植物组织培养的培养条件
组培成功必备的几大要素
组培成功必备的几大要素组织培养（tissue culture）是一种在实验室或生物技术设施中，通过控制环境条件来培养植物组织或细胞的技术。
以下是组织培养成功必备的几大要素：1.无菌环境：无菌环境是组织培养成功的首要条件。
所有用于组织培养的材料，包括外植体、培养基、接种工具等，都必须进行严格的消毒处理，以防止细菌、真菌等微生物的污染。
实验室应配备超净工作台、紫外灯、高压蒸汽灭菌器等设备，确保无菌操作。
2.合适的培养基：植物组织培养的成功与否，很大程度上取决于所使用的培养基。
培养基应含有植物生长所需的营养成分，如糖、氨基酸、微量元素、维生素等，以及适量的植物生长调节剂，如生长素和细胞分裂素。
根据不同的植物种类和培养目的，可以选择不同的培养基。
3.适宜的温度和光照：在组织培养过程中，温度和光照也是影响成功的关键因素。
每种植物都有其最适的生长温度和光照条件。
一般来说，大多数植物在25-30℃的温度下和16-24小时的光照条件下生长良好。
4.外植体选择与处理：选择健康、无病虫害的植物材料作为外植体，并对材料进行适当的预处理，如清洗、消毒等，是组织培养成功的关键步骤。
此外，选择适合的外植体类型也对培养成功至关重要。
5.接种技术：接种是将外植体接入培养基的过程。
熟练的接种技术能够减少对植物组织的损伤，避免污染，并提高组织的存活率。
6.细胞分裂与增殖：在适宜的培养条件下，植物细胞会分裂并增殖形成愈伤组织。
这个过程需要定期观察和记录细胞的生长情况，及时调整培养条件以促进细胞的分裂和增殖。
7.生根与移植：当愈伤组织形成后，可以将其转移到生根培养基中，促使组织产生根系。
当根系形成后，可以将其移植到土壤中或进行其他后续实验。
8.遗传稳定性：为了确保组织培养后得到的植株是纯合的，并保持其遗传稳定性，需要采用适当的遗传检测方法。
这可以通过分子生物学方法，如DNA 指纹分析或基因表达分析来实现。
9.法规与伦理：在进行组织培养实验时，必须遵守相关的法规和伦理准则。
植物组织培养的一般过程
植物组织培养的一般过程
以下是有关植物组织培养的一般过程：
1.植物组织培养的一般过程
（1）在无菌条件下，将植物器官或组织（如芽、茎尖、根尖或花药）的一部分切下，用纤维素酶和果胶酶处理以去除细胞壁，使之露出原生质体。
（2）然后放在适当的人工培养基上进行培养，这些器官和组织就会进行细胞分裂，形成新的组织。
不过这种组织没有发生分化，只是一团薄壁细胞，称为愈伤组织。
（3）在合适的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下，愈伤组织便开始分化，分化成植物的各种器官和组织，进而发育成一株完整的植株。
2.植物组织培养的特点
（1）培养条件可以人为控制，组织培养采用的植物材料完全是在人为提供的培养基和小气候环境条件下进行生长，摆脱了大自然中四季、昼夜的变化以及灾害性气候的不利影响，且条件均一，对植物生长极为有利，便于稳定地进行周年培养生产。
（2）生长周期短，繁殖率高，植物组织培养是由于人为控制培养条件，根据不同植物不同部位的不同要求而提供不同的培养条件，因此生长较快，另外，植株也比较小，往往20~30天为一个周期。
所以，虽然植物组织培养需要一定设备及能源消耗，但由于植物材料能按几何级数快速繁殖生产，故总体上成本低廉，且能及时提供规格一致的优质种苗或脱病毒种苗。
（3）管理方便，利于工厂化生产和自动化控制。
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植物组织培养具备的基本培养条件
在植物组织培养中温度、光照、湿度等各种环境条件，培养基组成、PH值、渗透压等各种化学环境条件都是影响组织培养育苗的生长和发育重要因素。
一、温度（temperature）因为温度是植物组织培养中的重要因素，所以植物组织培养在最适宜的温度下生长分化才能表现良好，大多数植物组织培养都是在23~27℃之间进行，一般采用25±2℃。
低于15℃时培养，植物组织会表现生长停止，高于35℃时对植物生长不利.但是，不同植物培养的适温不同。
白鹤非的最适温度是20℃、月季是25~27℃、番茄是28℃。
温度不仅影响植物组织培养育苗的生长速度，也影响其分化增殖以及器官建成等发育进程。
如烟草芽的形成以28℃为最好，在12℃以下，33℃以上形成率皆最低。
不同培养目标采用的培养温度也不同,百合鳞片在30℃以下再生的小鳞茎的发叶速度和百分率比在25％以下的高。
桃胚在2～5℃条件进行一定时间的低温处理,有利于提高胚培养成活率。
用35℃处理草莓的茎尖分生组织3～5d,可得到无病毒苗。
二、LED光照（light）组织培养中使用光照也是重要的条件之一，主要表现在光强、光质、以及光照时间方面：1、LED光照强度（light intensity）光照强度对培养细胞的增殖和器官的分化有重要影响，从目前的研究情况看，光照强度对外植物体、细胞的最初分裂有明显的影响。
一般来说,光照强度较强，幼苗生长的粗壮，而光照强度较弱幼苗容易徒长。
2、LED光质（light wave）光质对愈伤组织诱导，培养组织的增殖以及器官的分化都有明显的影响。
如百合珠芽在红光下培养，8周后，分化出愈伤组织.但在蓝光下培养，几周后才出现愈伤组织，而唐菖蒲子球块接种15天后，在蓝光下培养首先出现芽，形成的幼苗生长旺盛,而白光下幼苗纤细。
3、LED光周期(light period)试管苗培养时要选用一定的光暗周期来进行组织培养，最常用的周期是16h的光照,8h的黑暗。
研究表明，对短日照敏感的品种的器官组织，在短日照下易分化，而在长日照下产生愈伤组织，有时需要暗培养，尤其是一些植物的愈伤组织在暗培养下比在光下更好。
植物组织培养所依据的原理
植物组织培养所依据的原理
植物组织培养的基本原理是通过人工控制营养培养基的成分和生长条件，使植物组织得以在无菌条件下生长和繁殖。
具体可分为以下几个方面：
1. 组织分化和再生能力：植物细胞具有一定的再生能力，可以在适当的培养基中通过分化再生成为新的组织或器官。
2. 营养培养基的配方：对于不同类型的植物组织，需要设计不同的营养培养基，使其能够提供必须的营养物质和生长因子，满足组织生长和分化的需要。
3. 温度、光照和湿度的控制：适宜的生长环境对于植物组织的培养非常重要。
温度、光照和湿度等因素需要仔细控制，以优化组织生长和分化过程。
4. 无菌技术：植物组织培养需要在无菌条件下进行，以避免细菌和其他微生物的污染对组织生长的影响。
因此，需要使用适当的无菌技术和设备来保证培养环境的纯净度。
基于以上原理，植物组织培养可以用于植物繁殖、遗传改良、组织工程等方面的研究和应用。
植物组织培养设备及条件
光照设备：提供植物生 长所需的光照
温度控制系统：控制培 养箱内的温度，保持恒
定
培养基制备设备：制备 培养基，包括培养基的
配制、灭菌等
灭菌设备
高压灭菌 锅：用于 培养基、 器皿、工 具等灭菌
紫外灯： 用于培养 室、操作 台等空间 灭菌
酒精灯： 用于培养 基、器皿、 工具等灭 菌
超净工作 台：用于 培养基、 器皿、工 具等灭菌
培养环境控制
温度：植物组织 培养的最佳温度 为25-30℃
光照：植物组织 培养的光照强度 为2000-3000勒 克斯
湿度：植物组织 培养的湿度为7080%
气体：植物组织 培养的气体成分 为氧气和二氧
恒温培养箱：提供稳定的温度条件，保证 植物组织的正常生长
显微镜：观察植物组织的生长和发育情 况，进行细胞学研究
培养设备
培养箱：提供稳定的温度、 湿度和光照条件
气体交换设备：提供植物 生长所需的氧气和二氧化
碳
湿度控制系统：控制培养 箱内的湿度，保持恒定
培养瓶：用于培养植物 组织，包括培养基、培
养液等
植物组织培养设备及条件
汇报人：
植物组织培养设备 植物组织培养条件
植物组织培养设备
实验室设备
培养箱：用于培养植物组织，提供适宜的 温度、湿度和光照条件
超净工作台：提供无菌环境，防止植物 组织受到污染和感染
光照培养箱：提供光照条件，促进植物 组织的生长和发育
离心机：用于分离植物组织中的细胞和 细胞器，提高培养效率
培养条件
温度：植物组织培养的温度一般在20-30℃之间，不同植物种类和培养阶段对温度的要求不同。
光照：植物组织培养的光照强度和光照时间对植物生长和分化有重要影响，一般采用人工光源 进行光照。
第2章植物组织培养的设备与培养条件
试管——特别适合于用少量培养基及试验各种不同配方 时选用，在茎尖培养及花药和单子叶植物分化长苗培 养时更显方便。有圆底的和平底的两种。 三角瓶——是植物组织培养中最常用的培养器皿，适合 于各种培养，固体或液体、大规模或小规模都行。 其优点是：采光好、瓶口较小不易失水和污染。 L形管和T形管——为专用的旋转式液体培养试管。 培养皿——适于作单细胞的固体平板培养、胚和花药培 养和无菌发芽。 角形培养瓶和圆形培养瓶——适于液体培养用。 果酱瓶或罐头瓶——常用于试管苗大量繁殖，200ml500ml规格 太空玻璃杯——可机械化洗瓶，适于工厂化生产
（3）磨口瓶 用于存装试剂、分装母液。 （4）滴瓶 盛装酸液（1N盐酸和1N氢氧化钠） （5）锅具：配置和熬制培养基
2.2.1.3计量容器 （1）容量瓶：培养基配置时定容 （2）移液管和移液枪 （3）量筒、量杯
2.2.2器械用具 组织培养所需要的器械用具，可选 用医疗器械和微生物实验所用的 器具。常用的器械用具如图： （1）镊子：可用于接种和转移植 物材料 （2）剪刀：一般在转移植株时用。 （3）解剖刀： （4）显微接种工具：包括接种针、 接种钩及接种铲，用来接种花药 或转移植物组织。
（1）功能：植物材料的灭菌、接种以及培养 物的继代转接等。 （2）仪器设备及用品： 超净工作台，紫外灯、小推车、搁架、接种 工具（各种镊子、解剖刀、手术剪、普通 剪刀接种针、酒精灯、手持喷雾器、细菌 过滤器等），紫外灯，换气扇，空调。
超净工作台
接种工具
无菌操作室消毒的方法： 照射灭菌： 紫外灯， 15—20分钟（接种前） 熏蒸灭菌 ：甲醛加高锰酸钾（定期）（一般 每立方米用甲醛2mL、高锰酸钾1g。 ） 超净工作台的消毒方法： 每次接种前，用70%酒精药棉擦拭台面。
植物组织培养技术的过程
植物组织培养技术的过程一、材料准备在进行植物组织培养前，首先需要准备培养基、植物材料和培养器具等。
培养基是植物生长和发育所需的营养物质，通常包括无机盐、有机物、植物生长激素和固化剂等。
植物材料可以是植物的种子、茎段、叶片等，要选择健康、无病虫害的材料。
培养器具要进行高温高压灭菌，以确保无菌条件。
二、无菌处理植物组织培养必须在无菌条件下进行，以防止外来微生物的污染。
无菌处理包括无菌操作台的准备、培养器具的灭菌和植物材料的表面消毒。
无菌操作台是一个密闭的工作区域，通过高效的过滤器和紫外线杀菌灯来保持无菌环境。
培养器具可以通过高温高压灭菌或化学消毒的方式进行无菌处理。
植物材料的表面消毒可以用漂白粉或酒精进行处理。
三、外植体切割外植体是指植物体中用于培养的组织或细胞，可以是茎段、叶片、花药等。
外植体切割是将植物材料切割成适当大小的片段，以便于培养和繁殖。
切割时要注意保持无菌操作，避免污染。
四、培养基配置培养基的配制是植物组织培养的关键步骤之一。
根据不同的培养目的和植物材料的特性，可以选择不同类型的培养基配方。
常用的培养基有MS培养基、B5培养基等。
在配制培养基时，要按照一定的比例将无机盐、有机物、植物生长激素和固化剂等加入到蒸馏水中，并进行搅拌和调pH值。
五、组织培养组织培养是将外植体培养在含有适当营养物质的培养基上，通过调控培养基中植物生长激素的浓度和比例，促进外植体的生长和分化。
培养过程中要注意控制培养基的温度、光照和湿度等环境因素，以及培养器具的无菌操作。
培养时间的长短和外植体的生长状态有关，通常需要数周至数个月的时间。
六、分化和增殖在组织培养过程中，外植体会经历分化和增殖的过程。
分化是指外植体的细胞在培养基中逐渐发育成不同的组织和器官，如根、茎、叶等。
增殖是指外植体的细胞在培养基中不断分裂和增殖，形成新的植株。
分化和增殖的过程可以通过调控培养基中植物生长激素的浓度和比例来实现。
七、移栽和生根当外植体在培养基上分化和增殖到一定程度后，可以进行移栽和生根。
植物组织培养技术
2种激素5种浓度的实验组合 6-BA mg/L） 0 NAA 0 (mg/L) 0.5 2.5 5 10 0.5 1 6 11 16 21 2.5 2 7 12 17 22 3 8 13 18 23 5 4 9 14 19 24 10 5 10 15 20 25
• 完全试验方案试验因子越多，处理数越多，试验越复杂，消耗的 精力、物力越多。为了减少试验处理，但又能准确全面地获得试 验信息，通常采用正交试验。例如，采用正交设计，在使用此表 时就可以安排4个因子，3种水平的试验，一共做9种不同搭配的试 验，其结果相当于做了27次种种搭配的试验。正交试验虽然是多 因素搭配在一起的试验，但是在试验结果的分析中，每一种因素 所起的作用却又能够明白无误地表现出来。因此，一次系统的试 验结果，就可以把问题分析得清清楚楚，用有限的时间取得成倍 的收获。在组织培养研究中，可用于同时探求培养基中适宜的几 种成分的用量，如细胞分裂素、生长素、糖和其他成分的用量。
四、广谱实验法
• 在广谱实验法中，把培养基中所有组分分为4大类：无 机盐、有机营养物质(蔗糖、氨基酸和肌醇等)、生长素、 细胞分裂素。对每一类物质选定低(L)、中(M)、和高 (H)3个浓度。4类物质各3种浓度的自由组合即构成了 一项包括81个处理的实验。在这81个处理中最好的一 个可用4个字母表示。例如，一个包含中等浓度无机盐， 低等浓度生长素、中等浓度细胞分裂素和高等浓度有 机营养物质的处理即可表示为MLMH。达到这个阶段， 再试用不同类型的生长素和细胞分裂素即可找到培养 基的最佳配方。这是因为不同类型的生K素和细胞分裂 素对不同植物的活性有所不同。
• 不同的植物对培养基最适pH值的要求也是不同的(表 2—1)，大多在5、6．5左右，一般培养基皆要求5.8， 这基本能适应大多植物培养的需要。 • pH值适度因材料而异，也因培养基的组成而不同。以 硝态氮作氮源和以铵态氮作氮源就不一样，后者较高 一些。一般来说当pH值高于6．5时，培养基全变硬； 低于5时，琼脂不能很好地凝固。因为高温灭菌会降低 pH值(约0.2—0.3个pH值)因此在配制时常提高pH值 0．2—0．3单位。pH值大小调整可用0．1M的NaOH和 0．IM的HCI来调整。lml的NaOH可使pH值升高0．2单 位，lml的HCl可使pH值降低0．2单位。调节时一定要 充分搅拌均匀。
植物组织培养的方法
植物组织培养的方法植物组织培养（Plant tissue culture）是指利用无菌条件下培养植物细胞或组织，以实现繁殖、繁育新品种、生物合成化合物、环境污染处理等目的的技术。
其不仅可以大幅度提高植物材料的品质和数量，还可以在无限制地产生同一种植物。
方法一：赤潮法（Embryogenesis）这一方法是利用赤潮细胞发生器官（如胚性板）的细胞分化，诱导植物组织的胚胎发生，进而实现植物再生。
该方法适用于很多种植物，如玉米、大麦、水稻等。
步骤为：1. 准备培养基：含有赤潮素、氨基酸、维生素、植物激素和适当的糖类和盐类的基础培养基。
2. 处理材料：将植物的姿态板或种子材料在高温（35-40C）下进行消毒，使其无菌。
3. 材料分离：将消毒材料放入无菌条件下进行材料分离。
4. 培养细胞：将细胞或组织放入含有培养基的无菌培养皿中，保持恒定的温度、湿度和光照条件，促进发生素感应化。
5. 发生胚胎体：促进胚胎形成，通过培养发生胚胎胶囊或胚胎体。
6. 块茎冷藏：利用低温存储胚胎体或胚胎胶囊。
方法二：组织培养（Organogenesis）组织培养方法是通过培养植物的基本组织如叶片、茎尖、芽分根进而再生整个植株。
步骤为：1. 材料处理：对种子或植株进行表层消毒处理。
2. 制备组织片：将消毒好的植株切成组织片段，如茎尖、叶片等。
3. 培养基准备：准备无菌的培养基，其中含有植物的必需胰凡陈列如糖类、氨基酸、维生素、生长因子和植物激素等。
4. 组织分化：将组织片段放入含有培养基的培养皿中，使其分化成根、茎、叶等。
5. 干涸与移栽：将培养的加上适量水后，移栽到含有生长素适量的培养基中，促进植物以正常生长的形式营养。
方法三：悬浮细胞培养（Suspension Culture）在此方法中，使用悬浮培养细胞进行植物细胞或组织的生物合成和生物转化。
步骤为：1. 培养基准备：通常使用植物基础培养基加入氨基酸、维生素和植物激素等。
2. 细胞处理：将细胞分散在含有培养基的匀浆器中，使其悬浮在培养基中。
植物组织培养
植物组织培养植物组织培养：在无菌的条件下，将离体的植物材料包括器官，组织，细胞以及原生质体在人工培养基上进行培养，使其再生发育成完整植株的过程，又称植物离体培养。
细胞全能性：植物体的任何一个细胞都携带该物种的全部遗传信息，离体细胞在一定的条件下具有发育成完整植株的潜在能力。
外植体：植物组织培养中离体的植物材料，包括植物器官，胚胎、组织、细胞和原生质体。
细胞分化：导致细胞形成不同结构，引起功能改变或潜在发育方式改变的过程。
脱分化：已分化成熟的植物组织或器官回复到分生状态，细胞开始分裂形成无组织结构的细胞团或愈伤组织的过程。
再分化：是指在一定条件下，脱分化形成的愈伤组织转变成为具有一定结构、执行一定生理功能的细胞团和组织、并进一步形成完整植株的过程，即从愈伤组织再生形成完整植株的过程。
愈伤组织：植物体受伤后的伤口处或在植物组织培养中外植体切口处产生的一团不定型的薄壁组织。
离体无性繁殖：根据植物细胞全能性原理，在无菌条件先短时间内形成大量植株。
玻璃化苗：在植物组培中，茎叶形成透明矮小肿胀的形态，生根能力差。
问答题：1、无菌操作是贯穿于整个组织培养过程的一门关键技术，请根据自己的体会论述如何在植物组织培养过程中做到无菌？1〕取少菌的材料〔春夏，中午的幼芽〕 2〕严格灭菌3〕合理安排操作程序 4〕无菌保存 5〕操作标准2、组培在生产上的应用有哪些？学好植物组培的意义？1〕植物快速繁殖：增殖速度快，本钱低，易于批量生成和管理。
比方利用一小块叶片或一个茎尖，一年内可繁殖出1000-100000株幼苗2〕脱除病毒：植物在生长过程中几乎都要蒙受到病毒的危害，采用茎尖培养方法可以除去植物体内的病毒。
脱毒苗恢复了原有的优良种性，生长势明显增强，整齐一致。
3〕培养新品种：克服远缘杂交不亲合性；克服远缘杂交的不孕性；选择细胞突变体；单倍体育种；转基因育种。
4〕植物次生代谢产物生产：利用植物组织后细胞的大规模培养，可以生产一些天然有机化合物，这些次生代谢产物，往往具有一些特定的功能，对人类有重要的影响和作用。
植物组织培养设计方案
植物组织培养设计方案植物组织培养是一种繁殖植物的方法，通过在无菌条件下培养植物的组织或细胞，可以获得大量的健康无病害的植株。
植物组织培养广泛应用于植物保护、育种、快速繁殖和基因转化等领域。
本文将重点介绍植物组织培养的设计方案。
1.实验材料准备：-植物种子或幼苗：选择优良品种的无病害种子或幼苗作为材料。
- 生长基质：常用的基质包括MS培养基（Murashige和Skoog培养基）、B5培养基（Gamely和Ribble培养基）等。
根据不同的植物种类和实验目的，选择适宜的培养基。
2.无菌操作：-实验室要保持高度的无菌操作环境，使用无菌操作台、无菌培养器等工具设备。
-使用无菌操作工具，如无菌钳、无菌刀片等进行操作。
-使用无菌材料：培养基、培养瓶、培养器等都要在高温高压下灭菌处理。
3.组织处理和培养：-种子处理：以浓度为0.1%的漂白水处理种子表面，去除外层的外壳，并在无菌条件下接种到培养基上。
-组织切割：从植株中选择新鲜、无病害的茎、叶、根等组织切取，注意避免外界微生物的污染。
-培养基配制：根据实验目的和植物种类，调整培养基的配方，添加适量的植物生长调节剂（如激素）。
-培养条件控制：控制培养瓶内温度、光照强度和光周期，以及湿度等因素，提供适宜的生长环境。
4.培养过程监测与处理：-观察细胞分裂和不定芽发生情况，根据需要进行不定芽分离和转移。
-监测培养器内的细菌和真菌污染，及时采取措施防止蔓延。
-过程中温度、光照等条件的调节，根据实验需要和细胞、组织的生长情况进行调整。
5.培养结束处理：-移除培养器中的植株，将其进行除菌处理，避免对环境产生影响。
-将培养基进行无菌处理，以免细菌或真菌残留造成二次污染。
-对根据实验结果分析，总结经验教训，为后续的实验提供参考。
总之，植物组织培养设计方案需要从材料选择、无菌操作、组织处理和培养、监测与处理以及培养结束处理等方面进行全面考虑。
只有在严格的无菌条件下进行操作，并根据实验需求和植物特性进行科学的调控和管理，才能获得高效的植物组织培养。
植物组织培养技术
植物组织培养技术植物组织培养技术是一种在无菌条件下培养和再生植物细胞、组织和器官的方法。
该技术被广泛应用于植物生物学研究、种质资源保护和利用、植物育种以及生物工程等领域。
本文将为您介绍植物组织培养技术的原理、步骤以及在不同应用领域的具体应用。
一、植物组织培养技术的原理植物组织培养技术的原理是基于植物的无限生长能力和组织再生能力。
在无菌培养条件下，植物细胞、组织被分离、培养，通过提供适宜的培养基、光照、温度和激素等环境因素，可以促进细胞分裂和再分化，最终形成新的植物器官或整株植株。
二、植物组织培养技术的步骤1. 材料准备：收集植物组织样品，如叶片、茎段、花器官等，并进行表面消毒处理。
2. 培养基配制：根据具体需求配制适宜的培养基，培养基包括基础盐、有机添加物、糖类、维生素和激素等成分。
3. 组织切割和培养：将材料切割成适当大小的小块，接种到含有培养基的培养器皿中，置于恒温、恒湿条件下进行培养。
4. 培养条件管理：根据不同材料的需求，调节光照强度、温度、湿度以及培养基中激素和营养物质的浓度等条件。
5. 组织再分化和生长：培养的初期，细胞和组织会发生再分化现象，形成愈伤组织；随后，再生出新的植株。
6. 生根和移栽：对于培养的植株，进行生根处理，并移栽到土壤中进行进一步生长。
三、植物组织培养技术的应用领域1. 种质资源保护与利用：植物组织培养技术可以使濒危植物得到有效保护和大量繁殖，并为种质资源的利用提供便利。
2. 植物育种：通过植物组织培养技术，可以繁殖无性系、获得遗传变异体、加速杂交育种过程等，从而提高育种效率和品种纯度。
3. 生物工程：植物组织培养可以用于基因转导、基因工程以及体外合成药物等生物工程领域。
4. 药用植物生物学研究：利用植物组织培养技术，可以大量繁殖药用植物，并提取有效成分，用于药物研发和生产。
5. 植物组织培养的教学与科普：植物组织培养技术作为现代生物学的重要实验内容，被广泛应用于高等教育和科普教育。
植物组织培养的培养条件
Auxins——生长素
溶于95%乙醇或 1mol/LNaOH
诱导细胞的分裂和根的分化
培养基对非洲紫罗兰组织培养的影响
No NAA
NAA reduced to 0.1 mg. l-1
NAA increased to 5.0 mg. l-1
Na2MoO4.2H2O 0.25 mg/L
CuSO4.5H2O 0.025 mg/L
CoCl2.6H2O 0.025 mg/L
Na2.EDTA
37.3 g/L
FeSO4.7H2O 27.8 mg/L
一、母液的配制与保存
培养基母液：培养基各类溶液的浓缩液。
一、母液的配制与保存
• 培养基母液：配制母液不但可以保证各物 质成分的准确性及配制时的快速移取。一 般母液配成比所需浓度高。
第一节 植物组织培养的条件
1. 植物组织培养最基本的前提条件：用于培 养的外植体细胞必须具有全能性
2.离体隔离 3.适宜的培养条件
环境条件：光照、温度、湿度。 营养条件：培养基。
一、环境条件
温度
植物组织培养在最 适宜的温度下生长分 化才能表现良好，大 多数植物组织培养都 是在23-27 ℃之间进行，
无机盐浓度高、元素间比例适当,离子平衡性好，具 有较强的缓冲性，是目前使用最广泛的培养基。
White培养基特点：
无机盐、有机成分含量较低，适用于生根培养。
一、常用培养基特点
B5培养基 特点：
含较高的NO3-N，氨态氮含量较低，含有 较高的硫胺素（VB1）较适用于一些要求较 高氮素营养的植物培养，如常见木本植物 双子叶植物组培的选择
Murashige and Skoog (MS） Medium
植物组织培养的基本原理
植物组织培养的基本原理
植物组织培养是一种无性繁殖技术，利用植物的组织和细胞
在适当的培养条件下，通过细胞分裂和再生组织的形成，实现
植物的繁殖和繁衍。
1.组织选择：选择适当的种植物材料作为组织培养的起始材料，常用的包括茎段、叶片、花蕾等。
2.组织预处理：将选择的植物组织进行消毒，去除外部污染物，并保持组织的完整性。
常用的消毒方法包括浸泡、清洗、
酶解等。
3.培养基配制：根据植物组织的特性和培养的目的，配制适
合的培养基。
培养基中包含了植物所需的营养物质、激素和其
他辅助物质。
4.组织接种：将处理后的植物组织放置于培养基上，使组织
接触到培养基上的营养物质和激素。
5.培养条件控制：将接种后的培养皿置于合适的培养环境中，包括温度、光照、湿度等条件的控制。
6.培养过程管理：定期观察和转移培养皿，确保培养组织的
生长和分化。
7.再生植株移栽：在组织培养成功后，可以将再生的植株移
栽到土壤中，继续生长和发育。
植物组织培养常见失败原因
植物组织培养常见失败原因植物组织培养是一种将植物细胞或组织培养于无菌条件下，通过调节培养基中营养物质和激素的浓度，促使细胞或组织快速增殖和分化的技术。
然而，在实践中，植物组织培养常常会面临许多失败的挑战。
下面将介绍植物组织培养中常见的失败原因。
第一，原料选取不当。
植物组织培养需要使用健康且无病原体的组织或种子作为起始材料。
如果选取的组织或种子存在病原菌、真菌污染或已经失活，那么培养过程中很可能会导致失败。
因此，在进行组织培养前，必须对起始材料进行消毒处理，以确保无菌。
第二，环境因素不适宜。
组织培养需要在特定的环境条件下进行，包括温度、光照、湿度和气体浓度等。
如果环境温度过高或过低、光照不足或过强、湿度不够或过高，或者气体浓度不合适，都会对组织培养的成功率产生影响。
因此，在进行组织培养时，要选择适宜的实验室条件，并严格控制环境参数。
第三，培养基成分不合理。
培养基是植物组织培养中非常重要的因素之一，它提供了必需的营养物质和激素来支持细胞或组织的生长和分化。
如果培养基中营养物质过少或过多，或者激素浓度不合适，都会对组织培养的成功产生影响。
因此，在制备培养基时，要准确地配制营养物质和激素，并进行适当的调整。
第四，污染现象的发生。
由于植物组织培养需要在无菌条件下进行，因此，污染成为影响成功率的一个主要因素。
污染可以来自起始材料、培养器皿、培养基或操作者等多个方面。
常见的污染源包括细菌、真菌、酵母菌等微生物，以及灰尘、皮屑等异物。
为了避免污染，必须进行严格的无菌操作，并确保材料和设备的无菌。
第五，植物基因型和酶活性的影响。
不同植物的基因型和酶活性可能存在差异，这会影响组织培养的成功率。
有些植物品种对组织培养非常敏感，容易出现培养失败的情况。
此外，在进行组织切割和悬浮培养时，细胞酶的活性可能会导致组织断裂或无法分化。
因此，在进行植物组织培养前，要充分了解植物的基因型和酶活性，并选择合适的操作方法和培养条件。
第六，愈伤组织的选择和建立。
植物组培室设备及培养条件全攻略
植物组培室设备及培养条件全攻略组培室建设首要考虑的问题就是组培室需要哪些设备条件和需要什么样的培养条件。
对这些有了全面了解以后，我们便可以因地制宜地新建或利用现有房屋建设实验室。
在设计组培室时，一般情况应按组培的流程来设计，同时考虑人物分流顺畅，空间合理利用。
植物组织培养要求严格的无菌的条件，需要一定专业仪器设备、器材和用具，同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。
第一、实验室一个标准的组织培养实验室应当包括洗涤室、•配置室、接种室、培养室、观察室（冷却室）、灭菌室、洗苗室等。
在实际中可结合可行条件，合并一部分。
（一）洗涤室洗涤室完成玻璃器皿和其它仪器的清洗、干燥和贮存。
室内应配备大型水槽，用于培养器皿的洗涤，最好是内衬白瓷砖的水泥槽。
为防止碰坏玻璃器皿，可铺橡胶板，上下水道要畅通。
备有大型塑料筐，用于放置培养器皿。
可直接置于搁架上，以节约空间和便于运输工作。
备有空干架，以空干涮净的培养器皿。
（二）配置室、灭菌室（可分开）准备室要求明亮、通风。
在准备室内要完成培养基制备以及试管苗出瓶、清洗与整理工作。
如果房间较多，可将准备室分为洗涤室和配置室两部分。
洗涤室专门负责试管苗出瓶与培养器皿的清洗工作；配置室则负责培养基的配制、分装、包扎和高压灭菌等工作。
为完成培养基的制备工作，准备室还应配备以下仪器设备：1．工作台。
其高度应方便配制工作。
2．药品柜。
用以放置常用药品。
3．普通冰箱。
主要用于贮存母液、各种易变质、易分解的化学药品以及植物材料等。
4．电子分析天平和托盘天平。
电子分析天平精确度为0.001g，用于称取大量元素、微量元素、维生素、激素等微量药品；托盘天平精确度为0.1g，用于称取用量较大的糖和琼脂等。
天平应放置在干燥、不受振动的固定操作台上。
5．纯水仪或电蒸馏水器。
纯水仪提供纯水，水质好。
电蒸馏水器，采用硬质玻璃或金属制成。
蒸馏水用于配制母液或培养基，配培养基可用自来水来代替，若实验要求严格的话，则须用蒸馏水。
植物组织培养的操作手段及注意事项
植物组织培养的操作手段及注意事项植物组织培养是一种利用植物的组织或细胞在无菌条件下进行培养和繁殖的技术。
通过植物组织培养，可以实现植物的无性繁殖、植物基因工程以及植物种质资源的保存等目的。
下面将介绍植物组织培养的操作手段及注意事项。
一、植物组织培养的操作手段1.材料准备：选择优良的母本植株，将其嫩茎、新芽、子叶等组织取出，进行消毒处理。
消毒处理一般采用漂白粉、酒精等方法，以确保材料的无菌状态。
2.培养基配制：根据实验需要，选择合适的培养基进行配制。
培养基可以分为基础培养基和添加物培养基。
基础培养基通常包括无机盐、糖类、维生素和植物激素等成分，而添加物培养基则根据具体实验需要添加特定的物质。
3.无菌操作：将材料放入培养室中进行无菌操作，保证实验的无菌条件。
无菌操作包括消毒台面、工具、培养器皿等，以及操作者本身的无菌状态。
4.培养条件控制：根据植物的特性和培养的目的，控制适宜的温度、光照和湿度等条件。
不同植物对于培养条件的要求有所不同，需要根据具体情况进行调整。
5.观察和记录：在培养过程中，要及时观察和记录植物的生长情况。
观察可以包括植物的生长速度、形态特征以及细胞分裂和器官发育等方面。
二、植物组织培养的注意事项1.消毒措施：在进行组织培养之前，必须进行彻底的消毒处理，以防止外源性的污染。
消毒处理可以使用漂白粉、酒精或高温高压等方法，具体方法根据实验需要进行选择。
2.培养器皿选择：选择适合的培养器皿进行培养。
常用的培养器皿有培养瓶、琼脂瓶、培养皿等。
不同的植物和实验要求可以选择不同的培养器皿。
3.培养基配制：培养基的配制要准确无误，按照配方进行称量和溶解。
培养基的pH值要适宜，一般在5.5-6.5之间。
4.无菌操作：在进行组织培养时，必须保持无菌操作。
操作者要穿戴无菌衣物、戴手套，并将操作区域消毒。
工具和培养器皿要进行高温高压消毒或用酒精擦拭。
5.培养条件控制：不同的植物对于培养条件有不同的要求，要根据具体植物的特性进行调整。
植物组织培养
绪论植物组织培养（Plant tissue culture）广义上是指无菌条件下，在特定的培养基上对离体的植物器官、组织、细胞和原生质体甚至包括完整植株进行培养的技术。
外植体：愈伤组织：一、植物组织的主要特征：（1）在培养容器中进行；（2）无菌培养环境，排除了微生物如真菌、细菌以及害虫等的侵入；（3）各种环境因子如营养因子、激素因子以及光照、温度等物理因子处于人工控制之下，并可达到最适条件。
（4）通常打破了正常的植物发育过程和格局；（5）随着单细胞和原生质体培养技术的发展，对植物显微结构进行操作成为可能。
二、植物组织培养类型：根据不同分类的依据可以分为不同类型。
1、根据培养材料不同分为：（1）完整植株培养（Plant Culture）：对幼苗和较大植株等的培养。
（2）胚胎培养（Embryo Culture）：包括成熟胚、幼胚、子房、胚珠等的培养。
（3）器官培养（Organ Culture）：包括离体根、茎、叶、果实、种子、花器官的培养。
（4）组织培养（Tissue Culture）：如分生组织、薄壁组织、输导组织培养。
（5）细胞培养（Cell Culture）：指对单细胞或较小的细胞团进行培养。
（6）原生质体培养（Protoplast Culture）：指对去掉细胞壁后所获得的原生质体进行培养。
三．植物组培的应用1.植物离体快繁。
2.无病毒苗木培养。
3.培育新品种或创制新物种。
4.次生代谢物生产。
5.植物种质资源的离体保存。
6.人工种子。
第一章1.）实验室包括：准备室，无菌操作室，培养室，温室。
2.）器具的灭菌：1、器具灭菌：培养皿、解剖刀、镊子等用品。
（1）干热灭菌：铝箔包好后，放于恒温干燥箱内，150 ℃保温2小时，成本较高。
（2）高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌锅内120 ℃15－20分钟。
（3）灼烧灭菌：接种时，解剖刀及镊子等浸入95％乙醇，然后取出在酒精灯火焰上灼烧杀菌。
2、培养基灭菌：采用高压蒸汽灭菌。
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植物组织培养的培养条件
在植物组织培养中温度、光照、湿度等各种环境条件，培养基组成、PH值、渗透压等各种化学环境条件都会影响组织培养育苗的生长和发育。
一、温度(temperature)
因为温度是植物组织培养中的重要因素，所以植物组织培养在最适宜的温度下生长分化才能表现良好，大多数植物组织培养都是在23～27℃之间进行，一般采用
25±2℃。
低于15℃时培养，植物组织会表现生长停止，高于35℃时对植物生长不利。
但是，不同植物培养的适温不同。
白鹤非的最适温度是20℃、月季是25～27℃、番茄是28℃。
温度不仅影响植物组织培养育苗的生长速度，也影响其分化增殖以及器官建成等发育进程。
如烟草芽的形成以28℃为最好，在12℃以下，33℃以上形成率皆最低。
不同培养目标采用的培养温度也不同，百合鳞片在30℃以下再生的小鳞茎的发叶速度和百分率比在25%以下的高。
桃胚在2～5℃条件进行一定时间的低温处理，有利于提高胚培养成活率。
用35℃处理草莓的茎尖分生组织3～5d，可得到无病毒苗。
二、光照(light)
组织培养中光照也是重要的条件之一，主要表现在光强、光质、以及光照时间方面：
1、光照强度(light intensity)
光照强度对培养细胞的增殖和器官的分化有重要影响，从目前的研究情况看，光照强度对外植物体、细胞的最初分裂有明显的影响。
一般来说，光照强度较强，幼苗生长的粗壮，而光照强度较弱幼苗容易徒长。
2、光质(light wave)
光质对愈伤组织诱导，培养组织的增殖以及器官的分化都有明显的影响。
如百合珠芽在红光下培养，8周后，分化出愈伤组织。
但在蓝光下培养，几周后才出现愈伤组织，而唐菖蒲子球块接种15天后，在蓝光下培养首先出现芽，形成的幼苗生长旺盛，而白光下幼苗纤细。
3、光周期(light period)
试管苗培养时要选用一定的光暗周期来进行组织培养，最常用的周期是16h的光照，8h的黑暗。
研究表明，对短日照敏感的品种的器官组织，在短日照下易分化，而
在长日照下产生愈伤组织，有时需要暗培养，尤其是一些植物的愈伤组织在暗培养下比在光下更好。
如红花、乌饭树的愈伤组织。
三、湿度(humidity)
湿度的影响包括培养容器保持和环境的湿度条件，容器内主要受培养基水分含量和封口材料的影响。
前者又受琼脂含量的影响。
在冬季应当适当减少琼脂用量，否则，将使培养基干硬，以致不利于外植体接触或插进培养基，导致生长受阻。
封口材料直接影响容器内湿度情况，但封闭性较高的封口材料易引起透气性受阻，也会导致植物生长发育受影响。
环境的相对湿度可以影响培养基的水分蒸发，一般要求70%-80%的相对湿度，常用加湿器或经常洒水的方法来调节湿度。
湿度过低会使培养基丧失大量水分，导致培养基各种成分浓度的改变和渗透压的升高，进而影响组织培养的正常进行。
湿度过高时，易引起棉塞长霉，造成污染。
四、渗透压(penetrating pressure)
培养基中由于有添加的盐类、蔗糖等化合物，因此影响到渗透压的变化。
通常1-2个大气压对植物生长有促进作用，2个大气压以上就对植物生长有阻碍作用，而5-6个大气压植物生长就会完全停止，6个大气压植物细胞就不能生存。
五、PH值
不同的植物对培养基最适PH值的要求也是不同的，大多在5-6.5左右，一般培养基皆要求5.8，这基本能适应大多数植物培养的需要。
PH值适度因材料而异，也因培养基的组成而不同。
以硝态氮作氮源和以铵态氮作氮源就不一样，后者较高一些。
一般来说PH值高于6.5时，培养基会变硬;低于5时，琼脂不能很好地凝固。
因为高温灭菌会降低PH值(约0.2-0.3个PH值)因此在配制时常提高PH值0.2-0.3单位。
PH值大小调节可用0.1M的NaOH和0.1M的HCl来调整。
1ml的NaOH可使PH值升高0.2单位，1ml的HCl可使PH值降低0.2单位。
调节时一定要充分搅拌均匀。
六、气体(gas)
氧气是组织培养中必需的因素，瓶盖封闭时要考虑通气问题，可用附有滤气膜的封口材料，如易生组培热销的培养瓶盖和封口膜本身带有PTFE材质的滤菌膜，孔径为0.2um，即保证通气又可以滤菌。
通气最好的是棉塞封闭瓶口，但棉塞易使培养基干燥，夏季易引起污染。
固体培养基可加进活性炭来增加通气度，以利于发根。
培养室要经常换气，改善室内的通气状况。
液体振荡培养时，要考虑振荡的次数、振幅等，同时要考虑容器的类型、培养基等。