幼畜腹 泻最常见的病原菌；
毒力因子有粘附素性 菌毛和肠毒素。
ETEC
易感宿主的小肠
低御肠蝠动和流动肠液的神刷作用， 粘附素性菌毛
从而定居在肠内，
⑥ 血平板： 一些致病性菌株常β溶血。
麦康凯琼脂培养基 伊红美兰琼脂培养基 SS 琼脂培养基
血平板
2、 生化特性
I: 吲哚试验 M: 甲基红试验
V:V-P 试验
C: 枸橼酸盐利用实验
三糖铁琼脂
糖类发酵
细菌 腼廊 葡萄糖乳糖 麦芽糖 甘露蔗糖 MWC 运力
大肠杆菌
+1
( 1)三糖铁培养基
① 配方
牛肉膏
(一)抗原
0抗原，即菌体抗原，为细胞壁脂多糖。该抗原刺激 机体主要产生IgM类抗体。
H 抗原， 即鞭毛抗原， H抗原主要刺激机体产生IgG 类抗体，与其他肠道菌基本无交叉反应。
K 抗原，即荚膜抗原，位于O 抗原外层，为多糖。具 有K抗原的菌株不能被其相应的抗O 血清所凝集叫“O 不凝集性"。
据耐热性不同， K抗原又分为： L、A 和B 三型。
粘附于肠粘膜
大量产生并释放肠毒素
靶细胞
水样腹泻和迅速脱水
致病过程
七、抵抗力
大肠杆菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强。 5 5 ℃ 加 热 6 0min 或60℃加热15min 仍有部分细菌存
活。
胆盐、煌绿等对非致病性大肠杆菌有选择性抑制作 用，而对致病性大肠杆菌无抑制作用，所以用肠道 选择鉴别培养基来分离致病性大肠杆菌。
③ 普通琼脂培养基：生长良好，圆形凸起、光滑、湿润、半 透明、灰白色菌落，直径约2~3mm;
④ 普通肉汤培养基：均匀浑浊，管底有粘性沉淀，液面管壁
有菌环。
⑤ 肠道菌鉴别培养基 麦康凯琼脂培养基：红色菌落。 伊红美兰琼脂培养基：黑色带金属闪光的菌落。 SS 琼脂培养基： 一般不生长或生长较差，生长者呈红色。
(二)质粒 F 因子：又称致育因子，插入、复制和转移的功能。
有F因子的大肠杆菌为雄性，用F+表示，不含F 因子 的大肠杆菌称为雌性，用F-表示。通过F+ 和F-细菌 的接合， F 因子可经性菌毛传递给F-菌株，使F-菌株 转变为F+菌株。
R 因子：抗性转移因子和抗性决定因子。
Col 因子：产大肠杆菌素因子，编码合成大肠杆菌素。
Gwpom
陆
(二)血清型
可 用O:K:H 排列表示其血清型。如： O8:K23:H19, 表示该菌具有O 抗原8, K 抗原23, H 抗原为19。
致人畜腹泻的产肠毒素大肠杆菌，除含 K抗原外， 还可含有蛋白质性粘附素抗原。对粘附素抗原应并 列写于多糖K 抗原之后。如： O8:K87,K88:H19 中 K88 即为粘附素抗原。
5g
蛋伯族2
5g
0g
蛋 白 胨5g
乳糖
10g
蔗糖
10g
葡 萄 糖 1g
硫酸亚铁
0.2g
蒸馏水
1000mL
硫代硫酸钠 0.2g
琼脂
12g
2%酚红溶液 12.5ml
②原理
测定细菌对葡萄糖、乳糖及蔗糖的发酵反应， 以 及 能否产生硫化氢。可鉴别肠道菌。
葡萄糖 乳糖 蔗糖 硫酸亚铁
大肠杆菌 沙门菌
发酵葡萄糖和乳糖； 底层和斜面均呈
革兰氏阴性杆菌大肠杆菌介绍
1
一 、大肠杆菌的一般特性
1、G- 直短杆菌，两端钝圆，散在或成对。
革兰染色
2、 周身鞭毛，能运动，无芽孢，有的有荚膜。 3、 代谢能力强，代谢类型是异养兼性厌氧型。
二 、培养及生化特性 1、 培养特性
① 兼性厌氧；
② 最适生长温度37℃,最适生长pH7.2～7.6;
大量产酸产气
黄色，底层有气
泡只发酵Βιβλιοθήκη 萄糖底层黄色，斜产酸产气
面保持红色
能产硫化氢菌株
因形成硫化亚铁而使培养基呈黑色
对照 假单胞菌 志贺氏菌沙门氏菌大肠杆菌变形杆菌 三糖铁培养基
吲哚试验
甲基红试验 V-P 试验 IMViC 试 验
枸橼酸盐试验
三 、大肠杆菌的基本结构
( 一 )细胞壁 大肠杆菌的细胞壁分外膜和肽聚糖层。 外膜是大肠杆菌细胞壁的主要成分，主要由磷脂、
证实试验：制备O 抗原悬液。原效价为1:160～1: 320的O 血清，用0.5%盐水稀释至1:40。稀释血清 与抗原悬液在10 mm×75mm 试管内等量混合，做试 管凝集试验。混匀后放于50℃水浴箱内，经16h后 观察结果。如出现凝集，可证实为该O抗原。
谢谢观看!
腹泻或水肿病例
病料
常采集粪便或肠粘膜刮取物
败血症病例 常采集血液及其病变组织
麦康凯或伊红美兰琼脂平板划线
血琼脂或麦康凯琼脂平板划线
挑取疑似大肠杆菌菌落5～10个分别在琼脂平板进行纯培养
革兰染色镜检 革兰氏染色阴性
接种TSI琼脂培养基
A(K)/A
+(-);-
生化试验
血清学鉴定 临床上只检测O抗原
猪水肿病菌株 Stx2e检测
四、 大肠杆菌的特殊结构
1 、荚膜 荚膜具有抗原性，构成了大肠杆菌的表面抗原，即 K抗原 。
2、 鞭毛
由鞭毛蛋白组成，构成了细菌的鞭毛抗原，与运动 有关。
3 、 菌毛 在细胞表面还含有一种比鞭毛更细更短更硬的丝状 体叫菌毛，可分为普通菌毛和性菌毛。
大肠杆菌可以透过 接合作用传递遗传
物质。
五、 抗原及血清型
作用，有抵抗抗体和补体的作用。
(二)所致疾病
1 . 肠道外感染： 多为内源性感染，以泌尿系感染为 主；大肠杆菌可侵入血液，引起败血症；大肠杆菌
性脑膜炎。
2. 急性腹泻
( 1 ) 肠 产 毒 性 大 肠 杆 菌 ( ETEC) ( 2 ) 产 志 贺 毒 素 大 肠 杆 菌 (STEC) ( 3 ) 肠 致 病 性 大 肠 杆 菌 (EPEC)
对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感。
八、 非致病性大肠杆菌的作用
保护肠道的微生态平衡。消耗肠道内的氧 气，创造厌氧环境，利于厌氧菌的生长； 分解代谢产物供厌氧菌生长。
能合成维生素 K和B。 对外袭菌有拮抗作用。某些大肠杆菌能产
生大肠菌素，对一些病原微生物具有拮抗 作用。
九 、微生物学的诊断
1 、 病料的采集： 肠道外感染取中段尿、血液、脓液、 脑脊液等，腹泻者取粪便。
猪腹泻菌株 肠毒素检测
4、 血清型鉴定
假定试验：取经生化试验证实的大肠杆菌培养物， 用致病性大肠杆菌，侵袭性大肠杆菌和产毒素大肠 杆菌多价O 血清和出血性大肠杆菌的O₁57 血清做玻 片凝集试验。
当与某一种多价O 血清凝集时，在与该多价O 血清的 单价O 血清做实验。如与某一单价O 血清发生强凝 集反应，则为假定试验阳性。
六、 致病性
(一)致病物质 1、 定居因子 (Colonization factor ,CF); 也称粘附素，
即大肠杆菌的菌毛。 2 、 肠毒素是肠产毒性大肠杆菌在生长繁殖过程中释放的外
毒素，分为耐热和不耐热两种。 ① 耐热 (ST ):100℃20min 不破坏，免疫原性弱。
② 不耐热 (LT): 65 ℃30min破坏，免疫原性强。 3. 其他：细胞壁脂多糖的类脂A 具有毒性； K 抗原有抗吞噬
L 型K抗原：对热敏感，100℃ 1h 破坏其抗原性，并 失去与相应抗体的结合力和凝集性，位于被膜中，
偶见于荚膜中。 A 型K抗原：耐100℃1h, 但121℃ 2.5h破坏其抗原
性和O 不凝集性，但保留与相应抗体结合能力。位 于荚膜中，抗A 血清可使具有相应A 抗原的菌体出现 荚膜肿胀现象。 B 型K 抗原：100℃ 1h 破坏其抗原性与相应抗体的 凝集性，但保留其与相应抗体结合力。
2 、 分离培养： 粪便标本直接接种肠道杆菌选择性培 养基。其他病料可同时接种血琼脂平板和肠道杆菌 选择性培养基。37℃培养18～24h后，观察菌落并涂 片染色镜检。
3 、 生化鉴定： 大部分菌株发酵乳糖产酸产气，并发 酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和木胶糖等产酸 产气。
IMViC 试验为“++--”。即为典型大肠杆菌。
Copwle XoWongl
-onhod(
ndon
H 抗原 → 有56种
K抗原 —→有80种
- 0phocheid -Porochord on tpdA
是鉴定血清型的基础
0抗原—→ 有173种 Ow mmbo
Perplowme woo
ppron
Pidrn
因此，自然界中存在数万种的大肠杆菌血清型，
Irner merbrore 但致病性大肠杆菌的血清型数量是有限的。
性细菌细胞壁的特有成分，主要与抗原性、致病性 及对噬菌体的敏感性有关。
细胞质膜 Outer membrane
Periplasm
Cyloplasmic membrane
周质
外膜
hoyemadd
● Figure 4.36 The cell wall of Escherichia coli. High-magnification thin section of the cell envelope of E.coli showing the periplasmic gel bounded by the outer membrane and the cytoplasmic membrane. The large, dark particles in the cytoplasm are ribosomes.
(4)肠出血性大肠杆菌 (5)肠侵袭性大肠杆菌 (6)肠粘附性大肠杆菌
( EHEC ) ( EIEC ) ( EAEC)
肠产毒性大肠杆菌 ( ETEC)
ETEC是致人和幼畜腹 泻最常见的病原菌；
毒力因子有粘附素性 菌毛和肠毒素。
ETEC
易感宿主的小肠
低御肠蝠动和流动肠液的神刷作用， 粘附素性菌毛
从而定居在肠内，
⑥ 血平板： 一些致病性菌株常β溶血。
麦康凯琼脂培养基 伊红美兰琼脂培养基 SS 琼脂培养基
血平板
2、 生化特性
I: 吲哚试验 M: 甲基红试验
V:V-P 试验
C: 枸橼酸盐利用实验
三糖铁琼脂
糖类发酵
细菌 腼廊 葡萄糖乳糖 麦芽糖 甘露蔗糖 MWC 运力
大肠杆菌
+1
( 1)三糖铁培养基
① 配方
牛肉膏
(一)抗原
0抗原，即菌体抗原，为细胞壁脂多糖。该抗原刺激 机体主要产生IgM类抗体。
H 抗原， 即鞭毛抗原， H抗原主要刺激机体产生IgG 类抗体，与其他肠道菌基本无交叉反应。
K 抗原，即荚膜抗原，位于O 抗原外层，为多糖。具 有K抗原的菌株不能被其相应的抗O 血清所凝集叫“O 不凝集性"。
据耐热性不同， K抗原又分为： L、A 和B 三型。
粘附于肠粘膜
大量产生并释放肠毒素
靶细胞
水样腹泻和迅速脱水
致病过程
七、抵抗力
大肠杆菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强。 5 5 ℃ 加 热 6 0min 或60℃加热15min 仍有部分细菌存
活。
胆盐、煌绿等对非致病性大肠杆菌有选择性抑制作 用，而对致病性大肠杆菌无抑制作用，所以用肠道 选择鉴别培养基来分离致病性大肠杆菌。
③ 普通琼脂培养基：生长良好，圆形凸起、光滑、湿润、半 透明、灰白色菌落，直径约2~3mm;
④ 普通肉汤培养基：均匀浑浊，管底有粘性沉淀，液面管壁
有菌环。
⑤ 肠道菌鉴别培养基 麦康凯琼脂培养基：红色菌落。 伊红美兰琼脂培养基：黑色带金属闪光的菌落。 SS 琼脂培养基： 一般不生长或生长较差，生长者呈红色。
(二)质粒 F 因子：又称致育因子，插入、复制和转移的功能。
有F因子的大肠杆菌为雄性，用F+表示，不含F 因子 的大肠杆菌称为雌性，用F-表示。通过F+ 和F-细菌 的接合， F 因子可经性菌毛传递给F-菌株，使F-菌株 转变为F+菌株。
R 因子：抗性转移因子和抗性决定因子。
Col 因子：产大肠杆菌素因子，编码合成大肠杆菌素。
Gwpom
陆
(二)血清型
可 用O:K:H 排列表示其血清型。如： O8:K23:H19, 表示该菌具有O 抗原8, K 抗原23, H 抗原为19。
致人畜腹泻的产肠毒素大肠杆菌，除含 K抗原外， 还可含有蛋白质性粘附素抗原。对粘附素抗原应并 列写于多糖K 抗原之后。如： O8:K87,K88:H19 中 K88 即为粘附素抗原。
5g
蛋伯族2
5g
0g
蛋 白 胨5g
乳糖
10g
蔗糖
10g
葡 萄 糖 1g
硫酸亚铁
0.2g
蒸馏水
1000mL
硫代硫酸钠 0.2g
琼脂
12g
2%酚红溶液 12.5ml
②原理
测定细菌对葡萄糖、乳糖及蔗糖的发酵反应， 以 及 能否产生硫化氢。可鉴别肠道菌。
葡萄糖 乳糖 蔗糖 硫酸亚铁
大肠杆菌 沙门菌
发酵葡萄糖和乳糖； 底层和斜面均呈
革兰氏阴性杆菌大肠杆菌介绍
1
一 、大肠杆菌的一般特性
1、G- 直短杆菌，两端钝圆，散在或成对。
革兰染色
2、 周身鞭毛，能运动，无芽孢，有的有荚膜。 3、 代谢能力强，代谢类型是异养兼性厌氧型。
二 、培养及生化特性 1、 培养特性
① 兼性厌氧；
② 最适生长温度37℃,最适生长pH7.2～7.6;
大量产酸产气
黄色，底层有气
泡只发酵Βιβλιοθήκη 萄糖底层黄色，斜产酸产气
面保持红色
能产硫化氢菌株
因形成硫化亚铁而使培养基呈黑色
对照 假单胞菌 志贺氏菌沙门氏菌大肠杆菌变形杆菌 三糖铁培养基
吲哚试验
甲基红试验 V-P 试验 IMViC 试 验
枸橼酸盐试验
三 、大肠杆菌的基本结构
( 一 )细胞壁 大肠杆菌的细胞壁分外膜和肽聚糖层。 外膜是大肠杆菌细胞壁的主要成分，主要由磷脂、
证实试验：制备O 抗原悬液。原效价为1:160～1: 320的O 血清，用0.5%盐水稀释至1:40。稀释血清 与抗原悬液在10 mm×75mm 试管内等量混合，做试 管凝集试验。混匀后放于50℃水浴箱内，经16h后 观察结果。如出现凝集，可证实为该O抗原。
谢谢观看!
腹泻或水肿病例
病料
常采集粪便或肠粘膜刮取物
败血症病例 常采集血液及其病变组织
麦康凯或伊红美兰琼脂平板划线
血琼脂或麦康凯琼脂平板划线
挑取疑似大肠杆菌菌落5～10个分别在琼脂平板进行纯培养
革兰染色镜检 革兰氏染色阴性
接种TSI琼脂培养基
A(K)/A
+(-);-
生化试验
血清学鉴定 临床上只检测O抗原
猪水肿病菌株 Stx2e检测
四、 大肠杆菌的特殊结构
1 、荚膜 荚膜具有抗原性，构成了大肠杆菌的表面抗原，即 K抗原 。
2、 鞭毛
由鞭毛蛋白组成，构成了细菌的鞭毛抗原，与运动 有关。
3 、 菌毛 在细胞表面还含有一种比鞭毛更细更短更硬的丝状 体叫菌毛，可分为普通菌毛和性菌毛。
大肠杆菌可以透过 接合作用传递遗传
物质。
五、 抗原及血清型
作用，有抵抗抗体和补体的作用。
(二)所致疾病
1 . 肠道外感染： 多为内源性感染，以泌尿系感染为 主；大肠杆菌可侵入血液，引起败血症；大肠杆菌
性脑膜炎。
2. 急性腹泻
( 1 ) 肠 产 毒 性 大 肠 杆 菌 ( ETEC) ( 2 ) 产 志 贺 毒 素 大 肠 杆 菌 (STEC) ( 3 ) 肠 致 病 性 大 肠 杆 菌 (EPEC)
对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感。
八、 非致病性大肠杆菌的作用
保护肠道的微生态平衡。消耗肠道内的氧 气，创造厌氧环境，利于厌氧菌的生长； 分解代谢产物供厌氧菌生长。
能合成维生素 K和B。 对外袭菌有拮抗作用。某些大肠杆菌能产
生大肠菌素，对一些病原微生物具有拮抗 作用。
九 、微生物学的诊断
1 、 病料的采集： 肠道外感染取中段尿、血液、脓液、 脑脊液等，腹泻者取粪便。
猪腹泻菌株 肠毒素检测
4、 血清型鉴定
假定试验：取经生化试验证实的大肠杆菌培养物， 用致病性大肠杆菌，侵袭性大肠杆菌和产毒素大肠 杆菌多价O 血清和出血性大肠杆菌的O₁57 血清做玻 片凝集试验。
当与某一种多价O 血清凝集时，在与该多价O 血清的 单价O 血清做实验。如与某一单价O 血清发生强凝 集反应，则为假定试验阳性。
六、 致病性
(一)致病物质 1、 定居因子 (Colonization factor ,CF); 也称粘附素，
即大肠杆菌的菌毛。 2 、 肠毒素是肠产毒性大肠杆菌在生长繁殖过程中释放的外
毒素，分为耐热和不耐热两种。 ① 耐热 (ST ):100℃20min 不破坏，免疫原性弱。
② 不耐热 (LT): 65 ℃30min破坏，免疫原性强。 3. 其他：细胞壁脂多糖的类脂A 具有毒性； K 抗原有抗吞噬
L 型K抗原：对热敏感，100℃ 1h 破坏其抗原性，并 失去与相应抗体的结合力和凝集性，位于被膜中，
偶见于荚膜中。 A 型K抗原：耐100℃1h, 但121℃ 2.5h破坏其抗原
性和O 不凝集性，但保留与相应抗体结合能力。位 于荚膜中，抗A 血清可使具有相应A 抗原的菌体出现 荚膜肿胀现象。 B 型K 抗原：100℃ 1h 破坏其抗原性与相应抗体的 凝集性，但保留其与相应抗体结合力。
2 、 分离培养： 粪便标本直接接种肠道杆菌选择性培 养基。其他病料可同时接种血琼脂平板和肠道杆菌 选择性培养基。37℃培养18～24h后，观察菌落并涂 片染色镜检。
3 、 生化鉴定： 大部分菌株发酵乳糖产酸产气，并发 酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和木胶糖等产酸 产气。
IMViC 试验为“++--”。即为典型大肠杆菌。
Copwle XoWongl
-onhod(
ndon
H 抗原 → 有56种
K抗原 —→有80种
- 0phocheid -Porochord on tpdA
是鉴定血清型的基础
0抗原—→ 有173种 Ow mmbo
Perplowme woo
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因此，自然界中存在数万种的大肠杆菌血清型，
Irner merbrore 但致病性大肠杆菌的血清型数量是有限的。