表达产物的分离纯化

表达产物的分离纯化

1.rHGH粗提

首先分离工程细胞，收集培养液

PH5.5等电点沉淀，硫酸铵盐析

离心分离收集沉淀

2. rhGH的层析纯化

目的：使残余DNA、残余工程菌蛋白、相关蛋白、热原均达到相关药典质量标准。

方法：分别经过G-25层析、Phenyl—Sepharose FF层析、Sephacryl S—100层析和DEAE—Sepharose FF离子交换层析纯化rHGH蛋白。

3. rHGH纯度鉴定和活性鉴定

纯度鉴定：纯化后的样品经非还原SDS—P AGE、铬银法染色后薄层扫描鉴定纯度。

活力鉴定：取纯化rHGH样品，经HPLC法测定蛋白活力（要求比活性大于2．5 IU／ml）。