小鼠冠状动脉平滑肌细胞使用说明

合集下载

小鼠主动脉内皮细胞使用说明

小鼠主动脉内皮细胞小鼠主动脉内皮细胞产品说明：为使能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。

派瑞金提供的小鼠主动脉内皮细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。

研发的小鼠主动脉内皮细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。

同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。

注意事项：1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。

3. 请用相同条件的培养基用于细胞培养。

培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。

4. 建议收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。

5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。

小鼠主动脉内皮细胞产品简介：1、产品名称：C57小鼠主动脉内皮细胞（Mouse Aortic Endothelial Cells）2、组织来源：C57小鼠心肌主动脉3、产品规格：5×105cells / 25cm2培养瓶小鼠主动脉内皮细胞简介：心肌主动脉是供给心脏血液的动脉。

主动脉内皮细胞分离自正常C57小鼠心肌主动脉，呈单层扁平分布。

内皮细胞或血管内皮是一薄层的专门上皮细胞，由一层扁平细胞所组成。

它形成血管的内壁，是血管管腔内血液及其他血管壁（单层鳞状上皮）的接口。

内皮细胞是沿着整个循环系统，由心脏直至最少的微血管。

本公司生产的C57小鼠主动脉内皮细胞采用混合酶消化而来，细胞总量约为5×105cells/瓶，CK-18免疫荧光鉴定细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

小鼠血管平滑肌细胞原代培养及体外钙化模型的制备

小鼠血管平滑肌细胞原代培养及体外钙化模型的制备徐丽华;严金川;伍超;逯朝阳;王中群;袁伟【摘要】目的:建立一种简单、高效的小鼠主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)原代培养方法及体外钙化模型.方法:采用改良的组织贴块法培养小鼠VSMCs,经免疫荧光染色法鉴定后,将细胞随机分为对照组和钙化组.采用yon kossa染色及比色法检测两组细胞内钙含量.结果:培养3～5d时,可见细胞从组织块边缘爬出,7～10d后细胞融合成片;免疫荧光染色显示胞质表达特异性α-肌动蛋白;VSMCs培养至第2代细胞纯度达95％;与对照组相比,钙化组细胞的钙含量、碱性磷酸酶(ALP)活性明显增加(P均＜0.05).结论:改良的组织贴块法可获得高纯度的小鼠VSMCs;β-甘油磷酸钠在体外可有效诱导其钙化.%Objective:To establish a simple and efficient method for primary culture of mouse aortic vascular smooth muscle cells (VSMCs) and calcification model in vitro.Methods:The primary VSMCs were harvested by modified tissue-piece inoculation and identified by immunocytochemistry.The established VSMCs were randomly divided into control group and calcification group.Calcification of cells was assayed by von kossa staining and colorimetry method.Results:VSMCs migrated from explants of mouse aorta tissue after 3-5 days of culture.After 7-10 days,VSMCs grew to form a fusing monolayer.Immunofluorescence staining with specific mAb against mouse α-actin demonstrated VSMCs were positive.The cell purity of the 2nd generation of VSMCs was over 95％.Compared with the control group,the calcium content and ALP activity in the calcification group were increased significantly (both P ＜0.05).Conclusion:The method of modified explant-culture successfully established a effective model for primary culture of VSMCs,of which calcification in vitro could be induced by β-glycerophosphate.【期刊名称】《江苏大学学报（医学版）》【年(卷),期】2014(024)002【总页数】4页(P110-113)【关键词】血管平滑肌细胞;原代培养;钙化【作者】徐丽华;严金川;伍超;逯朝阳;王中群;袁伟【作者单位】江苏大学附属医院心内科,江苏镇江212001;江苏大学附属医院心内科,江苏镇江212001;江苏大学附属医院心内科,江苏镇江212001;江苏大学附属医院心内科,江苏镇江212001;江苏大学附属医院心内科,江苏镇江212001;江苏大学附属医院心内科,江苏镇江212001【正文语种】中文【中图分类】R543血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）是血管壁的重要组成部分，通过协调血管收缩和舒张，控制血管压力和流速。

小鼠主动脉平滑肌细胞取材步骤

小鼠主动脉平滑肌细胞取材步骤嘿，朋友们！今天咱就来讲讲小鼠主动脉平滑肌细胞取材那些事儿。

你想想看，这小鼠主动脉平滑肌细胞就像是藏在小鼠身体里的小宝贝，咱得小心翼翼地把它们给找出来。

首先呢，你得准备好各种工具，这就好比战士上战场得有趁手的兵器呀！什么手术剪啦、镊子啦，都得准备齐全咯。

然后就是抓小鼠啦，这小鼠可机灵着呢，可得费点功夫抓住它。

抓住后把它固定好，可别让它乱跑乱动，不然咱这工作可没法开展呀。

接下来，就该动真格的啦！用手术剪剪开小鼠的胸腔，哎呀，这一步可得小心再小心，别伤着那些咱们要找的宝贝细胞呀。

就好像拆礼物一样，得轻轻地、慢慢地打开。

找到主动脉后，仔细地把周围的组织清理干净，这就像是给宝贝打扫房间一样，得弄得干干净净的。

然后呢，用镊子小心地把主动脉取出来，这时候你的手可得稳如泰山呀，千万别抖。

取出来后，把主动脉放在合适的溶液里，让它舒舒服服的。

这就好比给小宝贝找了个温暖的小窝。

再之后呢，就是要把平滑肌细胞从主动脉上分离出来啦。

这可是个精细活儿，就跟雕刻大师在雕琢一件艺术品似的，得全神贯注。

你说这是不是挺有意思的？就像一场小小的冒险，在小鼠的身体里寻
找那些神奇的细胞。

咱做这个可不能马虎，每一步都得认真对待。

要是不小心弄错了一步，那可能就前功尽弃啦！就像建房子，一块砖没放好可能整个房子就不稳咯。

总之呢，小鼠主动脉平滑肌细胞取材虽然有点麻烦，但只要咱认真、细心，就一定能把这些小宝贝给成功找出来！这可是为了咱们的实验、咱们的研究呀，可不能马虎！加油吧，朋友们！。

平滑肌细胞培养方法

平滑肌细胞培养方法
1.平滑肌细胞培养基本介绍
平滑肌细胞是一种广泛存在于人体的微小细胞，它们在舌头、咽喉、唾液腺、支气管、胃肠道等部位有分布。

主要作用是运输氧气，调节呼吸、控制血管压力，调节胃肠道收缩等。

平滑肌细胞在心血管病、恶性肿瘤、胃肠道疾病及甲状腺功能紊乱方面有诸多应用，因此，平滑肌细胞的培养方法十分重要。

2.平滑肌细胞培养步骤
（1）切取肌组织，从人体和动物肠道中切取肌肉组织，如舌苔腺或食管。

（2）洗涤组织：将取出的肌肉组织放置于容器中，加入能够破坏真菌等细菌的生物消毒液，用弱酸
洗涤细胞。

（3）离心：将洗涤过的肌组织穿过45μm滤网，净化血清及消毒液，用1000-3000×g的离心力、37℃的低温离心过滤和洗涤，保证细胞的活性。

（4）脱管：将离心过滤和洗涤过的细胞放入培养管中，用0.125%葡萄糖胰酶液将细胞脱管，然后20%牛血清 or 小鼠血清分散离细胞，取离心的物质收集细胞悬液。

3.平滑肌细胞培养培养基的配制
（1）细胞培养基的选择：具有细胞活力的DMEM、RPMI-1640等哺乳动物细胞培养基可以
分别作为基础培养基。

（2）培养基中添加抗生素：如卡那霉素、链霉素、林可霉素等，防止杂菌污染。

（3）添加特定生长因子：如胰岛素、EGF、HCF 等，以促进细胞生长。

小鼠冠状动脉内皮细胞使用说明

小鼠冠状动脉内皮细胞小鼠冠状动脉内皮细胞产品说明：为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。

派瑞金提供的小鼠冠状动脉内皮细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。

研发的小鼠冠状动脉内皮细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。

注意事项：1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。

3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。

4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。

5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。

小鼠冠状动脉内皮细胞产品简介：产品名称：小鼠冠状动脉内皮细胞（Mouse Coronary Artery Endothelial Cells）组织来源：小鼠冠状动脉产品规格：5×105cells/25cm2培养瓶小鼠冠状动脉内皮细胞简介：冠状动脉是供给心脏血液的动脉，起于主动脉根部，分左右两支，行于心脏表面。

冠状动脉内皮细胞分离自正常小鼠冠状动脉组织，呈单层扁平分布。

内皮细胞或血管内皮是一薄层的专门上皮细胞，由一层扁平细胞所组成。

它形成血管的内壁，是血管管腔内血液及其他血管壁（单层鳞状上皮）的接口。

内皮细胞是沿着整个循环系统，由心脏直至最少的微血管。

小鼠阴茎血管平滑肌细胞介导ED的研究

小鼠阴茎血管平滑肌细胞介导ED的研究近年来，随着人们生活水平的提高，男性勃起功能障碍的发病率也越来越高。

勃起功能障碍，也即勃起功能障碍症，或称为阳痿，是指男性在性兴奋和心理刺激下，无法使阴茎勃起硬度足以完成性交，或勃起持续时间不足以完成性交，造成男性性生活满意度下降。

根据研究发现，勃起功能障碍并非是单一的疾病，它可能由许多因素导致，其中包括糖尿病、高血压、精神疾病和代谢疾病等等。

然而，最近的研究表明，小鼠阴茎血管平滑肌细胞可能是导致勃起功能障碍的一个重要因素。

下面我将就此进行深入介绍。

一、小鼠阴茎血管平滑肌细胞的作用小鼠阴茎血管平滑肌细胞是组成阴茎海绵体的主要 cell 类型。

阴茎海绵体是阴茎内的一个柔性组织，其内有很多的血管，平滑肌细胞位于海绵体内部的血管壁上。

经实验表明，小鼠阴茎血管平滑肌细胞的收缩和松弛状态是影响勃起功能的一个重要因素。

二、小鼠阴茎血管平滑肌细胞与勃起功能障碍的关系勃起功能是阴茎在性刺激下的生理反应，其主要是由阴茎海绵体平滑肌细胞的松弛所引起的。

近年来，许多研究表明，小鼠阴茎血管平滑肌细胞的功能异常可能导致勃起功能障碍的发生。

具体表现为：在小鼠阴茎血管平滑肌细胞中，缺少了一种名为 ROS 的分子，这个分子可以促进平滑肌细胞的松弛。

缺失 ROS 分子，就会使得海绵体中的平滑肌细胞不能完全舒张，继而影响勃起功能。

此外，多项研究发现，小鼠阴茎血管平滑肌细胞的变性也可能导致勃起功能障碍的发生。

三、研究小鼠阴茎血管平滑肌细胞的机制由于小鼠阴茎血管平滑肌细胞的功能与勃起功能紧密相关，因此研究其机制非常重要。

从细胞的角度来看，小鼠阴茎血管平滑肌细胞的功能主要受到几种分子的调控。

比如，一些 vasoactive 的分子，比如硝酸酯类化合物和孕胎素等，可以作为平滑肌细胞舒张剂，从而增强勃起功能。

而另外一些物质，比如 G-蛋白和磷脂酰肌醇三磷酸等，都可以调节小鼠阴茎血管平滑肌细胞的兴奋和缩放。

平滑肌细胞培养实验步骤解读

平滑肌细胞培养实验步骤解读原代平滑肌细胞培养Protocol实验准备：器材：注射器（10mL），玻璃吸管，胶头（用于细脚吸管，吹匀组织块用），枪头（蓝色、黄色），移液器（1000μL，100μL），电动移液器，玻璃培养皿（2-3个），小烧杯（10 mL或5 mL），青霉素瓶（配鼠尾胶原），剪刀（大，小，弯）多把，镊子（大，小，弯）多把，纱布，六孔板（真空包装），托盘（放老鼠），酒精棉球，乳胶手套试剂：平滑肌细胞专用培养基，生理盐水，D-hank’s 液，鼠尾胶原，戊巴比妥钠（麻醉用），75%酒精步骤：1. 高压灭菌实验所需器材，超净台紫外照射30mins，吹风；2. 配制鼠尾胶原应用液，一般1:15-1:19稀释，六孔板中每孔加入1mL稀释液待用（可省去）；3. 大鼠（200g左右，一百五六十克较好）腹腔注射一定体积戊巴比妥钠（0.5mL/100g）麻醉，麻醉好后将大鼠全身（尤其是胸腹部）用酒精棉球擦拭干净，放入托盘置于超净台中紫外照射15mins左右，开始试验；4. 用已消毒的剪刀将大鼠腹部表皮剪开，充分暴露出整个胸部，再换用干净的剪刀打开胸腔。

将肝脏及肺脏等组织拨开（小心操作以避免伤到血管）。

用小弯镊及小直镊分离胸主动脉外壁贴附的结缔组织及外膜等。

分离干净后，用眼科剪小心剪断血管，去除血管中的血，置于干净玻璃培养皿中；5. 用生理盐水多次冲洗分离出来的血管。

冲洗干净后，将血管剪开，小心刮除血管内膜，去掉内皮细胞；6. 将处理好的血管放入平滑肌细胞专用培养基（约200μL）中，用眼科剪将组织尽量剪碎成1mm3大小的小块，用细脚吸管吹匀后，均匀种入加了鼠尾胶原的六孔板中；7. 用黄枪头小心吸弃多余的液体（避免将组织块吸起来），然后将六孔板盖好颠倒放在培养箱中约2h（待组织块粘牢培养板底）后，再加入培养基；8. 过3-4d后拿出细胞在显微镜下观察，看其是否已长出。

改良组织块贴壁法培养小鼠主动脉血管平滑肌细胞及生物学鉴定

ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ．Ｄｉｇｅｓｔｅｄｗｉｔｈｔｒｙｐｓｉｎａｎｄｐａｓｓａｇｅｄ，ＶＳＭＣｗｅｒｅｐｕｒｉｆｉｅｄｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌａｄｈｅｒｅｎｃｅｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｃｅｌｌｕｌａｒｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙａｎｄｇｒｏｗｔｈｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｕｎｄｅｒｉｎｖｅｒｔｅｄｐｈａｓｅｃｏｎｔｒａｓｔｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ，ａｎｄＶＳＭＣｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｗｉｔｈｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ－ｅｏｓｉｎ
分离小鼠胸、腹主动脉，采用改良组织块贴壁法获得主动脉ＶＳＭＣ，胰蛋白酶消化传代，差速贴壁
科学研究提供实验材料。方法
法进行细胞纯化，倒置相差显微镜观察细胞形态及生长情况，并用苏木素一伊红（ＨＥ）染色法和免疫荧光法进行鉴定。结果该方法成功分离出小鼠主动脉ＶＳＭＣ，细胞生长旺盛，活性良好，呈放射状、典型“ 峰一谷” 样生长，ＨＥ染色细胞呈梭形，细胞质丰富，核大而圆形或椭圆形，细胞免疫荧光显示特异性的细胞质内平滑肌肌动蛋白阳性表达。结论本方法简单、经济、可靠，可在体外

血管平滑肌细胞原代培养

血管平滑肌细胞原代培养血管平滑肌细胞是构成血管壁的主要细胞成分，具有调节血管管径和维持血管壁稳定的重要作用。

血管平滑肌细胞的原代培养是研究血管生物学和血管疾病发生机理的常用方法之一，同时也是研究血管再生和维修的基础。

1. 材料（1）动物组织：小鼠主动脉、人体脐带血。

（2）DMEM培养基、胎牛血清、0.25%胰酶、0.1%胶原酶、1%抗生素-抗菌素、无菌PBS。

（3）T-25培养瓶、15毫升离心管、1毫升离心管、细胞计数板、倒置显微镜、细胞培养箱、离心机、培养皿等。

2. 方法①用消毒剂清洁手部等操作区域，将小鼠主动脉取出，去除外膜和内膜，将中层切成0.5毫米大小的小块。

②将小鼠主动脉碎片与0.25%胰酶和0.1%胶原酶混合液在37℃下消化3小时。

③将消化液离心，将沉淀用DMEM培养基混合后分装在T-25培养瓶中，添加10%胎牛血清和1%抗生素-抗菌素。

④将培养瓶放置在37℃的细胞培养箱中培养，每天更换一次培养基，至细胞达到80%-90%的密度时进行传代。

①将人脐带血收集入无菌离心管中，用相同容量的PBS混合，离心15分钟，去除上清液。

3. 结果经过数天的培养，小鼠主动脉或人脐带血管平滑肌细胞可在培养瓶中生长形成典型的“山川”式形态，细胞密度逐渐增加。

细胞在培养基中会分泌胶原和纤维蛋白等胶原成分，这些成分有助于维持细胞外基质的稳定性和促进细胞分裂生长。

经过多次传代后，细胞的生长速度将明显加快，并且会逐渐转化为诱导型平滑肌细胞，表达平滑肌肌动蛋白和舒张激肽受体等标记物质。

4. 结论血管平滑肌细胞原代培养是研究血管生物学和血管疾病发生机理的重要方法。

通过原代培养可以维持细胞的稳定生长，并且可以进行多次传代，以获得更多的细胞，更好地研究细胞功能。

本实验采用小鼠主动脉和人脐带血作为来源，通过胰酶和胶原酶的消化分离获得血管平滑肌细胞，然后进行培养，可得到较为纯净的细胞。

在培养的过程中，需要注意细菌、真菌和病毒的污染，以及细胞的密度和培养基的更换等。

小鼠骨骼肌细胞使用说明

小鼠骨骼肌细胞小鼠骨骼肌细胞产品说明：为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。

派瑞金提供的小鼠骨骼肌细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。

研发的小鼠骨骼肌细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。

小鼠骨骼肌细胞注意事项：1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。

3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。

4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。

5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。

小鼠骨骼肌细胞产品简介：产品名称：小鼠骨骼肌细胞组织来源：小鼠肌肉组织产品规格：5×105cells / 25cm2培养瓶小鼠骨骼肌细胞简介：小鼠骨骼肌细胞分离自鼠肌肉组织，细胞多呈梭行，具有一定的方向性。

刚开始的细胞呈单个圆形或梭形，处于有丝分裂后期，细胞的活动性强，核成椭圆形，位于细胞中央，胞质内嗜碱性逐渐变为嗜酸性。

本公司生产的小鼠骨骼肌细胞总量约为5×105cells/瓶，细胞纯度75%~85%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

5、培养基信息：小鼠骨骼肌细胞培养基类型：DMEM培养基(GIBCO，添加NaHCO3 1.5g/L，Sodium Pyruvate0.11g/L)；添加因子：优质胎牛血清10%，细胞生长因子等。

小鼠血管平滑肌细胞原代培养方法的改良

小鼠血管平滑肌细胞原代培养方法的改良【摘要】目的建立一种简单方便但高效的血管平滑肌细胞原代培养方法。

方法改良酶消化法。

结果用该法培养细胞传代生长快，细胞纯度达98%以上，足以满足各种细胞试验需求。

结论与传统方法相比该法简单经济，试验成功率高，节省材料和时间，而且可获得小鼠动脉血管平滑肌细胞原代培养Abstract Objective To create a simple and effective primary culture methods for mouse vascular smooth muscle cells (VSMC). Methods Reformed enzymatic digestion. Results VSMC was grown well and fast, the purity is more than 98% which can meet various cell tests. Conclusion Comparing with traditional methods , this approaches can save much time and more materials, also have better cell quantities and purity.Key words Mouse Aorta VSMC Primary cult 在心血管疾病的基础研究中，对血管平滑肌细胞生物特性的研究是极其重要的一部分，其对揭示血管病变机理至为关键。

体外培养平滑肌细胞是常用试验模型，近年来随着细胞培养技术的发展，原代培养的成功率有所提高，但仍然存在许多问题，经验不足者往往要花费大量时间、精力去摸索，不但影响试验进程而且浪费材料，而有些组织材料是极为昂贵且很难获得的，所以为了提高平滑肌细胞原代培养的成功率，并在有限的材料下获得好的结果，我们大胆采用了酶消化法，从取材方法及消化步骤等方面进行了改良，试验结果证实该法简单经济，成功率高，细胞生长快，纯度高，现介绍如下。

小鼠气管平滑肌细胞处理方法及细胞说明书

小鼠气管平滑肌细胞处理方法及细胞说明书小鼠气管平滑肌细胞处理方法及细胞说明书仅供参考，具体操作还需要根据到货时细胞密度，细胞生长状态等具体情况，酌情处理。

一．小鼠气管平滑肌细胞贴壁细胞客户接收到细胞，用75%的酒精消毒（建议配制75%酒精的水是灭菌过的）培养瓶外部。

肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X 各一张）。

显微镜观察细胞，当细胞融汇80%左右（可以传代的情况下），细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。

如未达到细胞传代密度，培养瓶应预留一部分培养基继续培养。

严格无菌操作，打开细胞培养瓶。

将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。

用PBS2-3ml/次轻轻洗细胞表面，加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。

1000rpm,5min离心，重悬细胞。

换新的细胞培养瓶，37℃,5%CO2培养。

二．小鼠气管平滑肌细胞悬浮细胞1.接收到细胞，用75%的酒精消毒（建议配制75%酒精的水是灭菌过的）培养瓶外部。

2.肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。

3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。

4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒）。

5.1000rpm,5min离心，重悬细胞。

换新的细胞培养瓶和新鲜培养基，37℃,5%CO2培养。

实验动物(大鼠、小鼠、兔)原代海绵体平滑肌细胞

实验动物（大鼠、小鼠、兔）原代海绵体平滑肌细胞产品编号：RAT/MIC/RAB-iCELL-f003产品规格：>5×105细胞数产品价格：3660/3600/4050包装规格：1ml冻存细胞悬液或T-25培养瓶细胞详述：海绵体平滑肌细胞不仅含有丰富的肾上腺素能受体、胆碱能受体，而且还含有多种其他能受体，作为勃起组织中最主要的舒收缩成分，是组成阴茎勃起功能的主要承担着。

在病理条件下，阴茎勃起组织中海绵体平滑肌细胞减少与勃起功能障碍的发生关系密切，且与临床表现的严重程度一致。

细胞特性:1)组织来源于实验动物的正常阴茎组织。

2)细胞鉴定：平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式：梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养。

产品的运输和保存：视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。

2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。

推荐培养基：我们推荐使用iCell原代平滑肌细胞培养体系（产品编号：PriMed-iCELL-004）作为体外培养原代海绵体平滑肌细胞的培养基。

产品使用：1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核。

平滑肌细胞培养-文献版解读

01年中国现代医学杂志贴壁法原代培养1.1 细胞培养1.1.1 培养液配制 DMEM(美国Gibco公司),Hepes(15mmol/L),青霉素(100u/ml),链霉素 (100mg/ml),优质胎牛血清(原代培养浓度20%,传代培养浓度10%,美国Hyclone)。

1.1.2 培养器皿 25cm2塑料培养瓶(Costar),培养面积25cm2;直径3.5cm培养皿。

1.1.3 大鼠血管平滑肌细胞培养动物来源:健康Wistar大鼠,由第三军大学实验动物中心提供,雌雄不拘,体重150~180g。

动脉取材:断颈法处死Wis-tar大鼠,无菌条件下分离全段主动脉,立即置于含青霉素100u/ml,链霉素100mg/ml的无菌生理盐水中。

每次取材2~3只大鼠。

贴壁法原代培养:超净工作台上,清除结缔组织,剥除动脉外膜。

纵向剖开血管,用眼科弯镊钝性刮除内膜面,以去除内皮细胞,剩余血管中膜组织较薄、透明、韧性好。

用含青、链霉素的生理盐水反复冲洗,去除脂滴、血凝块等杂质及可能残留的内皮细胞和外膜成纤维细胞,然后将一次取材的2~3条血管的中膜组织混合在一起,置于无菌培养皿中。

滴加少许培养液使组织保持湿润,用眼科弯剪反复剪切成1mm×1mm大小的组织块。

并剪切好的组织小块均匀摆置于瓶底,组织块间距0.5cm。

盖好瓶盖,轻轻翻转培养瓶,让瓶底朝上并向瓶内注入适量培养液,于37℃孵箱内放置2~4h使组织块干涸并与瓶壁贴附后,将培养瓶慢慢翻转平放,使组织块完全浸入培养液中,继续静置培养3~5d。

待有细胞从组织块周围游出后换液。

1.1.4 原代培养动脉VSMC的传代培养当大部分组织块长出细胞晕,并与相邻细胞的细胞晕接触时即可传代。

加入配制好的消化液使其恰好覆盖细胞表面,室温下大约1~2min,倒置显微镜下见细胞质回缩、细胞间隙增大时迅速翻转培养瓶使细胞脱离消化液,吸弃消化液,加入含胎牛血清培养液3~4ml终止消化并反复吹打瓶壁细胞使细胞脱壁,分散为单细胞悬液。

小鼠主动脉平滑肌细胞原代培养常见问题及处理对策

狭窄等心血管疾病的核心病理变化，以ＶＳＭＣ为实验对象，研究调控ＶＳＭＣ增殖及迁移的信号转导机制，以及寻找ＡＳ和ＰＣＩ术后再狭窄的分子治疗靶点是目前研究的重点［１］。因此，提高ＶＳＭＣ培养成功率，增强细胞生物学活性，保证细胞质量是进行分子生物学研究的重要基础。在利用组织块贴壁法培养小鼠主动脉ＶＳＭＣ过程中，作者通过实践和摸索，对ＶＳＭＣ原代培养过程中常见问题进行了分析，提出了解决方法，现综
细胞爬满瓶底还是选择进行传代是大多数初次原代培养者面
临的一个问题。笔者尝试过继续观察等待细胞爬面瓶底。发现原来细胞生长密集的地方，细胞已经融合成一片，细胞形态不
规则，部分细胞已经老化。经胰酶消化后细胞抱成一团，很难
过程中要注意无菌操作，器具不能交叉使用，所使用的培养基和平衡盐溶液应含１％青霉素、链霉素［２］。
述于下。 Leabharlann 孔内的组织块上，迫使组织块贴壁。在原代培养前３天，切勿
轻易挪动培养瓶／板，因为培养液的晃动容易导致组织块松动、漂浮。在原代培养第４、５天可首次换液，吸取废液和加入液体时动作要缓慢，避免将已贴壁组织块从壁上脱落下来［５］。

小鼠食管平滑肌细胞原代提取分离方法

从小鼠的食道中提取平滑肌肉细胞的激动人心的冒险开始于食道的勇敢而小心的分解，只使用最好的消毒技术来防止任何不想要的污染。

一旦食道被熟练地分离出来，现在该是释放强大的剪刀或手术刀的时候了，以便将组织切成小的，咬伤大小的碎片。

但真正的魔法发生在组织在含有强效酶，如collagenase和thepsin 的溶液中进行放松浴时。

这个酶消化派对是在一个吐司37°C进行，温和的激动，以确保每一个最后一个细胞都有机会与酶一起跳舞。

一旦消化完结，组织通过细网过滤，将勇敢，单光滑的肌肉细胞与其余未消化的组织分离。

雄伟的光滑的肌肉细胞被释放并准备开始他们的下一个科学探索！
我们接下来要做的就是把平滑的肌肉细胞从混合体中分离出来。

我们通常通过让细胞粘附在培养盘或瓶子上一段时间来完成这项工作，然后把没有粘住的细胞洗掉，如纤维爆炸和上皮细胞，主要留下平滑的肌肉细胞。

如果我们还需要清理一些，我们可以使用特殊的文化媒介或细胞分类技术来进行。

是的，保持一切真正干净是极为重要的以确保我们最后的细胞是纯净的，没有污染。

按照规定的方法，要将平滑肌肉细胞从小鼠食道中初级提取和隔离，就必须遵守既定的协议和标准作业程序。

细心的组织解剖，精确的酶消化，以及细心的细胞隔离，是保证这一程序成功的关键步骤。

由此
产生的原生细胞有可能对科学知识的进步和麻黄素平滑肌相关病理学治疗的发展作出重大贡献。

研究人员和从业人员在利用这些初级细胞进行随后的功能、分子和药理学研究时，必须坚持科学严谨和道德行为的最高标准。

这将确保从这种研究中获得的深刻见解是有力和可靠的，最终增进我们对食道平滑肌肉细胞的生物学和病理学的理解。

动脉粥样硬化模型小鼠血管平滑肌细胞原代培养及鉴定

东南大学学报（医学版）J Southeast Univ（Med Sci Edi）2011，Aug；30（4）：537-540mice［J］．Nature，1994，367（6464）：645-648．［4］BHATIA M，BONNET D，MURDOCH B，et al．A newly discov-ered class of human hematopoietic cells with SCID-repopulat-ing activity［J］．Nat Med，1998，4（9）：1009-1010．［5］LUCIA R V，DARIO G L，EMANUELA P，et al．Identification and expansion of human colon-cancer-initiating cells［J］．Na-ture，2007，445：111-115．［6］SWAMINATHAN S K，OLIN M R，FORSTER C L，et al．Iden-tification of a novel monoclonal antibody recognizing CD133［J］．Elsevier BV，2010，361（1-2）：110-115．［7］唐权，窦骏，顾宁．癌干细胞研究现状［J］．东南大学学报：医学版，2005，24（4），276-279．［8］SHMELKOV S V，st CLAIR R，LYDEN D，et al．AC133/ CD133/Prominin-1［J］．Int Biochem Cell Biol，2005，37（4）：715-719．［9］KOV S V，JUN L，st CLAIR R，et al．Alternative promoters reg-ulate transcription of the gene that encodes stem cell surface protein AC133［J］．Blood，2004，103（6）：2055-2061．［收稿日期］2011-02-18［修回日期］2011-03-15［基金项目］国家自然科学基金资助项目（81070571）；江苏省自然科学基金资助项目（BK2009279）［作者简介］刘晶（1985-），女，湖北随州人，在读硕士研究生。

小鼠血管平滑肌细胞原代培养方法的改良

小鼠血管平滑肌细胞原代培养方法的改良【摘要】目的建立一种简单方便但高效的血管平滑肌细胞原代培养方法。

方法改良酶消化法。

结果用该法培养细胞传代生长快，细胞纯度达98%以上，足以满足各种细胞试验需求。

结论与传统方法相比该法简单经济，试验成功率高，节省材料和时间，而且可获得更多纯度较高的细胞。

吴建芳（1972～），女，汉族，青海籍，副教授，硕士【关键词】小鼠动脉血管平滑肌细胞原代培养Abstract Objective To create a simple and effective primary culture methods for mouse vascular smooth muscle cells (VSMC). Methods Reformed enzymatic digestion. Results VSMC was grown well and fast, the purity is more than 98% which can meet various cell tests. Conclusion Comparing with traditional methods , this approaches can save much time and more materials, also have better cell quantities and purity.Key words Mouse Aorta VSMC Primary cult在心血管疾病的基础研究中，对血管平滑肌细胞生物特性的研究是极其重要的一部分，其对揭示血管病变机理至为关键。

体外培养平滑肌细胞是常用试验模型，近年来随着细胞培养技术的发展，原代培养的成功率有所提高，但仍然存在许多问题，经验不足者往往要花费大量时间、精力去摸索，不但影响试验进程而且浪费材料，而有些组织材料是极为昂贵且很难获得的，所以为了提高平滑肌细胞原代培养的成功率，并在有限的材料下获得好的结果，我们大胆采用了酶消化法（常规采用组织块培养法），从取材方法及消化步骤等方面进行了改良，试验结果证实该法简单经济，成功率高，细胞生长快，纯度高，现介绍如下。

平滑肌细胞培养-文献版

01年中国现代医学杂志贴壁法原代培养1.1 细胞培养1.1.1 培养液配制DMEM(美国Gibco公司),Hepes(15mmol/L),青霉素(100u/ml),链霉素(100mg/ml),优质胎牛血清(原代培养浓度20%,传代培养浓度10%,美国Hyclone)。

1.1.2 培养器皿25cm2塑料培养瓶(Costar),培养面积25cm2;直径3.5cm培养皿。

1.1.3 大鼠血管平滑肌细胞培养动物来源:健康Wistar大鼠,由第三军大学实验动物中心提供,雌雄不拘,体重150~180g。

动脉取材:断颈法处死Wis-tar大鼠,无菌条件下分离全段主动脉,立即置于含青霉素100u/ml,链霉素100mg/ml的无菌生理盐水中。

每次取材2~3只大鼠。

贴壁法原代培养:超净工作台上,清除结缔组织,剥除动脉外膜。

纵向剖开血管,用眼科弯镊钝性刮除内膜面,以去除内皮细胞,剩余血管中膜组织较薄、透明、韧性好。

滴加少许培养液使组织保持湿润,用眼科弯剪反复剪切成1mm×1mm大小的组织块。

并剪切好的组织小块均匀摆置于瓶底,组织块间距0.5cm。

待有细胞从组织块周围游出后换液。

1.1.4 原代培养动脉VSMC的传代培养当大部分组织块长出细胞晕,并与相邻细胞的细胞晕接触时即可传代。

肺动脉平滑肌细胞原代培养原代培养

肺动脉平滑肌细胞原代培养操作流程一、实验准备1、健康雄性SD大鼠一只，4周大，重约200g。

2、 75％消毒用酒精2瓶，5%碘酒1瓶，无菌0.01MPBS溶液500ml，M199培养基100ml（含4mmol/L 的谷氨酰胺、15%胎牛血清、20万IU/L青霉素、20万IU/L链霉素）。

3、生物安全柜2个，解剖板1个（含4条固定用绳子），1L烧杯1个，培养皿5个，培养瓶5个，1ml 吸管20根，弯头吹打管10根，眼科剪3把，眼科镊3把，解剖镊3把，止血钳4把，手术刀1把，刀片若干，吸头若干、棉签纱布若干，口罩帽子及无菌手套若干。

二、操作步骤1、洗手，戴口罩帽子及手套。

2、酒精喷洒并擦拭生物安全柜1，放入培养皿1个（倒入PBS并盖好）、手术刀1把、组织剪1把、止血钳4把及纱布若干（均经蒸汽灭菌消毒）。

3、处死大鼠（断颈法），完全浸泡于盛有75%的1L烧杯中3min，碘酒酒精消毒解剖板（包括绳子），换手套，取出大鼠，固定于解剖板上，放入生物安全柜1，打开紫灯消毒30min。

4、酒精喷洒并擦拭生物安全柜2，于左侧放培养瓶、吸管及弯头吸管，眼科剪3把，眼科镊3把，中间放培养皿4个（打开，共8个，其中5个倒入PBS），以上物品均经蒸汽消毒灭菌，除培养皿外均应装入消毒饭盒内防止污染。

左侧放解剖镊1把（泡入酒精中，取吸管时用）。

打开紫灯消毒30min。

5、打开生物安全柜1，开吹风机10min，再一次消毒老鼠。

6、换手套，用手术刀、止血钳、解剖镊、组织剪等开胸，取出完整的心肺组织放入培养皿内，盖好。

7、打开生物安全柜2，开吹风机10min，放入装有心肺培养皿。

8、换手套，用眼科剪眼科镊仔细分离出肺动脉。

9、将取出的肺动脉（长约0.5cm）放入无PBS的培养基中，去除纤维外膜，用眼科剪将其剖开，用PBS 冲洗3次至无血迹，（原则上还应刮除肺动脉内皮细胞，但因组织太小不好操作，且内皮细胞在M199培养基中不易生长，故此操作可省略）。