NBRIP培养基(解磷培养基)
1株潞党参根部内生细菌的鉴定及促生长指标测定
２．２．４ 固氮能力的鉴定 土壤中的氮通常约 ９５％ 都是以 有 机 氮 的 形 式 存 在，不 能 被 植 物 直 接 利 用 ［２０］。具有固氮 能 力 的 细 菌 能 够 将 空 气 中 的 氮 气
还原为可被植物直接吸收利用的铵态氮，从而对植 物生长起到促进作用 。 ［２１－２２］ 将菌株 ＤＳ－３接种于 不含氮源的无氮培养基上，培养 ３ｄ后，在培养基上
２ 结果与分析
２．１ 菌株 ＤＳ－３的鉴定 菌株在培养基上形成的菌落为边缘整齐的圆
形，表面 湿 润，有 光 泽，不 透 明，颜 色 为 浅 黄 色。 生 理生化测定结果显示菌株 ＤＳ－３为革兰氏阴性菌 （Ｇ－）。ＫＯＨ、接 触 酶、需 氧 性、氧 化 酶 和 卵 磷 脂 酶 试验均为阳 性，淀 粉 水 解、吲 哚、伏 普、纤 维 素 分 解 及甲基红试验均为阴性。
菌株 ＤＳ－３的 １６ＳｒＲＮＡ基因扩增条带经电泳 鉴定，大小正确，约为 １６００ｂｐ。将测序所得序列在 ＮＣＢＩ和 ＥｚＢｉｏＣｌｏｕｄ２个数据库中比对，比对结果显 示菌株 ＤＳ－３与菌株 Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｃｏｒｒｕｇａｔａ的同源 性达到 ９９．３７％。经 ＭＥＧＡ－Ｘ构建系统发育树，由 图 １可知，菌株 ＤＳ－３与模式菌株 Ｐ．ｃｏｒｒｕｇａｔａ处 于同一分支上，其自展值为 ９４％，说明菌株 ＤＳ－３ 为 Ｐ．ｃｏｒｒｕｇａｔａ的另外一种亚种，与系统发育树中 这 ２种菌株不完全相同。结合该菌株表现出的形态 特 征 和 生 理 生 化 试 验 结 果，将 其 鉴 定 为 Ｐ． ｃｏｒｒｕｇａｔａ。 ２．２ 菌株的促生能力 ２．２．１ 解磷能力 在有机磷平板上点接菌液培养 ７２ｈ后，由图 ２－Ａ可知，在菌株 ＤＳ－３的菌落周围 出现了明显的透明圈，说明该菌株具有溶解有机磷 的能力。对该菌株的解磷能力进行定量检测，菌株 在液体解磷培养基中培养 ７ｄ后，解磷率为 ４０．２％。 由此可见，该菌株对土壤中的有机磷能发挥一定的 解磷能力。
NBRIP-P培养基
NBRIP-P 培养基简介：植物根际存在各种微生物，2-5%的细菌能促进植物生长，增加作物产量，被称为根际促生细菌(PGPR)，植物根际促生细菌的研究对开发植物专化型微生物菌剂，促进农作物增产增收有重要意义。
Leagene NBRIP-P 培养基主要由葡萄糖、氯化镁、硫酸镁、氯化钾、磷酸盐等组成，经无菌处理，该试剂不含磷酸钙和ACC(又称1-氨基羰酰-1-环丙烷羧酸)。
NBRIP-P 培养基多用于菌株原液的培养，尤其适用于活化接种菌种，再进行后续的菌株液体溶磷能力的测定。
该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：材料：1、无菌离心管或培养器皿2、接种环3、摇床4、比色杯5、分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、种子液的制备：将待测菌种依次接种至NBRIP-P 培养基中，置于摇床振摇培养，获得对数生长期的菌液，以备后续接种使用。
2、取无菌离心管或培养器皿，加入适量NBRIP 培养基(解磷培养基)，将活化好的菌株接种于NBRIP 培养基(解磷培养基)。
3、置于摇床振摇培养。
4、取菌液，离心，取上清液加入无菌水，滴加二硝基苯酚作为显色剂，再滴入几滴使溶液刚好呈黄色，再用调至无色。
5、加入钼锑抗显色试剂，补水，摇匀，静置，分光光度计处测定吸光度值，同时以未接种的空白培养基作为相应处理的作为对照。
6、通过磷标准曲线，可查出接菌处理各培养基中可溶性磷的浓度。
编号名称CM0325Storage NBRIP-P 培养基500ml 4℃使用说明书1份注意事项：1、注意无菌操作，避免微生物污染。
2、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
相关：编号名称CC0007磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)CM0004LB培养基DC0032Masson三色染色液DF0135多聚甲醛溶液(4%PFA)NR0001DEPC处理水(0.1%)PS0013RIPA裂解液(强)TC1167尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)。
实验室常用培养基配方及制备方法
实验室常用培养基配方及制备方法实验室中常用的培养基有很多种，不同的培养基适用于不同类型的微生物，如细菌、真菌或细胞系等。
下面将介绍几种常用培养基的配方及制备方法。
1. LB培养基（Luria-Bertani培养基）LB培养基常用于大肠杆菌等细菌的培养。
其配方如下：- Tryptone：10g/L- Yeast extract：5g/L-NaCl：10g/L将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中，调节pH至7.0。
用自动过滤器过滤液体得到无菌的LB培养基。
分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。
2. Sabouraud葡萄汁蘑菇培养基Sabouraud培养基常用于真菌的培养。
其配方如下：- Peptone：10g/L- Dextrose：40g/L将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中，调节pH至5.6、用自动过滤器过滤液体得到无菌的Sabouraud培养基。
分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。
3. DMEM培养基（Dulbecco's Modified Eagle Medium）DMEM培养基常用于细胞系的培养。
其配方如下：-DMEM粉：每升DMEM培养基50g-细胞因子或血清等:根据实验要求添加将DMEM粉溶解于适量蒸馏水中，并根据实验要求添加适量的细胞因子或血清。
调节pH至7.2-7.4、用自动过滤器过滤液体得到无菌的DMEM 培养基。
分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。
4.M9液体培养基M9液体培养基是一种常用于细菌的最小培养基，适用于检验细菌的营养需求。
其配方如下：-Na2HPO4：6g/L-KH2PO4:3g/L-NaCl:0.5g/L-NH4Cl:1g/L-MgSO4·7H2O:0.1g/L-CaCl2:0.01g/L将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中，调节pH至7.0-7.4、用自动过滤器过滤液体得到无菌的M9液体培养基。
分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。
146种培养基配方
146种培养基配方培养基是微生物学实验中用来培养和繁殖微生物的营养物质组合的混合物。
不同种类的微生物对培养基的要求不同，因此有很多种不同的培养基配方。
以下是一些常见的微生物培养基配方及其用途。
1. LB培养基：由Tryptone、Yeast Extract和NaCl组成，用于培养大肠杆菌等细菌。
2.洋葱培养基：将洋葱切碎，加入生理盐水悬浮液中，并加热煮沸，用于培养霉菌等真菌。
3.玉米浆培养基：将玉米浆过滤后，与其他添加剂混合，用于培养放线菌等产生抗生素的微生物。
4.BHIA培养基：由牛肉提取物、酵母粉、大豆蛋白酸水解物和葡萄糖组成，用于分离和培养霍乱弧菌等革兰氏阴性菌。
5.PDA培养基：由马铃薯、葡萄糖和琼脂组成，用于培养真菌和酵母。
6.铜绿假单胞菌选择性培养基：由铜绿假单胞菌选择性抱合物和琼脂组成，用于分离和培养铜绿假单胞菌。
7.南非忍冬培养基：由南非忍冬浆液、葡萄糖和琼脂组成，用于培养放线菌等微生物。
8.霍乱选择性富集培养基：由牛肉脯、胆盐、次氯酸钠等组成，用于富集和分离霍乱弧菌。
9. Sabouraud培养基：由葡萄糖、琼脂和酵母培养物组成，用于培养皮肤真菌。
10.洋葱素培养基：由洋葱素提取物、蔗糖和琼脂组成，用于培养嗜热菌。
11.耐热菌培养基：由牛肉提取物、蛋白胨和琼脂组成，用于培养耐高温微生物。
12. Salmonella选择性富集培养基：含有肉精提取物、胆盐和硫代硫酸钠，用于富集和分离沙门氏菌。
13.溶藻菌富集培养基：由海藻提取物、胆盐和地衣酸组成，用于富集和分离溶藻菌。
14.MRSA选择性富集培养基：含有盐酸、洗涤剂和染料，用于富集和分离甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌。
15. Trichophyton培养基：由马铃薯提取物、琼脂和迷迭香酸组成，用于培养皮肤真菌。
16.高盐富集培养基：含有高浓度的NaCl，适用于培养嗜盐菌。
17.TBX富集培养基：含有大肠杆菌选择性抱合物和苦味素，适用于富集志贺氏菌。
实验室常用培养基大全
表皮葡萄球菌产气肠杆菌鼠伤寒沙门氏菌单核增生李斯特氏菌大肠埃希氏菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌表面接触碟/表面接触皿金黄色葡萄球菌酿酒酵母菌脑心浸出液肉汤(BHI)品红亚硫酸钠液体培养基MFC肉汤CFU培养基基础4-甲基伞形酮葡糖苷酸(MUG)培养基蛋白胨胰蛋白胨胰酪蛋白胨酵母浸粉大豆蛋白胨酸水解酪蛋白明胶蛋白胨马铃薯浸粉琼脂粉琼脂粉动物组织胃蛋白酶消化物肉胃酶消化物牛肉浸粉牛肝浸粉牛肝浸粉牛心浸粉多价蛋白胨(多聚蛋白胨)月示蛋白胨玉米浸出粉一次性培养皿表面接触碟一次性培养皿（密理博浮游菌采样）表面接触碟/表面接触皿金属玻璃培养皿（可重复使用）金属玻璃表面接触碟嗜热脂肪肝菌芽孢菌片（ATCC7953枯草杆菌黑色变种芽孢菌片（ATCC9372）121度高压灭菌化学指示卡132℃压力蒸汽灭菌指示卡葡萄糖氯化钠L-半胱氨酸盐酸盐氧化酶试剂三磷酸腺苷二钠盐（ATP）费尔休林（无吡啶）SDS-PAGE凝胶配制试剂盒SDS-PAGE电泳液SDS-PAGE上样缓冲液5倍考马斯亮蓝R-250染色套装铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌大肠埃希氏菌大肠埃希氏菌产气肠杆菌乙型副伤寒沙门氏菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌表面接触碟/表面接触皿黑曲霉生孢梭菌大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤)大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤)无菌大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉? 大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤)大豆酪蛋白消化液培养基大豆酪蛋白琼脂培养基大豆酪蛋白琼脂培养基无菌大豆酪蛋白琼脂培养基卵磷脂-吐温80营养琼脂培养基基础胰化大豆坚固绿琼脂(TSFA)营养肉汤(NB)营养琼脂(NA)0.5%葡萄糖肉汤培养基pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液三糖铁琼脂培养基(TSI)三糖铁琼脂培养基R2A琼脂平板计数琼脂(PCA)TTC营养琼脂2216E琼脂2216E液体培养基嗜冷菌计数琼脂胰蛋白胨大豆肉汤(TSB)胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)Dey/Engley中和肉汤基础Dey/Engley中和琼脂基础胰蛋白示磷酸盐肉汤胰蛋白示磷酸盐肉汤胰蛋白示磷酸盐肉汤标准Ⅰ号营养琼脂标准Ⅰ号营养肉汤标准Ⅱ号营养琼脂m-TGE肉汤表面接触碟/表面接触皿AC肉汤豆粉琼脂哥伦比亚血琼脂基础血琼脂基础脑心浸出液肉汤(BHI)脑心浸出液琼脂(BHIA)溴甲酚紫葡萄糖肉汤酸性肉汤溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基0.5%葡萄糖肉汤培养基SCDLP液体培养基基础SCDLP琼脂培养基基础Letheen琼脂基础Letheen肉汤基础改良Letheen琼脂基础改良Letheen肉汤基础Eugon 肉汤Eugon 琼脂小牛浸液肉汤小牛浸液琼脂溴甲酚紫蛋白胨培养液普通肉汤培养基细菌保存培养基细菌保存培养基(半固体)血液增菌培养基心浸液琼脂哥伦比亚肉汤TGC液体培养基TGC流体培养基改良TGC流体培养基(无指示剂)菌种培养基水琼脂培养基营养琼脂(pH6.0)营养琼脂,1.5%营养琼脂,1.5%改良平板计数琼脂(MPCA)CVT琼脂培养基酵母粉琼脂Eugon LT 100肉汤基础Eugon LT 100琼脂基础LT 100琼脂基础大豆酪蛋白琼脂培养基(含卵磷脂)哥伦比亚CNA 琼脂SLB培养基胰酪胨大豆琼脂大豆酪蛋白琼脂（灌装生产用）血琼脂基础2号酪胨琼脂（G.A）三糖铁（TSI）琼脂含0.05%聚山梨酯80的pH7.0氯化钠-蛋白液3%氯化钠碱性蛋白胨水TCBS琼脂3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂3%氯化钠三糖铁琼脂氯化钠三糖铁琼脂3.5%氯化钠三糖铁琼脂我妻氏血琼脂基础四号琼脂基础庆大霉素琼脂基础嗜盐菌选择性琼脂氯化钠多粘菌素B肉汤（SPB）基础O/F试验用培养基（HLGB）碱性蛋白胨水（APW）氯化钠营养琼脂42℃生长试验用培养基mCPC琼脂基础（CC琼脂基础）碱性琼脂碱性胆盐琼脂氯化钠蔗糖琼脂培养基PAC斜面培养基BTB培养基氯化钠结晶紫增菌液T1N1琼脂T1N0肉汤T1N3肉汤精氨酸葡萄糖斜面琼脂（AGS）嗜盐性试验培养基基础霍乱双糖铁琼脂1%氯化钠碱性蛋白胨水气单胞菌鉴别琼脂气单胞菌培养基基础（Ryan）气单胞菌琼脂（胆盐氯酚红亮绿琼脂）氨苄青霉素麦康凯琼脂基础RS琼脂普通肉汤普通琼脂碱性蛋白胨水AHM鉴别培养基脱脂奶蔗糖蛋白胨培养基基础蔗糖胰蛋白胨肉汤APM培养基改良磷酸盐缓冲液CIN-1培养基基础改良Y培养基改良克氏双糖铁培养基改良的酵母浸汁-孟加拉红肉汤ITC肉汤基础SSDC培养基DYS耶尔森菌琼脂亚硫酸钠琼脂龙胆紫血液琼脂基础溶血琼脂基础赫氏琼脂赫氏增菌液木糖-明胶培养基克氏双糖铁琼脂(KI)葡萄糖琼脂尿素琼脂基础(pH7.2)动力-吲哚-尿素(MIU)培养基基础MIO培养基LIM培养基V-P半固体琼脂（VP）西蒙氏柠檬酸盐琼脂Korser氏柠檬酸盐肉汤Hugh-Leifson培养基(O/F试验用)硝酸盐肉汤动力-硝酸盐培养基(A法)动力-硝酸盐培养基(B法)基础SIM动力培养基缓冲葡萄糖蛋白胨水培养基(MR-VP培养基) 赖氨酸脱羧酶试验培养基精氨酸双水解酶试验培养基鸟氨酸脱羧酶试验培养基氨基酸脱羧酶试验对照培养基硫酸亚铁琼脂明胶培养基(营养明胶培养基)蛋白胨水培养基糖发酵培养基基础氰化钾(KCN)培养基基础甘露醇发酵培养基醋酸铅培养基基础溴甲酚紫琼脂基础(糖发酵基础)溴甲酚紫肉汤基础Andrade氏糖类肉汤基础葡萄糖半固体琼脂丙二酸钠培养基淀粉培养基石蕊牛乳培养基PEA琼脂基础葡萄糖铵琼脂培养基赖氨酸铁琼脂(LIA)硝酸盐蛋白胨水培养基含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆肉汤（TSB-YE 含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂（TSA-YE 李氏增菌肉汤（LB1,LB2）基础PALCAM琼脂基础Fraser肉汤增菌液基础牛津琼脂（OXA）基础LPM琼脂基础LPM琼脂基础（含七叶苷与柠檬酸铁铵）改良牛津培养基（MOX）基础EB肉汤增菌液基础改良UVM增菌液基础缓冲李斯特氏菌增菌肉汤基础改良McBride琼脂基础（MMA）葡萄糖肉浸液肉汤匹克氏肉汤基础KF链球菌琼脂培养基（KF培养基基础）脑-心浸萃液态培养基脑-心浸萃琼脂培养基胆汁液态培养基叠氮化钠葡萄糖肉汤Pfizer肠球菌选择性琼脂（PSE琼脂）胆汁七叶苷琼脂肠球菌琼脂（胆汁七叶苷叠氮钠琼脂）肠球菌肉汤牛心汤肉汤培养基选择性牛心汤增菌培养基牛心汤琼脂Todd-Hewitt肉汤Todd-Hewitt琼脂CATC琼脂葡萄糖肉汤乙基紫叠氮钠肉汤6.5%氯化钠葡萄糖琼脂变异链球菌培养基轻唾琼脂培养基（MS）基础叠氮钠血琼脂基础Slanetz and?Bartley 培养基TYC培养基滤膜肠球菌琼脂改良爱德华培养基基础VRE肉汤基础VRE琼脂基础Amies运送培养基Cary-Blair氏运送培养基Stuart运送培养基Amies运送培养基(含活性碳)改良运送培养基pH7.2磷酸盐缓冲液无菌检验用洗脱液胰蛋白胨生理盐水溶液(TPS)氯化钠胰蛋白胨稀释液蛋白胨-盐溶液酪胨-大豆卵磷脂-吐温20液体培养基基础杜氏磷酸缓冲液杜氏磷酸缓冲液(不含钙、镁离子)pH7.4磷酸盐缓冲液(PBS)0.1%蛋白胨水培养基胆盐乳糖培养基(BL)乳糖胆盐发酵培养基曙红亚甲蓝琼脂培养基(EMB)麦康凯琼脂培养基(MacC)4-甲基伞形酮葡糖苷酸(MUG)培养基乳糖发酵培养基乳糖肉汤水合乳糖肉汤乳糖亚硫酸盐培养基月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(LST)煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)EC肉汤伊红美蓝琼脂(不含乳糖)去氧胆酸盐琼脂(DC)结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)品红亚硫酸钠琼脂乳糖蛋白胨培养液亮绿乳糖胆盐培养基MFC琼脂MFC肉汤LB琼脂(Miller)LB肉汤(Miller)LB肉汤(Miller)LB肉汤(Lennox)LB琼脂(Lennox)双倍乳糖胆盐(含中和剂)培养基基础伊红美蓝琼脂(EMB)品红亚硫酸钠液体培养基无盐麦康凯琼脂麦康凯琼脂中国蓝琼脂MEE肉汤结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂(VRBDA) Tergitol-7琼脂LES-Endo 琼脂现隐肉汤EEM培养基Endo培养基m-Endo肉汤麦康凯肌醇阿东醇羧苄青霉素琼脂(MIAC)基溴甲酚紫乳糖琼脂阴沟肠杆菌分离琼脂(ECIA)A1培养基亮绿胆盐琼脂乳糖TTC琼脂基础mTEC琼脂表面接触碟/表面接触皿乳糖肉汤培养基乳糖莫能霉素葡萄糖醛酸琼脂胰化大豆硫酸镁琼脂(TSAM)胰蛋白胨胆汁琼脂(TBA)Honda氏产毒肉汤基础Elek氏培养基月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-MUG (LST-MUG) MUGal肉汤基础Aliz-gal琼脂哥伦比亚-MUG琼脂培养基缓冲MUG琼脂结晶紫中性红胆盐-4-甲基伞形酮-β-D-葡? EC-MUG培养基表面接触碟/表面接触皿MUG营养琼脂培养基(NA-MUG)MMO-MUG培养基改良EC肉汤(mEC+n)基础山梨醇麦康凯琼脂(CT-SMAC琼脂基础)麦康凯(MAC)肉汤(CT-MAC肉汤基础)改良胰蛋白胨大豆肉汤(mTSB)基础山梨醇麦康凯半固体培养基改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨(mLST)肉汤基础结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂(VRBGA) NZCYM肉汤NZYM肉汤Luria肉汤基础表面接触碟/表面接触皿Luria琼脂基础2×YT培养基M9低盐培养基（5倍浓缩）M9CA肉汤麦康凯琼脂基础低限肉汤（不含葡萄糖）低限琼脂SOC培养基SOB培养基极品肉汤（TB培养基）极品肉汤（TB培养基）选择性APS肉汤基础选择性APS超级肉汤基础SB肉汤SB琼脂表面接触碟/表面接触皿Bolton肉汤基础Bolton增菌培养基基础（含氯化血红素）Skirrow琼脂基础（改良Skirrow琼脂基础）改良CCD琼脂基础改良CCDA培养基基础布氏肉汤改良布氏肉汤培养基布氏琼脂Campy-Cefex 琼脂培养基基础(改良Campy-C 改良Camp-BAP琼脂基础肉浸液肉汤甘露醇卵黄多粘菌素琼脂基础(MYP) NGKG琼脂基础酪蛋白琼脂酚红葡萄糖肉汤表面接触碟/表面接触皿溶菌酶营养肉汤基础胰酪胨大豆多粘菌素肉汤基础嗜热脂肪杆菌恢复琼脂培养基TGY肉汤培养基TGY琼脂培养基芽孢杆菌培养基基础溴甲酚紫琼脂（BPA）锰盐营养琼脂改良亚硫酸盐琼脂葡萄糖胰蛋白胨琼脂DTA培养基葡萄糖蛋白胨琼脂（DT培养基,不含中和剂? BBL琼脂培养基（双歧杆菌琼脂培养基）PYG液体培养基基础TPY液体培养基TPY琼脂培养基双歧杆菌生化管用基础培养基双歧杆菌BS培养基BLB培养基基础TOS丙酸盐琼脂(TOS MUP培养基基础) MRS肉汤MRS培养基（改良MRS培养基基础）MRS培养基（不含葡萄糖）MRS培养基（改良MRS培养基基础）MC培养基（改良MC培养基基础）改良番茄汁琼脂培养基（改良TJA培养基）乳酸杆菌选择性琼脂（LBS琼脂）表面接触碟/表面接触皿乳酸杆菌选择性肉汤（LBS肉汤）M17琼脂M17琼脂M17肉汤M17肉汤APT琼脂APT肉汤Raka-Ray 3号培养基溴甲酚紫平板计数琼脂含糖牛肉汤培养基含糖牛肉汤琼脂培养基含糖牛肉汤琼脂培养基（含碳酸钙）LAMVAB琼脂基础BL琼脂基础BCG牛乳培养基LAPTg肉汤LAPT肉汤Rogosa SL肉汤Rogosa SL肉汤Rogosa SL琼脂乳酸杆菌琼脂培养基乳酸杆菌肉汤培养基Elliker肉汤Elliker琼脂RSMA培养基脱脂乳培养基酸性番茄培养基（ATB培养基）Middle Brook 7H10琼脂基础Middle Brook 7H11琼脂基础Middlebrook 7H9 肉汤基础Lowenstein-Jensen培养基基础酸性L-J培养基基础碱性L-J培养基基础酸性L-J培养基基础碱性L-J培养基基础改良罗氏培养基基础Dubos肉汤基础Dubos油酸琼脂基础小川氏培养基基础苏通液体培养基基础苏通琼脂培养基基础溶菌酶多粘菌素琼脂基础戊烷脒多粘菌素琼脂基础碳酸氢钠琼脂基础指示选择性培养基基础PLET琼脂基础双抗巧克力琼脂基础巧克力血琼脂培养基基础淋病奈瑟菌琼脂培养基基础淋病奈瑟菌增菌培养基基础Thayer-Martin 选择性琼脂基础GC肉汤基础GC培养基基础Martin-Lewis琼脂基础脑膜炎奈瑟氏菌糖发酵琼脂基础布氏肉汤布氏琼脂肝浸液培养基胰蛋白胨琼脂培养基布鲁氏菌培养基基础马铃薯浸出液琼脂胰蛋白月示肉汤亚硫酸铋琼脂培养基四硫磺酸钠亮绿培养基(TTB)基础沙门、志贺菌属琼脂培养基(SS)胆盐硫乳琼脂培养基(DHL)结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂结晶紫中性红胆盐琼脂(含葡萄糖和乳糖) 肠道菌增菌肉汤(EE肉汤)连四硫酸盐肉汤培养基基础亮绿琼脂培养基木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂(XLD)HE琼脂培养基麦康凯琼脂麦康凯肉汤伊红美蓝琼脂RV沙氏增菌肉汤去氧胆酸盐柠檬酸盐琼脂SS琼脂RV R10肉汤RVS肉汤氯化镁孔雀绿增菌液(MM)志贺氏菌增菌肉汤基础GN增菌液沙门、志贺氏菌增菌培养基改良MSRV培养基亚利桑那菌琼脂(SA)WS琼脂亮绿酚红琼脂亮绿琼脂培养基改良亮绿琼脂培养基MKTTn肉汤基础Muller -Kauffmann四硫磺酸钠肉汤基础BPL琼脂BPLS琼脂改良BPLS琼脂DCLS琼脂煌绿磺胺嘧啶琼脂(BGS琼脂)SBG磺胺增菌液SBG肉汤EF-18琼脂基础亚硒酸盐肉汤(SF)M-肉汤XLT4琼脂亚硒酸盐胱氨酸培养基缓冲蛋白胨水(BPW)顶层培养基(Ames试验)底层培养基(Ames试验)四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液K氏培养基基础YSG琼脂培养基基础阿须贝氏（Ashby）培养基根瘤菌培养基YM根瘤菌培养基Ⅱ基础硅酸盐细菌培养基固氮（茎瘤）根瘤菌培养基基础联合固氮菌培养基光合细菌培养基Ⅰ胱氨酸乳糖无电解质培养基（CLED）包姜氏琼脂培养基基础纤维素分解菌培养基（纤维素刚果红培养基幽门螺杆菌琼脂培养基基础碎肉培养基基础Tinsdale琼脂基础亚碲酸钾血琼脂基础吡哆醇Y培养基Korthof培养基基础EMJH培养基基础发根农杆菌培养基（YEB）发根农杆菌液体培养基APA培养基基础MSE琼脂STAA 琼脂基础三丁酸甘油酯琼脂基础TYM培养基基础PS琼脂真杆菌选择性琼脂基础氧化亚铁硫杆菌培养基碳琼脂基础果蝇培养基BAT琼脂BAT肉汤黄原胶液体发酵培养基（淀粉）黄原胶液体发酵培养基（蔗糖）黄原胶液体发酵培养基（葡萄糖）BYP琼脂培养基基础布氏菌疫苗液体培养基布氏活菌苗琼脂培养基鸡副嗜血杆菌疫苗培养基链球菌疫苗培养基猪丹毒疫苗培养基肺疫疫苗培养基马丁肉汤马丁琼脂仔猪副伤寒疫苗培养基改良Minca培养基基础鸡毒支原体疫苗培养基猪肺炎支原体培养基副猪嗜血杆菌疫苗培养基细菌总数显色培养基TBX显色培养基大肠杆菌/大肠菌群显色培养基大肠菌群显色培养基沙门氏菌显色培养基李斯特氏菌显色培养基弧菌显色培养基金黄色葡萄球菌显色培养基念珠菌显色培养基大肠埃希氏菌O157显色培养基阪崎肠杆菌显色培养基尿道感染显色培养基mEI琼脂肠球菌显色培养基大肠杆菌/大肠菌群液体显色培养基霉菌和酵母菌显色培养基志贺氏菌显色培养基蜡样芽胞杆菌显色培养基BCYE琼脂基础（BCYE鉴别琼脂基础）活性炭酵母琼脂(CYE)BCYE-Cys琼脂基础GVPC琼脂基础硝酸铁琼脂胰蛋白胨酵母浸粉肉汤无机盐淀粉琼脂甘油天门冬素琼脂基础酪氨酸琼脂培养基基础高氏合成一号琼脂培养基酵母膏-麦芽膏琼脂黄豆粉液体培养基黄豆粉琼脂培养基淀粉铵盐培养基淀粉酪蛋白琼脂（SCA）改良高氏合成一号液体培养基B12测试培养基B12琼脂培养基B12肉汤培养基生物素测定培养基维生素B12测定用培养基烟酸测定用培养基叶酸测定培养基泛酸测定培养基游离生物素测定培养基肌醇测定培养基溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基绿脓菌素测定用培养基(PDP)基础溴十六烷三甲铵琼脂基础假单胞菌琼脂培养基F基础假单胞菌琼脂培养基P基础绿脓菌素测定培养基(PDP)基础十六烷基三甲基溴化铵培养基金氏B培养基NAC琼脂培养基NAC液体培养基乙酰胺肉汤乙酰胺琼脂假单胞菌琼脂培养基基础/CN琼脂基础假单胞菌CFC选择性培养基基础假单胞菌分离琼脂洋葱假单胞菌琼脂基础（PC）卵黄氯化钠琼脂培养基基础甘露醇氯化钠琼脂Baird-Parker琼脂培养基基础Vogel-Johnson琼脂基础甘露醇卵黄培养基基础兔血浆纤维蛋白原（RPF）琼脂培养基基础7.5%氯化钠肉汤10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤10%氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤蛋白胨氯化钠溶液Chapman琼脂培养基Chapman Stone琼脂培养基肠毒素产毒培养基（不含琼脂）葡萄球菌增菌肉汤基础葡萄球菌培养基110改良GC肉汤基础RSA筛选琼脂基础甲苯胺蓝-DNA琼脂DNA酶试验琼脂表面接触碟/表面接触皿含甲苯胺蓝的DNA酶试验琼脂含甲基绿的DNA酶试验琼脂改良马丁培养基改良马丁琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD)沙氏葡萄糖液体培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基1%吐温80-玉米琼脂培养基基础1%吐温80-玉米琼脂培养基基础沙氏琼脂培养基(SDA)沙氏葡萄糖肉汤马铃薯葡萄糖琼脂马铃薯葡萄糖肉汤马铃薯葡萄糖肉汤马丁培养基孟加拉红培养基（虎红培养基）沙氏液体培养基（含氯霉素）沙氏琼脂培养基（含氯霉素）沙堡琼脂培养基沙堡液体培养基表面接触碟/表面接触皿TTC-沙保弱培养基沙氏脑心浸液琼脂基础马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基（含氯霉素）马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基（不含氯霉素）马铃薯葡萄糖琼脂表面接触碟/表面接触皿马铃薯葡萄糖半固体琼脂马铃薯葡萄糖半固体琼脂马铃薯蔗糖琼脂马铃薯蔗糖水麦芽汁琼脂基础麦芽汁肉汤麦芽浸膏汤麦芽汁琼脂培养基麦芽汁琼脂培养基（含氯霉素）Wort肉汤基础Wort琼脂基础MEA培养基MBB肉汤察氏琼脂察氏肉汤高盐察氏培养基霉菌琼脂培养基霉菌液体培养基霉菌液体培养基玉米粉琼脂WL营养肉汤WL营养琼脂（WL鉴别培养基基础）葡萄糖蛋白胨培养基（G.P）葡萄糖蛋白胨肉汤葡萄糖蛋白胨琼脂YM肉汤YM琼脂表面接触碟/表面接触皿产毒培养基酵母粉葡萄糖氯霉素琼脂（YGC）Candida Elective 琼脂DTM培养基基础DRBC培养基M-绿色酵母菌和霉菌肉汤Littman琼脂基础BIGGY琼脂BIGGY琼脂无菌试验用真菌培养基桔汁琼脂（OSA）桔汁肉汤（10倍浓缩）麦氏（Meclary）琼脂营养盐培养液营养盐琼脂培养基DG-18琼脂基础改良DG-18琼脂基础念珠菌BCG琼脂基础HC琼脂基础HC琼脂基础赖氨酸培养基（LYS）赖氨酸培养基（LYS）BMGY/BMMY培养基基础MMN培养基MMN琼脂酵母浸膏葡萄糖土霉素琼脂培养基基础OGY琼脂基础MYGP培养基基础植物胨酵母琼脂表面接触碟/表面接触皿植物胨酵母琼脂YPD琼脂YPD肉汤沙氏葡萄糖琼脂(含抗生素)麦芽浸粉琼脂培养基基础沙氏琼脂培养基（灌装生产用）燕麦琼脂BSM无机盐培养基基础PTM1（微量元素）咖啡酸琼脂（CAA）Leeming-Notman培养基基础橄榄油培养基基础硫乙醇酸盐流体培养基(FT)无菌硫乙醇酸盐流体培养基(FT)哥伦比亚琼脂培养基基础强化梭菌培养基梭菌增菌培养基硫乙醇酸盐流体培养基(不含琼脂)CW琼脂基础（不含卡那霉素）CW琼脂基础（含卡那霉素）卵黄琼脂培养基基础胰月示-亚硫酸盐-环丝氨酸（TSC）琼脂基? SC琼脂基础厌氧卵黄琼脂基础表面接触碟/表面接触皿CCFA琼脂基础梭杆菌选择性琼脂基础亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶(SPS)琼脂基?含铁牛奶培养基产芽孢肉汤多价蛋白胨-酵母膏（PY）培养基缓冲动力-硝酸盐培养基基础乳糖-明胶培养基亚硫酸铁琼脂胰蛋白胨葡萄糖酵母浸膏肉汤（TPGYT基础? 明胶磷酸盐缓冲液TSN琼脂TBB培养基强化梭菌鉴别琼脂（DRCA）梭菌鉴别琼脂（DCA）强化梭菌培养基（RCM）强化梭菌琼脂梭状芽孢杆菌计数琼脂庖肉培养基基础庖肉培养基基础改良FM琼脂TYA培养基基础硫乙醇酸盐培养基（Brewer）碎肉肉汤基础碎肉葡萄糖肉汤基础碎肉碳水化合物肉汤基础厌氧基础肉汤厌氧基础琼脂葡萄糖血琼脂基础（新霉素葡萄糖血琼脂基CDC厌氧菌琼脂基础AN厌氧琼脂基础AN厌氧肉汤基础拟杆菌胆汁七叶苷琼脂基础（BBE）拟杆菌琼脂BDS培养基GAM肉汤表面接触碟/表面接触皿GAM半固体培养基GAM半固体培养基（不含葡萄糖）GAM琼脂改良GAM肉汤基础改良GAM琼脂基础Wilkins-Chalgren厌氧菌琼脂Wilkins-Chalgren厌氧菌肉汤厌氧菌肉汤MIC苛养厌氧菌肉汤苛养厌氧菌琼脂普通啤酒琼脂（UBA培养基）改良NBB琼脂基础需氧-厌氧菌琼脂培养基厌氧菌琼脂Brewer厌氧菌琼脂厌氧肉肝汤培养基Schaedler琼脂Schaedler肉汤CHO培养基基础抗生素检定培养基Ⅰ号(低pH)(pH6.5-6.6) 抗生素检定培养基Ⅰ号(高pH)(pH7.8-8.0) 抗生素检定培养基Ⅱ号(低pH)(pH6.5-6.6) 抗生素检定培养基Ⅱ号(高pH)(pH7.8-8.0) 抗生素检定培养基Ⅲ号抗生素检定培养基Ⅳ号抗生素检定培养基Ⅴ号抗生素检定培养基Ⅵ号抗生素检定培养基Ⅶ号抗生素检定培养基Ⅷ号抗生素检定培养基Ⅸ号Mueller-Hinton 琼脂MH肉汤MH肉汤Ⅱ（阳离子调节）四环素族检定培养基AK琼脂2号HTM培养基基础溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨培养基Iso-Sensitest 琼脂Iso-Sensitest 肉汤药敏试验琼脂药敏试验肉汤抗生素检测用培养基Ⅱ抗生素培养基1号抗生素培养基2号抗生素培养基3号抗生素培养基4号抗生素培养基5号抗生素培养基8号抗生素培养基9号抗生素培养基10号抗生素培养基11号抗生素培养基12号抗生素培养基13号抗生素培养基19号抗生素培养基32号抗生素培养基34号抗生素培养基35号抗生素培养基36号抗生素培养基39号抗生素培养基40号抗生素培养基41号MS培养基MS培养基MS培养基（1/2蔗糖、不含琼脂）MS大量元素B5培养基H培养基MT培养基KC培养基GD基本培养基霍格兰氏营养液DCR培养基支原体肉汤培养基精氨酸支原体肉汤培养基支原体半流体培养基支原体琼脂培养基PPLO肉汤基础PPLO琼脂基础支原体肉汤基础（Frey）肺炎支原体肉汤基础解脲支原体肉汤基础解脲支原体琼脂基础TSATSAPTSAP（400万单位/L) TSAWLP TSAWLPPNANAPPCAR2ATSATSAPTSAWLP TSAWLPPTSAPTSASTTSALPTSAGTSAP80TSACNANAPR2ATSANAPCAR2ATSACTSALTHThNACNACTSAPTSASDASDAPSDASDAPSDASTSDALPSDAGSDAP80SDA玫瑰红钠琼脂玫瑰红钠琼脂Kovacs氏靛基质试剂脱纤维绵羊血革兰氏染色液芽孢染色液V-P试剂甲基红试剂硝酸盐还原试剂吲哚试剂瑞氏染色液姬姆萨染色液庆大霉素琼脂基础添加剂多粘菌素B（2.5万单位）25%纤维二糖溶液多粘菌素E多粘菌素B溶液氨苄青霉素溶液20%脱脂奶粉溶液CIN-1培养基基础添加剂ITC肉汤基础添加剂40%尿素溶液甘油10%醋酸铅溶液萘啶酮酸溶液吖啶黄溶液吖啶黄溶液萘啶酮酸溶液吖啶黄溶液多粘菌素B溶液头孢他啶溶液吖啶黄溶液萘啶酮酸溶液柠檬酸铁铵溶液吖啶黄溶液萘啶酮酸溶液多粘菌素E放线菌酮溶液吖啶黄溶液萘啶酮酸溶液拉氧头孢溶液β-苯乙醇吖啶黄溶液放线菌酮溶液吖啶黄溶液放线菌酮溶液1:800三氮化钠溶液0.05%TTC溶液羧苄青霉素溶液0.5%TTC溶液头孢磺啶溶液新生霉素储备液新生霉素储备液亚碲酸钾溶液头孢克肟溶液万古霉素溶液1%TTC溶液Bolton肉汤基础添加剂无菌裂解脱纤维绵羊血Bolton增菌培养基基础添加剂弯曲菌分离琼脂添加剂(头孢哌酮、两性霉? FBP溶液改良Skirrow琼脂基础添加剂改良CCDA培养基基础添加剂Campy-Cefex 琼脂培养基基础添加剂改良Campy-Cefex 琼脂培养基基础添加剂改良Camp-BAP琼脂基础添加剂A改良Camp-BAP琼脂基础添加剂B0.1%溶菌酶溶液胰酪胨大豆多粘菌素肉汤添加剂莫匹罗星锂盐储备液β-苯乙醇放线菌酮溶液吐温80L-半胱氨酸盐酸溶液10%乳糖溶液Middlebrook OADC增菌液Middlebrook ADC增菌液Dubos肉汤基础添加剂Dubos油酸琼脂基础添加剂多粘菌素B溶液双抗巧克力琼脂添加剂淋病奈瑟菌增菌培养基添加剂IsoVitaleX 添加剂V-C-N 抑菌剂三甲氧苄胺嘧啶乳酸盐布鲁氏菌选择性添加剂改良布鲁氏菌选择性添加剂碘溶液0.1%煌绿溶液新生霉素溶液。
常用培养基配制
常用培养基参考文献1.Atlas, R.M., Handbook of Microbiological Media, second edition, Ed. Parks,L.C., CRC Press, N.Y., 1997.2.Sambrook, J., et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition,Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, A1.2-A2.12, 2001.常用储存液参考文献1.Atlas, R.M., Handbook of Microbiological Media, second edition, Ed. Parks,L.C., CRC Press, N.Y., 1997.2.Sambrook, J., et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition,Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, A1.2-A2.12, 2001.常用缓冲液10X 磷酸盐缓冲液(储存液) (PBS) /升终1 X浓度NaCl 80.0 g 137 mMKCl 2.0 g 2.7 mMNa2HPO414.4 g 100 mMKH2PO42.7 g 2 mMH2O 至800 mlHCl 至pH 7.4H2O 至1升20X SSC /升终1 X浓度NaCl 175.3 g 150 mMNa3citrate x H2O 88.2 g 15 mMH2O 至800 ml 1M HCl调节pH值至7.0Tricine 179.2 g 0.1 MSDS 10.0 g 0.1% (w/v) O 至1升H2稀释溶液的pH至8.350X TAE (Tris-醋酸-EDTA)电泳缓冲液/升终1 X浓度Tri 碱242.0 g 40 mM冰醋酸57.1 ml 20 mM0.5 M EDTA (pH 8.0) 100 ml 2% mMO 至1升H2稀释溶液的pH大约为~8.510X TBE (Tris-硼酸-EDTA)电泳缓冲液/升终1 X浓度Tri 碱108.0 g 90 mM硼酸55.0 g 90 mM0.5 M EDTA (pH 8.0) 40 ml 2% mMHO 至1升210X TPE (Tris-磷酸-EDTA)电泳缓冲液/升终1 X浓度Tri 碱108.0 g 90 mM磷酸(85%) 15.5 ml 23 mM0.5 M EDTA (pH 8.0) 40 ml 2% mMO 至1升H2TE (Tris-EDTA) 缓冲液pH 7.4, 7.6或8.0 /升终1 X浓度参考文献1.Atlas, R.M., Handbook of Microbiological Media, second edition, Ed. Parks,L.C., CRC Press, N.Y., 1997.2.Sambrook, J., et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition,Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, A1.2-A2.12, 2001.常用缩写下面红色字体为赠送的个人总结模板，不需要的朋友下载后可以编辑删除xx年电气工程师个人年终总结模板根据防止人身事故和电气误操作事故专项整治工作要求，我班针对现阶段安全生产工作的特点和重点，为进一步加强落实安全工作，特制定了防止人身事故和防电气误操作事故的(两防)实施细则。
常用培养基概念及配方
LB培养基：是微生物学实验中最常用的培养基，用于一般细菌培养，特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。
用于培养大肠杆菌、枯草杆菌等细菌，分为液态培养基和加入琼脂制成的固态培养基。
加入抗生素的LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。
PＤA培养基:马铃薯葡萄糖琼脂培养基,即Ｐｏtａto Ｄeｘtrose Ａgar (Mediｕm），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。
宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。
改良MＣ培养基:用于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数;原理：大豆蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源;乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶解,以辨别乳酸菌；琼脂是培养基的凝固剂;中性红为ｐH指示剂。
MRS培养基:乳酸菌培养基,由多种成分组成,适用于乳酸菌的生长,用来分离培养乳酸菌的一类培养基，一种常用的培养基，宜培养分离乳酸菌。
由于该培养基十分适于乳酸菌的生长,而且抑制其他菌的生长,因此具有分离乳酸菌的功能。
当乳酸菌长成后在培养基上显黄色，之后会变淡黑色。
以此分离乳酸菌。
乳酸菌：凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。
这是一群相当庞杂的细菌，目前至少可分为1８个属,共有２０0多种。
除极少数外,其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。
目前已被国内外生物学家所证实，肠内乳酸菌与健康长寿有着非常密切的关系。
乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。
常见菌种有双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和嗜酸乳杆菌等自配高浓度污水：葡萄糖5550 mg/L+(NＨ4)2SO４，11７0 mg／L+KH2ＰO4，170 mg／L＋CＯD为500０mg／L。
自配污水:葡萄糖555 mg/L+(NH4)２SＯ４,１1７mg／Ｌ＋ＫH2PO4１７mg/Ｌ＋CaC12 0，0８ｍg/L+ＭgSＯ4,1，５34 mg/L+NａＨCＯ3 550．８ mg/L+FeC1３·6H2Ｏ0.2５ mg／L+C0D 50０mｇ／L+氨氮为30 mg/L．一、ＬB培养基配制1升ＬＢ培养培养基需:蛋白胨10g/L；酵母粉５ｇ/L、Naｃl１0 ｇ／L、单/双去离子水、琼脂15~2０g／L（配制液体培养基不需要加，配制固体培养基时加入)。
一株高效促生菌株的分离筛选与发酵
山东农业大学学报(自然科学版),2022,53(6):825-831VOL.53NO.62022 Journal of Shandong Agricultural University(Natural Science Edition)doi:10.3969/j.issn.1000-2324.2022.06.002一株高效促生菌株的分离筛选与发酵条件初探杜洪波,巩杰,高婷,李传荣*山东农业大学林学院,山东泰安271018摘要:为筛选能有效促进植物生长的促生细菌，从山东省泰安市泰山山脉常年生长植株根际土壤中分离获得一株芽孢杆菌TG-5。
通过形态学特征和16S rRNA分析，将其鉴定为苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）。
采用NBRIP 培养基对溶磷能力进行测定，结果表明：苏云金芽孢杆菌TG-5对磷酸钙培养基溶磷效果较好，与对照相比，该菌株溶磷效率是其他菌株3倍以上，最高达10.7倍以上。
通过对该菌株固体发酵条件初探，发现发酵培养基主要成分玉米粉和大豆粉的最佳配比为2:3、碳氮源分别为玉米粉和大豆粉时生物量最大。
上述试验证明苏云金芽孢杆菌TG-5具有较好的促生应用潜力，可进一步扩大培养。
关键词:土壤微生物;苏云金芽孢杆菌;分离;发酵条件中图法分类号:S154.34文献标识码:A文章编号:1000-2324(2022)06-0825-07 Isolation and Screening of a High-efficiency Growth-promotingStrain and Preliminary Exploration for Fermentation Conditions DU Hong-bo,GONG Jie,GAO Ting,LI Chuan-rong*College of Forestry/Shandong Agricultural University,Tai’an271018,ChinaAbstract:In order to screen the growth-promoting bacteria that can effectively promote plant growth,a Bacillus TG-5was isolated from the rhizosphere soil of perennial plants in Taishan Mountains,Tai'an City,Shandong Province.It was identified as Bacillus thuringiensis by morphological features and16SrRNA analysis.The phosphorus-dissolving ability of NBRIP medium was measured.The results showed that B.thuringiensis TG-5had better phosphorus-dissolving effect on calcium phosphate medium.10.7times or more.Through preliminary exploration of the solid fermentation conditions of this strain,it was found that the optimum ratio of the main components of the fermentation medium,corn meal and soybean meal,was2:3, and the biomass was the largest when the carbon and nitrogen sources were corn meal and soybean meal,respectively.The above experiments proved that B.thuringiensis TG-5has good growth-promoting application potential and can be further expanded.Keywords:Soil microbe;Bacillus thuringiensis;isolation;fermentation condition微生物群落的多样性、相对丰度和活性在土壤有机质分解、养分循环、系统稳定性和抗干扰能力中起着核心作用[1-5]。
土壤悬液培养法研究长期施肥下花生根际解磷菌溶磷特性
土壤悬液培养法研究长期施肥下花生根际解磷菌溶磷特性孙婷婷;陈晏;樊剑波;何园球;孙波【摘要】基于长期野外定位试验和室内土壤悬液培养，研究长期不同有机与无机肥料配施（纯化肥（NPK）、化肥与厩肥配施（NPKM）和化肥与稻草秸秆配施（NPKS））下，花生根际土壤解磷菌对Ca3（PO4）2（Ca-P）、FePO4（Fe-P）和AlPO4（Al-P）的溶解特性。
结果表明：有机无机肥配施促进了解磷菌的繁殖，在Ca-P和Fe-P固体NBRIP（国际植物研究所磷酸盐生长培养基）培养基中，NPKM处理可培养解磷菌密度分别为6.15和5.80 log（cfu g-1 dry soil），高于其他处理。
在分别以Ca-P、Fe-P和Al-P为唯一磷源的NBRIP液体培养基中添加土壤悬液培养9 d发现，NPKM处理对Fe-P和Al-P的最高溶磷量分别为221.8 mg kg-1和205.5 mg kg-1；NPKS处理对Ca-P的溶解有明显的优势。
相比于单一菌株，解磷菌溶磷能力无绝对优势，但更能反映田间复杂条件下实际溶磷效果。
通过土壤悬液培养法，从微生物群体角度发现：长期无机肥和厩肥配施更能促进花生根际解磷菌的繁殖以及对无机磷的溶解，从而改善土壤缺磷状况，提高花生生物量和产量。
%Objective]The study was oriented to explore characteristics of phosphate-dissolving microbial(PDM)in peanut rhizosphere dissolving Ca3(PO4)2(Ca-P),FePO4(Fe-P)and AlPO4 (Al-P)as affected by fertilization in a 28-year long-term fertilization field experiment designed to have three fertilization treatments,i.e. NPK(pure chemical fertilizer-NPK),NPKM(combined fertilization of chemical fertilizer and pig manure)and NPKS(combined fertilization of chemical fertilizer and rice straw)in the red soil region. [Method]Soil samples were collected from the three treatments of the long-term field experiment for preparation of soilsuspensions with NBRIP(National Botanical Research Institute Phosphate)(containing 10 g L-1 glucose,2.5 g L-1 MgCl2,0.25 g L-1 MgSO4-7H2O,0.2 g L-1 KCl,1 g L-1 (NH4)2SO4,15 g L-1 agar,pH 7.0,and 5g L-1 Ca3(PO4)2 for the Ca-P test,4.86 g L-1 FePO4 for the Fe-P test,and3.93 g L-1AlPO4 for the Al-P test),separately. Then the suspensions were incubated in lab and analyzed for variation of available phosphorus(AP)in and pH of the suspensions relative to treatment of the long-term fertilization experiment. In the experiment field of acidic soil,N,P and K was applied at a rate of 110 kg hm-2,29 kg hm-2,142 kg hm-2 in the form of urea,(NH4)2HPO4 andKCl,respectively, and combined fertilization was done at a ratio of 7∶3 on N input basis(chemical fertilizer and composted pig manure or straw). Each fertilization treatment had three replicates,34.6 cm2 in plot size. The plots were laid out randomly and separated with cement boards(20 cm above ground,30 cm below ground).[Result]Results show that the treatments of combined fertilization stimulated propagation of PDM. In Treatments NPKM of the Ca-P and Fe-P types,PDM was 6.15 and5.80 log(cfu g-1 dry soil)in density, respectively,higher than in all the other treatments. Among the treatments,Treatment NPKM was the highest inphosphorus solubilizing capacity and reached up to 221.8 mg kg-1 in Fe-P and 205.5 mg kg-1 in Al-P, or 134.6%~144.6% and 10.48%~153.2% higher than that in the other two treatments after 3 and 5 days of incubation,whileTreatment NPKS was unique in ability to dissolve Ca-P,which was 21.33% and 24.57%higher than that in Treatment NPKM and NPK. Comparing to a single strain of bacteria,PDM did not showany absolute advantages,but it did reflect the real phosphate-dissolving effect under complicated field conditions and the effects of different fertilization treatments on phosphate-dissolving bacteria groups.[Conclusion]Therefore,it is found that long-term combined fertilization is more capable of stimulating propagation of PDM groupsand hence dissolving more inorganic phosphorus in peanut rhizosphere soil. Consequently,soil P supply is improved and biomass/yield of peanut raised.【期刊名称】《土壤学报》【年(卷),期】2017(054)001【总页数】10页(P227-236)【关键词】有机肥与无机肥配施;土壤悬液培养法;解磷微生物;有效磷;pH【作者】孙婷婷;陈晏;樊剑波;何园球;孙波【作者单位】中国科学院南京土壤研究所，南京 210008; 中国科学院大学，北京100049;中国科学院南京土壤研究所，南京210008; 中国科学院红壤生态实验站，江西鹰潭 335211;中国科学院南京土壤研究所，南京 210008; 中国科学院红壤生态实验站，江西鹰潭 335211;中国科学院南京土壤研究所，南京 210008; 中国科学院红壤生态实验站，江西鹰潭 335211;中国科学院南京土壤研究所，南京210008; 中国科学院红壤生态实验站，江西鹰潭 335211【正文语种】中文【中图分类】S154.39磷是植物生长必不可少的一种大量元素。
NBRIP培养基(解磷培养基)
NBRIP 培养基(解磷培养基)简介：植物根际存在各种微生物，2-5%的细菌能促进植物生长，增加作物产量，被称为根际促生细菌(PGPR)，植物根际促生细菌的研究对开发植物专化型微生物菌剂，促进农作物增产增收有重要意义。
Leagene NBRIP 培养基(解磷培养基)主要由葡萄糖、氯化镁、硫酸镁、氯化钾、磷酸钙等组成，经无菌处理，该试剂不含ACC(又称1-氨基羰酰-1-环丙烷羧酸)。
NBRIP 培养基多用于菌株液体溶磷能力的测定。
该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：材料：1、 无菌离心管或培养器皿2、 接种环3、 摇床4、 比色杯5、 分光光度计步骤(仅供参考)：1、 种子液的制备：将待测菌种依次接种至NBRIP-P 培养基中，置于摇床振摇培养，获得对数生长期的菌液，以备后续接种使用。
2、 取无菌离心管或培养器皿，加入适量NBRIP 培养基(解磷培养基)，将活化好的菌株接种于NBRIP 培养基(解磷培养基)。
3、 置于摇床振摇培养。
4、 取菌液，离心，取上清液加入l 无菌水，滴加2滴二硝基苯酚作为显色剂，再滴入几滴使溶液刚好呈黄色，再用调至无色。
5、 加入钼锑抗显色试剂，补水至，摇匀，静置，用分光光度计测定吸光度值，同时以未接种的空白培养基作为相应处理的作为对照。
6、 通过磷标准曲线，可查出接菌处理各培养基中可溶性磷的浓度。
编号 名称 CM0323 Storage NBRIP 培养基(解磷培养基) 500ml 4℃ 使用说明书 1份注意事项：1、注意无菌操作，避免微生物污染。
2、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
相关：编号名称CC0007 磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)CM0004 LB培养基DC0032 Masson三色染色液DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA)NR0001 DEPC处理水(0.1%)PS0013 RIPA裂解液(强)TC1167 尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)。
固氮菌、解磷菌的分离筛选
精品固氮菌、解磷菌的分离筛选一、目的要求:1、掌握选择培养基的筛选原理。
2、掌握固氮菌、解磷菌的分离方法。
3、学习平板划线分离法。
二、实验原理：选择培养基是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理化学抗性而设计的培养基，利用这种培养基可以将所需的微生物从混杂的微生物中分离出来。
固氮菌可以利用空气中的氮作为氮源进行自身代谢，根据这一原理可以利用无氮培养基将固氮菌从混合菌中分离出来。
解磷菌可以在含有难溶性磷酸盐或有机磷的固体培养基产生溶磷圈，根据这一特性可以分离出解磷菌。
同样，可以根据解钾菌的生理特性选择合适的培养基将其分离出来。
在本实验中，分离固氮菌我们采用阿须贝氏( Ashby ) 培养基，分离解磷菌采用无机磷培养基。
选择培养基的配方如下Ashby 培养基：磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.2 g硫酸镁(MgS04 7H2O) 0.2 g氯化钠(NaCI) 0.2 g碳酸钙(CaC03) 5.0 g甘露醇(C6H14O6) 10.0 g硫酸钙(CaSO4 2H2O) 0.1 g精品18.0 g1000 mL6.8 〜7.0 10.0 g 0.5 g 0.3 g 0.3 g 0.3 g 0.03 g0.03 g10 g 18 g 1000 ml无机磷培养基、无菌水、土壤样品(自带) 2、 仪器及其它用具：培养皿、玻璃棒、烧杯、量筒、天平、高压蒸汽灭菌锅、 生化培养箱、超净工作台、接种环、酒精灯、 PH 试纸等。
四、方法步骤 :培养基 的配制1、根据要求，配置好三种培养基，115 C 条件下高压灭菌25min琼脂蒸馏水 pH 无机磷培养基：葡萄糖(NH ?)?SO?NaClKClMgSO ??7H ?OFeSO??7H ?OMnSO ?? 4H?O Ca?(PO?)?琼脂蒸馏水三、 实验材料 : 1、 试剂及样品： Ashby 培养基、精品2、将灭菌后的培养基在超净工作台倒平板，备用。
样品处理3、在离心管中，将自带土壤样品按5g 土样\10ml无菌水的比例溶解，土壤样品要充分溶解，使土壤中的微生物全部溶解在无菌水中。
科研用培养基使用方法
科研用培养基使用方法北京华越洋生物LB Lennox培养基粉剂1L 培养基40% 室温,24个月细菌培养,常与盐敏感抗生素一起使用主要由酵母提取物、胰蛋白胨、氯化钠等组成,其中氯化钠含量比LB Miller培养基减半。
如要求无菌，可高压灭菌15～21min。
LB Lennox培养基500ml 培养基40% 4℃,6个月细菌培养,常与盐敏感抗生素一起使用无菌，经高压灭菌处理。
主要由酵母提取物、胰蛋白胨、氯化钠、去离子水组成,其中氯化钠含量比LB Miller培养基减半。
LB培养基粉剂1L 培养基40% 室温,24个月最经典、最通用的细菌培养液体培养基,本配方为LB Miller的配方。
leagene推荐用于大肠杆菌培养。
主要由酵母提取物、胰蛋白胨、氯化钠等组成,如要求无菌，可高压灭菌15～20min。
LB培养基500ml 培养基40% 4℃,6个月最经典、最通用的细菌培养液体培养基,本配方为LB Miller的配方。
leagene推荐用于大肠杆菌培养。
无菌溶液。
主要由酵母提取物、胰蛋白胨、氯化钠等组成。
经高压灭菌处理。
LB冷冻缓冲液100ml 培养基40% 4℃,6个月保存细菌的培养基无菌溶液。
主要由LB培养基、硫酸铵、甘油等组成,经过滤除菌处理。
LB Lennox固体培养基粉剂1L 培养基40% 室温,24个月细菌培养,常与盐敏感抗生素一起使用主要由酵母提取物、胰蛋白胨、氯化钠等组成,其中氯化钠含量比LB Miller培养基减半。
如要求无菌，可高压灭菌15～21min。
LB固体培养基粉剂1L 培养基40% 室温,24个月最经典、最通用的细菌培养液体培养基,本配方为LB Miller的配方。
leagene推荐用于大肠杆菌培养。
主要由酵母提取物、胰蛋白胨、氯化钠等组成,如要求无菌，可高压灭菌15～20min。
GYT培养基500ml 培养基40% 4℃,6个月大肠杆菌的液体培养基无菌溶液。
主要由甘油、酵母提取物、胰蛋白胨等组成,经过滤除菌处理。
146种常见培养基的配方
146种常见培养基的配方培养基是微生物学实验中常用的一种重要实验工具，通过调配合适的培养基，可以提供微生物生长所需的营养物质，从而促进微生物菌落的繁殖和生长。
下面将介绍一些常见的培养基配方，涵盖了常用的总结培养基、选择性培养基和不同微生物类群的专用培养基。
1.琼脂肉汤培养基（NB）-牛肉脱脂粉5g-酵母提取物2.5g-琼脂12g- 蒸馏水 1000ml2.大肠杆菌复合培养基（LB）-液体培养基-蛋白胨10g-酵母提取物5g-NaCl5g- 蒸馏水 1000ml-琼脂板-蛋白胨10g-酵母提取物5g-NaCl5g-琼脂15g- 蒸馏水 1000ml3. 肠杆菌选择性琼脂培养基（MacConkey琼脂培养基）-蛋白胨17g-紫胆汁盐1.5g-普鲁士蓝盐1.5g-琼脂12g- 蒸馏水 1000ml4. 脱氧胆盐琼脂培养基（Deoxycholate Agar）-脱氧胆酸钠20g-普鲁士蓝盐0.8g-蛋白胨7.5g-琼脂12g- 蒸馏水 1000ml5.阿米巴选择性琼脂培养基（KV培养基）- 鸡蛋清 20ml- 中性红溶液 12ml-NaCl0.5g-纤维素0.25g- 盐酸 1ml-琼脂15g- 蒸馏水 1000ml6. 革兰氏阳性菌选择性琼脂培养基（Mannitol Salt Agar）-蔗糖10g-氯化钠75g-酵母提取物5g-麦芽提取物1g-琼脂15g- 蒸馏水 1000ml7. 维生素富集琼脂培养基（Burkholder's Basal Salt Medium）-NaNO31g-KCl0.5g-MgSO4·7H2O0.2g-CaCl2·2H2O0.02g-FeSO4·7H2O0.01g-琼脂14g- 蒸馏水 1000ml8. 三氯化铁琼脂培养基（Cetrimide Agar）-硫酸镁0.8g-氯化钴0.05g-氯化锌0.01g-氯化亚铁0.03g-三氯化铁0.03g-比色琼脂糖15g- 过滤蒸馏水 1000ml9. 库氏四甲基铵琼脂培养基（Chapman Agar）-高氯酸钠5g-脲7.5g-酵母提取物2g-海藻酸钠20g-紫胆汁盐0.25g-琼脂12g- 蒸馏水 1000ml10. 还原格兰氏琼脂培养基（Reduced Gram-negative Broth）-蛋氨酸0.5g-异亮氨酸0.5g-半胱氨酸0.5g-菜碱0.5g-胀氨酸0.5g-琼脂7g- 蒸馏水 1000ml这些是其中的一部分常见的培养基配方，涵盖了常用的总结培养基、选择性培养基和不同微生物类群的专用培养基。
一株硝基还原假单胞菌的溶磷特性及对碳循环相关基因的影响
江苏农业学报(ＪｉａｎｇｓｕＪ.ｏｆＡｇｒ.Ｓｃｉ.)ꎬ２０２３ꎬ３９(５):１１５１￣１１５８ｈｔｔｐ://ｊｓｎｙｘｂ.ｊａａｓ.ａｃ.ｃｎ乔志伟ꎬ刘㊀超ꎬ王㊀红.一株硝基还原假单胞菌的溶磷特性及对碳循环相关基因的影响[Ｊ].江苏农业学报ꎬ２０２３ꎬ３９(５):１１５１￣１１５８.ｄｏｉ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１０００￣４４４０.２０２３.０５.００７一株硝基还原假单胞菌的溶磷特性及对碳循环相关基因的影响乔志伟１ꎬ２ꎬ３ꎬ㊀刘㊀超２ꎬ㊀王㊀红２(１.安顺学院农学院ꎬ贵州安顺５６１０００ꎻ２.安顺学院资源与环境工程学院ꎬ贵州安顺５６１０００ꎻ３.贵州省高校乡村振兴研究中心ꎬ贵州安顺５６１０００)收稿日期:２０２２￣０９￣２９基金项目:贵州省科技计划项目(黔科合基础２０１８１４０１)ꎻ贵州省普通高等学校科技拔尖人才支持计划项目(黔教合ＫＹ字２０１７０９１)ꎻ贵州省教育厅青年科技人才成长项目(黔教合ＫＹ字２０１７２８９)作者简介:乔志伟(１９８５－)ꎬ男ꎬ山西大同人ꎬ博士ꎬ副教授ꎬ主要从事土壤溶磷细菌筛选及应用研究ꎮ(Ｅ￣ｍａｉｌ)７０４７２５６４６＠ｑｑ.ｃｏｍ㊀㊀摘要:㊀为提高黔中黄壤区农田土壤磷素的有效性ꎬ以从该地区筛选的１株具有溶磷能力的硝基还原假单胞菌(ＱＨＲ￣９)为试验菌株ꎬ通过室内摇瓶培养试验研究菌株的溶磷特性ꎮ设置对照㊁ＱＨＲ￣９㊁ＱＨＲ￣９＋葡萄糖㊁ＱＨＲ￣９＋组合糖类等４个处理ꎬ通过室外土壤培养试验研究菌株在土壤中的作用及对碳循环相关基因的影响ꎮ室内摇瓶培养试验结果表明ꎬ培养第７ｄꎬＱＨＲ￣９对磷酸三钙㊁磷酸铝㊁磷矿粉的溶解能力分别为６４５ ８２ｍｇ/Ｌ㊁２６９ １７ｍｇ/Ｌ㊁２７２ ４５ｍｇ/ＬꎻＱＨＲ￣９在１０种不同碳源条件下溶磷能力为２８ ０６~６４５ ８２ｍｇ/Ｌꎬ在１０种组合碳源条件下的溶磷能力为９２ ３１ｍｇ/Ｌꎮ室外土壤培养试验结果表明ꎬＱＨＲ￣９可以显著增加土壤有效磷含量㊁酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性㊁硝基还原假单胞菌丰度等ꎬＱＨＲ￣９＋葡萄糖与ＱＨＲ￣９＋组合糖类处理上述４项指标均高于ＱＨＲ￣９处理ꎻ土壤ｐＨ以ＱＨＲ￣９＋葡萄糖处理最低ꎬ与ＱＨＲ￣９㊁ＱＨＲ￣９＋组合糖类处理差异不显著ꎻＱＨＲ￣９处理微生物碳循环糖基转移酶(ＧＴ)和辅助活性酶(ＡＡ)基因相对丰度与对照相比降低ꎬ糖苷水解酶(ＧＨ)基因相对丰度增加ꎬＱＨＲ￣９＋葡萄糖和ＱＨＲ￣９＋组合糖类处理加剧了这一变化趋势ꎮ相关性分析结果表明ꎬ土壤有效磷含量㊁ｐＨ㊁酸性(碱性)磷酸酶活性与微生物碳循环相关基因相对丰度均有显著或极显著相关性ꎮ关键词:㊀硝基还原假单胞菌ꎻ溶磷特性ꎻ不同碳源ꎻ碳循环基因中图分类号:㊀Ｓ１５４.３㊀㊀㊀文献标识码:㊀Ａ㊀㊀㊀文章编号:㊀１０００￣４４４０(２０２３)０５￣１１５１￣０８ＰｈｏｓｐｈｏｒｕｓｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆａＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓｓｔｒａｉｎａｎｄｉｔｓｅｆｆｅｃｔｏｎｃａｒｂｏｎｃｙｃｌｉｎｇｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓＱＩＡＯＺｈｉ￣ｗｅｉ１ꎬ２ꎬ３ꎬ㊀ＬＩＵＣｈａｏ２ꎬ㊀ＷＡＮＧＨｏｎｇ２(１.ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅꎬＡｎｓｈｕｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＡｎｓｈｕｎ５６１０００ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＲｅｓｏｕｒｃｅｓａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇꎬＡｎｓｈｕｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＡｎｓｈｕｎ５６１０００ꎬＣｈｉｎａꎻ３.ＲｕｒａｌＲｅｖｉｔａｌｉｚａｔｉｏｎＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｏｆＧｕｉｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓꎬＡｎｓｈｕｎ５６１０００ꎬＣｈｉｎａ)㊀㊀Ａｂｓｔｒａｃｔ:㊀ＴｏｉｍｐｒｏｖｅｓｏｉｌｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙｉｎｙｅｌｌｏｗｓｏｉｌａｒｅａｆａｒｍｌａｎｄｏｆｃｅｎｔｒａｌＧｕｉｚｈｏｕꎬａＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓｓｔｒａｉｎ(ＱＨＲ￣９)ｗｉｔｈｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ￣ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇａｂｉｌｉｔｙｗａｓｓｅｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍｔｈｉｓａｒｅａａｓｔｈｅｔｅｓｔｓｔｒａｉｎ.Ｔｈｅｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｓｏｌｕｂｉｌｉｚａｔｉｏｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｔｈｅｓｔｒａｉｎｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄｂｙｌａｂｏｒａｔｏｒｙｓｈａｋｉｎｇｆｌａｓｋｃｕｌｔｕｒｅｔｅｓｔ.ＯｕｔｄｏｏｒｓｏｉｌｃｕｌｔｕｒｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｗｅｒｅｃｏｎｄｕｃｔｅｄｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｓｔｒａｉｎｉｎｓｏｉｌａｎｄｉｔｓｅｆｆｅｃｔｏｎｃａｒｂｏｎｃｙｃｌｉｎｇｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓꎬｂａｓｅｄｏｎｆｏｕｒｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｗｈｉｃｈｃｏｎｔａｉｎｅｄＣＫꎬＱＨＲ￣９ꎬＱＨＲ￣９＋ｇｌｕｃｏｓｅａｎｄＱＨＲ￣９＋ｃｏｍｂｉｎｅｄｃａｒｂｏｈｙ￣１５１１ｄｒａｔｅ.ＲｅｓｕｌｔｓｏｆｌａｂｏｒａｔｏｒｙｓｈａｋｉｎｇｆｌａｓｋｃｕｌｔｕｒｅｔｅｓｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔꎬｔｈｅｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎｃａｐａｃｉｔｙｏｆＱＨＲ￣９ｔｏｔｒｉｃａｌｃｉｕｍｐｈｏｓ￣ｐｈａｔｅꎬａｌｕｍｉｎｕｍｐｈｏｓｐｈａｔｅａｎｄｇｒｏｕｎｄｐｈｏｓｐｈｏｒｉｔｅｗｅｒｅ６４５ ８２ｍｇ/Ｌꎬ２６９ １７ｍｇ/Ｌａｎｄ２７２ ４５ｍｇ/Ｌｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｏｎｔｈｅ７ｔｈｄａｙｏｆｃｕｌｔｕｒｉｎｇ.ＴｈｅｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇｃａｐａｃｉｔｙｏｆＱＨＲ￣９ｗａｓ２８.０６￣６４５.８２ｍｇ/Ｌｕｎｄｅｒｔｅｎｃａｒｂｏｎｓｏｕｒｃｅｓｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓꎬｔｈｅｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇｃａｐａｃｉｔｙｕｎｄｅｒｔｈｅｃｏｍｂｉｎｅｄｔｅｎｃａｒｂｏｎｓｏｕｒｃｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｗａｓ９２.３１ｍｇ/Ｌ.ＲｅｓｕｌｔｓｏｆｏｕｔｄｏｏｒｓｏｉｌｃｕｌｔｕｒｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔꎬＱＨＲ￣９ｃｏｕｌｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｓｏｉｌａｖａｉｌａｂｌｅｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｃｏｎｔｅｎｔꎬａｃｉｄｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙꎬａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｒｅｌａｔｉｖｅａｂｕｎｄａｎｃｅｏｆＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓｓｔｒａｉｎꎬｅｔｃ.ＵｎｄｅｒＱＨＲ￣９＋ｇｌｕｃｏｓｅｔｒｅａｔｍｅｎｔａｎｄＱＨＲ￣９＋ｃｏｍｂｉｎｅｄｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｔｒｅａｔｍｅｎｔꎬｔｈｅａｂｏｖｅｆｏｕｒｉｎｄｅｘｅｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｕｎｄｅｒＱＨＲ￣９ｔｒｅａｔｍｅｎｔ.ＵｎｄｅｒＱＨＲ￣９＋ｇｌｕｃｏｓｅｔｒｅａｔｍｅｎｔꎬｔｈｅｐＨｗａｓｔｈｅｌｏｗｅｓｔꎬａｎｄｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎＱＨＲ￣９ｏｒＱＨＲ￣９＋ｃｏｍｂｉｎｅｄｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ.ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＣＫꎬｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅａｂｕｎｄａｎｃｅｏｆｇｌｙ￣ｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ(ＧＴ)ａｎｄａｕｘｉｌｉａｒｙａｃｔｉｖｅｓ(ＡＡ)ｇｅｎｅｓｏｆｍｉｃｒｏｂｉａｌｃａｒｂｏｎｃｙｃｌｅｕｎｄｅｒＱＨＲ￣９ｔｒｅａｔｍｅｎｔｄｅｃｒｅａｓｅｄꎬｗｈｉｌｅｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅａｂｕｎｄａｎｃｅｏｆｇｌｙｃｏｓｉｄｅｈｙｄｒｏｌａｓｅｓ(ＧＨ)ｇｅｎｅｓｉｎｃｒｅａｓｅｄꎬｔｈｅｖａｒｉａｔｉｏｎｔｒｅｎｄｗａｓｅｘａｃｅｒｂａｔｅｄｂｙＱＨＲ￣９＋ｇｌｕｃｏｓｅｔｒｅａｔｍｅｎｔａｎｄＱＨＲ￣９＋ｃｏｍｂｉｎｅｄｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ.Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔꎬｓｏｉｌａｖａｉｌａｂｌｅｐｈｏｓ￣ｐｈｏｒｕｓｃｏｎｔｅｎｔꎬｐＨꎬａｃｉｄｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｏｒａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｏｒｅｘｔｒｅｍｅｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｒｅｌａｔｉｖｅａｂｕｎｄａｎｃｅｏｆｍｉｃｒｏｂｉａｌｃａｒｂｏｎｃｙｃｌｉｎｇｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:㊀Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓｓｔｒａｉｎꎻｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙꎻｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃａｒｂｏｎｓｏｕｒｃｅｓꎻｃａｒｂｏｎｃｙｃｌｅｇｅｎｅ㊀㊀磷在植物生长发育中发挥着重要的作用[１]ꎬ磷素的丰缺影响生态系统结构和功能的稳定性[２]ꎮ磷素易在土壤中累积ꎬ这是其利用率较低的重要原因ꎮ溶磷细菌可以改善土壤磷素的有效性ꎬ因此成为土壤磷素利用研究的热点方向ꎮ通过溶磷细菌的作用ꎬ对化学磷肥减量增效和增加作物产量等都有积极的效果[３￣５]ꎮ不同碳源条件下ꎬ微生物溶磷能力差异较大[６￣７]ꎬ研究溶磷细菌在不同碳源条件下的溶磷特性是其应用的前提之一ꎮ土壤溶磷细菌种类多样ꎬ芽孢杆菌㊁假单胞菌等属中许多种类的微生物都具有溶磷能力ꎬ但是关于硝基还原假单胞菌作为溶磷细菌的研究未见报道ꎮ碳是微生物有机体的能源物质ꎬ也是重要的结构物质ꎬ微生物介导的碳循环是地球物质循环的重要组成部分ꎬ其微生物驱动机制和关键功能基因是重要研究内容[８]ꎮ外源磷添加可以通过改变木质素的分解和微生物残体的分解[２]㊁土壤呼吸[９]㊁团聚体的稳定性[１０]等影响碳循环进程ꎮ土壤微生物碳循环相关基因丰度与碳合成㊁分解等有密切关系[１１]ꎬ宏基因组学及碳水化合物活性酶(ＣＡＺＹ)数据库的不断完善为全面研究微生物碳循环相关基因提供了前提条件ꎮ溶磷细菌施用增加了土壤有效磷含量ꎬ由溶磷微生物作用导致的土壤有效磷含量增加对碳循环相关基因的影响ꎬ需要进一步分析ꎬ且通过宏基因组学探讨溶磷细菌对微生物碳循环相关基因的影响鲜有研究ꎮ本研究试验菌株为具有溶磷特性的硝基还原假单胞菌ꎬ通过室内培养试验ꎬ研究其在不同碳源条件下的溶磷能力ꎻ通过土壤培养试验ꎬ设置空白㊁溶磷细菌㊁溶磷细菌＋葡萄糖㊁溶磷细菌＋组合糖类等４个处理ꎬ测定土壤养分含量㊁磷酸酶活性㊁硝基还原假单胞菌丰度㊁碳循环相关基因丰度等指标ꎬ并分析不同指标之间的相关性ꎬ以期为溶磷细菌的应用和探究溶磷细菌对土壤微生物碳循环的影响提供理论基础ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀试验菌株试验菌株为硝基还原假单胞菌ＱＨＲ￣９ꎬ来源于安顺学院微生物实验室ꎬ经鉴定为硝基还原假单胞菌ꎬ从贵州省安顺市农田土壤中分离出来ꎬ具有较强的溶磷能力ꎮ菌株１６ＳｒＤＮＡ序列分析采用引物７ｆ(５ᶄ￣ＣＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴ￣３ᶄ)㊁１５４０ｒ(５ᶄ￣ＡＧ￣ＧＡＧＧＴＧＡＴＣＣＡＧＣＣＧＣＡ￣３ᶄ)建立扩增反应体系并测序[１２]ꎬ将获得的ＤＮＡ序列输入ＧｅｎＢａｎｋꎬ用ＢＬＡＳＴ程序与数据库中的所有序列进行比对ꎬ通过ＭＥＧＡ７.０软件和Ｎｅｉｇｈｂｏｒ￣Ｊｏｉｎｉｎｇ方法[１３]进行系统发育树的构建ꎮ１.２㊀菌株溶磷特性测定１.２.１㊀菌株活化培养基(牛肉膏蛋白胨培养基)㊀牛肉膏５ ０ｇꎬ蛋白胨１０ ０ｇꎬ氯化钠５ ０ｇꎬ水１ ０Ｌꎬ调节ｐＨ６.５~７ ５ꎮ１.２.２㊀溶磷能力测定培养基(ＮＢＲＩＰ)[１４]㊀葡萄糖１０ ０ｇꎬ磷酸三钙５ ０ｇꎬ氯化镁５ ０ｇꎬ硫酸镁０ ２５２５１１江苏农业学报㊀２０２３年第３９卷第５期ｇꎬ硫酸铵０ １ｇꎬ氯化钾０ ２ｇꎻ磷酸三钙(或磷酸铝㊁磷矿粉)５ ０ｇꎬ水１ ０Ｌꎬ调节ｐＨ６ ５~７ ５ꎮ１.２.３㊀菌株的活化㊀将保存于４ħ冰箱中的菌株取出ꎬ接种在灭菌冷却后的活化培养基上培养２４ｈꎬ备用ꎮ１.２.４㊀菌株对磷酸三钙㊁磷酸铝㊁磷矿粉的溶解能力㊀将配制好的ＮＢＲＩＰ培养液分装在２５０ｍｌ三角瓶中ꎬ每瓶装培养液１００ｍｌꎬ灭菌后冷却ꎬ将１ｍｌ活化好的菌液接种于冷却后的ＮＢＲＩＰ培养液中ꎬ振荡培养ꎬ无菌操作下分别在第１ｄ㊁第３ｄ㊁第５ｄ㊁第７ｄ取培养液５ｍｌꎬ离心后取上清液测定其有效磷含量ꎬ并设置空白对照ꎮ根据接种菌株培养液有效磷含量和空白培养液有效磷含量的差值计算菌株对难溶态磷酸盐(磷酸三钙㊁磷酸铝㊁磷矿粉)的溶解能力ꎬ每个处理(包括空白对照)设置３次重复ꎮ１.２.５㊀不同碳源条件下菌株溶磷能力㊀在ＮＢＲＩＰ液体培养基中ꎬ难溶态磷为磷酸三钙ꎮ分别以鼠李糖㊁淀粉㊁蔗糖㊁乳糖㊁木糖㊁甘露醇㊁麦芽糖㊁纤维二糖㊁葡聚糖等糖类等质量替换葡萄糖ꎬ接菌(菌液与培养液体积比为１ʒ１００)振荡培养７ｄꎬ并设置空白对照ꎬ测定培养液有效磷含量ꎬ分析不同碳源条件下菌株的溶磷能力ꎮ在ＮＢＲＩＰ培养基中ꎬ以葡萄糖㊁鼠李糖㊁淀粉㊁蔗糖㊁乳糖㊁木糖㊁甘露醇㊁麦芽糖㊁纤维二糖㊁葡聚糖等１０种糖类物质组合作为碳源ꎬ各糖类质量比为１ʒ１ꎬ组合碳源含量为１０ｇ/Ｌꎬ接菌(菌液与培养液体积比为１ʒ１００)振荡培养７ｄꎬ并设置空白对照ꎬ测定培养液有效磷含量ꎬ分析组合碳源条件下菌株的溶磷能力ꎮ１.３㊀外加碳源条件下菌株土壤培养试验１.３.１㊀试验土壤㊀试验土壤采集于贵州省安顺市西秀区的农田ꎬ风干后过筛备用ꎮ土壤养分基本性质如下:ｐＨ４ ２３ꎬ碱解氮含量１３７ １２ｍｇ/ｋｇꎬ有效磷含量７９ ６５ｍｇ/ｋｇꎬ速效钾含量３１８ １０ｍｇ/ｋｇꎬ全氮含量２ ４５ｇ/ｋｇꎬ全磷含量０ ９１ｇ/ｋｇꎬ全钾含量２８ ０２ｇ/ｋｇꎬ有机质含量３９ ０３ｇ/ｋｇꎮ１.３.２㊀试验设计㊀将采集的土样风干ꎬ过筛后装盆ꎬ每盆装土１ ５ｋｇꎬ共设置４个处理ꎬ分别为对照(ＣＫ)㊁ＱＨＲ￣９㊁ＱＨＲ￣９＋葡萄糖(ＱＨＲ￣９Ｐ)㊁ＱＨＲ￣９＋组合糖类(ＱＨＲ￣９Ｃ)ꎬ每个处理重复３次ꎮ其中ＱＨＲ￣９菌液接种量为１％(菌液与土壤体积质量比)ꎬ组合糖类为葡萄糖㊁淀粉㊁乳糖㊁木糖㊁甘露醇㊁麦芽糖㊁蔗糖㊁纤维二糖㊁鼠李糖㊁葡聚糖等１０种糖类按照质量等比配制而成ꎬ试验设计见表１ꎮ㊀㊀将上述物质加入塑料盆后与土壤充分混匀ꎬ放置在室外ꎬ培养时间为６０ｄꎬ定期管理ꎮ培养结束后ꎬ采集表层新鲜土样５０ｇ左右ꎬ除去杂草等杂质后装于塑封袋中ꎬ样品采集完成后放在干冰箱中寄送至生工生物工程(上海)股份有限公司ꎬ进行土壤宏基因组测序ꎻ剩余的土样风干后过筛ꎬ进行土壤养分和磷酸酶活性的测定ꎮ表１㊀试验设计Ｔａｂｌｅ１㊀Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｄｅｓｉｇｎ处理㊀㊀㊀不同物质加入量菌液(ｍｌ/ｋｇ)葡萄糖(ｇ/ｋｇ)组合糖(ｇ/ｋｇ)ＣＫ０００ＱＨＲ￣９１０００ＱＨＲ￣９Ｃ１０１００ＱＨＲ￣９Ｐ１００１０１.３.３㊀土壤养分和磷酸酶活性测定㊀土壤有效磷含量采用０ ５ｍｏｌ/Ｌ碳酸氢钠溶液浸提后ꎬ使用钼锑抗比色法测定[１５]ꎻｐＨ通过ｐＨ计直接测定(水土质量比为１ʒ１)[１５]ꎻ土壤有机质含量采用重铬酸钾容量法[１５]测定ꎻ土壤酸性或碱性磷酸酶活性采用磷酸苯二钠比色法[１６]测定ꎮ１.３.４㊀土壤宏基因组测定１.３.４.１㊀土壤ＤＮＡ提取和宏基因组测序㊀称取土样０ ５ｇꎬ使用Ｅ.Ｚ.Ｎ.ＡＭａｇ￣ＢｉｎｄＳｏｉｌＤＮＡＫｉｔ试剂盒ꎬ按照说明书上的方法提取总群落基因组ＤＮＡꎬ使用Ｑｕｂｉｔ４.０测量ＤＮＡ浓度ꎮ取５００ｎｇＤＮＡ样品进行宏基因组测序ꎬ采用ＩｌｌｕｍｉｎａＮｏｖａＳｅｑ６０００高通量测序平台测序ꎮ１.３.４.２㊀宏基因组序列分析方法㊀测得的原始数据使用Ｔｒｉｍｍｏｎｍａｔｉｃ进行过滤处理ꎬ默认参数值为Ｑ２０ꎬ去除得分值低于Ｑ２０的质量序列ꎬ得到Ｃｌｅａｎ数据ꎻ使用基于ＤｅＢｒｕｉｊｎｇｒａｐｈ原理的拼接软件ＩＤ￣ＢＡ＿ＵＤ对优质的ｒｅａｄｓ进行拼接组装ꎬ获得ｃｏｎｔｉｇｓꎻ选择１００ｂｐ以上的基因ꎬ翻译出蛋白质序列ꎮ将所有预测出来的基因序列ꎬ用ＣＤ￣ＨＩＴ软件进行聚类(设置参数为９５％ｉｄｅｎｔｉｆｙ㊁９０ｃｏｖｅｒａｇｅ)ꎬ构建非冗余基因集[１７]ꎮ１.３.４.３㊀物种丰度分析方法㊀将基因与美国国立生３５１１乔志伟等:一株硝基还原假单胞菌的溶磷特性及对碳循环相关基因的影响物技术信息中心(ＮＣＢＩ)数据库进行ＢＬＡＳＴｐ同源性比对ꎬ得到物种相关信息及丰度信息ꎮ１.３.４.４㊀碳水化合物活性酶注释分析方法㊀通过ＨＭＭＥＲ３将翻译出的蛋白质序列与ＣＡＺＹ数据库比对ꎬ得到其相应的碳水化合物活性酶注释ꎬ筛选条件Ｅｖａｌｕｅ<１ˑ１０－５ꎬ并统计ＣＡＺＹ各功能层级的丰度ꎮ１.４㊀数据处理使用Ｅｘｃｅｌ２０１６和ＳＰＳＳ２０.０等软件进行数据处理和显著性分析ꎮ２㊀结果与分析２.１㊀ＱＨＲ￣９同源性分析及系统发育树菌株ＱＨＲ￣９的１６ＳｒＤＮＡ序列长度为１４７７ｂｐꎬ对其进行序列分析ꎬ结果(图１)表明ꎬＱＨＲ￣９与硝基还原假单胞菌[Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓｓｔｒａｉｎ(ＮＲ０４２４３５.１)]同源性最接近ꎮ图１㊀ＱＨＲ￣９系统发育树Ｆｉｇ.１㊀ＱＨＲ￣９ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅ２.２㊀ＱＨＲ￣９溶磷特性２.２.１㊀ＱＨＲ￣９对磷酸三钙㊁磷酸铝㊁磷矿粉等的溶解能力㊀ＱＨＲ￣９对磷酸三钙㊁磷酸铝㊁磷矿粉等的溶解能力见表２ꎮ由表２可知ꎬＱＨＲ￣９对磷酸三钙㊁磷酸铝㊁磷矿粉的溶解能力在第１~５ｄ随时间延长呈现显著增加的趋势ꎬ第７ｄ菌株溶磷能力趋于稳定ꎮＱＨＲ￣９在第７ｄ对磷酸三钙㊁磷酸铝㊁磷矿粉的溶解能力分别为６４５ ８２ｍｇ/Ｌ㊁２６９ １７ｍｇ/Ｌ㊁２７２ ４５ｍｇ/Ｌꎬ说明ＱＨＲ￣９菌株对各种难溶态磷酸盐具有较强的溶解能力ꎮ表２㊀ＱＨＲ￣９对磷酸三钙㊁磷酸铝㊁磷矿粉的溶解能力Ｔａｂｌｅ２㊀ＳｏｌｕｂｉｌｉｔｙｏｆＱＨＲ￣９ｔｏｔｒｉｃａｌｃｉｕｍｐｈｏｓｐｈａｔｅꎬａｌｕｍｉｎｕｍｐｈｏｓｐｈａｔｅａｎｄｇｒｏｕｎｄｐｈｏｓｐｈｏｒｉｔｅ菌株培养时间(ｄ)对难溶态磷酸盐的溶磷能力(ｍｇ/Ｌ)磷酸三钙磷酸铝磷矿粉１３０１.８１ʃ１６.６０ｃ９７.６７ʃ４.０４ｃ６１.６４ʃ１２.２８ｃ３５０３.０９ʃ２０.０７ｂ１１７.９９ʃ８.６８ｂ９８.５１ʃ１３.５１ｂ５６５８.０２ʃ３５.０６ａ２７１.３２ʃ２０.９０ａ２６６.０４ʃ１３.１９ａ７６４５.８２ʃ２３.８７ａ２６９.１７ʃ２２.９８ａ２７２.４５ʃ１５.５５ａ同列数据后不同小写字母表示在０.０５水平上差异显著ꎮ２.２.２㊀不同碳源条件下ＱＨＲ￣９的溶磷特性㊀由表３可知ꎬ在不同碳源条件下ＱＨＲ￣９溶磷能力差异较大ꎬ菌株以葡萄糖为碳源的溶磷能力显著高于其他糖类ꎬ以乳糖为碳源时溶磷能力次之ꎬ为２０１ ８２ｍｇ/Ｌꎬ以淀粉㊁甘露醇㊁蔗糖㊁木糖㊁麦芽糖㊁鼠李糖㊁葡聚糖㊁纤维二糖等为碳源ꎬ其溶磷能力均在１００ ００ｍｇ/Ｌ以下ꎬ菌株对这些糖类的利用率较低ꎮＱＨＲ￣９在１０种碳源条件下溶磷能力范围在２８ ０６~６４５ ８２ｍｇ/Ｌꎬ最大变化幅度为６１７ ７６ｍｇ/ＬꎮＱＨＲ￣９在组合碳源条件下的溶磷能力为９２ ３１ｍｇ/Ｌꎬ比以葡萄糖为单独碳源时的溶磷能力降低了８５ ７１％ꎮ２.３㊀ＱＨＲ￣９土壤培养试验２.３.１㊀土壤养分含量㊀由表４可知ꎬＱＨＲ￣９各处理土壤有效磷含量均显著高于ＣＫꎬＱＨＲ￣９㊁ＱＨＲ￣９Ｐ㊁ＱＨＲ￣９Ｃ处理土壤有效磷含量分别比ＣＫ增加了９ ７４ｍｇ/ｋｇ㊁２０ ８１ｍｇ/ｋｇ㊁１７ １６ｍｇ/ｋｇꎬ施用ＱＨＲ￣９对土壤有效磷含量的增加效果显著ꎬＱＨＲ￣９Ｐ㊁ＱＨＲ￣９Ｃ处理土壤有效磷含量显著高于ＱＨＲ￣９ꎮ㊀㊀各处理土壤ｐＨ值为４ １１~４ ２０ꎬＱＨＲ￣９各处理土壤ｐＨ差异不显著ꎮＱＨＲ￣９处理土壤有机质含量为３８ ８１ｍｇ/ｋｇꎬ与对照差异不显著ꎬＱＨＲ￣９Ｐ㊁ＱＨＲ￣９Ｃ处理土壤有机质含量分别为４０ ５９ｍｇ/ｋｇ㊁４０ ８９ｍｇ/ｋｇꎬ显著高于ＱＨＲ￣９ꎬ但２个处理之间差异不显著ꎮ４５１１江苏农业学报㊀２０２３年第３９卷第５期表３㊀不同碳源条件下ＱＨＲ￣９对磷酸三钙的溶解能力Ｔａｂｌｅ３㊀ＳｏｌｕｂｉｌｉｔｙｏｆＱＨＲ￣９ｔｏｔｒｉｃａｌｃｉｕｍｐｈｏｓｐｈａｔｅｕｎｄｅｒｄｉｆｆｅｒ￣ｅｎｔｃａｒｂｏｎｓｏｕｒｃｅｓ糖类㊀㊀㊀㊀ＱＨＲ￣９溶磷能力(ｍｇ/Ｌ)葡萄糖６４５.８２ʃ２３.８７ａ淀粉５７.４４ʃ３.５８ｅ乳糖２０１.８２ʃ１３.０２ｂ蔗糖６４.４３ʃ２.５５ｄ麦芽糖９３.９２ʃ３.６９ｃ甘露醇５９.７７ʃ１.６２ｅ木糖３４.９７ʃ１.８１ｇ鼠李糖４１.８８ʃ４.４３ｆ纤维二塘４６.３５ʃ３.５０ｆ葡聚糖２８.０６ʃ３.２７ｈ组合碳源９２.３１ʃ６.７７ｃ同列数据后不同小写字母表示在０.０５水平上差异显著ꎮ表４㊀ＱＨＲ￣９不同处理土壤养分含量Ｔａｂｌｅ４㊀ＳｏｉｌｎｕｔｒｉｅｎｔｃｏｎｔｅｎｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔＱＨＲ￣９ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ试验处理㊀㊀有效磷含量(ｍｇ/ｋｇ)ｐＨ有机质含量(ｇ/ｋｇ)ＣＫ８１.１２ʃ６.９２ｄ４.２０ʃ０.０３ａ３８.９４ʃ１.２４ａｂＱＨＲ￣９９０.８６ʃ０.５８ｃ４.１７ʃ０.０３ａｂ３８.８１ʃ０.３５ｂＱＨＲ￣９Ｐ１０１.９３ʃ０.１１ａ４.１１ʃ０.０４ｂ４０.５９ʃ０.３４ａＱＨＲ￣９Ｃ９８.２８ʃ１.８９ｂ４.１５ʃ０.０３ａｂ４０.８９ʃ１.１７ａＣＫ:对照ꎻＱＨＲ￣９:ＱＨＲ￣９菌株ꎻＱＨＲ￣９Ｐ:ＱＨＲ￣９＋葡萄糖ꎻＱＨＲ￣９Ｃ:ＱＨＲ￣９＋组合糖类ꎮ同列数据后不同小写字母表示在０ ０５水平上差异显著ꎮ２.３.２㊀土壤磷酸酶活性㊀由图２可知ꎬＣＫ㊁ＱＨＲ￣９㊁ＱＨＲ￣９Ｐ㊁ＱＨＲ￣９Ｃ处理土壤酸性磷酸酶活性分别为２ ２４ｍｇ/ｋｇ㊁２ ６７ｍｇ/ｋｇ㊁３ ３１ｍｇ/ｋｇ㊁３ ７１ｍｇ/ｋｇꎬＱＨＲ￣９㊁ＱＨＲ￣９Ｐ㊁ＱＨＲ￣９Ｃ处理的土壤酸性磷酸酶活性分别比ＣＫ显著增加了１９ ２０％㊁４７ ７７％㊁６５ ６３％ꎬ溶磷细菌可以显著增加土壤酸性磷酸酶的活性ꎬＱＨＲ￣９Ｐ㊁ＱＨＲ￣９Ｃ处理酸性磷酸酶活性分别比ＱＨＲ￣９处理显著增加了２３ ９７％㊁３８ ９５％ꎬ溶磷细菌与葡萄糖或者组合糖类可以进一步增加土壤酸性磷酸酶的活性ꎻＱＨＲ￣９Ｃ处理土壤酸性磷酸酶活性最高ꎬ比ＱＨＲ￣９Ｐ处理显著增加了１２ ０８％ꎮ各处理土壤碱性磷酸酶活性的变化趋势与酸性磷酸酶一致ꎮ２.３.３㊀土壤硝基还原假单胞菌(Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｎｉｔｒｏｒｅ￣ｄｕｃｅｎｓｓｔｒａｉｎ)丰度㊀由图３可知ꎬ培养６０ｄ后ＱＨＲ￣９各处理土壤Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓｓｔｒａｉｎ的相对丰度显著高于ＣＫꎬＱＨＲ￣９㊁ＱＨＲ￣９Ｐ㊁ＱＨＲ￣９Ｃ处理土壤Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓｓｔｒａｉｎ的相对丰度分别比ＣＫ显著增加了３６ ５６％㊁６７ ４４％㊁８２９０％ꎬＣＫ㊁ＱＨＲ￣９㊁ＱＨＲ￣９Ｐ㊁ＱＨＲ￣９Ｃ见表４注ꎮ不同小写字母表示在０.０５水平上差异显著ꎮ图２㊀ＱＨＲ￣９不同处理土壤磷酸酶活性Ｆｉｇ.２㊀ＳｏｉｌｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｃｏｎｔｅｎｔｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔＱＨＲ￣９ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓＱＨＲ￣９在土壤中表现出较强的生长和繁殖能力ꎻＱＨＲ￣９Ｐ㊁ＱＨＲ￣９Ｃ处理土壤Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｎｉｔｒｏｒｅｄｕ￣ｃｅｎｓｓｔｒａｉｎ的相对丰度分别比ＱＨＲ￣９显著增加了２２ ６１％㊁３３ ９３％ꎬ添加葡萄糖或者组合糖类可以进一步增强ＱＨＲ￣９在土壤中的生存能力ꎮＣＫ㊁ＱＨＲ￣９㊁ＱＨＲ￣９Ｐ㊁ＱＨＲ￣９Ｃ见表４注ꎮ不同小写字母表示在０.０５水平上差异显著ꎮ图３㊀ＱＨＲ￣９不同处理土壤硝基还原假单胞菌(Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓｓｔｒａｉｎ)丰度Ｆｉｇ.３㊀ＳｏｉｌＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓｓｔｒａｉｎａｂｕｎｄａｎｃｅｕｎｄｅｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔＱＨＲ￣９ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ２.３.４㊀土壤微生物碳循环相关基因相对丰度㊀ＧＨ(糖苷水解酶)参与土壤有机碳分解ꎬＧＴ(糖基转移酶)参与土壤有机碳生物合成ꎬＡＡ(辅助活性酶)参与木质素的微生物分解ꎮ由表５可知ꎬＱＨＲ￣９处理微生物碳循环基因相关ＧＴ基因相对丰度与对照相比显著减少ꎬＧＨ基因相对丰度呈现增加趋势ꎬ比对照显著增加ꎬ溶磷细菌可以在一定程度上影响土壤微生物碳循环ꎻＱＨＲ￣９＋葡萄糖和ＱＨＲ￣９＋组合糖类处理微生物碳循环相关基因ＡＡ㊁ＧＴ丰度与ＱＨＲ￣９处理相比ꎬ均呈减少趋势ꎬＧＨ基因相对丰度呈现增加趋势ꎬＱＨＲ￣９与５５１１乔志伟等:一株硝基还原假单胞菌的溶磷特性及对碳循环相关基因的影响葡萄糖或者组合糖类共同施用ꎬ进一步影响了土壤微生物碳循环相关基因的相对丰度ꎻＱＨＲ￣９＋葡萄糖和ＱＨＲ￣９＋组合糖类处理微生物碳循环各类基因丰度之间差异均不显著ꎮ２.３.５㊀土壤微生物碳循环基因相对丰度与土壤养分含量、磷酸酶活性的相关性㊀由表６可知ꎬ土壤有效磷含量㊁酸性磷酸酶活性㊁碱性磷酸酶活性与ＡＡ㊁ＧＴ基因相对丰度呈现极显著负相关ꎬ与ＧＨ基因相对丰度呈现极显著正相关ꎻｐＨ与ＡＡ㊁ＧＴ基因相对丰度呈现极显著正相关ꎬ与ＧＨ基因相对丰度呈现显著负相关ꎻ有机质含量与ＧＨ基因相对丰度呈现显著正相关ꎬ与ＡＡ㊁ＧＴ基因相对丰度相关性不显著ꎮ表５㊀ＱＨＲ￣９不同处理土壤微生物碳循环相关基因相对丰度Ｔａｂｌｅ５㊀ＱＨＲ￣９ｓｏｉｌｍｉｃｒｏｂｉａｌｃａｒｂｏｎｃｙｃｌｅｇｅｎｅａｂｕｎｄａｎｃｅｕｎｄｅｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ不同处理微生物碳循环基因丰度(％)ＡＡＧＨＧＴＣＫ０.２０３ʃ０.００５ａ１.５７４ʃ０.００８ｃ１.５１９ʃ０.００２ａＱＨＲ￣９０.１９８ʃ０.００２ａ１.６００ʃ０.００７ｂ１.４７４ʃ０.００７ｂＱＨＲ￣９Ｐ０.１８９ʃ０.００６ｂ１.６５７ʃ０.０５８ａｂ１.４３２ʃ０.０１４ｃＱＨＲ￣９Ｃ０.１８５ʃ０.００４ｂ１.６９１ʃ０.０１５ａ１.４４９ʃ０.０４６ｂｃＣＫ㊁ＱＨＲ￣９㊁ＱＨＲ￣９Ｐ㊁ＱＨＲ￣９Ｃ见表４注ꎮＧＨ㊁ＧＴ㊁ＡＡ分别代表糖苷水解酶㊁糖基转移酶㊁辅助活性酶ꎮ同列数据后不同小写字母表示在０ ０５水平上差异显著ꎮ表６㊀土壤微生物碳循环相关基因相对丰度与土壤养分含量㊁磷酸酶活性的相关性系数Ｔａｂｌｅ６㊀Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｂｅｔｗｅｅｎｓｏｉｌｍｉｃｒｏｂｉａｌｃａｒｂｏｎｃｙｃｌｅｇｅｎｅｓａｎｄｓｏｉｌｎｕｔｒｉｅｎｔｓ土壤养分含量和磷酸酶活性指标ＡＡ基因相对丰度ＧＨ基因相对丰度ＧＴ基因相对丰度有效磷含量－０.７９５∗∗０.７４４∗∗－０.７７３∗∗ｐＨ０.７４３∗∗－０.６３５∗０.７１５∗∗有机质含量－０.５６００.６５１∗－０.５５８酸性磷酸酶活性－０.７６３∗∗０.７４７∗∗－０.８２４∗∗碱性磷酸酶活性－０.７６６∗∗０.７０９∗∗－０.８２８∗∗ＡＡ㊁ＧＨ㊁ＧＴ见表５注ꎮ∗表示０.０５水平上显著相关ꎬ∗∗代表０.０１水平上显著相关ꎮ３㊀讨论与结论３.１㊀溶磷细菌溶磷能力及不同碳源对其影响微生物对难溶态磷酸盐的溶解能力是评价其溶磷能力大小的重要指标[１８￣１９]ꎮ溶磷能力为接菌培养后培养液有效磷含量与未接菌培养液有效磷含量的差值ꎮ李慧萍等[２０]对祁连山云杉林土壤溶磷细菌的研究中筛选出５株对磷酸三钙溶解能力为３８７.４１~４７９ ８７ｍｇ/Ｌ的菌株ꎻ朱芙蓉等[２１]在滇重楼根际土壤分离出４２株无机溶磷细菌ꎬ对磷酸三钙溶磷能力为６６ ６８~１０４ １０ｍｇ/Ｌꎻ刘萍等[２２]的研究结果显示ꎬ溶磷细菌ＲＰＢ０３在较高的温度㊁盐度和碱性条件下对磷酸三钙溶磷能力均在３００ ００ｍｇ/Ｌ以上ꎻ吕俊等[２３]㊁刘春菊等[２４]筛选的溶磷菌株对磷酸三钙溶磷能力在２００ｍｇ/Ｌ以上ꎮ本试验中ꎬ在培养第７ｄＱＨＲ￣９对磷酸三钙㊁磷酸铝㊁磷矿粉的溶解能力分别为６４５ ８２ｍｇ/Ｌ㊁２６９ １７ｍｇ/Ｌ㊁２７２ ４５ｍｇ/Ｌꎬ对各种难溶态磷酸盐都具有较强的溶解能力ꎬ可以作为黔中黄壤区农田土壤溶磷细菌研究的菌株资源ꎮ培养基碳源种类对溶磷微生物溶磷能力影响较大[８]ꎮ本试验中ꎬＱＨＲ￣９以葡萄糖为碳源时溶磷能力最强ꎬ在１０种碳源条件下其溶磷能力为２８ ０６~６４５ ８２ｍｇ/Ｌꎬ最大变化幅度为６１７ ７６ｍｇ/Ｌꎮ这是因为溶磷细菌对不同碳源的利用率不尽相同ꎬ在利用率高的碳源条件下溶磷能力强ꎬ在无法利用或者利用率较低的碳源条件下溶磷能力显著降低ꎮ研究结果表明ꎬ不同碳源通过影响微生物产生有机酸的种类和含量不同进而影响溶磷能力[２５]ꎬ产生有机酸是微生物溶磷的重要机理之一[２６￣２７]ꎮ溶磷细菌研究的关键在于应用ꎬ土壤中的碳源种类繁多ꎬ含量也不尽相同ꎬ因此研究碳源对菌株溶磷能力的影响ꎬ不仅要分析单一碳源的影响ꎬ更要分析组合碳源的影响ꎮ本研究采用室内摇瓶培养ꎬＱＨＲ￣９在组合碳源条件下的溶磷能力比以葡萄糖为单一碳源降低了８５ ７１％ꎬ组合碳源是１０种糖类的等量组合ꎬ其中有８种是ＱＨＲ￣９利用率较低的碳源ꎬ其余２种利用率较高的碳源在培养液中的含量也较低ꎬ不足以提供其正常生长所需要的能量物质ꎬ因此菌株在组合碳源条件下的溶磷能力也较低ꎮ３.２㊀溶磷细菌外加碳源对土壤有效磷含量㊁磷酸酶活性和微生物碳循环相关基因相对丰度的影响㊀㊀本研究中ꎬＱＨＲ￣９各处理与ＣＫ相比ꎬ土壤有效磷含量均显著增加ꎬ这与Ｂａｒｒａ等[２８]的研究结果相同ꎬ溶磷细菌在提升土壤磷素有效性方面发挥积极的作用ꎻＱＨＲ￣９Ｐ处理的土壤有效磷含量最高ꎬ溶磷细菌与其可高效利用的碳源共同施用ꎬ对溶磷能力的发挥可以起到协同作用ꎮ土壤磷酸酶的作用之一是将６５１１江苏农业学报㊀２０２３年第３９卷第５期有机磷转化为无机磷[２９]ꎬ酸性磷酸酶是中国农业和自然生态系统磷素有效性的重要预测因子[３０]ꎬ碱性磷酸酶活性高低与微生物磷素丰缺有显著相关性[２９]ꎮ本研究中ＱＨＲ￣９Ｃ处理的土壤磷酸酶活性最高ꎬ溶磷细菌增加土壤有效磷含量的重要原因之一是磷酸酶活性增强ꎬ这与Ａｎｇｅｌｉｃａ等[３１]㊁张雪梅等[３２]的研究结果一致ꎮ微生物增殖会导致土壤磷酸酶活性增强[３３]ꎬ本研究中不同处理土壤Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｎｉ￣ｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓｓｔｒａｉｎ相对丰度与土壤有效磷含量㊁酸性磷酸酶活性㊁碱性磷酸酶活性等呈现一致的变化趋势ꎬＱＨＲ￣９的增殖在一定程度上增加了磷酸酶活性ꎬ进而促进了土壤有效磷含量的增加ꎮ在土壤中添加不稳定碳源(葡萄糖等)ꎬ微生物可以利用添加的碳源进行自身生长[３４]ꎬ因此本试验中ＱＨＲ￣９Ｐ和ＱＨＲ￣９Ｃ处理土壤碳循环相关基因相对丰度显著高于ＱＨＲ￣９处理ꎬ土壤中以ＱＨＲ￣９为代表的溶磷细菌数量的增加ꎬ进一步促进了土壤磷酸酶活性和有效磷含量等磷素相关指标的变化ꎮ土壤碳循环相关基因中ꎬＧＨ参与有机碳的微生物分解ꎬＧＴ与有机碳的合成有关ꎬＡＡ参与木质素的微生物分解ꎮＱＨＲ￣９处理土壤ＧＴ基因相对丰度与对照相比呈现减少趋势ꎬＧＨ基因相对丰度增加ꎬ这可能是因为溶磷细菌需要利用土壤中的碳源作为生长的碳骨架和能源物质ꎬ维持自身生长和发挥溶磷能力ꎬ促进了土壤碳的分解ꎬ土壤有机碳分解相关基因ＧＨ相对丰度增加ꎬ有机碳合成相关基因ＧＴ相对丰度减少ꎮＬｕｏ等[２]的研究结果表明ꎬ添加人工磷ꎬ通过降低氧化酶活性抑制了木质素的分解ꎬ施用溶磷细菌的土壤有效磷含量显著增加ꎬ有效磷含量的增加对木质素的分解产生抑制作用ꎬ与木质素分解有关的ＡＡ基因丰度呈现下降的趋势ꎮ外加不稳定碳源(葡萄糖等)会产生正激发效应ꎬ导致土壤有机碳分解增加[３４]ꎬ因此ＱＨＲ￣９Ｃ处理ＧＨ基因相对丰度高于ＱＨＲ￣９处理ꎬＱＨＲ￣９Ｃ处理的ＧＴ基因相对丰度与ＱＨＲ￣９处理相比呈下降趋势ꎮＱＨＲ￣９＋葡萄糖与ＱＨＲ￣９＋组合糖类处理ＧＨ㊁ＧＴ㊁ＡＡ基因相对丰度差异不显著ꎬ这可能与土壤微生物系统的复杂性以及对碳源利用的多样性有关ꎬ单独加入葡萄糖或者加入组合糖类ꎬ两者对土壤微生物碳循环相关基因影响的差异性较小ꎮ３.３ 土壤微生物碳循环相关基因相对丰度与土壤养分含量㊁磷酸酶活性的相关性㊀㊀本研究中ꎬ土壤有效磷含量与微生物碳循环ＡＡ㊁ＧＴ基因相对丰度等均呈现极显著负相关ꎬ与ＧＨ基因相对丰度呈现极显著正相关ꎮ土壤有效磷是影响土壤微生物碳循环功能相关基因的重要因素ꎬ袁银龙等[３５]的研究结果也证明土壤有效磷对土壤微生物碳循环具有重要影响ꎬ这也揭示了外源磷添加对碳库的影响ꎬ即外源磷添加会增加土壤有效磷含量ꎬ进而影响碳循环过程ꎮ在影响微生物群落和结构方面ꎬｐＨ是关键因子之一[３６]ꎬＤａｉ等[３７]的研究结果表明ꎬ土壤ｐＨ与土壤微生物碳循环ＡＡ㊁ＧＴ基因相对丰度呈正相关ꎬ与ＧＨ基因相对丰度呈负相关ꎬ这与本试验研究结果一致ꎮ溶磷细菌在土壤中分泌低分子量有机酸ꎬ通过降低土壤ｐＨ促进有效磷含量的增加ꎬ土壤ｐＨ的变化与有效磷含量的变化呈现相反趋势ꎬ因此ｐＨ与土壤微生物碳循环相关基因相对丰度的相关性也呈相反的趋势ꎮ微生物参与土壤有机质的分解和合成ꎬ因此与微生物碳循环相关基因有密切的关系ꎮ本研究中ꎬ由于试验包含添加葡萄糖或组合糖等处理ꎬ有机质含量仅与ＧＨｓ基因相对丰度呈现显著正相关ꎮ参考文献:[１]㊀ＲＩＮＧＥＶＡＬＢꎬＮＯＷＡＫＢꎬＮＥＳＭＥＴꎬｅｔａｌ.Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆａｎ￣ｔｈｒｏｐｏｇｅｎｉｃｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｔｏａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌｓｏｉｌｆｅｒｔｉｌｉｔｙａｎｄｆｏｏｄｐｒｏ￣ｄｕｃｔｉｏｎ[Ｊ].ＧｌｏｂａｌＢｉｏｇｅｏｃｈｅｍｉｃａｌＣｙｃｌｅｓꎬ２０１４ꎬ２８(７):７４３￣７５６.[２]㊀ＬＵＯＲＹꎬＫＵＺＹＡＫＯＶＹＫꎬＺＨＵＢꎬｅｔａｌ.Ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓａｄｄｉｔｉｏｎｄｅｃｒｅａｓｅｓｐｌａｎｔｌｉｇｎｉｎｂｕｔｉｎｃｒｅａｓｅｓｍｉｃｒｏｂｉａｌｎｅｃｒｏｍａｓｓｃｏｎｔｒｉｂｕ￣ｔｉｏｎｔｏｓｏｉｌｏｒｇａｎｉｃｃａｒｂｏｎｉｎａｓｕｂａｌｐｉｎｅｆｏｒｅｓｔ[Ｊ].ＧｌｏｂａｌＣｈａｎｇｅＢｉｏｌｏｇｙꎬ２０２２(４２０):１￣１７.[３]㊀ＭＯＨＡＭＭＡＤＳＫꎬＡＬＭＡＳＺꎬＭＬＵＮＥＥＳＡꎬｅｔａｌ.Ｐｌａｎｔｇｒｏｗｔｈｐｒｏｍｏｔｉｏｎｂｙｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇｆｕｎｇｉ￣ｃｕｒｒｅｎｔｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ[Ｊ].ＡｒｃｈｉｖｅｓｏｆＡｇｒｏｎｏｍｙａｎｄＳｏｉｌＳｃｉｅｎｃｅꎬ２０１０ꎬ５６(１):７３￣９８. 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[２８]ＢＡＲＲＡＰＪꎬＰＯＮＴＩＧＯＳꎬＤＥＬＧＡＤＯＭ.Ｐｈｏｓｐｈｏｂａｃｔｅｒｉａｉｎｏｃｕ￣ｌａｔｉｏｎｅｎｈａｎｃｅｓｔｈｅｂｅｎｅｆｉｔＰ￣ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｎＬｏｌｉｕｍｐｅｒｅｎｎｅｉｎｓｏｉｌｓｃｏｎｔｒａｓｔｉｎｇｉｎＰ￣ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ[Ｊ].ＳｏｉｌＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ２０１９(１３６):１￣１２.[２９]杨文娜ꎬ余㊀泺ꎬ罗东海ꎬ等.化肥和有机肥配施生物炭对土壤磷酸酶活性和微生物群落的影响[Ｊ].环境科学ꎬ２０２２ꎬ４３(１):５４０￣５４９.[３０]ＬＵＪＬꎬＪＩＡＰꎬＦＥＮＧＳＷꎬｅｔａｌ.Ｒｅｍａｒｋａｂｌｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｍｉｃｒｏｂｉａｌｆａｃｔｏｒｓｏｎｓｏｉｌｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ:ａｃｏｕｎｔｒｙ￣ｓｃａｌｅｓｔｕｄｙ[Ｊ].ＧｌｏｂａｌＣｈａｎｇｅＢｉｏｌｏｇｙꎬ２０２２(４２２):１￣１７.[３１]ＡＮＧＥＬＩＣＡＢＣꎬＢＥＴＳＹＡＲꎬＶＥＲＯＮＩＣＡＣＭＧ.Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ￣ｓｏｌｕｂｉｌｉｚｉｎｇｂａｃｔｅｒｉａｉｍｐｒｏｖｅＡｇａｖｅａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａＨａｗ.ｇｒｏｗｔｈｕｎｄｅｒｆｉｅｌｄｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＦｏｏｄａｎｄＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅꎬ２０１９ꎬ９９(１４):６６０１￣６６０７.[３２]张雪梅ꎬ张秀梅ꎬ李文涛.鳗草根际溶磷微生物分离㊁筛选及其对鳗草生长的影响[Ｊ].中国水产科学ꎬ２０２０ꎬ２７(１):８２￣９５. [３３]ＹＯＯＧꎬＫＡＮＧＨ.Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｂｉｏｃｈａｒａｄｄｉｔｉｏｎｏｎｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅｇａｓｅｍｉｓｓｉｏｎｓａｎｄｍｉｃｒｏｂｉａｌｒｅｓｐｏｎｓｅｓｉｎａｓｈｏｒｔ￣ｔｅｒｍｌａｂｏｒａｔｏｒｙｅｘｐｅｒ￣ｉｍｅｎｔ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＱｕａｌｉｔｙꎬ２０１２ꎬ４１(４):１１９３￣１２０２.[３４]ＭＯＲＲＩＳＳＥＹＥＭꎬＭＡＵＲＬꎬＳＣＨＷＡＲＴＺＥꎬｅｔａｌ.Ｂａｃｔｅｒｉａｃａｒｂｏｎｕｓｅｐｌａｓｔｉｃｉｔｙꎬｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙａｎｄｔｈｅｐｒｉｍｉｎｇｏｆｓｏｉｌｏｒｇａｎｉｃｍａｔｔｅｒ[Ｊ].ＴｈｅＩＳＭＥＪｏｕｒｎａｌꎬ２０１７(１１):１８９０￣１８９９. 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甘蔗内生菌分离鉴定及功能多样性研究
热带作物学报2019, 40(6): 1144 1152Chinese Journal of Tropical Crops甘蔗内生菌分离鉴定及功能多样性研究刘鲁峰1，寸海春2*，何鹏飞2，狄义宁1，吴毅歆1,3，何丽莲1，李富生1**，何月秋1,3**1. 云南农业大学农学与生物技术学院，云南昆明 650201；2. 云南农业大学植物保护学院，云南昆明 650201；3. 微生物菌种筛选与应用国家地方联合工程研究中心，云南昆明 650217摘要为探究甘蔗内生菌多样性组成及相关特性，本研究采用稀释涂板法分离并结合形态观察和分子标记（gyrB, rpoB, ITS, 16S rDNA）进行鉴定。
结果表明，从12个栽培品种（系）和5个野生种无性系的根、茎、叶组织中共分离到细菌589株、放线菌34株和真菌46株；细菌中固氮菌有41株，溶磷菌有98株，解钾菌有52株，对黄曲霉和禾谷镰刀菌具有拮抗作用分别有44株和35株。
内生细菌分属21个属，其中芽孢杆菌属、伯克氏菌属、肠杆菌属和泛菌属为优势属；内生真菌分属于枝顶孢属、链格孢属、曲霉属、镰刀菌属、枝孢属等17个属，而放线菌仅为链霉菌属。
具有潜在植物益生功能的菌株主要集中在芽孢杆菌属、伯克氏菌属、肠杆菌属、假单胞菌属、不动杆菌属、类芽孢杆菌属及泛菌属。
本研究显示甘蔗栽培品种（系）和野生种无性系均含有丰富的内生菌资源，且栽培品种（系）所含内生菌在数量和多样性上均高于野生种无性系；12个栽培品种（系）间所分离到的内生细菌大部分相同，但也存在差异。
通过初步的功能鉴定，筛选出一些具有应用潜力的益生微生物，为开发相应功能的生物菌剂奠定基础。
关键词甘蔗；内生菌；分离；鉴定；功能多样性中图分类号S566.1 文献标识码 AIsolation, Identification and Multiple Function Analyses of Sugarcane EndophytesLIU Lufeng1, CUN Haichun2*, HE Pengfei2, DI Yining1, WU Yixin1,3, HE Lilian1, LI Fusheng1**,HE Yueqiu1,3**1. College of Agronomy and Biotechnology, Yunnan Agricultural University, Kunming, Yunnan 650201, China;2. College of Plant Protection, Yunnan Agricultural University, Kunming, Yunnan 650201, China;3. National and Local Joint Engineering Research Center for Screening and Application of Microbial Strains, Kunming, Yunnan 650217, ChinaAbstract To investigate the diversity composition of sugarcane endophytes and the beneficial characteristics, dilu-tion-plating, morphological observation and molecular marker (gyrB [gyrase beta-subunit], rpoB [RNA polymerase beta-subunit], ITS [integrated transcribed space], 16S rDNA) were used in the combination and several room assays such as phosphate-, potassium-solubilizations and antagonistism tests. The results showed that 589 bacterial, 34 actin-omycetic and 46 fungal strains were isolated from the root, stem and leaf tissues of 12 sugarcane varieties and 5 wild species, of which 41 strains could fix nitrogen, 98 and 52 strains solubilize phosphate and potassium respectively, 44 and 35 strains were antagonistic to Aspergillus flavus and Fusarium graminearum, respectively. The endophytic bacteria belonged to 21 genera, among them Bacillus, Burkholderia, Enterobacter and Pantoea were the dominant. The endo-phytic fungi were classified into 17 genera, Acremonium, Alternaria, Aspergillus, Ceriporia, Cladosporium, etc., while 收稿日期 2018-07-16；修回日期 2018-12-27基金项目 云南省现代农业甘蔗产业技术体系建设专项（2017-2018）；福建农林大学国家甘蔗工程技术研究中心开放课题项目（No. NER02018.6.1）。
有机磷培养基配方
有机磷培养基配方
有机磷是指含有磷原子的有机化合物，不仅存在于生物体内，也存在于环境中。
为了研究微生物在有机磷存在的环境中的作用，需要开发相应的有机磷培养基。
本文将按类介绍有机磷培养基的配方。
1. C酶培养基配方
C酶是一种能分解化合物中的磷酸酯键的酶，因此被广泛用于有机磷的检测。
C酶培养基含有硫酸镁、硝酸铵、硫酸钾等无机盐和蔗糖、柠檬酸等有机物质。
其中，硝酸铵可作为氮源，而蔗糖和柠檬酸是C 酶的底物。
在培养基中加入有机磷化合物，利用C酶的分解作用，将有机磷转化为磷酸，进而检测有机磷化合物的含量。
2. RP培养基配方
RP培养基是一类以铁离子为氧化剂，能够利用有机磷为唯一的磷源的培养基。
其配方包括柠檬酸铵、硫酸镁、硝酸钙、硫酸铵等无机盐和α-酮戊二酸等有机物质。
与其他有机磷培养基不同，RP培养基中不需要添加磷源，而是通过有机磷的代谢产生的磷酸盐来满足细胞对磷的需求。
3. MPN培养基配方
MPN培养基以铵盐为氮源，以柠檬酸为碳源，是一种适合测定土壤样
品中短链有机磷化合物的工具。
其配方中包括柠檬酸铵、硝酸钠、硫
酸镁、硫酸铵等无机盐和p-氨基苯磷酸等有机磷化合物。
在培养过程中，MPN培养基中的硝酸钠被还原为亚硝酸盐，随后与有机磷产生反应，最终生成耐热性酸性磷酸酯酶。
总之，不同类型的有机磷培养基配方不仅用于检测不同类型的有机磷
化合物，更重要的是满足微生物生长的需求和研究的目的。
在科学研
究中，培养基的配方不仅是研究思路的基础，更是数据准确性的保障。
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NBRIP 培养基(解磷培养基)
简介：
植物根际存在各种微生物，2-5%的细菌能促进植物生长，增加作物产量，被称为根际促生细菌(PGPR)，植物根际促生细菌的研究对开发植物专化型微生物菌剂，促进农作物增产增收有重要意义。
Leagene NBRIP 培养基(解磷培养基)主要由葡萄糖、氯化镁、硫酸镁、氯化钾、磷酸钙等组成，经无菌处理，该试剂不含ACC(又称1-氨基羰酰-1-环丙烷羧酸)。
NBRIP 培养基多用于菌株液体溶磷能力的测定。
该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
材料：
1、无菌离心管或培养器皿
2、接种环
3、摇床
4、比色杯
5、分光光度计
步骤(仅供参考)：
1、种子液的制备：将待测菌种依次接种至NBRIP-P 培养基中，置于摇床振摇培养，获得对数生长期的菌液，以备后续接种使用。
2、取无菌离心管或培养器皿，加入适量NBRIP 培养基(解磷培养基)，将活化好的菌株接种于NBRIP 培养基(解磷培养基)。
3、置于摇床振摇培养。
4、取菌液，离心，取上清液加入l 无菌水，滴加2滴二硝基苯酚作为显色剂，再滴入几滴使溶液刚好呈黄色，再用调至无色。
5、加入钼锑抗显色试剂，补水至，摇匀，静置，用分光光度计测定吸光度值，同时以未接种的空白培养基作为相应处理的作为对照。
6、通过磷标准曲线，可查出接菌处理各培养基中可溶性磷的浓度。
编号
名称CM0323
Storage NBRIP 培养基(解磷培养基)
500ml 4℃使用说明书1份
注意事项：
1、注意无菌操作，避免微生物污染。
2、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
相关：
编号名称
CC0007磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)
CM0004LB培养基
DC0032Masson三色染色液
DF0135多聚甲醛溶液(4%PFA)
NR0001DEPC处理水(0.1%)
PS0013RIPA裂解液(强)
TC1167尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)。