实验 高效液相色谱分离甲苯和乙苯

实验高效液相色谱分离甲苯和乙苯

目的和要求

1.熟悉高效液相色谱仪的结构，理解反相HPLC的原理和应用；

2.掌握高效液相色谱法定性分析的原理。

基本原理

高效液相色谱法（HPLC）是以液体作为流动相的一种色谱分析方法。高效液相色谱采用细颗粒固定相，使流动相在色谱柱上渗透性大大减小，流动阻力增大，必须借助高压泵输送流动相。

同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。

不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。所以分离最终效果则是热力学与动力学两方面的综合效益。

本实验中，采用化合物的保留值进行定性分析。

仪器

高压泵紫外光度检测器六通进样阀色谱工作站柱温箱

试剂

甲苯、乙苯均为分析纯

甲醇为色谱纯

纯水为重蒸水

标准溶液的配制配制含甲苯、乙苯为4‰（体积比）的甲醇溶液及混合溶液。实验条件

色谱柱：C18 柱(4.6 mm ×250 mm，5 µm)

流动相：甲醇：水（9：1或8：2，v/v），流量：1.0 ml·min-1

紫外分光检测器：测定波长254 nm

进样量：20µl

实验步骤

1.将配制好的流动相于超声波清洗器上脱气15 min 。

2.根据实验条件，将仪器按照仪器的操作步骤调节至进样状态，待仪器液路和

电路系统达到平衡，基线平直时，即可进样。

3.吸取20µl标准溶液进样，记录色谱图，重复进样。

数据及处理

思考题

1.紫外光度检测器是否适用于检测所有的有机化合物，为什么？

2.若实验中的色谱峰无法完全分离，应如何改善实验条件？