HIV实验室ELISA检测方法

人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）

1 试剂信息

试剂厂家：北京万泰生物药业股份有限公司

2 样本要求

2.1 本试剂使用样品为人血清或血浆，含有EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样品可用于本实验。

2.2 不能检测含悬浮纤维蛋白或聚集物，重度溶血的样品。

2.3 样品中应无微生物，可在2-8℃储存1周，长期储存应低温冻存，避免反复冻融。

2.4 使用前请将样品室温平衡30分钟以上，冷冻样品实验前需混匀。

3 检测步骤

3.1 配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。

3.2 编号：将样品对应微孔板按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照1型、2型各1孔、空白对照1孔。

3.3 加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照100μL。

3.4 温育：用封板膜封板后，置37±1℃温育60±2分钟。

3.5 洗板：小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。

3.6 加酶：每孔加入酶标试剂100μL，空白孔除外。

3.7 温育：用封板膜封板后，置37±1℃温育60±2分钟。

3.8 洗板：操作同步骤5。

3.9 显色：每孔加入显色剂A、B液各50μL，轻轻震荡混匀，37±1℃避光显色30±1分钟。

3.10 测定：每孔加入终止液50μL，轻轻振荡混匀，10分钟内测定结果。

4 参考值

临界值（CUTOFF）计算：临界值=阴性对照A均值+0.12.

5 检验结果的解释

5.1 阴性对照孔A值≦0.10，阳性对照A值≧0.80，否则试验无效。

5.2 若有1孔阴性对照A值大于0.1应舍弃，若两孔或两孔以上阴性对照A值大于0.1，应重复试验。

5.3 阴性判定：样品A值<临界值（CUTOFF）者为HIV抗体阴性。

5.4 阳性判定：样品A值≧临界值（CUTOFF）者为HIV抗体阳性。（注意：初试阳性应重新取样双孔复试。复试阳性者应按《全国艾滋病检测技术规范》送HIV确证实验室进行确证实验。）