实验一---DNA提取
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入3ml/L NaAc和两倍体积的乙醇， -20 ℃放置1h或过夜； 10.吹干沉淀后，加入适量TE， 65℃溶解， 4℃或-20℃贮存。
1. 植物叶子约3g, 剪碎置预冷研钵中
加入液氮充分研磨， 注意不能干磨
3. 60℃水浴保温30-60min
加入等体积氯仿，用力摇匀
6. 再次10000rpm离心5min； 将上清小心吸入新的离心管中；
Email：zhxkongnjau.edu
课后要求：完成实验报告
注意：实验目的，实验原理， 实验步骤，你的实验材料，结 果，实验中出现的问题以及你 的分析。
Βιβλιοθήκη Baidu 再见
PVP（聚乙烯吡喏烷酮）可以降低酚化合物的离 子化。
2-巯基乙醇作为还原剂可以防止酚类的氧化。适 用于提取新鲜植物以及干品、冷冻品的基因组 DNA。
实验仪器
实验步骤：
1. 取新鲜叶片约3g, 剪碎, 加入液氮充分研磨后转移至2ml离心管中； 2. 在65℃预热的提取液中按3.8g/L加入Na Bisufite, 混匀并调pH至8.0； 3. 在管中加入适量提取液，60℃水浴保温约30min，不时颠倒混匀； 4. 冷却至室温后加入等体积氯仿/异戊醇，用力摇匀后，放置摇床上摇动
核酸的理化性质
RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结晶，DNA则为白色类 似石棉样的纤维状物。除肌苷酸、鸟苷酸具有鲜味外，核酸 和核苷酸大都呈酸味。
DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物，一般都溶于水，不溶 于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水， RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。DNA在水中为10g/L，呈 黏性胶体溶液。在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性 或弱碱性溶液中较稳定。
DNA提取
SDS法 SDS是有效的阴离子去垢剂, 细胞中DNA与蛋白 质之间 常借静电引力或配位键结合, SDS能够破坏 这种价键。
CTAB法 CTAB是一种阳离子去垢剂，它可以溶解膜与 脂膜，使细胞中的DNA-蛋白质复合物释放出来，并使 蛋白质变性，使DNA与蛋白质分离。
实验材料和试剂
实验材料：新鲜植物组织。 实验所需试剂：
15min左右； 5. 室温下10000rpm离心15min，小心吸上清于新的离心管中，加入两倍体
积的冷酒精，-20 ℃放置1h或过夜； 6. 挑出DNA置于新的管中，挑出有困难时可以低速离心后倒去上清。加入
适量70%酒精，摇动洗涤10min，重复洗涤2-3次； 7. 吹干DNA，加入适量TE在65℃溶解，完全溶解后离心去除杂质； 8. 加入RNase（10mg/mL）, 室温处理0.5-1h, 除去RNA，4℃或-20℃贮存。 9. 如需纯化DNA，再加入适量TE，氯仿/异戊醇多次抽提后吸取上清，加
2%
CTAB
0.2% 巯基乙醇
酚/氯仿（1:1） 氯仿：50 ml 无水乙醇
DNA纯化（去杂质）
蛋白质 常用苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）或 氯仿：异戊醇（24：1）抽提。 RNA 常选用RNase消化 ，或是用LiCl来消除大分子 的RNA。 酚类物质 提取液中加少量巯基乙醇，选取幼嫩的 材料。 多糖提取液中加1％PVP。
DNA提取缓冲液
100 mmol/L Tris-HCl (pH8.0)
50mmol/L EDTA
500 mmol/L NaCl
1.5%
SDS
24:1/氯仿:戊醇
其它试剂：液氮、TE缓冲液，无 水乙醇、70%乙醇。
2×CTAB buffer
100mM Tris pH8.0
1.4M NaCl
20 mM EDTA pH8.0
具体方法简单说来就是利用液氮对植物组织进行研磨，从而破 碎细胞。细胞提取液中含有的SDS溶解膜蛋白而破坏细胞膜， 使蛋白质变性而沉淀下来。EDTA抑制DNA酶的活性。再用酚、 氯仿抽提的方法去除蛋白，得到的DNA溶液经乙醇沉淀。
细胞破碎
①机械方法： 超声波处理法、研磨法、匀浆法； ②化学试剂法：用SDS处理细胞； ③酶解法： 加入溶菌酶或蜗牛酶，破坏细胞壁。
DNA样品在0.9% Agarose胶上电泳（例图）
实验注意事项
1. 微量移液枪的使用一定要规范，吸取氯仿等有机 试剂要注意不要将试剂吸入枪中；
2. 提取过程中的机械力可能使大分子DNA断裂成小 片段，所以为保证DNA的完整性，各步操作均应 较温和，避免剧烈震荡。
3. 尽量取材幼嫩组织，最好在早晨取材，可以避免 过多的糖分污染
天然状态的DNA 是以脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于细胞核 中。要从细胞中提取DNA时，先把DNP抽提出来，再把蛋白质 和糖去除，同时除去RNA及无机离子等，从中分离DNA 。
提取植物DNA的方法主要采用SDS和CTAB法，对它们进行稍 加修改就可以应用于DNA的微量提取。两种方法均采用去污剂 裂解细胞并保护DNA不受内源核酸内切酶降解。
1. 植物叶子约3g, 剪碎置预冷研钵中
加入液氮充分研磨， 注意不能干磨
3. 60℃水浴保温30-60min
加入等体积氯仿，用力摇匀
6. 再次10000rpm离心5min； 将上清小心吸入新的离心管中；
Email：zhxkongnjau.edu
课后要求：完成实验报告
注意：实验目的，实验原理， 实验步骤，你的实验材料，结 果，实验中出现的问题以及你 的分析。
Βιβλιοθήκη Baidu 再见
PVP（聚乙烯吡喏烷酮）可以降低酚化合物的离 子化。
2-巯基乙醇作为还原剂可以防止酚类的氧化。适 用于提取新鲜植物以及干品、冷冻品的基因组 DNA。
实验仪器
实验步骤：
1. 取新鲜叶片约3g, 剪碎, 加入液氮充分研磨后转移至2ml离心管中； 2. 在65℃预热的提取液中按3.8g/L加入Na Bisufite, 混匀并调pH至8.0； 3. 在管中加入适量提取液，60℃水浴保温约30min，不时颠倒混匀； 4. 冷却至室温后加入等体积氯仿/异戊醇，用力摇匀后，放置摇床上摇动
核酸的理化性质
RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结晶，DNA则为白色类 似石棉样的纤维状物。除肌苷酸、鸟苷酸具有鲜味外，核酸 和核苷酸大都呈酸味。
DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物，一般都溶于水，不溶 于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水， RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。DNA在水中为10g/L，呈 黏性胶体溶液。在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性 或弱碱性溶液中较稳定。
DNA提取
SDS法 SDS是有效的阴离子去垢剂, 细胞中DNA与蛋白 质之间 常借静电引力或配位键结合, SDS能够破坏 这种价键。
CTAB法 CTAB是一种阳离子去垢剂，它可以溶解膜与 脂膜，使细胞中的DNA-蛋白质复合物释放出来，并使 蛋白质变性，使DNA与蛋白质分离。
实验材料和试剂
实验材料：新鲜植物组织。 实验所需试剂：
15min左右； 5. 室温下10000rpm离心15min，小心吸上清于新的离心管中，加入两倍体
积的冷酒精，-20 ℃放置1h或过夜； 6. 挑出DNA置于新的管中，挑出有困难时可以低速离心后倒去上清。加入
适量70%酒精，摇动洗涤10min，重复洗涤2-3次； 7. 吹干DNA，加入适量TE在65℃溶解，完全溶解后离心去除杂质； 8. 加入RNase（10mg/mL）, 室温处理0.5-1h, 除去RNA，4℃或-20℃贮存。 9. 如需纯化DNA，再加入适量TE，氯仿/异戊醇多次抽提后吸取上清，加
2%
CTAB
0.2% 巯基乙醇
酚/氯仿（1:1） 氯仿：50 ml 无水乙醇
DNA纯化（去杂质）
蛋白质 常用苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）或 氯仿：异戊醇（24：1）抽提。 RNA 常选用RNase消化 ，或是用LiCl来消除大分子 的RNA。 酚类物质 提取液中加少量巯基乙醇，选取幼嫩的 材料。 多糖提取液中加1％PVP。
DNA提取缓冲液
100 mmol/L Tris-HCl (pH8.0)
50mmol/L EDTA
500 mmol/L NaCl
1.5%
SDS
24:1/氯仿:戊醇
其它试剂：液氮、TE缓冲液，无 水乙醇、70%乙醇。
2×CTAB buffer
100mM Tris pH8.0
1.4M NaCl
20 mM EDTA pH8.0
具体方法简单说来就是利用液氮对植物组织进行研磨，从而破 碎细胞。细胞提取液中含有的SDS溶解膜蛋白而破坏细胞膜， 使蛋白质变性而沉淀下来。EDTA抑制DNA酶的活性。再用酚、 氯仿抽提的方法去除蛋白，得到的DNA溶液经乙醇沉淀。
细胞破碎
①机械方法： 超声波处理法、研磨法、匀浆法； ②化学试剂法：用SDS处理细胞； ③酶解法： 加入溶菌酶或蜗牛酶，破坏细胞壁。
DNA样品在0.9% Agarose胶上电泳（例图）
实验注意事项
1. 微量移液枪的使用一定要规范，吸取氯仿等有机 试剂要注意不要将试剂吸入枪中；
2. 提取过程中的机械力可能使大分子DNA断裂成小 片段，所以为保证DNA的完整性，各步操作均应 较温和，避免剧烈震荡。
3. 尽量取材幼嫩组织，最好在早晨取材，可以避免 过多的糖分污染
天然状态的DNA 是以脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于细胞核 中。要从细胞中提取DNA时，先把DNP抽提出来，再把蛋白质 和糖去除，同时除去RNA及无机离子等，从中分离DNA 。
提取植物DNA的方法主要采用SDS和CTAB法，对它们进行稍 加修改就可以应用于DNA的微量提取。两种方法均采用去污剂 裂解细胞并保护DNA不受内源核酸内切酶降解。