动物细胞融合

①在特定的 选择培养基 上,未融合的亲本细胞(浆 细胞和骨髓瘤细胞)和融合的具有同种核的细胞(BB融 合细胞、瘤瘤融合细胞)都会死亡,只有融合的杂种细 胞( 杂交瘤 细胞)才能生长。这种杂种细胞的特点是 既能迅速大量繁殖,又能产生专一性抗体。
②经选择性培养的杂交瘤细胞并非都是能分泌所需 抗体的细胞(很多种杂交瘤细胞),需 经 克隆化培养 和抗体检测 ,经多次筛选后就可获 得足够数量的能分泌 所需抗体的细胞。 (4)两个培养提取场所
杂交瘤细胞
克隆化培养
专一抗体检验呈阳性
杂交瘤细胞 克隆化培养 专一抗体检验呈阳性
专一性杂交瘤细胞
注射到小鼠体内从腹水 中提取（体内培养）
体外培养从培养液中 提取（体外培养）
【总结提升】
(1)诱导融合的2种细胞名称及作用： 免疫 过的B淋巴 细胞(效应B细胞)——产生抗体;
骨髓瘤 细胞——无限增殖。 (2) 动物细胞诱导融合的特有方法——灭活病毒诱导。 (3)两次筛选的目的及方法：
2.2.2 动物细胞融合与单克 隆抗体
一．学习目标： 1.理解和掌握动物细胞融合的原理、过程和意 义。 2.理解和掌握单克隆抗体制备的过程的步骤和 应用
单克隆抗体生产背景：
传统抗体生 向动物体内反复注射抗原 产方法：
从动物血清中提取
缺点：产量低、纯度低、特异性差。 原因：动物在免疫反应过程中，体内产生的特异性抗 体可以多达百万种
成为可能
单
制 注射抗原
获取细胞后细胞培养
克 隆
备 过
诱导细胞融合
筛选
杂交瘤细胞
抗 体
程 筛选 专Baidu Nhomakorabea性杂交瘤细胞 细胞培养提取抗体
特点：特异性强、灵敏度高、可大量制备
应
作为诊断试剂
用
用于治疗疾病和运载药物
2、用于治疗疾病和运载药物（“生物导 弹”）
概念：细胞杂交——杂交细胞（单核细胞） 动物细 原理：细胞膜的流动性 胞融合 诱导方法：物理、化学、灭活的病毒
应用：生产单克隆抗体
产 传统方法生产的抗体产量低、纯度低、特异性差
生
一个B淋巴细胞只产生一种特异性抗体
背
细胞融合技术的发展使单个淋巴细胞的培养
景
最新研究成果：每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性 抗体 设想：单个B淋巴细胞体外培养形成细胞群，就可以 从培养液中提取纯度高、特异性强的抗体
困难：单个细胞很难体外培养形成细胞群
注射特定抗原
小鼠
B淋巴细胞
诱导融合
骨髓瘤细胞
细胞培养 骨髓瘤细胞
B-B、B-瘤、瘤-瘤、多个融合的杂交瘤细胞和未融合细胞 选择培养基筛选
①体外培养—— 从培养液中 提取。 ②体内小鼠腹腔中培养——小鼠 腹水中提取。
【注】取相应B细胞前必需先注射相应抗原,形 象地说先“打针”,否则失败。
单克隆抗体的应用：
1、作为诊断试剂：
利用抗原抗体特异性结合原理，具有准确、高 效、简便、快速等特点；
利用放射性同位素标记的单克隆抗体，在特定 组织中成像技术，可定位诊断肿瘤心血管畸形 等疾病。