蒸发光散射问题集锦

蒸发光散射技术讨论

1、蒸发光检测器属于质量检测器，理论上可以检测到挥发性低于流动相的任何物质，但对有紫外吸收的

样品组份检测灵敏度比较底，重现性比较差（出厂要求重现性RSD<6%即可），现常用于检测没有紫外吸收的物质。

主要原理是，流动相及组份在蒸发室，先被雾化，流动相蒸发，组份形成气溶胶，然后进入检测室，用激光照射照射气溶胶而产生光散射，测定光散射的光强而获得信号。

组份质量（m）与散射光强（I）的关系为：lgI=b·lgm+lgk

k和b是与蒸发室温度及流动相性质等试验条件有关的常数。

剩下的就是一些注意事项和简单保养的问题，比如流动相中不能有盐，使用前先升温给气，再进流动相，使用完后先停流动相，后降温，最后停气，光机。

最后说明一下，使用完毕后可将流动相改为水及甲醇，调节温度及气流量冲洗蒸发室，这样可以增加使用寿命，降低噪音。

2、zzz79朋友所说“我们有一台Alltech ELSD 2000，也许是因为蒸发光散射技术本身的问题，重现性特别

差。在方法学学研究时，更是没法做。”

我想您指的重现性较差，可能是说峰面积的重现性比较差吧。如果在每天测定中均采用随行对照品进行校对，含量的重现性还可以说得过去。

我个人认为气体的流速对峰面积的影响非常大，所以如果您使用纯净的气源，精准的气体流速控制，至少在一天内的重现性不成问题。

根据ELSD的工作原理，必须使用对数方程外标两点法进行计算。但是，在实际应用过程中，如果对照品浓度和被测样品浓度较为接近，直接采用峰面积计算也不会有显著性的影响（尽管其不是合理的方法）。

3、比较赞成楼主的说法，ELSD很多人都说它重现性很差，其实我根据我自己的经验，重现性差一般应该

是指其峰面积重现性较差（和UV比较），但其色谱条件的重现性还是比较稳定的。至于标准曲线的做法，我曾经做过一系列的比较实验，也查询了一些资料，目前尚没有定论到底以峰面积和浓度直接做线性还是用自然对数还是以常用对数，三种方法都有。至于我们在实验中应该如何做线性，个人认为：不必拘泥，首先用峰面积和浓度直接做线性，如果相关系数不好，再尝试用对数关系（自然对数或常用对数）。一般都可以解决问题，不象那位同学说的方法学根本没法做，应该还是可以做的。至于楼主所说的，对照品和供试品溶液接近时可直接用峰面积计算，我不是很认同，当很接近时，可以考虑做一个比较窄的范围做线性，你如果直接用两点法做计算的话，必须得有一些数据支持，否则文章是很难发表的，也没有说服力，很容易被人质问，至于做随行对照的问题，按正规要求，不只ELSD，其他检测器的液相也应该这样做，只是因为仪器相对的稳定性所以大家都不做，对于ELSD当然做随行对照最好，至于是否一定要做，我觉得如果是仪器一直都是你一个人在用，而且条件没有变，预热也够充分，那么不做也行，但是这只是考察了自己的一个实验而已，不敢建议大家都不做，在您自己做实验时建议你还是做随行对照的好，也好心里面有底，免得造成不好的影响，呵呵。建议做随行对照。

谈到ELSE仪器的使用上，也有一些体会，但一时难以细细道来，主要就是雾化温度和气体流速的设置上，如果这两个参数设置合理，一般情况下都不会有什么问题，大部分的问题都是出在温度和流速设置不合理上。基线噪音的出现也多是因为两个参数设置不合理而导致雾化器漂移管污染那就只好清洗了，也有个别人因为操作失误而导致问题的但不多见，一般仪器厂商提高的参数设置只能用来参考，实际实验时很少完全和他提供的条件一致的，多比他提供的参数稍微高些，开始设置温度建议高些，

如果基线没问题再慢慢调整到最佳温度流速。

再有，就是因为ELSD为质量型检测器，所以样品的预处理就相对更重要些，尽可能地分离纯化将会使你的方法学更容易建立，太多的成分在里面容易干扰正常检测。

本人只用过ALTECH 2000，其他牌子的ELSD只是在展会上见过，遗憾。见到一个内置工作站的ELSD 介绍，觉得不错，但没用过，不知道可有朋友用过，感觉如何？如果不错，倒可以考虑购买，呵呵4、法国的蒸发光散射检测器本人用过，Sedex-55型，Sedex-75型，都用过，也有五年多的历史了。主

要用于中药成分的含量测定，也作过麦芽糖。感觉其重现性RSD达到3%以下没问题。同时该品牌ELSD 采用超地温雾化技术，蒸发室温度一般低于50摄氏度，我一般用40左右，我曾经做过人参皂苷Rg1与Rb1的标准曲线几乎重合，则也充分证明其为质量型检测器，曾经做过中药注射剂的指纹图谱，在同一机器，同一牌号色谱主的情况下重现性较紫外好得多。但更换色谱柱峰形变化较大。

ALTECH 2000本人也接触过，知道其不是同一天其样品峰面积差异相当大。

5、对于蒸发光散射检测器的分离装置，我了解也不是很多，Alltech2000采用双模式方式即在挥发性溶剂

情况下，采用非分流模式；而水相或大流量情况下采用分流模式，其漂移管较短采用的是高温蒸发模式，蒸发温度90摄氏度以上，同时漂移管较短，是不锈钢材质。

Sedex-75型采用的是低温蒸发模式，由于其雾化室较大采用自然分流效果较前者好，同时其蒸发管（漂移管）长度较前者长许多，厂家工程师介绍有2m多长，且为螺旋形可以减缓漂移速度，同时其蒸发温度较低一般为40摄氏度左右，有利于被测物质形成较大结晶。从而增加测定的准确性。但Sedex 的管路均为玻璃材质，易破损，但我用的有5年了，中间还搬过两次家也没出什麽问题。

6、蒸发光散射检测器（ELSD）是一种通用型的检测器，其优势在于能检测无紫外吸收或紫外吸收很弱的

物质，如：碳水化合物、脂类、聚合物、未衍生脂肪酸和氨基酸、表面活性剂等。另外，在没有标准品和化合物结构参数的情况下也能检测未知化合物。理论上，可检测挥发性低于流动相的任何样品；

流动相低温雾化和蒸发，对热不稳定和挥发性化合物亦有较高灵敏度；

广泛的梯度和溶剂兼容性，无溶剂峰干扰；因此,ELSD应用比较广泛。

您说的“有些紫外检测器能检测到峰，而在蒸发光散射检测器中无法检测”情况不难理解:1、有些物质的挥发性比流动相大，进入飘移管后先于流动相而蒸发，到不了检测池，也就检测不到。2、有些物质的含量可能很微量，而紫外吸收很强，因此在紫外检测器中可以看到色谱峰。而在ELSD中，由于很微量的微粒或者液滴散射光的的能力有限，所以检测不到或色谱峰很弱。

7、我第一次使用蒸发光检测器，遇到一个问题跟大家请教下。

色谱条件：流动相甲醇：酸水=80：20，飘移管温度60度，气体压力25psi

仪器：waters2420

样品浓度3mg/ml，进样量10ul，

存在问题：

连续进样4次，但是峰面积一次比一次小，后来竟然有杂峰出现，而且该杂峰具有一定的规律性，具体请见附件。

请问是哪里出了问题呢？

8、看了下图，没用过waters2420的，我用的是Alltech的，原理应该相通吧。感觉上有几点地方可以注

意下：

1.不知道你的漂移管温度和喷雾器温度为什么那么低。还有压力换算成流速是多少。按气体流速

2.5，

80％甲醇来说，温度最少也得80度吧，喷雾器温度也低了点，容易造成污染并堵塞喷雾器的。从你的图上看，很象这个原因。可以适当提高温度试试。

2.样品浓度感觉高了点，虽说蒸发光灵敏度低，但和waters DAD（2996）比也差不了多少，基线不会

那么杂的。