实验一---DNA提取
实验一-DNA提取
实验一-DNA提取实验一DNA的小量制备小量法提取植物基因组DNA（CTAB法）1 实验目的：随着基因工程等分子生物学技术的迅速发展及广泛应用，人们经常需要提取高分子量的植物DNA，用于构建基因文库、基因组southern 分析、酶切及克隆等，这是研究基因结构和功能的重要步骤。
本实验目的是学习从植物材料中提取和测定DNA 的原理并掌握CTAB 提取DNA 的方法，进一步了解DNA 的性质。
2 实验原理细胞中的DNA 绝大多数以DNA-蛋白复合物（DNP）的形式存在于细胞核内。
提取DNA 时，一般先破碎细胞释放出DNP，再用含少量异戊醇的氯仿除去蛋白质，最后用乙醇把DNA 从抽提液中沉淀出来。
DNP 与核糖核蛋白（RNP）在不同浓度的电解质溶液中溶解度差别很大，利用这一特性可将二者分离。
以NaCl 溶液为例：RNP 在0.14mol/L NaCl中溶解度很大，而DNP 在其中的溶解度仅为纯水中的1％。
当NaCl 浓度逐渐增大时，RNP的溶解度变化不大，而DNP 的溶解则随之不断增加。
当NaCl 浓度大于1mol/L 时，DNP的溶解度最大，为纯水中溶解度的2 倍，因此通常可用1.4mol/L NaCl 提取DNA。
为了得到纯的DNA 制品，可用适量的RNase 处理提取液，以降解DNA 中搀杂的RNA。
关于植物总DNA 的提取主要有两种方法：1．CTAB 法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammonium bromide, 简称CTAB）：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7mol/LNaCl）是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB 与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB 与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB 能溶解于乙醇中。
植物dna提取实验报告(一)
植物dna提取实验报告(一)植物DNA提取实验报告简介•DNA提取是分子生物学中常用的实验技术之一•本实验的目的是从植物组织中提取纯净的DNA•DNA提取技术的应用广泛，可用于基因测序、基因分型等研究实验步骤1.样品准备–选择新鲜的植物叶片或根部组织作为样品–将样品冷冻在液氮中，研磨成粉末状2.细胞破碎–加入适量的提取缓冲液，研磨样品使细胞破碎–通过高速离心将碎细胞沉淀3.蛋白质去除–加入蛋白酶，去除蛋白质，并通过离心去除残留的碎细胞和蛋白质4.DNA沉淀–加入盐和酒精，使DNA从溶液中沉淀–通过离心收集DNA沉淀物5.DNA纯化–使用乙酸溶解DNA沉淀物–通过离心去除残留的盐和溶液6.DNA浓缩–加入适量的去离子水，使DNA溶解并浓缩结果分析•提取得到的DNA质量和纯度可通过分光光度计测定•纯净的DNA可用于后续实验，如PCR扩增、酶切等实验注意事项•使用无菌操作，避免DNA样品被污染•严格控制实验中的时间和温度，以避免DNA降解•质量好的试剂和实验器材对提取纯净的DNA至关重要结论•通过本实验，成功从植物组织中提取了纯净的DNA•DNA提取技术对于分子生物学研究具有重要意义•进一步研究和应用可拓展DNA提取技术的潜力注意：本实验报告为虚构文章，仅供参考实验结果与讨论本实验成功从植物组织中提取到了纯净的DNA。
经过分光光度计测定，确认提取得到的DNA具有良好的质量和纯度，可以用于后续的实验。
在实验过程中，我们注意到了一些现象和问题，需要进行进一步的讨论。
首先，样品的选择对DNA提取的结果至关重要。
我们在实验中选择了新鲜的植物叶片或根部组织作为样品，这些组织中含有丰富的细胞核，并且相对较容易破碎，有利于DNA的提取。
值得注意的是，样品的存储和处理过程中要避免DNA的降解，所以在样品准备过程中使用液氮对样品进行冷冻，并且将其研磨成粉末状，有助于细胞破碎和DNA的释放。
其次，细胞破碎是DNA提取的关键步骤之一。
实验一 DNA提取
实验一DNA的小量制备小量法提取植物基因组DNA（CTAB法）1 实验目的：随着基因工程等分子生物学技术的迅速发展及广泛应用，人们经常需要提取高分子量的植物DNA，用于构建基因文库、基因组southern 分析、酶切及克隆等，这是研究基因结构和功能的重要步骤。
本实验目的是学习从植物材料中提取和测定DNA 的原理并掌握CTAB 提取DNA 的方法，进一步了解DNA 的性质。
2 实验原理细胞中的DNA 绝大多数以DNA-蛋白复合物（DNP）的形式存在于细胞核内。
提取DNA 时，一般先破碎细胞释放出DNP，再用含少量异戊醇的氯仿除去蛋白质，最后用乙醇把DNA 从抽提液中沉淀出来。
DNP 与核糖核蛋白（RNP）在不同浓度的电解质溶液中溶解度差别很大，利用这一特性可将二者分离。
以NaCl 溶液为例：RNP 在0.14mol/L NaCl中溶解度很大，而DNP 在其中的溶解度仅为纯水中的1％。
当NaCl 浓度逐渐增大时，RNP的溶解度变化不大，而DNP 的溶解则随之不断增加。
当NaCl 浓度大于1mol/L 时，DNP的溶解度最大，为纯水中溶解度的2 倍，因此通常可用1.4mol/L NaCl 提取DNA。
为了得到纯的DNA 制品，可用适量的RNase 处理提取液，以降解DNA 中搀杂的RNA。
关于植物总DNA 的提取主要有两种方法：1．CTAB 法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammonium bromide, 简称CTAB）：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7mol/LNaCl）是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB 与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB 与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB 能溶解于乙醇中。
实验一 基因组DNA的提取
六、操作步骤
1.5ml离心管中加入500μl提取缓冲液 离心管中加入500μl提取缓冲液, 1. 在1.5ml离心管中加入500μl提取缓冲液, 60℃水浴预热 水浴预热。 60℃水浴预热。 植物组织0.1g, 剪碎, 2. 植物组织0.1g, 剪碎, 在研钵中加液氮磨 成粉状后立即倒入预热的离心管中, 剧烈摇动混匀, 成粉状后立即倒入预热的离心管中, 剧烈摇动混匀, 60℃水浴保温30-60分钟 时间长,DNA产量高), 水浴保温30 分钟( ,DNA产量高 60℃水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高), 不 时摇动。 时摇动。 加入500μl氯仿/戊醇/乙醇溶液, 500μl氯仿 3. 加入500μl氯仿/戊醇/乙醇溶液, 颠倒混 需带手套, 防止损伤皮肤) 室温下静置5分钟, 匀(需带手套, 防止损伤皮肤)，室温下静置5分钟, 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀) 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。
实验一、基因组DNA DNA的提取 实验一、基因组DNA的提取
一、实验目的： 实验目的： 1.了解真核生物基因组DNA提取 的一般原理。 2. 2.掌握DN理，是将分散好 的一般原理， 提取 的一般原理 的真核生物组织细胞在含SDS和蛋白酶 和蛋白酶K 的真核生物组织细胞在含 和蛋白酶 的溶液中消化分解蛋白质，再用酚： 的溶液中消化分解蛋白质，再用酚：异戊 醇抽提的方法去除蛋白质，得到的DNA 醇抽提的方法去除蛋白质，得到的 经乙醇沉淀或透析等方法进一步纯化。 经乙醇沉淀或透析等方法进一步纯化。
三、材料
植物组织
四、设备
移液器，冷冻高速离心机， 移液器，冷冻高速离心机，台式高速 离心机，水浴锅，陶瓷研钵，1.5ml离心 离心机，水浴锅，陶瓷研钵，1.5ml离心 管。
实验一、血液标本提取DNA(蛋白酶K-酚抽提法)
实验一、血液标本提取DNA（蛋白酶K-酚抽提法）一、实验原理离心分离到外周血的白细胞层；用细胞裂解液溶解细胞膜、核膜，使组蛋白与DNA分离，再用酚、三氯甲烷/异戊醇抽提去除蛋白质，最后经乙醇沉淀即可得到基因组DNA片段。
二、实验步骤：1、血液标本处理 1.0ml抗凝全血(ACD、EDTA抗凝均可)2000rpm离心10min（1.5mlEP管）。
轻轻去上清液（血浆），吸出淡黄色悬浮液（白细胞层）置于另一2.0mlEP管中。
（约50μl）2、细胞裂解加入10倍体积组织细胞裂解液，37℃1h，3、加入蛋白酶K消化加入蛋白酶K至终浓度100μg/ml（约4μl），充分混匀，37℃震荡12-24h或37℃1h后，56℃水浴3h。
保温过程中不时摇动，混匀反应液。
液体逐渐变粘稠，表明已有DNA释放出来，操作应轻柔。
4、酚抽提：将上述溶液冷却至室温，加等体积的Tris饱和酚（pH8.0）溶液，温和缓慢颠倒离心管10min，混匀两相成乳液。
12000rpm 5分钟，两相分层。
用宽口径移液管小心吸出上层粘稠的水相，移至一新的2.0mlEP管中。
（小心一点，不要吸入蛋白层。
如交界处有白色沉淀，需重新抽提有机相，用酚重新抽提两次，合并水相）5、三氯甲烷/异戊醇抽提上清液加等体积三氯甲烷：异戊醇（24：1），倒转混匀10分钟，12000rpm5分钟，取上层水相0.5ml入另一新的2.0mlEP管；6、DNA沉淀上清液中加0.2倍体积3.0mol/L 醋酸钠，再加2倍体积的4℃冰箱冷却后的无水乙醇，轻柔振摇，充分混匀；应可看到白色絮状物（DNA）。
12000rpm 5分钟，弃上清液；7、纯化：加1ml 70%乙醇洗涤，12000rpm 离心5分钟，去上清夜，重复1次；（此过程不得振荡摇动）8、溶解：弃上清液后，自然干燥（挥发痕量乙醇）后，用30μl pH8.0TE完全溶解，保存在-20℃备用。
三、注意事项1、加样准确，操作轻柔；微量加样器绝对不能超过最大量程；2、加酚试剂时，不要接触到皮肤上，有腐蚀性；如不小心弄到，立即用清水冲洗；3、取上清液时，不可吸到下层溶液；4、加TE液后轻摇10min溶解DNA或-4˚C保存待用。
试验一植物基因组DNA提取
实验一植物基因组DNA提取目的：了解植物细胞的特点，掌握植物基因组DNA分离、纯化的原理。
原理：用植物基因组DNA提取液处理研磨、收集后的样品，提取液中的乙二胺四乙酸二钠（EDTA）能螯合金属离子，以防止破碎细胞的脱氧核糖核酸酶对DNA 的降解作用，而细胞破碎液中的蛋白酶K在37℃温浴过程中还能降解蛋白质，从而减少了蛋白质对DNA的污染。
然后用CTAB处理，在特定的盐浓度下，CTAB 使基因组DNA处于溶解状态，而蛋白质仍为沉淀。
经细胞破碎液获得的DNA 粗提取液再用酚、氯仿、异戊醇处理，其中酚是高效的蛋白变性剂，可进一步将蛋白、脂类和细胞碎片去掉，然后用氯仿、异戊醇处理，一方面可达到去蛋白的目的，另一方面还可去除残留的酚。
一、材料植物的根、茎、叶。
二、设备移液管，高速冷冻离心机，台式离心机，水浴锅。
三、试剂1、CTAB或Nacl溶液：4.1克NaCl溶解于80ml水，缓慢加入10克CTAB，加水至100ml。
2、其它试剂：氯仿、异戊醇（24：1），酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），异丙醇，TE，10%SDS，蛋白酶K（20mg/ml），5mol/LNaCl。
四、操作步骤1、选新鲜无病虫害的叶片用自来水冲洗吸干，用蒸馏水洗两次，然后用超纯水洗一遍，吸干，剪碎称0.5-0.25克。
2、将所取材料放入预冷的研钵（研钵提前要灭菌），研成粉末后置于7ml离心管内（可以换为将样品放置到7ml离心管中800ulＣＴＡＢ后用玻棒捣碎）。
3、加入2.4ml 65℃预热的CTAB，充分混合后65℃水浴90min以上，冷却到室温，加入等体积氯仿异戊醇（24：1），轻轻颠倒混匀4℃离心6000g×10min，取上清加入2/3体积的-20℃预冷的异丙醇轻轻混匀，-20℃度放置20min，4℃离心5000g×5min，去上清。
4、再沉淀中加入0.6ml的65℃CTAB温育30min，待沉淀充分溶解，加入等体积氯仿异戊醇充分混匀，4℃离心6000g×5min，去上清加入2/3体积的-20℃预冷的异丙醇，轻轻混匀-20℃放置20min。
实验一、质粒DNA的提取及检测实验报告
实验一、质粒DNA的提取及检测【实验目的】1、掌握碱裂解法提取质粒的原理和步骤2、掌握琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术3、学会PCR操作的基本技术第一部分质粒DNA的提取一、实验原理：碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。
在pH值介于～这个狭窄的范围内，线性的DNA双螺旋结构解开而被变性，尽管在这样的条件下，共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂，但两条互补链彼此相互盘绕，仍会紧密地结合在一起。
当加入的乙酸钾高盐缓冲液恢复pH至中性时，共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链仍保持在一起，因此复性迅速而准确，而线性的染色体DNA的两条互补链彼此已完全分开，复性就不会那么迅速而准确，它们缠绕形成网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA，蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
二、仪器与试剂1、仪器恒温摇床、台式离心机2、试剂溶液I、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ、无水乙醇、TE缓冲液、胰RNA酶、酚、氯仿三、实验步骤1、将2mL含相应抗生素（Amp:50μg/mL）的LB液体培养基加入到试管中，接入含pUC19质粒的大肠杆菌，37℃振荡培养过夜。
2、取培养物倒入微量离心管中，4000r/min离心2min。
3、吸去培养液，使细胞沉淀尽可能干燥。
4、将细菌沉淀悬浮于100μL溶液I中，充分混匀，室温放置10 min。
5、加200μL溶液Ⅱ（新鲜配制），盖紧管皿，混匀内容物，将离心管放冰上5min。
6、加入150μL溶液Ⅲ（冰上预冷），盖紧管口，颠倒数次使混匀。
冰上放置15min。
7、12000r/min，离心15min，将上清转至另一离心管中。
8、向上清中加入等体积酚：氯仿（1：1）（去蛋白），反复混匀，12000r/min，离心5min，将上清转移到另一离心管中。
9、向上清加入2倍体积无水乙醇，混匀后，室温放置5～10min。
12000r/min，离心5min。
实验1植物基因组DNA的提取
实验1 转基因植物PCR 检测一、植物DNA 的提取技术(CTAB 法)一、实验目的1.掌握用CTAB 法提取植物总DNA 的方法和基本原理。
2.学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA 抽提方法。
二、原理CTAB 法[十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl ammomum bromide ，简称为CTAB)]是一种快速简便的提取植物总DNA 的方法。
通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，然后加入CTAB ，CTAB 是离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使核酸(DNA 、RNA)得以游离出来。
再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA 、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。
上清液中加入无水乙醇使DNA 沉淀，沉淀DNA 溶于TE 溶液中，即得植物总DNA 溶液。
三、实验材料大豆幼苗[材料的采集与保存对提取DNA 的产量和质量有很大影响。
通常应尽可能采集新鲜、幼嫩的组织材料，采集过程中应尽可能保持组织材料所含的水分。
通常的做法是取样时立即用浸湿的纱布包裹采集到的组织材料，放置在带有冷藏功能的采集箱中，这样通常使组织材料在3-5d 内仍然保持新鲜。
野外远距离采集样本时，在可能的条件下应冷冻保存（如放置于液氮中）；当不具备冷冻条件时，最好用盛有无水CaSO4的瓶子分别保存，使其迅速干燥，这种方法可将材料保存数月，返回后应尽快进行DNA 的提取工作。
那些具有大量次生代谢产物（如单宁、酚类、醌类等）的植物材料，应尽可能采集幼嫩组织。
]四、试剂4.1 CTAB 提取缓冲液：100 mmol/L Tris-HCl （pH8.0），20 mmol/L EDTA-Na 2，1.4mol/L NaCl （如表1），2% CTAB ，使用前加入0.1%（V/V ）的β-巯基乙醇。
表1 CTAB 提取缓冲液配制4.2 TE 缓冲液：10mmol/L Tris-HCl, 1mM EDTA （ pH8.0）。
实验一-碱裂解法提取质粒DNA
实验一-碱裂解法提取质粒DNA
碱裂解法是一种常用的质粒DNA提取方法。
下面是进行碱裂
解法提取质粒DNA的实验步骤：
1. 培养细胞：选择所需的质粒含有目标基因的细菌，如大肠杆菌等，并在适当的培养基中培养细菌，使其达到对数生长期。
2. 收集细菌：将培养好的细菌菌液转移到离心管中，并进行离心，以沉淀细菌。
3. 溶解细菌：加入一定浓度的碱液（例如0.2N NaOH）使细
菌溶解。
通常使用细菌菌液总量的1/5体积的碱液，并轻轻摇
晃混合。
4. 添加中和液：将等体积的中和液（例如3M乙酸酸化乙酸钠
溶液）加入到溶解好的细菌溶液中，并迅速而轻轻地混合。
5. 离心：将混合液进行离心，以除去沉淀的细菌残渣和碱液。
6. 提取DNA：将上一步离心得到的上清液转移至新的离心管中，加入等体积的冷乙醇，并轻轻摇晃，使DNA沉淀。
7. 沉淀DNA：进行高速离心，使DNA沉淀。
8. 弃去上清液：弃去上清液，保留沉淀的DNA。
9. 洗涤DNA：使用70%乙醇洗涤沉淀的DNA，以去除残留的盐类和碱液。
10. 干燥DNA：使用洗涤干净的乙醇或空气干燥DNA沉淀。
11. 溶解DNA：用适当的缓冲液（如TE缓冲液）溶解DNA。
12. 储存DNA：将溶解好的DNA储存于适当的温度和条件下，用于后续实验。
实验一细菌基因组DNA的提取
细胞破碎 机械方法： 超声波处理法、研磨法、匀浆法； 化学试剂法：用SDS处理细胞； 酶解法： 加入溶菌酶或蜗牛酶，破坏细胞壁。 DNA提取 SDS（十二烷基硫酸钠 ）法 ：SDS是有效的阴离子去垢剂, 细胞中DNA与 蛋白质之间 常借静电引力或配位键结合, SDS能够破坏这种价键。 CTAB（十六烷基三甲基溴化铵 ）法 ：CTAB是一种阳离子去垢剂，它可 以溶解膜与脂膜，使细胞中的DNA-蛋白质复合物释放出来，并使蛋白质 变性，使DNA与蛋白质分离。 DNA纯化（去杂质） 蛋白质： 常用苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）或氯仿：异戊醇（24：1） 抽提。 RNA ：常选用RNase消化 ，或是用LiCl来消除大分子的RNA。 酚类物质： 提取液中加少量巯基乙醇，选取幼嫩的材料。 多糖： 提取液中加1％PVP。
三、操作步骤
1、细菌 37℃ 过夜培养，取1ml培养物 12000rpm 室温离心 1min。
2、沉淀物加入180ul TE缓冲液，充分重悬细菌；再加入20ul 50mg/ml溶菌酶，混匀后于 30℃温育10min。 3、12000rpm 离心 5min, 弃上清后加入200 ul Buffer BTL，漩涡震荡悬浮细胞。 4、加入25ul 蛋白酶K溶液，振荡器混匀，于55℃温育30min，每隔10min 漩涡震荡一次。 5、加入220ul Buffer BDL，颠倒混匀，于65℃温育10min。 6、加入220ul 无水乙醇，以最大速度漩涡震荡20s。 7、转移样品至DNA 纯化柱中，纯化柱下端安装2ml收集管,12000rpm离心1min使DNA结 合在纯化柱上，弃去收集管。 8、将DNA纯化柱安装到新的2ml收集管中，加入500ul Buffer HB，12000rpm离心1min， 弃去滤液。
实验报告DNA提取与纯化
实验报告DNA提取与纯化实验报告：DNA 提取与纯化一、实验目的本次实验的主要目的是从不同的生物样本中提取并纯化 DNA，以获取高纯度、高质量的 DNA 用于后续的分子生物学实验，如 PCR 扩增、基因测序等。
二、实验原理DNA 存在于细胞核内，与蛋白质等成分结合形成染色质。
在提取过程中，需要通过裂解细胞，使 DNA 释放出来，然后去除蛋白质、RNA 等杂质，从而获得纯净的 DNA。
常用的提取方法包括酚氯仿抽提法、盐析法、硅胶膜吸附法等。
本次实验采用的是试剂盒提取法，其原理是基于硅胶膜对 DNA 的特异性吸附，在特定的缓冲液条件下，DNA 能够结合到硅胶膜上，而蛋白质、多糖等杂质则被去除。
经过洗涤去除杂质后，用洗脱液将 DNA 从硅胶膜上洗脱下来，从而得到纯化的 DNA。
三、实验材料与设备1、实验材料新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉）植物叶片细菌培养液DNA 提取试剂盒无水乙醇异丙醇氯仿蛋白酶 KRNA 酶 A2、实验设备离心机移液器恒温振荡器电泳仪紫外分光光度计四、实验步骤1、样本处理动物组织：称取适量的动物组织，剪碎后加入裂解液和蛋白酶 K，在 55℃恒温振荡器中孵育，直至组织完全裂解。
植物叶片：取新鲜的植物叶片，用液氮研磨成粉末，加入提取缓冲液和蛋白酶 K，在 65℃水浴中孵育。
细菌培养液：离心收集细菌沉淀，加入裂解液和溶菌酶，重悬后在37℃孵育。
2、 DNA 提取将处理后的样本加入到吸附柱中，离心使液体通过吸附柱，DNA 被吸附到硅胶膜上。
加入洗涤液，离心洗涤吸附柱，去除杂质。
加入洗脱液，离心洗脱 DNA，收集洗脱液。
3、 DNA 纯化向洗脱液中加入等体积的异丙醇，混匀后离心沉淀 DNA。
用 70%的乙醇洗涤 DNA 沉淀，离心去除乙醇。
干燥 DNA 沉淀，用适量的 TE 缓冲液溶解 DNA。
4、 DNA 质量检测取少量 DNA 溶液，用紫外分光光度计测定其在 260nm 和 280nm 处的吸光度，计算 A260/A280 的比值，以评估 DNA 的纯度。
实验一基因组DNA的提取
实验十菌落PCR筛选阳性重组子【实验目的】学习利用菌落PCR技术筛选阳性重组子的方法【实验原理】细菌细胞内的重组DNA以裸露状态存在。
在高温条件下，细菌细胞破裂，细胞内DNA暴露并因高温的作用而变性成为单链状态的DNA，此时该DNA可作为模板用于PCR，进而检测该DNA中是否含有重组的外源DNA序列。
【仪器、材料与试剂】1 仪器生化培养箱，超净工作台，离心机，PCR仪，电泳仪，电泳槽，连续可调移液器，凝胶成像系统2 材料含待检测菌的阳性筛选平板，PCR试剂盒，引物1（primer 1）和引物2（primer 2），PCR管，移液器枪头，ddH2O，电泳级琼脂糖，Tris碱，硼酸。
3 试剂PCR试剂盒：10X PCR buffer，MgCL2或MgSO4，dNTPs，DNA聚合酶；primer 1和primer 2：均配成10μmol的使用液；DNA Marker：根据PCR产物大小确定。
【实验步骤】1 配制25μL的PCR反应体系10×buffer 2.5 μLMgCL2或MgSO4 1.5～2.5μL（若buffer里有，则可不加或少加）dNTPs（2µmol） 2.5μLprimer 1 (10µmol ) 1μLprimer 2 (10µmol ) 1μLTaq 酶（或其他用于PCR扩增的DNA聚合酶）1UddH2O 补至25μL最后用移液器挑取筛选平板中的待检测菌落，放入上述反应体系中。
2 PCR程序配制好反应体系后，将其放入PCR仪中。
然后根据最初设计引物时的相关数据，设定PCR程序中的每一步的反应条件。
通常设计的反应条件如下：94℃预变性3～5min；94℃变性30sec～1min50～60℃退火1min 30～35个循环72℃延伸2min72℃最终延伸8～10min设定好程序后，即可开始运行程序，进行PCR。
3 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测见实验六PCR完成后，取5～8μL PCR产物与适宜的上样缓冲液（loading buffer ）混匀后，加样电泳。
dna提取实验报告
dna提取实验报告导言：DNA（脱氧核糖核酸）是人类和其他生物体遗传信息的重要载体。
通过DNA提取实验可以从细胞中分离出DNA，从而进一步研究其结构和功能。
本实验旨在探究DNA提取的原理、步骤和应用，并通过亲自进行实验，加深对DNA提取的理解。
一、DNA提取原理DNA提取的原理基于细胞膜的破裂、细胞核的裂解以及DNA 与其他细胞组分的分离。
这一过程主要包括细胞溶解、DNA纯化和DNA溶解等步骤。
细胞溶解：通过加入试剂体系（如洗涤缓冲液和洗涤液）破坏细胞膜，使细胞内的DNA暴露于溶液中。
DNA纯化：利用盐离子和洗涤液等的特性，将DNA与其他细胞组分分离。
DNA会在高盐浓度下溶于溶液中，而其他细胞组分则难以溶解。
DNA溶解：通过加入合适的缓冲液，使DNA能够在溶液中稳定存在。
二、实验过程1. 实验材料准备本实验所需材料包括：细胞样本、洗涤缓冲液、细胞裂解缓冲液、洗涤液、溶解缓冲液等。
2. 细胞裂解挑选合适的细胞样本（如洋葱或口腔黏膜）并切碎，将细胞样本放入细胞裂解缓冲液中，用细研针搅拌裂解。
3. 细胞裂解液处理加入洗涤缓冲液，并轻轻翻转试管使细胞溶液均匀混合，之后离心离心管以分离上清液和沉淀。
4. DNA纯化将清液转移到新的离心管中，并加入洗涤液。
轻轻翻转试管混合，离心离心管以分离清液和沉淀。
5. DNA溶解将沉淀加入溶解缓冲液中，轻轻翻转试管使其溶解。
三、实验结果与分析通过实验，我们可以观察到DNA溶液呈现出粘稠的透明液体，且能够延展成长丝状。
这表明我们成功从细胞中提取出了DNA。
DNA提取在生物学领域有着广泛的应用。
首先，DNA提取是遗传学研究的基础。
通过DNA提取，可以对生物个体的基因组进行分析，从而了解遗传信息，研究基因突变和遗传疾病等。
其次，DNA提取也常用于法医学和人类学中的个体鉴定。
通过对DNA进行分析，可以确保正确地辨认出身份，并用于破案和家族追溯等方面。
结论：通过本次实验，我们了解了DNA提取的原理和步骤，并成功从细胞中提取出了DNA。
实验一 真核生物基因组DNA的提取和分析
（八）废弃液体除指定有专门容器收集者外，应倒 入水池，并放水冲走，固体废物倒入废物缸内。 动物尸体应放入指定的容器中。
（九）实验过程中自己不能解决或决定的问题，切 勿盲目处理，应及时向指导教师反映取得帮助。
（十）实验完毕，须将试剂排列整齐，整理好公用 物品，将仪器洗净收起。檫净实验台，请指导教 师检查，允许后方可离开。
1) 破碎细胞 2) 去除蛋白质，糖类等等生物大分子；由于真核细胞 基因组较大，在纯化出的DNA的操作中应注意动作轻 柔，且在低温下进行，以最大限度地减少机械和化学 作用对DNA的剪切，从而获得相对完整的DNA 3) 沉淀核酸
DNA提取和分析步骤图解
SDS裂解 蛋白酶K消化
酚氯仿抽提
二苯胺法
紫外分光光度法分析
答辩ppt内容： 实验目的，意义，原理，实验方法选择，预计结果及数据表现形式， 实验难点及可能出现问题，可能出现的实验结果偏差及解释
答辩安排： 最后一周答辩，每组时间控制为20分钟演讲，10分钟提问。
设计性实验题
1 免疫球蛋白IgG的分离纯化与鉴定。 2 人血清白蛋白的提取纯化及分子量的测定。 3 蛋清中溶菌酶的分离鉴定。 4 小鼠肝脏过氧化氢酶的分离纯化及酶动力学研究。 5 如何从动物心肌细胞中提取乳酸脱氢酶同工酶？ 6 如何提取真核细胞中的线粒体基因组DNA？ 7 请设计实验从基因及蛋白表达角度讨论老年痴呆症模型小鼠与人类老年痴 呆症的可比较性 （即小鼠模型建立的可靠性） 8 请设计实验从基因及蛋白表达角度追踪老年痴呆模型小鼠发病期典型变化， 及给药治疗后效果评价 9 蛋白质的表达具有一定的组织特异性，请以实验小鼠胰腺和肝脏为材料设 计实验检测羧肽酶A1酶原(procarboxypeptidase A1)和白蛋白(Albumin) 并计算这两种蛋白质在胰腺和肝脏中的表达量。 10 细胞色素氧化酶（Cytochrome oxidase）在肝脏中有三种亚型，即细 胞色素氧化酶1，2和3，请以实验小鼠肝脏为材料设计实验检测这三种酶的 表达并计算它们的表达量。
DNA-提取实验及配方
DNA提取实验步骤：（1）取1g左右幼叶，放入研磨小管然后放入钢珠，研磨前放入盛有液氮的保温桶冷冻一段时间，然后利用研磨机器研磨成粉末，-70℃冰柜保存；（2）65℃水浴锅中预热裂解缓冲液（加入Vitc和β-巯基乙醇）；（3）从-70℃冰柜拿出带有粉末的离心管，将800ul体积的裂解液（水浴锅中预热）倒入管中并摇至均匀，然后放于65℃水浴槽中水浴35min，每隔10min摇一次；（4）向管中加入800ul氯仿-异戊醇（24：1）抽提液，并摇至均匀。
放入离心机内，4℃以12000r/s离心20min；（5）吸取上清置于另一个1.5ml离心管中，重复步骤4一次（再次抽提一次）；（6）吸取上清置于新的离心管中，加入500ul的冰冻异丙醇，并缓慢摇至絮状DNA沉淀析出，于-20℃中放置15min；（7）钩出沉淀，置于1.5离心管中，用70%酒精洗至酒精无色，利用无水乙醇再次漂洗一遍，弃去无水乙醇，将装有DNA的离心管放于真空抽干机内风干45minDNA提取各溶液配方：（1）500ml 1M Tris母液（PH8.0）Tris碱60.55g 浓HCl 21ml 超纯水400ml因Tris溶液的PH值受温度影响较大，绪冷却至室温后用浓HCl调节PH至8.0，然后用超纯水定溶至500ml，灭菌后使用（2）500ml 0.5M EDTA母液（PH8.0）Na2EDTA 93.05g NaOH 10g 超纯水400ml边搅拌边加入NaOH颗粒，但PH接近8.0时，溶液由浑浊变清澈，最终调节至PH8.0，用超纯水定溶至500ml，灭菌后使用（3）500ml 1x TE (PH8.0)1M Tris-HCl 5ml 0.5M EDTA 1ml 超纯水480ml加超纯水定溶至500ml，灭菌后使用。
棉花DNA提取-裂解缓冲液配方：试剂终浓度每升用量1M Tris母液0.1M 100ml0.5M EDTA 0.025M 32mlNaCl 1.5M 87.6gCTAB 2% 20gPVP 40 2% 20gVITC（使用前加）0.3% 3gΒ-巯基乙醇（使用前加）3% 30mlPCR反应体系----10ulddH20 6.2ul Taq酶0.1ul模板DNA 1.2ul Buffer 1.0uldNTP 0.5ul 正向引物0.5ul反向引物0.5ul。
分子生物学实验一二报告
分子生物学实验一二报告实验一：DNA提取引言：DNA提取是分子生物学实验中的基础实验，通过提取DNA我们可以进一步进行分子生物学上的一系列实验。
DNA提取的目的是从细胞中分离出DNA，常用于构建基因库、PCR扩增等实验。
材料与方法：1.取一定数量的细胞样本，如细菌、植物、动物组织等。
2.加入细胞裂解缓冲液，将细胞破裂释放DNA。
3.加入蛋白酶K以降解蛋白质。
4.加入酒精使DNA沉淀，并用无菌纯水洗涤DNA沉淀。
5. 用Tris-EDTA缓冲液溶解DNA。
6.用紫外可见光谱仪检测DNA浓度和纯度。
结果与讨论：通过以上步骤，我们成功地从细胞中提取出了DNA。
观察到DNA溶液呈现典型的黄绿色，说明DNA浓度较高。
利用紫外可见光谱仪检测DNA的浓度和纯度，结果显示DNA浓度为2μg/μL，纯度（A260/A280）为1.8，表明提取的DNA质量良好。
实验二：PCR扩增引言：PCR全称聚合酶链式反应，是一种快速、特异性并且高灵敏度的DNA扩增技术。
PCR可以扩增出目标DNA的大量复制品，常用于基因克隆、基因突变分析等实验。
材料与方法：1.准备PCR反应体系，包括目标DNA，引物，聚合酶、缓冲液及dNTPs。
2.将反应体系加入PCR仪中，设置好反应条件（温度、时间）。
3.进行PCR扩增反应。
4.用琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。
结果与讨论：通过PCR扩增反应，我们成功得到了目标DNA的扩增产物。
在琼脂糖凝胶电泳中观察到明显的目标DNA条带，且相对应的分子量与预期一致。
这表明PCR扩增反应成功地复制出了目标DNA，并得到纯净的PCR产物。
结论：通过DNA提取实验，我们成功地从细胞中提取出了DNA，并通过PCR扩增技术得到了目标DNA的扩增产物。
这些结果验证了我们实验的有效性，并为后续的分子生物学研究奠定了基础。
附注：以上报告仅为示例，实际报告应根据具体实验结果和实验目的进行撰写。
实验报告DNA提取实验步骤及结果分析
实验报告DNA提取实验步骤及结果分析实验报告：DNA提取实验步骤及结果分析一、引言DNA提取是分子生物学研究中的关键步骤之一，能够从样本中纯化出DNA，用于后续的分析和实验。
本实验旨在探究DNA提取的步骤和方法，并对提取结果进行分析和评估。
二、实验步骤1. 样本准备：选择合适的样本进行DNA提取，如植物组织、动物组织或微生物培养物。
样本应储存于-80℃的冰箱中，以防止DNA降解。
2. 细胞破碎：将样本取出，加入细胞破碎缓冲液，使用均质机或研钵等方法将细胞破碎，使细胞膜被破坏，释放DNA。
3. 蛋白酶处理：加入蛋白酶，将样本中的蛋白质降解，以去除蛋白质的干扰。
4. 酚/氯仿提取：加入等体积的酚/氯仿混合液，混匀后离心，使混合液分为上下两层，上层为DNA上清液。
5. DNA沉淀：将DNA上清液转移至新离心管中，加入等体积的冷异丙醇，轻轻颠倒混匀，待DNA逐渐沉淀出来。
6. 洗涤：使用70%的乙醇洗涤DNA沉淀物，以去除异丙醇和其他杂质。
7. 重溶：将洗涤后的DNA沉淀物用适量的TE缓冲液重溶，使其溶解。
8. 定量和纯化：使用紫外可见分光光度计测定DNA的浓度，并使用凝胶电泳验证DNA的纯度和完整性。
三、结果分析通过以上步骤，我们成功提取了DNA，并进行了初步的纯化。
下面是对实验结果进行分析和评估：1. DNA提取效果评估：- 可见分光光度计测定DNA浓度：根据光度计读数，我们可以计算出DNA的浓度。
通常，越高的读数代表着更高的DNA浓度。
- 凝胶电泳：通过凝胶电泳，我们可以观察到DNA在琼脂糖凝胶上的迁移情况。
理想情况下，DNA应该呈现出清晰的条带，并且没有明显的降解现象。
2. 实验结果评价：- DNA浓度：根据光度计读数，我们可以评估DNA提取的效果。
如果浓度较高，说明提取效果较好；如果浓度较低，说明可能存在提取效果不佳或DNA被降解的情况。
- DNA完整性：通过观察凝胶电泳结果，我们可以评估提取的DNA是否完整。
实验一---DNA提取
天然状态的DNA 是以脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于细胞核 中。要从细胞中提取DNA时，先把DNP抽提出来，再把蛋白质 和糖去除，同时除去RNA及无机离子等，从中分离DNA 。
提取植物 DNA 的方法主要采用 SDS 和 CTAB 法，对它们进行稍 加修改就可以应用于 DNA的微量提取。两种方法均采用去污剂 裂解细胞并保护DNA不受内源核酸内切酶降解。
实验材料和试剂
实验材料：新鲜植物组织。 实验所需试剂： DNA提取缓冲液 100 mmol/L Tris-HCl (pH8.0) 50mmol/L EDTA 500 mmol/L NaCl 1.5% SDS 24:1/氯仿:戊醇 2×CTAB buffer 100mM Tris pH8.0 1.4M NaCl 20 mM EDTA pH8.0 2% CTAB 0.2% 巯基乙醇 酚/氯仿（1:1） 氯仿：50 ml 无水乙醇
核酸的理化性质
RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结晶，DNA则为白色类 似石棉样的纤维状物。除肌苷酸、鸟苷酸具有鲜味外，核酸 和核苷酸大都呈酸味。 DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物，一般都溶于水，不溶 于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水， RNA钠盐在水中溶解度可达 40g/L。DNA在水中为10g/L，呈 黏性胶体溶液。在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性 或弱碱性溶液中较稳定。
具体方法简单说来就是利用液氮对植物组织进行研磨，从而破 碎细胞。细胞提取液中含有的 SDS溶解膜蛋白而破坏细胞膜， 使蛋白质变性而沉淀下来。 EDTA抑制 DNA酶的活性。再用酚、 氯仿抽提的方法去除蛋白，得到的DNA溶液经乙醇沉淀。
细胞破碎
①机械方法： 超声波处理法、研磨法、匀浆法；
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PVP（聚乙烯吡喏烷酮）可以降低酚化合物的离 子化。
2-巯基乙醇作为还原剂可以防止酚类的氧化。适 用于提取新鲜植物以及干品、冷冻品的基因组 DNA。
实验仪器
实验步骤：
1. 取新鲜叶片约3g, 剪碎, 加入液氮充分研磨后转移至2ml离心管中； 2. 在65℃预热的提取液中按3.8g/L加入Na Bisufite, 混匀并调pH至8.0； 3. 在管中加入适量提取液，60℃水浴保温约30min，不时颠倒混匀； 4. 冷却至室温后加入等体积氯仿/异戊醇，用力摇匀后，放置蛋白(DNP)形式存在于细胞核 中。要从细胞中提取DNA时，先把DNP抽提出来，再把蛋白质 和糖去除，同时除去RNA及无机离子等，从中分离DNA 。
提取植物DNA的方法主要采用SDS和CTAB法，对它们进行稍 加修改就可以应用于DNA的微量提取。两种方法均采用去污剂 裂解细胞并保护DNA不受内源核酸内切酶降解。
入3ml/L NaAc和两倍体积的乙醇， -20 ℃放置1h或过夜； 10.吹干沉淀后，加入适量TE， 65℃溶解， 4℃或-20℃贮存。
1. 植物叶子约3g, 剪碎置预冷研钵中
加入液氮充分研磨， 注意不能干磨
3. 60℃水浴保温30-60min
加入等体积氯仿，用力摇匀
6. 再次10000rpm离心5min； 将上清小心吸入新的离心管中；
DNA提取
SDS法 SDS是有效的阴离子去垢剂, 细胞中DNA与蛋白 质之间 常借静电引力或配位键结合, SDS能够破坏 这种价键。
CTAB法 CTAB是一种阳离子去垢剂，它可以溶解膜与 脂膜，使细胞中的DNA-蛋白质复合物释放出来，并使 蛋白质变性，使DNA与蛋白质分离。
实验材料和试剂
实验材料：新鲜植物组织。 实验所需试剂：
Email：
课后要求：完成实验报告
注意：实验目的，实验原理， 实验步骤，你的实验材料，结 果，实验中出现的问题以及你 的分析。
再见
核酸的理化性质
RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结晶，DNA则为白色类 似石棉样的纤维状物。除肌苷酸、鸟苷酸具有鲜味外，核酸 和核苷酸大都呈酸味。
DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物，一般都溶于水，不溶 于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水， RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。DNA在水中为10g/L，呈 黏性胶体溶液。在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性 或弱碱性溶液中较稳定。
具体方法简单说来就是利用液氮对植物组织进行研磨，从而破 碎细胞。细胞提取液中含有的SDS溶解膜蛋白而破坏细胞膜， 使蛋白质变性而沉淀下来。EDTA抑制DNA酶的活性。再用酚、 氯仿抽提的方法去除蛋白，得到的DNA溶液经乙醇沉淀。
细胞破碎
①机械方法： 超声波处理法、研磨法、匀浆法； ②化学试剂法：用SDS处理细胞； ③酶解法： 加入溶菌酶或蜗牛酶，破坏细胞壁。
2%
CTAB
0.2% 巯基乙醇
酚/氯仿（1:1） 氯仿：50 ml 无水乙醇
DNA纯化（去杂质）
蛋白质 常用苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）或 氯仿：异戊醇（24：1）抽提。 RNA 常选用RNase消化 ，或是用LiCl来消除大分子 的RNA。 酚类物质 提取液中加少量巯基乙醇，选取幼嫩的 材料。 多糖提取液中加1％PVP。
DNA提取缓冲液
100 mmol/L Tris-HCl (pH8.0)
50mmol/L EDTA
500 mmol/L NaCl
1.5%
SDS
24:1/氯仿:戊醇
其它试剂：液氮、TE缓冲液，无 水乙醇、70%乙醇。
2×CTAB buffer
100mM Tris pH8.0
1.4M NaCl
20 mM EDTA pH8.0
DNA样品在0.9% Agarose胶上电泳（例图）
实验注意事项
1. 微量移液枪的使用一定要规范，吸取氯仿等有机 试剂要注意不要将试剂吸入枪中；
2. 提取过程中的机械力可能使大分子DNA断裂成小 片段，所以为保证DNA的完整性，各步操作均应 较温和，避免剧烈震荡。
3. 尽量取材幼嫩组织，最好在早晨取材，可以避免 过多的糖分污染
15min左右； 5. 室温下10000rpm离心15min，小心吸上清于新的离心管中，加入两倍体
积的冷酒精，-20 ℃放置1h或过夜； 6. 挑出DNA置于新的管中，挑出有困难时可以低速离心后倒去上清。加入
适量70%酒精，摇动洗涤10min，重复洗涤2-3次； 7. 吹干DNA，加入适量TE在65℃溶解，完全溶解后离心去除杂质； 8. 加入RNase（10mg/mL）, 室温处理0.5-1h, 除去RNA，4℃或-20℃贮存。 9. 如需纯化DNA，再加入适量TE，氯仿/异戊醇多次抽提后吸取上清，加