常见致病性真菌的实验诊断(实验课)2
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念珠菌显色培养 API鉴定试剂条 YST鉴定卡
念珠菌显色培养
白色念珠菌—绿色 热带念珠菌—蓝色 光滑念珠菌—粉红色
API鉴定试剂条
原理：API 32 C AUX 试验条是由32个含干燥碳水化 合物的试验杯组成。只有能以该底物为碳源的酵母菌 才能生长。
测定结果是以与对照生长物的比较而得；鉴定结果 参照分析图谱索引或鉴定软件。
白假丝酵母菌（+） ）
热带假丝酵母菌（-
ATBFUNGS3药敏结果判断
通过肉眼判读或是使用ATB仪器或mini API ®（参
考使用者手册）自动判读来观察生长情况。
ATBFUNGS3药敏结果判断
浊度下降80%为微弱生长；浊度下降50%左右为明显减少
酵母菌ETEST方法
培养基 RPMI+2%葡萄糖+MOPS+1.5% Bacto琼脂，pH 7.2~7.4
小培养
主要用于菌种鉴定，大致分为三种：玻片法，方块法 和钢圈法。
玻片法：在消毒的载玻片上，均匀地浇上熔化的培 养基，不宜太厚。接种后盖上消毒的盖玻片，30度 培养后，将盖玻片取下，加入棉酚兰以后直接在显微 镜下观察。
17
白念珠菌Etest判读
2019/9/28 18
100%抑制
80%抑制
ATBFUNGS3药敏结果判断
对于氟康唑（FCA）, 伊曲康唑（ITR）和伏立康唑（ VRC），最小抑菌浓度（MIC）对应的测试杯得分可 以是“2”，“1”，或是“0”分。
对于两性霉素B（AMB），最小抑菌浓度（MIC）应 该判断为生长完全受抑制的测试杯的浓度（即得分为 “0”的测试杯）
ATB FUNGUS 3 操作
制备浊度相当于2 McFarland的悬浮液。 转移20ul 该菌悬液到一ATB F2培养基的安瓿中。 每个杯状凹孔中加入135ul 的 ATB F2培养基 将一个盖子放在试条上。 把试条放入一个气密容器或是一个装有吸潮纸的密闭
罐里，在有氧条件下35°C (+ 2°C)的环境中培养。
接种量 孵育条件 判读方法
念珠菌：0.5 McFarland 新生隐球菌：1 McFarland
念珠菌：35℃，24~48h（光滑念珠菌和热带念珠菌需在 48h再次确认） 新生隐球菌： 35℃，48~72
两性霉素B：100%抑制 氟胞嘧啶：90%抑制 唑类：80%抑制 卡泊芬净：80%抑制
2019/9/28
试验条的准备
记录菌株资料于盘的延长边沿部分(不记在盖上，以 免错放)。
从包装中取出试验条，置试验条于培养盒中
接种物的制备
制成浊度2 McFarland.的均一菌悬液。菌悬液制备 好后应立即使用
打开一API C 培养基安瓿，转入250 l上述制备的菌 悬液。用吸管轻轻混均，注意避免产生气泡。
将API C培养基中悬浮液吸取135 l注入杯内。 盒子盖上盖子，在29°C ± 2°C 孵育 24-48 小时
ATB FUNGUS 3真菌药敏检测试剂条
ATB FUNGUS 3试条包括16对杯状凹孔。第一对不 含任何抗真菌药物，用作阳性生长对照。另外的15 对包含不同浓度的5种抗真菌药物，用于测定最小抑 菌浓度（MIC）。
API鉴定结果判读
培养48或72小时后(如果测定，尤其葡萄糖结果在48 小时后仍不明确), 每个杯内生长状况与阴性对照的0 杯比较。比对照更混浊者为阳性反应。记录于报告 单。
API鉴定条补充实验
运用RAT 培养基[大米琼脂吐温]确认菌丝（菌丝体） 或假菌丝（假菌丝体）的存在。
芽管形成实验 将假丝酵母菌接种于0.2—0.5毫升 的人或者动物血清中，37度孵育1.5—4个小时，镜 检观察有无芽管形成。
常见致病性真菌的实验诊断
常用真菌染色方法
革兰染色（念珠菌） 乳酸酚棉蓝染色（丝状真菌） 墨汁负染（隐球菌）
1 菌落形态和镜下形态的观察(酵母样真菌)
菌落呈现白色，奶酪样的类酵母菌落； 菌体呈圆形或者卵圆形，革兰染色阳性 增殖过程中容易形成假菌丝
2 菌落形态和镜下形态的观察(隐球菌)
wk.baidu.com
真菌鉴定常用方法
念珠菌显色培养
白色念珠菌—绿色 热带念珠菌—蓝色 光滑念珠菌—粉红色
API鉴定试剂条
原理：API 32 C AUX 试验条是由32个含干燥碳水化 合物的试验杯组成。只有能以该底物为碳源的酵母菌 才能生长。
测定结果是以与对照生长物的比较而得；鉴定结果 参照分析图谱索引或鉴定软件。
白假丝酵母菌（+） ）
热带假丝酵母菌（-
ATBFUNGS3药敏结果判断
通过肉眼判读或是使用ATB仪器或mini API ®（参
考使用者手册）自动判读来观察生长情况。
ATBFUNGS3药敏结果判断
浊度下降80%为微弱生长；浊度下降50%左右为明显减少
酵母菌ETEST方法
培养基 RPMI+2%葡萄糖+MOPS+1.5% Bacto琼脂，pH 7.2~7.4
小培养
主要用于菌种鉴定，大致分为三种：玻片法，方块法 和钢圈法。
玻片法：在消毒的载玻片上，均匀地浇上熔化的培 养基，不宜太厚。接种后盖上消毒的盖玻片，30度 培养后，将盖玻片取下，加入棉酚兰以后直接在显微 镜下观察。
17
白念珠菌Etest判读
2019/9/28 18
100%抑制
80%抑制
ATBFUNGS3药敏结果判断
对于氟康唑（FCA）, 伊曲康唑（ITR）和伏立康唑（ VRC），最小抑菌浓度（MIC）对应的测试杯得分可 以是“2”，“1”，或是“0”分。
对于两性霉素B（AMB），最小抑菌浓度（MIC）应 该判断为生长完全受抑制的测试杯的浓度（即得分为 “0”的测试杯）
ATB FUNGUS 3 操作
制备浊度相当于2 McFarland的悬浮液。 转移20ul 该菌悬液到一ATB F2培养基的安瓿中。 每个杯状凹孔中加入135ul 的 ATB F2培养基 将一个盖子放在试条上。 把试条放入一个气密容器或是一个装有吸潮纸的密闭
罐里，在有氧条件下35°C (+ 2°C)的环境中培养。
接种量 孵育条件 判读方法
念珠菌：0.5 McFarland 新生隐球菌：1 McFarland
念珠菌：35℃，24~48h（光滑念珠菌和热带念珠菌需在 48h再次确认） 新生隐球菌： 35℃，48~72
两性霉素B：100%抑制 氟胞嘧啶：90%抑制 唑类：80%抑制 卡泊芬净：80%抑制
2019/9/28
试验条的准备
记录菌株资料于盘的延长边沿部分(不记在盖上，以 免错放)。
从包装中取出试验条，置试验条于培养盒中
接种物的制备
制成浊度2 McFarland.的均一菌悬液。菌悬液制备 好后应立即使用
打开一API C 培养基安瓿，转入250 l上述制备的菌 悬液。用吸管轻轻混均，注意避免产生气泡。
将API C培养基中悬浮液吸取135 l注入杯内。 盒子盖上盖子，在29°C ± 2°C 孵育 24-48 小时
ATB FUNGUS 3真菌药敏检测试剂条
ATB FUNGUS 3试条包括16对杯状凹孔。第一对不 含任何抗真菌药物，用作阳性生长对照。另外的15 对包含不同浓度的5种抗真菌药物，用于测定最小抑 菌浓度（MIC）。
API鉴定结果判读
培养48或72小时后(如果测定，尤其葡萄糖结果在48 小时后仍不明确), 每个杯内生长状况与阴性对照的0 杯比较。比对照更混浊者为阳性反应。记录于报告 单。
API鉴定条补充实验
运用RAT 培养基[大米琼脂吐温]确认菌丝（菌丝体） 或假菌丝（假菌丝体）的存在。
芽管形成实验 将假丝酵母菌接种于0.2—0.5毫升 的人或者动物血清中，37度孵育1.5—4个小时，镜 检观察有无芽管形成。
常见致病性真菌的实验诊断
常用真菌染色方法
革兰染色（念珠菌） 乳酸酚棉蓝染色（丝状真菌） 墨汁负染（隐球菌）
1 菌落形态和镜下形态的观察(酵母样真菌)
菌落呈现白色，奶酪样的类酵母菌落； 菌体呈圆形或者卵圆形，革兰染色阳性 增殖过程中容易形成假菌丝
2 菌落形态和镜下形态的观察(隐球菌)
wk.baidu.com
真菌鉴定常用方法