微生物基础知识和无菌操作2017年
微生物基本知识
七、微生物的基础应用
被大量用作工业发酵 被用作环保、如降解塑料、处理废水、 废气等，可再生资源的潜力极大。 在食品、饮料工艺方面及药物制剂微生 物学 被广泛用于传染病的控制与治疗
八、细菌介绍
1.细菌的大小和形态：体积很小,常以微 米为测量单位.根据其外形可分为球菌、 杆菌、螺旋菌三大类。 2.细菌细胞的基本结构：细胞壁、细胞膜、 细胞质、核质。（鸡蛋结构） 3.细菌细胞的特殊结构：荚膜、芽胞、鞭 毛、菌毛等。
3、出现致热原的原因 ： ①药物原料本身含有热原，或在配制过程中污染， 储存期间产生热原或发霉变质。 ②输液器及各种用具被致热原污染。 ③输液前液体配制及输液时的操作不规范，引起 液体污染。 4、对输液器具及所输注液体的处理 ： 应将输液器具及所输注的液体尽快送检验科进行 热原检测及细菌学培养。
高温干燥 干热法。利用高温破 一般要求温 适用可耐高温的 灭菌 坏微生物 度160℃以上 设备的零部件
高压蒸汽 湿热法。利用高压蒸 一般为饱合 灭菌 汽使细菌蛋白质凝固 蒸汽 变性 气体灭菌 药物法。利用某些气 某些气体对 体如环氧乙烷、甲醛 环境的温度、 等的灭菌作用 湿度有特定 要求 适用于可耐高温 的零部件、无菌 服 适用于对热敏感 的物体及厂房
10、输液反应
1.范围：输液反应实际应该包括药物过敏反应、热原反应、菌污 染反应。 1.1 药物过敏反应 也称药物变态反应，是指机体再次接触某一药物相同抗原或 半抗原时，发生的一种以机体生理功能紊乱或组织损伤为主的特 异性免疫应答 1.2热原反应：是指由致热原（通常是由细菌内毒素）引起的反应。 1.3菌污染反应：是指由于液体或输液器具被细菌污染引起的不良 反应 临床以热原反应和药物过敏反应 最为常见，二者症状有相似之处， 都表现为：都可以出现寒战、发热、头痛、恶心、呕吐、心悸、 胸闷、低血压休克等
微生物的基本知识
二、微生物的特点
微生物除了个体微小、结构简单这一基本特征以外，还有一些其他特点也是与众多生物不同的。
（一）种类繁多
微生物的数量和种类是十分惊人的。一滴水，一颗土粒往往都是一个微生物“社会”。其中以土壤内的生存密度最大，1克较肥活的土壤常含有几亿到几十亿个微生物；贫瘠土壤每克也含有几百万到几千万个，一只肮脏的苍蝇，全身能携带5亿多个细菌，三对足能粘附700万至1000万个细菌，可见微生物的密集度之大。微生物的各类也很可观，自然界已知的微生物就有10万种左右。有人估计，这个数仅占自然界微生物种类的1/10，所以微生物资源的开发潜力是很大的。尤其微生物的生理类型多种多样，如细菌光合作用；化能合成作用；生物固氮作用；厌氧性的生物氧化作用以及烃代谢；合成各种次生代谢产物：如抗生素、毒素、维生素、赤霉素等；分解各种复杂化合物，如纤维素、木素、甲壳素、琼脂、角蛋白；一些塑料等和分解极毒素物质，如酚、氰、甲醛、多氯联苯等。显然，微生物多种多样的代谢类型，可为生产实践和科学研究提供丰富的菌种资源。
微生物的基本知识
一、微生物的概念与分类
在自然界里，有许多内眼不能直接看见，必须借助于显微镜放大才能观察到微小生物，这些微小生物总称为微生物。微生物虽然个体微小，但具有一定的形态与结构，在适宜的环境中生长和繁殖很快，它们在自然界里起着巨大的作用，是引起各种物质转化的原因之一。例如土壤中的微生物能将动物蛋白质转化为无机含氮化合物，以供植物生长发育的需要，而植物又为人类和动物所利用。有的微生物可使人和动植物得病，而另一些微生物又可直接用来治病，如乳酸杆菌制剂乳酶治疗腹泻，有的微生物产生一些有用的物质而应用于工农业生产，如酿酒、发酵以及抗生素生产等。微生物与人类的关系至为密切，绝大多数微生物对人类是有益的，而且是必须的。没有微生物，植物就不能新陈代谢，人和动物也将无法生存，只有少数微生物可能引起人类或动杆物病害，这些具有致病性的微生物则称为病原微生物或致病菌。
微生物基础知识-灭菌及无菌基本概念
注： 若存在伤口，在化脓部位存在金黄色葡萄球菌几率极高。
二、无菌概述
1、高压蒸汽灭菌
• 利用饱和蒸汽的湿热在一定压力下所释放的潜热杀灭病原 微生物、细菌繁殖体、芽胞和病毒的方法。 • 适用于耐高温、耐高湿的器械和物品的灭菌，如金属器皿 、玻璃器皿、基础培养基等。 • 常用灭菌条件： 134℃、3min 126℃、10min 121℃、15-20min 115℃、25min
为什么在无菌室里无菌环境下无菌操作了，产品还是会染菌 ？？？——相对无菌
3.1操作环境——洁净室
洁净室的常用消毒方式：
• 紫外杀菌: • 空气熏蒸： 乳酸熏蒸: 纯乳酸12ml+等量水/100m3, 30～120 min 甲醛熏蒸：40％甲醛10ml+高锰酸钾5g/1m3, 6～12h • 喷洒及擦拭： 0.1%的新洁尔灭 ：用于擦拭实验台面、墙面、地面、物品表面等。 75%酒精：用于擦拭实验台面、墙面、地面，还用于擦拭实验人员手及工器 皿表面等。
– 最佳杀菌波长：260nm – 有效距离：物品：25～60cm, 空气：＜2m – 照射时间：灯亮 5～7min后开始计算，＞30min – 适用：室内空气、物体表面 – 特点：简单、方便、无损物品 – 类型：悬吊式、移动式、屏幕式
4、电离辐射灭菌法
• 定义：利用ｒ射线或高能电子束进行灭菌，又称 “冷灭菌”，具有广谱杀菌作用。 • 特点：不使物品升温、穿透力强、操作简便、成本 低。 • 适用：忌热物品，如一次性医疗物品、包材、精密 器械、生物制品、药品、食品。
3.3人员无菌操作
避免人为污染方法： • 做好个人防护 • 手部消毒
原则： 发网、帽子——避免头发掉落或头 皮附带物飘落。 工作服——衣服按时清洗，进入无 菌室需更换专用工作服。 鞋子——进入无菌室需更换专用工 作鞋 洗手——按照标准洗手程序认真进 行。 手套——操作是必须戴专用手套。
微生物基础知识
4. 红外线 是一种0.7~1000μm波长的电磁波，尤以
1~10μm波长的热效应最强。
热效应只能在照射到的表面产生。多用 于医疗器械的灭菌。
（二）湿热灭菌法
最常用，效果优于干热灭菌法。
理由：
①湿热中细菌菌体蛋白质较易凝固变性。 湿热灭菌时，菌体吸收水分，蛋白质含水 愈多，凝固所需温度降低。
病毒和朊病毒等。
微生物分类
2.按其致病性可分为: ★病原性微生物:侵犯人体，引起感染甚至
传染病的微生物，或称病原体 。
★非病原性微生物
微生物形态结构
一、细菌 细菌是一类细胞细而短、结构简单、细胞壁坚韧，以二分裂方
式无性繁殖的原核微生物，分布广泛。 1. 球菌 多数球菌直径在1微米左右，外观呈球形或近似球形。
杆菌 形态多数呈直杆状，也有的菌体稍弯，多数呈分散存在
螺形菌 细菌虽小，仍具有一定的细胞结构和功能。细胞壁、细胞膜、
细胞质和核质是细菌的基本结构。
微生物的主要类群：球菌
链球菌
葡萄球菌
微生物的主要类群：杆菌
大肠杆菌
沙门氏菌
微生物的主要类群：弧状菌
2.细菌的繁殖 速度：细菌生长速度很快，一般约20min 完成一代繁殖。
人体中的微生物
人自出生后,外界的微生物就逐渐进入人体。在正常
鼻咽腔、肠道和泌尿道等）部位，存在着对人体无害 的微生物群（包括细菌、真菌、螺旋体、支原体等） 称为正常菌群 能使宿主致病的为致病菌或病原菌；不能造成宿主感 染的为非致病菌或非病原菌；有些细菌在正常情况下 并不致病，但当在某些条件改变的特殊情况下可以致 病，这类菌称为条件致病菌或机会致病菌。
醋的生产
酸奶的生产
微生物基础知识
大肠杆菌的个体繁殖:时间(分钟)世代微生物数
0020=1
20121=2
40222=4
60323=8
:::
40020220=1,048,576
:::
144072272=4.72*1021
生长周期
生长曲线:代表细菌在新的适宜的环境中生长繁殖直至衰老死亡全过程的动态变化。
微生物基础知识
第一节基础微生物学
一、微生物概述
病毒界————-病毒
原核生物界——-细菌
生物分类系统真菌界————酵母菌
霉菌
真核原生界——-藻类
原生动物
动物界
植物界
微生物并非生物分类学上的名词，是所有形体微小的低等生物的通称。
（一）微生物定义
微生物是一群形体微小，结构简单，肉眼看不到，只能借助光学显微镜或电子显微镜放大数100或数1000倍甚至数万倍才能看到的微小生物。
1)营养物浓度
2）温度
在一定的温度范围内，每种微生物都有自已的生长温度三基点：最低生长温度、最适生长温度和最高生长温度。在生长温度三基点内，微生物都能生长，但生长速率不一样。微生物只有处于最适生长温度时，生长速度才最快，代时最短。超过最低生长温度，微生物不会生长，温度太低，甚至会死亡。超过最高生长温度，微生物也要停止生长，温度过高。也会死亡。一般情况下，每种微生物的生长温度三基点是恒定的。但也常受其它环境条件的影响而发生变化。
３）穿刺接种在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时，用的接种工具是接种针。用的培养基一般是半固体培养基。它的做法是：用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。
微生物检测基础知识大全!
微生物检测基础知识大全微生物检测涉及多行业和领域，在实验室检测中有着重要的地位，今天和大家一起对微生物检测中的一些基础操作进行汇总和梳理！接种将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。
接种和分离工具1.接种针2.接种环3.接种钩4.5.玻璃涂棒6.接种圈7.接种锄8.小解剖刀常用的接种方法有以下几种：1、划线接种这是最常用的接种方法。
即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达到接种的作用。
常用的接种工具有接种环，接种针等。
在斜面接种和平板划线中就常用此法。
２、三点接种在研究霉菌形态时常用此法。
此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。
除三点外，也有一点或多点进行接种的。
３、穿刺接种在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。
做穿刺接种时，用的接种工具是接种针。
用的培养基一般是半固体培养基。
它的做法是：用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。
４、浇混接种该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45℃左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。
待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。
５、涂布接种与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。
６、液体接种从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中，或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，或从液体培养物中将菌液移至固体培养基中，都可称为液体接种。
７、注射接种该法是用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内，如人或其它动物中，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种，接入人体，来预防某些疾病。
８、活体接种活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。
食品微生物检测基础知识汇总
食品微生物检测基础知识汇总一、微生物基础知识1、微生物的概念：微生物是一群体形细小，构造简单的微小生物的总称。
即凡是肉眼看不见的生物通称为微生物。
2、微生物的特点：个体小、结构简单、分布广、繁殖快、容易发生变异。
3、细菌生长的四个时期：平缓期、对数期、延滞期、衰老期。
4、微生物繁殖需要的条件：(1).充足的营养(2).合适的酸碱度(3).适宜的温度(4).必要的气候环境。
5、常用检验方法镜检接种培养二、无菌操作1、微生物操作要求迅速，结果正确且不污染周围环境。
因此，操作必须在无菌室内进行，使用的培养基及各种器材需经灭菌处理，整个过程还要符合无菌要求。
2、无菌室的要求工作室应矮小、平整，面积4平方米，采光面积宜大，周围需设缓冲走廊，无菌室缓冲间应有供消毒空气用的紫外灯。
3、无菌室的使用与管理（1）无菌室应保持清洁整齐，室内仅放最必须的检验用具。
每2-3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作台、门及地面，然后用3%石碳酸水溶液消毒空气，最后紫外灯杀菌半小时。
（2）无菌室杀菌前，应将所有物品置于操作台，然后打开紫外灯杀菌30min。
进入无菌室前，必须清洁双手，在缓冲间更换消毒过的工作服、工作帽、工作鞋。
（3）操作应严格按照无菌操作规定进行，操作中少说话，以保持环境的无菌状态。
4、器材及场所的灭菌消毒高压蒸汽灭菌工作服、口罩、培养基稀、释液等，置高压杀菌锅内，一般采用121℃灭菌半小时，不同的培养基有不同的要求，应分别处理。
不能随便改变杀菌温度，温度过低，达不到杀菌效果，灭菌效果以芽孢是否杀死为判断标准。
温度过低，芽孢未被杀死，温度过高，则营养成分损失，状态也较差。
高温能杀死细菌的原因：细菌细胞基本是蛋白质，蛋白质不耐高温，生物催化剂-酶也是蛋白质，蛋白质受高温结构严重破坏，发生凝固便会死亡。
湿热比干热更容易杀菌的原因是：蛋白质含水越多，加热时越容易凝固，湿热作用的水蒸气传导力和穿透力都较强，更容易破坏蛋白质，从而更容易杀死细菌。
微生物知识及无菌操作注意事项
口腔菌丛
• 口腔中有适宜的温度，并含有食物残渣、脱落上皮和粘液等，是微生物 生长繁殖的良好场所。
• 口腔中的细菌种类很多，且数量变化也大。 • 常见的为革兰阳性球菌、奈氏球菌、乳酸杆菌、梭状芽胞杆菌、螺旋体、
白色念珠菌、类白喉杆菌。 • 正常谈话时，常见喷出的细菌是腐生的绿色链球菌类。
微生物知识及无菌操作 注意事项
2016/05/28
欣弗事件
ห้องสมุดไป่ตู้
刺五加事件
内容：
微生物基础知识 操作中无菌意识 人员卫生
第目
一
微生物基础知识
部录
分
1、微生物是什么？
是存在于自然界的一大群形态小、结构简单、肉眼看不见，需要借 助光学显微镜或者电子显微镜放大数百倍、数千倍甚至数万倍才能观 察到的微小生物。
特点： 对营养的要求非常低；
无处不在；
大多数微生物对人类有益；
有些微生物对人类有害；
八大类
• 真菌：酵母菌、霉菌、大型真菌 • 细菌：肺炎球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌 • 放线菌：抗生素如链霉素、土霉素等都是链霉菌
的次生 代谢产物 • 支原体：肺炎支原体 • 衣原体：沙眼 • 立克次体：斑疹伤寒 • 螺旋体：梅毒 • 病毒：甲、乙肝病毒，麻疹病毒，狂犬病毒，流
物异位侵入某些组织时，都可以引起人体疾病，这些细菌通常称条件致病菌。
人体不同部位所带细菌数量
部位
手部 前额 头皮 腋窝 鼻腔分泌物 唾液 粪便
细菌数量
100～1000/ cm2 1000～100000/ cm2
约100万/ cm2 约1000万/ g 约1000万/ g
微生物的无菌操作及接种技术
工业生产中的微生物接种
工业生产中培养的菌种接入种子罐时，一般先制成菌 悬液。 常用的方法有压差法、火焰封口法等。 1 、火焰封口法 种子罐的接种口周围设有沟槽，接种时先在沟槽里注 入少 量酒精，然后用火焰点燃酒精，使接种口被包围在一堆 火 焰之中，接着将菌悬液倒入种子罐中即可。
历史ⅱ岳麓版第13课交通与通讯 的变化资料
定期作实验室沉降菌计数，以检查无菌室微生物生长 繁殖动态。
无菌环境的要求与保持
2、超净工作台
超净工作台是为实验室工作提供无菌操作环境的设施， 以保护实验免受外部环境的影响，同时为外部环境提供 某些程度的保护以防污染并保护操作者。
原理：超净工作台的洁净环境是在特定的空间内，洁 净空气(进滤空气)按设定的方向流动而形成的。以气流 方向来分，现有的超净工作台可分为垂直式，由内向外 式以及侧向式。
无菌操作要求
无菌操作要求
（二）接种的操作方法
接种的基本程序 常用接种方法
斜面接种 划线接种 液体接种 穿刺接种
（二）接种的操作方
法1、接种的基本程
序
灭菌接种环 杀灭接种环沾染的微生物，以免污染标本
沾取标本 接种
•操作需在无菌室或超净工作台内进行 •无菌室、超净工作台使用前后需进行消毒。 •实验使用的物品使用前后需严格灭菌
垂直流超净工作台
垂直流超净工作台 水平流超净工作台
无菌环境的要求与保 持
超净台的使用与维护
风速保持在0.32-0.48米/秒 使用前打开紫外灯照射40~60min 开启超净工作台工作电源，关闭紫外灯，并用75%的酒精或0.5%过
氧乙酸喷洒擦拭消毒工作台面。 使用中，有机玻璃罩受到污染，严禁用酒精棉球擦拭，请用含水棉布
微生物基础知识和无菌操作
产品；部分或全部工序采用无菌生产工艺的为非最终灭菌产品。 ❖ ❖ 第七条 应当根据产品特性、工艺和设备等因素，确定无菌药品生产用洁净
区的级别。每一步生产操作的环境都应当达到适当的动态洁净度标准，尽可 能降低产品或所处理的物料被微粒或微生物污染的风险。
菌病，发于皮肤皱褶处。2.粘膜念珠菌病，以鹅口疮、口角炎、阴道炎最多见。3.内脏及 中枢神经念珠菌病，可由粘膜皮肤等处病菌播散引起，有肺炎、肠胃炎、心内膜炎、脑膜 炎等，偶尔也可发生败血症。
✓ 我们生产的疫苗必须无菌(绝对无微生物
)并且无颗粒 (纤维、玻璃或金属颗粒和
结晶体)
The vaccines
坐着不动能产生
100,000个颗粒
A person sitting and
without
activities
produces naturally
more than 100.000
particles.
✓ 走能产生5,000,000个 颗粒
A person walking produces more than 5.000.000 particles.
we produce must be sterile (bsent) and must
be free of particles (fiber, glass or steel fragments, crystals,...)
人体是微生物和颗粒污染的主要来源
❖ 内毒素不是蛋白质，因此非常耐热。在100℃的高温下加热1小时也不会被破 坏，只有在160℃的温度下加热2到4个小时，或用强碱、强酸或强氧化剂加 温煮沸30分钟才能破坏它的生物活性。
2017无菌技术基本知识
第四十页，编辑于星期五：一点 二十五分。
（二）无菌容器的使用法
无菌容器用于盛放无菌物品并保持无菌状态
种类： 无菌盒、罐、盘、储槽
无菌罐
无菌贮 槽
第四十一页，编辑于星期五：一点 二十五分。
无菌容器的使用
第四十二页，编辑于星期五：一点 二十五分。
第四十三页，编辑于星期五：一点 二十五分。
第十七页，编辑于星期五：一点 二十五分。
第十八页，编辑于星期五：一点 二十五分。
★无菌技术的操作原则
（一）操作前准备
个环人境准备
着环装境、清戴洁帽、子宽、敞 口操罩作、前剪30短min指停甲止
、清脱扫下腕表、洗 手
第十九页，编辑于星期五：一点 二十五分。
手的清洗和消毒
医护人员通过手传播病原菌造成的医院感染占所有医院感染原因的
感染。 追查原因
医务人员警惕性不强，无菌技术不够熟练，在诊断中未能有防范 意识，而造成疏忽性感染。
第四页，编辑于星期五：一点 二十五分。
案例分析
不安全注射或一次性医疗器材使用不规范
据WHO报道，全世界每年约有120亿注射。其中不安全注射引起 乙肝人数为800万人至1600万人，丙肝为230万人至470万人，艾滋病 为8万人至16万人，导致直接医疗费用为5.35亿美元。
第五十四页，编辑于星期五：一点 二十五分。
（六）戴无菌手套
取手套：手持手套内面，手套外面应从无菌区通过。
第五十五页，编辑于星期五：一点 二十五分。
戴无菌手套
戴手套：手套的外面不可触及有菌物品与有菌区，手套的外面与内面不可相互触及。
第五十六页，编辑于星期五：一点 二十五分。
戴无菌手套
脱手套：由上而下翻转脱出。
微生物基础知识及洁净区微生物控制
微生物基础知识及洁净区微生物控制培训内容简介一、 微生物简介二、微生物的分布三、微生物的作用及危害四、微生物的形态结构五、微生物污染及消毒灭菌六、 洁净区微生物的控制一、微生物简介1、微生物的定义(microorganism, microbe):微生物是存在于自然界中的个体微小，结构简单、肉眼看不见，必须借助于显微镜才能看清它们外形的一群低等的、原始的微小生物，如细菌，病毒等。
2、微生物的分类(按其结构、化学组成可分为)Ø原核生物:细胞核无核膜包裹，只存在称作核区的裸露DNA的原始单细胞生物。
它包括细菌、放线菌、立克次氏体、衣原体、支原体、蓝细菌和古细菌等。
Ø真核生物:细胞核的分化程度较高，有核膜、核仁和染色体, 细胞器完整。
如真菌(酵母菌和霉菌)、原生动物、藻类。
Ø非细胞类:结构最简单和最小的微生物，能通过除菌滤器，没有典型的细胞结构，无产生能量的酶系统，只能在宿主活细胞内生长增殖的微生物。
如病毒和朊病毒。
非细胞细胞生物生物3 .微生物的五大特点：3 .微生物的五大特点：①体积小、比表面积大：微生物的大小以μm计，但比表面积（表面积/体积）大，必然有一个巨大的营养吸收，代谢废物排泄和环境信息接受面。
这一特点也是微生物与一切大型生物相区别的关键所在。
②吸收多、转化快：这一特性为高速生长繁殖和产生大量代谢物提供了充分的物质基础。
③生长旺、繁殖快：生长繁殖率极高，如大肠杆菌在20-30分钟内分裂一次，如果连续分裂，48小时内2.2*10^43个细菌数量增加，营养消耗、代谢积累和限制生长速度。
这种特性可以在短时间内将大量的基板转化为有用的产品，缩短研究周期。
还有一些缺点，如疾病、粮食霉变。
④分布广,种类多（10万多种）：自然界中到处都有，如水、空气、土壤等，土壤中的数量最多。
⑤适应性强，易变异：在紫外线辐射、生物诱变剂和环境中的一些营养因子的变化中，微生物自觉地、强制性地改变其遗传结构，导致变异。
无菌知识与无菌操作注意事项
无菌知识与无菌操作注意事项目录：1、微生物基本知识2、无菌的基本知识3、GMP中关于洁净区管理的基本要求4、洁净区人员卫生规范5、洁净区人员行为规范6、具体工作中的注意事项具体内容：1、微生物基本知识1.1微生物包括：细菌、真菌、放线菌、蓝线菌、立克次氏体、支原体、衣原体、病毒。
1.2细菌的特点：体积小、面积大；吸收多、转化快；生产旺、繁殖快；适应性强；分布广、种类多1.3细菌的形态：○1球菌○2杆菌○3螺旋菌1.4细菌的结构：○1基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞核、核质体○2特殊构造：鞭毛、菌毛、芽孢、美膜、气泡1.5芽孢：某些细菌在其生产的一定阶段，于营养细胞内形成一个圆形或卵圆形的内生孢子，是细菌的休眼体。
特点：含水量低、壁原而致密，对热、化学剂、辐射、压力、抵抗力强。
1.6常见污染药物的菌体都是一些生命力强的菌体，如葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、枯草杆菌以及一些霉菌等。
2、无菌的基本知识按照无菌的最严格的定义，只有完全没有活微生物的样品才认为是无菌的。
但由于检查有一定的限度，它属于小概率事件，不可能破坏所有的药品，所以对于整批药品而言，实际上不能证明绝对无菌。
因此，声称无菌的一批产品的无菌情况是按照概率来定义的。
所以不能仅靠无菌检查来保证产品的无菌，而应通过全过程的无菌管理来保证产品的无菌。
我公司生产的产品主要用于注射剂的原料，因此要严格控制其无菌和澄明度。
如果使用了染菌的针剂，若是非致病菌，可能回引起局部的炎症，而若是致病菌，就可能会引起相应的疾病，染菌严重的药品若用于输液，会引起脓毒症、败血症甚至死亡。
较大的微粒可造成局部循环障碍，引起血管栓塞；微粒过多，造成局部堵塞和供血不足，组织缺氧而产生水肿和静脉炎；异物侵入组织，由于巨噬细胞的包围和增殖引起的肉芽肿。
此外，威力还可引起过敏反应、热原样反应。
灭菌与消毒灭菌方法：物理灭菌法（干热灭菌、湿热灭菌、辐射灭菌、过滤除菌）；化学灭菌法（化学药剂杀菌法、气体灭菌法）2.1化学消毒：2.2物理灭菌紫外线是一种比可见的紫外光波长还要短的不可见电磁波，它的波长范围是100~380nm，微生物体内都含有核酸，而核酸吸收紫外线照射的辐射能后可引起光化破坏作用，从而杀死微生物。
微生物及无菌基础知识
微生物及无菌基础知识一．前言我们所生活的环境中，到处都存在着大量的微生物。
在一般空气中，微生物达800~3500个/m3，在土壤中达1~500×108个/g，在严重污染的水中可达107个/ml。
（饮用水要求细菌总数≤100个/ml，大肠杆菌≤3个/ml。
经水塔或贮水池贮存后，短期内可繁殖至105~106个/ml。
）人的头皮上有140万个/cm2，两手上约有4~40万个，1g指甲污垢有38亿个，1g粪便可达10~1000亿个。
可以说微生物是无处不在，无处不有。
许多以前被人们认为是极端（高温、高压、强酸、强碱、低温等）甚至是致死的环境，现在已发现生活着各种类型的微生物（称为极端微生物）。
事实说明，微生物有特别顽强的生存、繁殖和变异能力来适应环境。
微生物种类繁多，有的对人有益，有的有害，有的无益也无害。
但在药品生产过程中，不可能对环境中的各种微生物加以区别对待，为保证药品的安全有效，需要对其进行控制。
空气中的微生物多数附着在灰尘上，或以芽孢形式悬浮于空气中，1μm以下者处于悬浮状态，10μm以上者会逐渐沉下来而形成菌尘。
所以也要对尘粒进行控制。
大量临床资料表明，注射剂（尤其是静脉注射剂）如污染了7~12μm的尘粒，可导致热原反应、肺动脉炎、微血栓或异物肉芽肿等，严重的还会致人死命。
而如果污染了细菌，轻则局部红肿化脓，重则引起全身细菌性感染。
因此，对微生物和尘粒进行更加严格的控制对于针剂生产洁净室非常重要。
人是洁净室最大的污染源，占90%左右。
一般男性每人每分钟向周围排放1000个以上的含菌粒子，女性为750个以上。
穿无菌服时，静止时的发菌量为10~300个/min，一般活动时发菌量为150~1000个/min，行走时发菌量为900~2500个/min。
咳嗽一次发菌量为70~700个/min，喷嚏一次为4000~60000个/min。
所以在洁净室中，人的数量和活动应有特别严格的限制。
二．微生物简介微生物是广泛存在于自然界的一群体形微小（直径小于1mm）、结构简单、肉眼看不见，必须藉助光学或电子显微镜放大数百至数万倍才能观察到的生物。
微生物基础知识
二、微生物的染色
一）试验准备
先分别用低倍镜和高倍镜找到要观察的样品区
域后，用转换器将物镜转到空挡，在样品区域滴加
香柏油，再将油镜慢慢转到工作位臵浸入油中。因
为当光线通过载玻片时，由于玻璃与香柏油的折射
率相近，可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射 ，这样就可以增加照明度，使镜检物清晰。若不清 晰，慢慢转动微调直至清楚。
2、构造
细菌细胞由外向里 依次有鞭毛、菌 （纤）毛、荚膜 、细胞壁、细胞 膜、细胞质，细 胞质中又有液泡 、储存性颗粒、 核质等。
图1-3 细菌的结构
*细胞壁
结构特点：坚韧且有弹性 细胞壁有哪些功能？ ①固定细胞外形； ②保护细胞免受外力的损伤； ③阻拦大分子物质进人细胞；
④使细胞具有致病性及对 噬菌体的敏感性。
1.消毒与灭菌的概念及两者的区别
（１）消毒定义： 利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物 的过程。区分为高程度消毒（High-level Disinfection）、中程度消毒（Intermediate-level Disinfection）、低程度消毒（Low-level Disinfection） 三种方式。
四、培养基的配制和灭菌
一）实验原理
培养基是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的各种营 养物质，用人工方法配制而成的一种基质。它包括碳源、氮 源、能源、生长因子、无机盐和水六类营养要素。由于不同 微生物细胞组成不同，因而所需营养基质不同，为了分离、 培养和鉴定不同的微生物，必须根据其需要，配制合适的培 养基. 培养基的种类繁多，根据培养基的成分、物理性状不同， 可分为天然培养基、合成培养基、半合成培养基、固体培养 基、半固体培养基和液体培养基
5-无菌及微生物检查方法验证
细菌（bacterium）属于原核细胞型微生物，其 特点是具有细胞壁、原始的核质，以二分裂方式 繁殖。
细菌的形态
⒈细菌体积微小，是无色半透明的，用肉眼直接观 察难以看到，其结构和形状须经过显微镜放大数百 倍至上千倍才能观察。
⒉一般以微米（µ m）作为测量单位。 ⒊在细菌学中，按其形态可分为球菌、杆菌、弧菌
薄膜过滤法
过滤器应优先选择封闭式薄膜过滤也可使用一般 薄膜过滤器。 选择滤膜材质时应考虑供试品及其溶剂的特性。பைடு நூலகம்
⒈可溶于十四烷酸异丙酯的膏剂和黏性油剂 供试品。
⒉水溶性供试品直接过滤。
⒊可溶性固体制剂供试品。
⒋装有药物的注射器供试品和具有导管的医 疗器具的供试品。
直接接种法
供试品按规定量分别接入含培养细菌和真菌培养 基的容器中，除另有规定外，每个容器中的培养 基量应符合接种的供试品体积不得大于培养基体 积的10%。同时硫乙 醇酸盐培养基不得少于 15ml、改良马丁培养基不得少于10ml，培养基 用量和高度应经方法验证。
⑷ 重新验证
药品的生产工艺、制剂组分、检验方法或检验 条件发生改变时，应重新进行验证，以确认所 发生的变化不影响该药品中的微生物检查。
验证试验用菌株的要求
⑴验证试验用菌株应有代表性。 ⑵试验菌株应选择非致病性菌株。 ⑶试验菌宜选择比较稳定、重现性强的菌株。 ⑷菌株传代次数不得超过第五代。
试验用菌株的储藏
药品无菌检查和微生物检查方法验证
方法验证的必要性 ⒈为保证检验结果的可靠性，真实性，选择正确
的检验方法是至关重要的。因此试验前必须对 选择的方法进行验证。 ⒉证明所采用的方法是适宜的，确认所采用的方 法适宜于被检供试品的微生物污染的检验。
检验结果的影响因素
微生物检验的基本操作之无菌操作
一、无菌操作技术1、定义是指在执行实验过程中，防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法；无菌操作技术是微生物实验的基本技术，是保证微生物实验准确和顺利完成的重要环节。
2、内容无菌操作技术主要包括两方面：1）创造无菌的培养环境。
包括提供密闭的培养容器、培养容器的灭菌、培养基的灭菌等；2）在操作和培养过程中防止一切其它微生物的侵入的措施。
包括紫外线杀菌、甲醛熏蒸、超净台的消毒与检测、操作工具、器皿灭菌、操作方法等。
3、无菌操作原则1）在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区，接种时必须穿工作服、戴工作帽，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球将手擦干净；2）在操作前20～30分钟要先启动超净台和紫外灯，进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼3次后使用。
严禁用手直接拿无菌物品，如瓶塞等，而必须用消毒的钳、镊子等；3）从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不能触及试管或平皿边；4）接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒；5）接种环或接种针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必须时还要烧到环和针与杆的连接处；6）吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。
倾倒平板应在超净台内操作，并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。
二、无菌操作的环境要求1、无菌室（1）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间；（2）无菌室的消毒和防污染•每日（使用前）紫外线照射（0.5~1小时）；•每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒；•每季度用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸（2小时），特殊情况下可增加熏蒸频次。
（3）无菌室使用要求①无菌室内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，拭擦工作台面，不得存放与实验无关的物品；②无菌室使用前后应将门关紧，打开紫外线，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻拭擦，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响；③处理和接种食品标本时，进入无菌室操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。
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2017.06
目录
1.无菌及微生物定义及法规讲解 2.微生物来源 3.生产洁净区无菌操作 另外---.厂房洁净区及环境监控
疑问？？
▪ 什么是无菌药品?什么是注射剂？ ▪ GMP法规中无菌药品微生物控制什么项目？ ▪ 什么是微生物？ ▪ 为什么要对药品生产进行微生物控制？ ▪ 微生物污染的途径？ ▪ 微生物的控制措施？
金黄色葡萄球菌 [CMCC (B)26003]---是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。
金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、 伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。
白色念珠菌[CMCC(F)98001]---白色念珠菌可侵犯人体许多部位，可引起：1.皮肤念珠
❖
二、GMP法规对无菌药品微生物的控制
❖ 第二十条 凡在洁净区工作的人员（包括清洁工和设备维修工）应当定期培训，使 无菌药品的操作符合要求。培训的内容应当包括卫生和微生物方面的基础知识。未受 培训的外部人员（如外部施工人员或维修人员）在生产期间需进入洁净区时，应当对 他们进行特别详细的指导和监督。 ❖ 第五十条 必要时，应当定期监测制药用水的细菌内毒素，保存监测结果及所采取 纠偏措施的相关记录。 ❖ 第五十二条 应当尽可能减少物料的微生物污染程度。必要时，物料的质量标准中 应当包括微生物限度、细菌内毒素或热原检查项目。 ❖ 第五十三条 洁净区内应当避免使用易脱落纤维的容器和物料；在无菌生产的过程 中，不得使用此类容器和物料。 ❖ 第五十四条 应当采取各种措施减少最终产品的微粒污染。 ❖ 第五十五条 最终清洗后包装材料、容器和设备的处理应当避免被再次污染。
二、GMP法规对无菌药品微生物的控制
❖ 第五十八条 应当根据所用灭菌方法的效果确定灭菌前产品微生物污染水平的监控 标准，并定期监控。必要时，还应当监控热原或细菌内毒素。 ❖ 第五十九条 无菌生产所用的包装材料、容器、设备和任何其它物品都应当灭菌， 并通过双扉灭菌柜进入无菌生产区，或以其它方式进入无菌生产区，但应当避免引入 污染。 ❖ 第八十条 无菌检查的取样计划应当根据风险评估结果制定，样品应当包括微生物 污染风险最大的产品。无菌检查样品的取样至少应当符合以下要求： ❖ （一）无菌灌装产品的样品必须包括最初、最终灌装的产品以及灌装过程中发生较 大偏差后的产品； ❖ （二）最终灭菌产品应当从可能的灭菌冷点处取样； ❖ （三）同一批产品经多个灭菌设备或同一灭菌设备分次灭菌的，样品应当从各个/次 灭菌设备中抽取。
微生物
❖ 一). 什么是微生物 ❖ 微生物是一类肉眼不能直接看见，必须借助光学显微镜或
电子显微镜放大几百倍、几千倍甚至几万倍才能观察到的 微小生物的总称。 ❖ 微生物具有形体微小、结构简单；繁殖迅速、容易变异； 种类繁多、分布广泛等特点。
细菌内毒素
❖ 内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁中的一种成分，叫做脂多糖。脂多糖 对宿主是有毒性的。内毒素只有当细菌死亡溶解或用人工方法破坏菌 细胞后才释放出来，所以叫做内毒素。又称之为"热原"。单位Eu/ml。 其毒性成分主要为类脂质A。内毒素位于细胞壁的最外层、覆盖于细 胞壁的黏肽上。各种细菌的内毒素的毒性作用可引起发热、微循环障 碍、内毒素休克及播散性血管内凝血等。
二、GMP法规对无菌药品微生物的控制
❖ 第三条 无菌药品的生产须满足其质量和预定用途的要求，应当最大限度降 低微生物、各种微粒和热原的污染。
❖ 生产人员的技能、所接受的培训及其工作态度是达到上述目标的关键因素， 无菌药品的生产必须严格按照精心设计并经验证的方法及规程进行，产品的 无菌或其它质量特性绝不能只依赖于任何形式的最终处理或成品检验（包括 无菌检查）。Βιβλιοθήκη 三、 药典中使用的菌种介绍
大肠杆菌 [CMCC (B) 44102]---革兰氏阴性短杆菌。能发酵多种糖类产酸、产气，是人
和动物肠道中的正常栖居菌。大肠埃希菌的致病物质之一是血浆凝固酶。主要为致泻性。
乙型副伤寒沙门杆菌 [CMCC (B) 50094]---寄居在人类动物肠道内生化反应和抗原构
造相似的革兰阴性杆菌。它是人类食物中毒的主要病原之一。肠道致病菌，常常因为误食 不洁食物引起，感染者出现严重腹泻。由沙门氏菌引起的疾病主要分两大类：一类是伤寒 和副伤寒，另一类是急性肠胃炎。
❖ 铜绿假单胞菌 [CMCC (B)10104]---原称绿脓杆菌。在自然界分布广泛，为土壤中存在
的最常见的细菌之一。铜绿假单胞菌有多种产物有致病性，其内毒素是引起脓毒综合征或 系统炎症反应综合征(SIRS)的关键因子。本菌为条件致病菌，是医院内感染的主要病原菌 之一。常引起术后伤口感染。本菌引起的感染病灶可导致血行散播，而发生菌血症和败血 症。烧伤后感染了铜绿色假单胞菌可造成死亡。
无菌、注射剂
❖ (一). 什么是无菌药品？ ❖ 无菌指没有或的微生物。
❖ 药品GMP指南中介绍，无菌药品是指法定药品标准中列有无菌检
查项目的制剂和原料药，包括注射剂、眼用制剂、无菌软膏剂、无菌 混悬剂等。
❖ (二). 什么是注射剂？
❖ 注射剂系指原料药物或与适宜的辅料制成供注入体内的无菌制剂。
❖ 注射剂可分为注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液等。
❖ 内毒素不是蛋白质，因此非常耐热。在100℃的高温下加热1小时也不会被破 坏，只有在160℃的温度下加热2到4个小时，或用强碱、强酸或强氧化剂加 温煮沸30分钟才能破坏它的生物活性。
❖ 由于内毒素是细菌死亡裂解或自溶引起的，因此环境中大量存在内毒素。内 毒素大量进入血液就会引起发热反应-"热原反应"。
❖ ❖ 第四条 无菌药品按生产工艺可分为两类：采用最终灭菌工艺的为最终灭菌
产品；部分或全部工序采用无菌生产工艺的为非最终灭菌产品。 ❖ ❖ 第七条 应当根据产品特性、工艺和设备等因素，确定无菌药品生产用洁净
区的级别。每一步生产操作的环境都应当达到适当的动态洁净度标准，尽可 能降低产品或所处理的物料被微粒或微生物污染的风险。