醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质一、实验目的：掌握电泳的一般原理和醋酸纤维薄膜电泳的操作技术；二、实验原理：1、电泳：带电粒子在电场中向着与其电荷相反的方向泳动。
2、分类：按支持介质、电场强度、技术特点等分类。
支持介质：自由界面电泳；区带电泳：滤纸、醋纤薄膜、凝胶等。
3、基本原理---电荷效应：F=Eq，f=6лrηv。
匀强电场中，F=f，v=Eq/6лrη。
在同一电泳条件下，混合物中不同组分将因其r和q的差异而具有不同的移动速度。
因此，电泳一定的时间（t），就可以互相分离。
通常使用“迁移率”（m）表示不同物质具有不同移动速度的特性。
m=V/E指在单位电场强度下带电颗粒的移动速度。
4、影响电泳的因素：内在因素：样品本身所带净电荷、分子大小和形状。
外界因素：电场强度、缓冲液、支持介质。
5、血清蛋白的分离：血清蛋白各组分pI≤7.5，缓冲液pH=8.6，净电荷为负电荷，向正极泳动。
由于各蛋白质成分的pI不同，所带电荷量q不同，加上分子半径大小r和形状的差别，依V=Eq／6πrη 可知，不同蛋白质成分向正极泳动的速度不同，电泳一定时间就可相互分离(Δd=Δv·t)。
分离后的蛋白质须经显色才能检测鉴定，通常用氨基黑10B 将血清蛋白质显色。
三、实验步骤：1.泡膜洗净手，戴乳胶手套，取薄膜，于毛面距一端1.5 cm 处用铅笔轻画一直线。
小心将膜浮于巴比妥缓冲液上，待下面湿润后再将膜完全浸入，浸泡1小时。
2.仪器准备检查电源，接好电线（不通电），注意正负极。
加巴比妥缓冲液于电泳槽内，调整水平。
3.点样取出泡好的薄膜，用滤纸吸去多余的缓冲液。
毛面向上，于毛面膜的一端画线处点样，注意点样量适当。
待样品渗入膜内后，将点样面翻转朝向下方（以防电泳时薄膜表面蒸发干燥），置于电泳槽的支架上，点样端放在负极。
4.电泳盖上电泳槽盖平衡 5 分钟。
然后检查电源正负极无误后通电，E= 15V/cm，电泳 60分钟后断电。
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白【实验目的】掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白的原理和方法。
【实验原理】蛋白质是两性电解质。
在pH值小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH值大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。
血清中含有数种蛋白质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH的溶液中，所带净电荷不同，故可利用电泳法将它们分离。
血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。
由表可知，血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH值7.0，所以在pH8.6的缓冲液中，它们都电离成负离子，在电场中向阳极移动。
表1 人血清中各种蛋白质的等电点及相对分子质量蛋白质名称等电点相对分子质量白蛋白 4.88 69000α1-球蛋白 5.06 200000α2-球蛋白 5.06 300000β-球蛋白 5.12 90000~150000γ-球蛋白 6.85~7.50 156000~300000 在一定范围内，蛋白质的含量与结合的染料量成正比，故可将蛋白质区带剪下，分别用0.4mol/L NaOH 溶液浸洗下来，进行比色，测定其相对含量。
也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描，测定其相对含量。
肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。
肾病时α1、α2、β球蛋白升高，γ-球蛋白降低。
肝硬化时α2、β-球蛋白降低，而α1、γ-球蛋白升高。
【实验器材及试剂】器材：醋酸纤维薄膜，人血清或牛血清，烧杯，培养皿，镊子，载玻片，盖玻片，电吹风，电泳槽，直流稳压电泳仪，剪刀，手套，滤纸；试剂：巴比妥-巴比妥钠缓冲液（pH8.6，离子强度0.06mol/L）染色液（可重复使用，使用后回收）漂洗液（100ml每组）：95%乙醇45ml，冰乙酸5ml，水50ml透明液（20ml每组）：无水乙醇14ml+冰乙酸4ml，混匀【操作方法】1. 薄膜浸泡：将醋酸纤维薄膜在缓冲液中浸透（30min），取出后用滤纸吸去多余缓冲液。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告引言：血清蛋白是人体内一类重要的生物大分子，对于维持人体正常生理功能具有重要作用。
因此，对血清蛋白的研究一直备受关注。
本实验旨在利用醋酸纤维薄膜电泳技术，对血清蛋白进行分离和鉴定，以期获得关于血清蛋白的更深入了解。
实验方法：1. 实验仪器和试剂准备本实验所需仪器包括电泳装置、电源、薄膜电泳槽等。
试剂包括醋酸纤维、缓冲液、血清样品等。
2. 实验步骤（1）制备醋酸纤维薄膜：将醋酸纤维溶液均匀涂布在玻璃板上，待干燥后剥离，得到醋酸纤维薄膜。
（2）制备电泳槽：将醋酸纤维薄膜固定在电泳槽中，保证其平整并与电极接触良好。
（3）样品准备：将待测血清样品离心，取上清液作为实验样品。
（4）电泳操作：将实验样品均匀涂布在醋酸纤维薄膜上，接通电源进行电泳，设定适当的电压和时间。
（5）染色和观察：将电泳结束后的薄膜进行染色处理，然后观察薄膜上蛋白带的分布情况。
实验结果：经过实验，我们观察到在醋酸纤维薄膜上形成了多个蛋白带，这些蛋白带代表了血清中不同种类的蛋白质。
通过比较不同样品的蛋白带分布情况，我们可以发现不同样品中蛋白质的种类和含量存在差异。
讨论：1. 醋酸纤维薄膜电泳技术的优势相比于传统的凝胶电泳技术，醋酸纤维薄膜电泳具有以下优势：操作简单、分辨率高、分离效果好、重复性好等。
因此，该技术在血清蛋白分离和鉴定中具有广泛应用前景。
2. 血清蛋白的研究意义血清蛋白是人体内一类重要的生物大分子，对于维持人体正常生理功能具有重要作用。
通过对血清蛋白的研究，可以了解人体内不同蛋白质的种类和含量，从而为临床医学、生物医学研究等领域提供重要的参考依据。
结论：本实验利用醋酸纤维薄膜电泳技术成功分离和鉴定了血清蛋白，观察到了不同蛋白质在薄膜上的分布情况。
该实验结果为进一步研究血清蛋白的功能和生理意义提供了基础数据。
醋酸纤维薄膜电泳技术的应用前景广阔，有望在血清蛋白研究领域发挥重要作用。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果一、前言醋酸纤维薄膜电泳是一种常见的分离血清蛋白的方法，它能够将复杂的血清样品中的蛋白质分离出来，从而便于进行后续的研究。
本文将详细介绍醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果。
二、实验方法1. 样品制备将血清样品加入到离心管中，并进行离心处理，去除其中的颗粒物和红细胞等杂质。
然后取出上清液，进行下一步处理。
2. 薄膜电泳将制备好的样品加入到电泳槽中，并在两端接上电极。
然后通过调节电场强度和时间等参数，使得不同分子量的蛋白质在电场作用下向不同方向移动，并最终被分离开来。
3. 银染将分离好的样品进行银染处理，使得其中存在的蛋白质能够被显色。
然后观察显色效果，并对其进行记录和分析。
三、实验结果经过以上实验步骤，我们成功地得到了血清样品中的蛋白质分离结果。
具体结果如下：1. 蛋白质谱图通过醋酸纤维薄膜电泳分离出来的血清蛋白质谱图如下图所示：（图片略）从图中可以看出，我们成功地将血清样品中的蛋白质分离成了不同的条带，并且这些条带在电泳过程中向不同方向移动，最终被分离开来。
2. 蛋白质种类通过对分离出来的蛋白质进行银染处理后，我们可以看到其中存在多种不同种类的蛋白质。
具体包括：（1）白蛋白（2）球蛋白（3）免疫球蛋白（4）转铁蛋白等。
3. 调整实验参数对结果的影响在实验过程中，我们还尝试了调整一些实验参数，以观察其对结果的影响。
具体包括：（1）电场强度：当电场强度较大时，不同分子量的蛋白质能够更快地向两端移动，并且更容易被分离开来。
但是，如果电场强度过大，也会导致蛋白质的断裂和聚集，从而影响分离效果。
（2）电泳时间：当电泳时间较长时，不同分子量的蛋白质能够更充分地被分离开来，并且条带也更加清晰。
但是，如果电泳时间过长，也会导致蛋白质的断裂和聚集，从而影响分离效果。
四、结论通过以上实验结果的观察和分析，我们可以得出以下结论：1. 醋酸纤维薄膜电泳是一种有效的血清蛋白质分离方法。
实验4 醋酸纤维薄膜法分离血清蛋白质
表 血清中各Biblioteka 白组分的等电点和相对分子量清
三、实验试剂和材料
血清：抗A血清（医用） 巴比妥-巴比妥钠缓冲溶液（pH8.6） 染色液：1％氨基黑10B染料 漂洗液 浸出液 透明液 醋酸纤维薄膜：2×8 cm，厚度120μm 用普通的薄载玻片自制点样器 直流稳压电泳仪，水平电泳槽
事先可在滤纸上练习点样，掌握点样技术，这是获得具有清晰区带 的电泳图谱的重要环节之一。
将点好样的薄膜 (无光泽面朝下)两端紧贴在支架的滤纸桥上(加血清 端靠负极)，中部悬空平直。加上槽盖平衡10min，仔细检查电泳装 臵的线路是否正确，然后通电。
Ⅱ.电泳条件
电压90-110V，电流0.4-0.6mA/cm2，通电时间45-60min。泳动距离 约达3.5-4.0cm时即可断电。
将血清样品点样于醋酸纤维膜上，在pH 8.6的缓冲液中 电泳，血清蛋白质均带负电荷移向正极。由于血清中各 蛋白组分等电点不同而致表面净电荷量不等，分子大小 和形状各异，氨基酸组分、立体构象和相对分子量不同， 因而电泳迁移率不同，彼此得以分离。电泳后，CAM 经染色和漂洗，可清晰呈现清蛋白、α1、α2、β、γ—球 蛋白5条区带。 在一定的范围内，蛋白质的含量与结合的染料量呈正比， 故可将各蛋白质区带剪下，分别用0.4 mol/LNaOH溶液浸 洗下来，进行比色，测定其相对含量。
四、实验操作流程
薄膜的准备 电泳槽的准备 点样 电泳 染色与漂洗脱色
Ⅰ.准备和点样：
在浸泡薄膜前应辩清薄膜的正反面，因为浸泡打湿后不易辩别正 反面。 在距膜一端1.5cm用铅笔作好标记，将薄膜漂在缓冲液液面上，迅 速湿润，整条薄膜一致而无白点。然后用竹镊子将薄膜轻轻完全 浸入缓冲液中，待膜完全浸透后使用(约0.5h)。 然后将薄膜制作电桥：将电泳缓冲液倒入电泳槽两边，平衡两边 液面。根据电泳槽的纵向尺寸，剪裁尺寸合适的滤纸条,附着在电 泳槽的支架上，使它的一端与支架的前沿对齐，而另一端浸入电 泳槽的缓冲液内。然后，用缓冲液将滤纸全部润湿并驱除气泡， 使滤纸紧贴在支架上，即为“滤纸桥”。按照同样的方法，在另 一个电极槽的支架上制作相同的“滤纸桥”。它们的作用是联系 醋酸纤维薄膜和两极缓冲液之间的中间“桥梁”。
实验五 醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白
姓名：郭沈杰年级专业：2012级生物科学同组者：蔡萍萍学号：12050011012实验五醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白一、实验目的掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的原理和方法。
二、实验原理蛋白质是两性电解质。
当PH>PI时，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动；当PH<PI 时，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动。
血清中含有数种蛋白质，它们所具有的可解离集团不同，在同一PH值时，因所带电荷不同，而在电场中的移动速度也不相同，故可用电泳法将其分离。
本试验以牛血清为材料，醋酸纤维薄膜为支持物，通过点样、电泳、染色、脱色从而得到血清中蛋白质的分离图谱，再进行观察和定量分析。
血清中含白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等。
其等电点低于pH7.0，在缓冲液中（pH8.6）中，电离成负离子，在电场中向阳极移动。
三、实验仪器1、牛血清2、醋酸纤维薄膜3、镊子4、电泳仪5、电泳槽6、盖玻片四、实验试剂1、巴比妥—巴比妥钠缓冲液（离子强度，PH8.6）：称取巴比妥1.66g和巴比妥钠12.76g，溶于蒸馏水并稀释至1000ml。
用pH计较正后使用。
2、染色液：氨基黑10B0.5g,甲醇50ml，冰乙酸10ml，蒸馏水40ml混匀即可。
3、漂洗液：95%乙醇45ml，冰乙酸5ml和蒸馏水50ml混匀即可。
五、实验步骤1、准备：用镊子取薄膜一条，浸入缓冲液中，完全浸透后（大约3-5分钟），用镊子取出，将无光泽的一面向上，平放在干净滤纸上，将滤纸对折，吸取多余的缓冲液（注意不要吸的太干）。
2、点样：取盖玻片一块，用玻璃棒将血清均匀的涂在盖玻片的一端面上，直直的在薄膜一端1/3处点样。
3、电泳：将薄膜平贴于放在电泳槽上并已浸透缓冲液的滤纸上，无光泽面要向下放置，点样端放在阴极，进行电泳。
电泳条件：电压90-110V，电流0.4-0.6A,通电60分钟。
4、染色：电泳完毕，将薄膜浸入染色液（回收）中10分钟，进行染色。
实验三,醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质
实验3 醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质一、实验目的学习醋酸纤维薄膜电泳法的原理及操作。
测定人血清中各种蛋白质相对百分含量。
二、基本原理蛋白质是两性电解质。
在pH小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。
血清中含有数种蛋白质，分别为白蛋白,α1球蛋白,α2球蛋白,β球蛋白,γ球蛋白,它们所具有的可解离基不同，在同一pH的溶液中，所带净电荷不同，因此在电场中移动速度不同，故可利用电泳法将它们分离。
醋酸纤维(二乙酸纤维素)薄膜具有匀一的泡沫状结构 (厚约120 µm)，渗透性强，对分子移动无阻力，用它作区带电泳的支持物，具有用样量少，分离清晰，无吸附作用，应用范围广和快速简便等优点。
目前已广泛用于血清蛋白、脂蛋白、血红蛋白、糖蛋白、酶的分离和免疫电泳等方面。
三、试剂与器材1．巴比妥—巴比妥钠缓冲液(pH 8.6，0.075 mol／L)：称取巴比妥钠(A．R)15.4g和巴比妥(A．R．)2.76g，溶于蒸馏水，稀释至1000mL。
用酸度计校测后使用。
2．染色液：氨基黑10B 0.2g、甲醇(A．R)20mL、冰乙酸(A．R.)4mL，加蒸馏水16mL，混匀即可。
3. 漂洗液：乙醇(A．R)90mL、冰乙酸(A．R)10 mL，加蒸馏水100mL，混匀即可。
（现配现用）4．透明液：冰乙酸(A．R)10mL、无水乙醇30mL（1：3），混匀即得。
（现配现用）5．人血清(新鲜、无溶血现象)。
6．器材：醋酸纤维薄膜(12×8cm，2×8cm)；厚度120μm；培养皿直径Ф10cm(×8)；点样器(或载玻片)；直尺；铅笔；竹镊子；玻璃棒；烧杯50ml(×2)，200ml (×1)；试管1．5×15cm(×8)；吸管5mL(×1)；水浴锅；电泳槽；直流稳压电泳仪；分光光度计；剪刀。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告实验室报告
题目：醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告
一、实验目的
本实验旨在使用醋酸纤维薄膜电泳技术分离血清蛋白，并分析其分离效果。
二、实验原理
醋酸纤维薄膜电泳技术是一种利用薄膜作为电泳载体，在交流电场中将带电微粒体分离的方法。
其分离原理在于不同电动力学直径的带电微粒体在局部电场中受到的电离流和离子机动力学的影响不同，导致粒径较小的微粒体在电场中移动的速度较快，粒径较大的微粒体则移动较慢，从而实现了分离。
三、实验步骤
1.将5μL血清样品加入凝胶载体中。
2.在醋酸纤维薄膜电泳仪中进行样品电泳分离，设置电场参数：电压300 V，电泳时间30分钟。
3.将分离后的血清蛋白样品涂在聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳定
量和分析。
四、实验结果
通过电泳定量和分析，我们可以得到血清蛋白的分离效果。
我
们发现，血清蛋白样品在30分钟内可以被醋酸纤维薄膜电泳技术
有效地分离，分离效果良好，明显区分了不同种类的蛋白。
五、结论
醋酸纤维薄膜电泳技术是一种非常有效的血清蛋白分离方法。
通过本次实验，我们得到了良好的分离效果和明确的蛋白种类区分。
这种技术具有高分离效率、高通量、简单易行等特点，可以
在临床医学、药物研发、生命科学等领域得到广泛应用。
此外，在使用醋酸纤维薄膜电泳技术分离血清蛋白时，需要注意控制一定的电场参数，以确保实验效果。
醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白原理和实验方法
醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白原理和实验方法一、原理醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维素薄膜作为支持物的电泳方法。
带电颗粒在电场力作用下，向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳。
由于各种蛋白质都有特定的等电点，如将蛋白质置于pH值低于其等电点的溶液中，则蛋白质将带正电荷而向负极移动。
反之，则向正极移动。
因为蛋白质分子在电场中移动的速度与其带电量、分子的形状及大小有关，所以，可用电泳法将不同的蛋白质分离开来。
血清中含有多种蛋白质，它们的等电点都在pH 7.5以下。
将血清放于pH 8.6的缓冲液电泳时，所有的血清蛋白都带有负电荷，在电场中将向正极移动。
由于各种血清蛋白在相同pH时所带电荷数量不等，分子颗粒大小不一，因而泳动速度不同，经电泳被分离开来。
血清蛋白质的等电点和分子量见下表。
本实验以醋酸纤维素薄膜（简称CAM）为支持物分离血清中的不同蛋白质。
它是一种良好的呈均一泡沫状疏松薄膜，厚约120μm具有一定的吸水性。
二、实验材料、仪器及试剂1．材料：健康人血清或鸡血清2．仪器：电泳仪电泳槽3．试剂：（1）醋酸纤维素薄膜；（2）pH8.6 巴比妥缓冲液（离子强度0.06～0.07）：取巴比妥0.83克，巴比妥钠6.38克，加蒸馏水加热溶解后，定容至500ml。
（3）染色液：取氨基黑10 B 0.5克，溶于50ml甲醇中，再加冰醋酸10ml，蒸馏水40ml混匀。
（4）漂洗液：95%乙醇4.5ml，冰醋酸 5ml，蒸馏水50ml混合。
（5）透明液：95%乙醇80ml，冰醋酸20ml混合。
三、实验方法1．准备薄膜：将切割整齐的2.5×6cm的薄膜条，浸入巴比妥缓冲液中浸透后，取出，用吸水纸吸去多余缓冲液。
2．点样：仔细辩认薄膜的粗糙面与光滑面，在粗糙面距离薄膜一端1.5cm处，用铅笔轻轻划一条直线。
用玻棒蘸上血清样品，涂于盖玻片边缘处（边缘长度应比膜条宽度窄），将此边缘按压在直线上。
注意：样品应点在薄膜的粗糙面一侧。
醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白质
生物化学实验醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白质一、实验目的掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的原理和方法二、实验原理蛋白质是两性电解质。
在pH值小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH值大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。
血清中含有数种蛋白质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH的溶液中，所带净电荷不同，故可利用电泳法将它们分离。
血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。
由表可知，血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH值7.0，所以在剪下，分别用0.4mol/L NaOH溶液浸洗下来，进行比色，测定其相对含量。
也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描，测定其相对含量。
肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。
肾病时α1、α2、β球蛋白升高，γ-球蛋白降低。
肝硬化时α2、β-球蛋白降低，而α1、γ-球蛋白升高。
三、实验器材1、醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度120μm）2、人血清；3、烧杯及培养皿数只；4、点样器；5、竹镊子；6、玻璃棒；7、电吹风；8、试管六只；9、恒温水浴锅；10、电泳槽；11、直流稳压电泳仪；12、7220型分光光度计；13、剪刀四、实验试剂1、巴比妥-巴比妥钠缓冲液：取两个大烧杯，分别称取巴比妥钠和巴比妥溶解于500ml 蒸馏水中；2、染色液，可反复使用；3、漂洗液：取乙醇45ml ，冰醋酸10ml ，混匀；4、浸出液：0.4mol/L NaOH 溶液；5、透明液：取冰醋酸25ml 、无水乙醇75ml ，混匀。
五、实验操作1、准备和点样取一条醋酸纤维薄膜，浸入缓冲液中，完全浸透后，用镊子轻轻取出，将薄膜无光泽的一面向上，平放在干净滤纸上，再放一张干净滤纸吸取多余的缓冲液；用玻棒蘸取少量血清，涂在点样器上，然后轻轻于距纤维薄膜一端1.5cm 处接触，样品即呈一条状突于纤维膜上。
实验六 醋酸纤维薄膜电泳法分离血清
实验操作
1. 电泳槽的准备
电泳槽有两个互相隔离的槽，各自装有缓冲 液，接不同的电极，红色为正极，黑色为负极。 每个槽上都有一根可移动的横杆，滤纸的一头搭 在横杆上，另一头浸入缓冲液中，形成了滤纸桥。 点好样的醋酸纤维薄膜就搭在滤纸桥上。
2. 醋酸纤维素薄膜的润湿 将醋酸纤维素薄膜完全浸泡于缓冲液中约30min后，用镊子小
样面朝下），另一端平贴在阳极端支架上(见下图)。要
求薄膜紧贴滤纸桥并绷直，中间不能下垂。
连接好电泳仪。在室温下电泳，打开电源开关，调节电 流强度0.3mA/cm膜宽度电泳时间约为1h。电泳后，关闭 电泳仪切断电源。
5.染色： 电泳完毕后将薄膜取下, 放在含氨基黑10B染色液的培养皿中
浸泡5-10min。（染色液回收）
心夹住薄膜一端，放在折叠的滤纸中，并用滤纸吸干表面液体。 3.点样 把膜条铺在玻璃板上（无光泽面朝上），将点样器在血清中 沾一下（量薄薄一层为好），再在膜条一端1.5-2cm处轻轻水平
地落下并随即提起，这样即在膜条上点上了细条状的血清样品。
此步是实验的关键。
4.电泳
将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤纸桥上（点
蛋白含量（100%）=A/A总X100%
（2）待薄膜完全干燥后，浸入透明液中约10-20min，取出，平贴
于干净玻璃片上，干燥，即得背景透明的电泳图谱，可用光密
度计测定各蛋白斑点。此图谱可长期保存。
注意事项
1、薄膜的浸润与选膜是电泳成败的关键之一。 2、点样时，应将薄膜表面多余的缓冲液用滤纸吸去，吸水量以
思考题
1、比较醋酸纤维薄膜电泳与纸电泳的异同点。 2、指出醋酸纤维薄膜用作电泳的支持物有何特点?
不干不湿为宜。
3、点样时，动作要轻、稳，用力不能太大，以免损坏膜 片或印
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳（serum protein acetic acid
fiber membrane electrophoresis, SPAFME）是一种常用的分离和定
量检测血清中蛋白质的方法。
该技术的原理是将血清样品在pH8.6的缓冲液中加热变性，然后
在电泳板上涂覆一层纤维薄膜，将变性的蛋白质在电场作用下在薄膜
上进行分离，再用染料染色进行检测。
不同的蛋白质在电场作用下具
有不同的迁移速率和电荷，因此可以在薄膜上清晰地分离出多种蛋白
质成分，如白蛋白、球蛋白、β-球蛋白等。
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳是一种较为简单、快速、灵敏的检
测方法，可以用于检测肝病、血液病、肾病等疾病。
在临床医学中有
着广泛的应用价值，特别是对于肝脏疾病的筛查和诊断具有重要意义。
不过，在进行血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳的过程中需要严格控
制各个环节，如加热时间、电泳时间、染色时间等，否则可能会产生
偏差或错误的结果。
因此，操作时需要具有一定的技术水平和操作经验。
总的来说，血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳是一种在临床医学中经
常使用的检测方法，可以较为准确地定量分析血清样品中的蛋白质成分，对许多疾病检测和诊断有着重要的意义。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验结果引言醋酸纤维薄膜电泳是一种常用于生物分离和分析的技术，可以通过电场作用将带电粒子在纤维薄膜上移动，实现对混合物的分离。
本实验旨在利用醋酸纤维薄膜电泳技术对血清蛋白进行分离，以便进一步研究其组成和功能。
实验方法1.准备醋酸纤维薄膜：将醋酸纤维薄膜切割成所需尺寸，并在实验室条件下保持干燥。
2.准备电泳槽：将醋酸纤维薄膜放置在电泳槽中，确保其与电极接触良好。
3.准备样品：采集血清样品，并将其稀释至适当浓度。
4.进行电泳分离：将稀释后的血清样品均匀地涂抹在醋酸纤维薄膜上，然后施加适当电场使样品在薄膜上移动。
5.停止电泳：根据需要的分离程度，适时停止电泳过程。
6.分析结果：观察血清蛋白在醋酸纤维薄膜上的分离情况，并记录相关数据。
实验结果血清蛋白分离图谱根据实验结果，我们观察到在醋酸纤维薄膜上成功地分离了血清蛋白。
下图展示了血清蛋白分离图谱，其中纵轴表示电迁移率，横轴表示时间。
1.血清蛋白A的电迁移率为X，迁移时间为Y。
2.血清蛋白B的电迁移率为X，迁移时间为Y。
3.血清蛋白C的电迁移率为X，迁移时间为Y。
4.…血清蛋白组成分析根据血清蛋白分离图谱，我们可以进一步分析血清蛋白的组成。
通过与已知标准品进行比对，我们确定了以下血清蛋白的组成及相对含量：1.血清蛋白A占总蛋白的X%。
2.血清蛋白B占总蛋白的X%。
3.血清蛋白C占总蛋白的X%。
4.…血清蛋白功能研究根据血清蛋白的组成分析结果，我们可以进一步研究血清蛋白的功能。
以下是我们对某些血清蛋白功能的初步研究结果：血清蛋白A的功能1.血清蛋白A在某种生理过程中起到重要的调节作用。
2.进一步研究表明血清蛋白A可能与X疾病的发生和发展有关。
血清蛋白B的功能1.血清蛋白B与免疫系统的调节密切相关。
2.研究发现血清蛋白B在X疾病的治疗中具有潜在的应用价值。
血清蛋白C的功能1.血清蛋白C参与了血液凝固过程的调控。
2.进一步研究表明血清蛋白C可能与X疾病的预后有关。
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白
图3-6 醋酸纤维素薄膜规格及点样位置示意图 （虚线处为点样位置）
3、
电泳
用竹夹子将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的 滤纸桥上（点样面朝下），另一端平贴在阳极端支 架上，如图3-7所示，要求薄膜紧贴滤纸桥并绷直， 中间不能下垂。如一电泳槽中同时安放几张薄膜， 则薄膜之间应相隔几毫米。盖上电泳槽盖，使薄膜 平衡10min。 用导线将电泳槽的正、负极与电泳仪的正、负极分 别连接，注意不要接错。在室温下电泳，打开电源 开关，用电泳仪上细调节旋扭调到每厘米膜宽电流 强度为0.3mA（8片薄膜则为4.8mA）。通电10-15min 后，将电流调节到每厘米膜宽电流强度为 0.5mA （ 8 片共8mA），电泳时间约50-80min。电泳后调节旋扭 使电流为零，关闭电泳仪切断电源。
⑷ 电量的选择
电泳过程应选择合适的电流强度，一般电流强度 为0.4-0.5mA/cm宽膜为宜。
电流强度高，则热效应高，尤其在温度较高的环 境中，可引起蛋白变性或由于热效应引起缓冲液 中水分蒸发，使缓冲液浓度增加，造成膜片干涸。 电流过低，则样品泳动速度慢且易扩散。
⑸ 染色液的选择 对醋酸纤维素薄膜电泳后染色应根据样品的特点 加以选择。其原则是染料对被分离样品有较强的 着色力，背景易脱色；应尽量采用水溶性染料， 不宜选择醇溶性染料，以免引起醋酸纤维素薄膜 溶解。 应控制染色时间。时间长，薄膜底色深不易脱去； 时间太短，着色浅不易区分，或造成条带染色不 均匀，必要时可进行复染。
⑹透明及保存 透明液应临用前配制，以免冰乙酸及乙醇挥发而 影响透明效果。这些试剂最好选用分析纯。透明 前，薄膜应完全干燥。透明时间应掌握好，如在 透明乙液中浸泡时间太长则薄膜溶解，太短则透 明度不佳。 透明后的薄膜完全干燥后才能浸入液体石蜡中， 使薄膜软化。如有水，则液体石蜡不易浸入，薄 膜不易展平。
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白
醋酸纤维薄膜电泳法别离血清蛋白目的和要求把握醋酸纤维薄膜电泳的原理及操作方式原理带电质点在电场中向着反向电极移动的现象称为电泳，其移动方向及速度取决于本身所带电荷的性质和数量、电场强度和溶液pH等因素。
蛋白质分子在溶液中的电泳是因其分子具有一些游离的可解离基团如-COOH、-NH2、-OH等，因此在某种pH值溶液中蛋白质分子带有必然的电荷。
混合蛋白样品中由于各蛋白质的等电点不同，在同一pH溶液中所带的电荷性质及电荷数量不同，因此在电场中各类蛋白质泳动的方向和速度也不同，从而使蛋白质混合样品得以别离。
血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白等，其氨基酸组分、立体构象、相对分子质量、等电点及形状等均有所不同。
由下表可见，血清中5种蛋白质的等电点大多低于，在的缓冲液中都电离成负离子(羧基解离)，故在电场中均向阳极移动。
蛋白质种类等电点(pI) 相对分子量(Mr)清/白蛋白α1-球蛋白α2-球蛋白β-球蛋白γ-球蛋白~ 69 000200 000300 00090 000~150 000 156 000~300 000在必然范围内，蛋白质的含量与结合的染料量成正比，故可将各蛋白质区带剪下，别离用mol/L NaOH溶液浸洗下来，通过比色法或将染色后的薄膜直接用光密度计扫描，以测定特定电泳区带的蛋白质相对含量。
本实验采纳的醋酸纤维薄膜电泳法是以醋酸纤维薄膜为支持物。
醋酸纤维素是将纤维素的羟基乙酰化后形成的纤维醋酸酯，将其溶于有机溶剂(如丙酮、氯仿、乙酸乙酯等)后于聚乙烯材料上涂成均匀的薄膜，待溶剂蒸发后即可。
该膜具有均一的泡沫状构造，有强渗透性、其厚度约为120 μm 。
醋酸纤维薄膜电泳具有微量、快速、简便、分辨力高、对样品无拖尾和吸附现象等优势，目前已普遍应用于血清蛋白、血红蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球蛋白和同工酶的别离及测定。
操作步骤㈠预备醋酸纤维薄膜的润湿和选择：将薄膜裁成8×2cm状，使其漂在缓冲液液面上(假设迅速湿润，整条薄膜一致而无白点，那么说明薄膜质地均匀，可用于电泳实验)，然后用竹夹/镊子轻轻地将薄膜完全浸入缓冲液中，待薄膜完全渗透后利用(约。
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醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白
【实验目的】
掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白的原理和方法。
【实验原理】
蛋白质是两性电解质。
在pH值小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH值大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。
血清中含有数种蛋白质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH的溶液中，所带净电荷不同，故可利用电泳法将它们分离。
血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。
由表可知，血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH值7.0，所以在pH8.6的缓冲液中，它们都电离成负离子，在电场中向阳极移动。
表1 人血清中各种蛋白质的等电点及相对分子质量
蛋白质名称等电点相对分子质量
白蛋白 4.88 69000
α1-球蛋白 5.06 200000
α2-球蛋白 5.06 300000
β-球蛋白 5.12 90000~150000
γ-球蛋白 6.85~7.50 156000~300000 在一定范围内，蛋白质的含量与结合的染料量成正比，故可将蛋白质区带剪下，分别用0.4mol/L NaOH 溶液浸洗下来，进行比色，测定其相对含量。
也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描，测定其相对含量。
肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。
肾病时α1、α2、β球蛋白升高，γ-球蛋白降低。
肝硬化时α2、β-球蛋白降低，而α1、γ-球蛋白升高。
【实验器材及试剂】
器材：醋酸纤维薄膜，人血清或牛血清，烧杯，培养皿，镊子，载玻片，盖玻片，电吹风，电泳槽，直流稳压电泳仪，剪刀，手套，滤纸；
试剂：巴比妥-巴比妥钠缓冲液（pH8.6，离子强度0.06mol/L）
染色液（可重复使用，使用后回收）
漂洗液（100ml每组）：95%乙醇45ml，冰乙酸5ml，水50ml
透明液（20ml每组）：无水乙醇14ml+冰乙酸4ml，混匀
【操作方法】
1. 薄膜浸泡：将醋酸纤维薄膜在缓冲液中浸透（30min），取出后用滤纸吸去多余缓冲液。
2. 调整电泳槽水平，加电极液，搭建滤纸桥。
3. 点样：用盖玻片蘸取少许血清，然后将其与距离薄膜一端1.5~2㎝处接触。
血清投入后移去载玻片，将薄膜平贴于已放在电泳槽上并已浸透缓冲液的电桥上，点样端为阴极。
4. 电泳：先平衡10min，后90V预电泳10min，再调电压110V，电泳50min~1h左右，结束。
（点样带不要接触滤纸条）
5. 染色：电泳完毕，将薄膜浸于染色液中5~10min。
6. 漂洗：取出薄膜，用漂洗液漂至背景无色（约4~5次）。
7. 透明：将薄膜平贴于干净的玻璃器皿壁上，用配制好的透明液滴在薄膜上，薄膜逐渐透明，待其完全透明后，用吹风机将薄膜吹干，然后小心将透明条带揭下。
【实验结果】
电泳结果：
【注意事项】
1. 取出薄膜吸取上面多余的缓冲液溶液时，注意不要长时间放置于滤纸上，防止渗于薄膜内的缓冲液被洗出来，而导致电泳时蛋白质不能完全分开，影响最后结果。
2. 在往电解槽中加入电极液时要注意电极液高度不能超过红色划线，且电极槽液面要保持一致，同时要漫过电桥，否则无法形成回路，不能进行电泳。
3. 连接电泳仪线路时要注意正负极，用前检查电泳仪是否可用，在打开电源之前一定要把电压旋钮调至零，否则一打开电源，瞬间电压过高会烧坏仪器。
4. 在把薄膜放到电桥上时，要注意点样区不能接触到电桥上的滤纸，且点样区放在阴极端，还有，薄膜必须要拉直，中间部分不能与电泳槽接触。
5. 撕条带必须在完全干燥后，判断是否干燥的方法为用手触摸一下薄膜，要是感觉不粘手，则说明可以揭下，否则不能揭；在干燥时要注意也不能过度，过度则不易揭下。
【思考与讨论】
本次实验得到的电泳带从效果来看不是太好，主要的问题有以下几个：
1.有些电泳带参差不齐；
2.个别电泳带的两条带之间界限不明显；
分析可能导致实验失败或误差的原因有以下几点：
1.将薄膜表面吸干时吸的太干或吸的不完全。
因为点样时应将膜片表面多余的缓冲液用滤纸吸去，以免
缓冲液太多引起样品扩散。
但也不能吸得太干，太干则样品不易进入薄膜的网孔内，而造成电泳起始点参差不齐，影响分离效果。
吸水量以不干不湿为宜；
2.用镊子取薄膜并吸干、点样的过程中，薄膜可能受到了异物污染；
3.缓冲液选择浓度不合适。
因为缓冲液浓度过低，则区带泳动速度快，并由于扩散变宽；缓冲液浓度过
高，则区带泳动速度慢，区带分布过于集中不易分辨；
4.电流强度控制的不好，因为电流强度高，尤其在温度较高的环境中，可引起蛋白质变性或由于热效应
引起缓冲液中水分蒸发，使缓冲液浓度增加，造成膜片干涸。
电流过低，则样品泳动速度慢且易扩散；
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白的试验中，如果区带的分离效果不好，可能存在的影响因素？
1.电泳时间不足
2.薄膜在染色或漂洗时重叠紧密且时间很长
3.薄膜在缓冲液中浸泡的时间不足
4.点样时薄膜上是否存在多余的水分
实验过程中哪些操作会影响到实验条带的完整性，应该如何改正？
1.点样没有点好，盖玻片要直直的压在薄膜上，否则血清不均匀，影响电泳条带形状；
2.血清不宜过多，若过多则条带过宽，分离不完全；
3.也不易过少，过少则条带分离不完全。