实验 高效液相色谱分离甲苯和乙苯
苯、甲苯、乙苯混合物的分离和定量分析
苯、甲苯、乙苯混合物的分离和定量分析一、实验目的1、掌握气相色谱法分离多组分混合物的方法。
2、练习用归一化法定量测定混合物中各组分的含量。
二、实验原理1、色谱法是一种分离技术，是试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配过程。
其中的一相固定不动，称为固定相；另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称为流动相。
2、气相色谱：流动相为气体（称为载气）；按固定相的不同又分为：气固色谱和气液色谱。
3、气相色谱法的特点1）分离效率高：可分离复杂混合物，有机同系物、异构体、手性异构体。
2）灵敏度高：可以检测出μg.g-1(10-6)级甚至ng.g-1(10-9)级的物质量。
3）分析速度快：一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。
4）应用范围广：适用于沸点低于400℃的各种有机或无机试样的分析。
4、不足之处：1）不适用于高沸点、难挥发、热不稳定物质的分析。
2）被分离组分的定性较为困难。
5、气相色谱流程图：1-载气钢瓶；2-减压阀；3-净化干燥管；4-针形阀；5-流量计;6-压力表；4-针形阀；5-流量计;6-压力表；9-热导检测器；10-放大器；11-温度控制器；12-记录仪；1) 载气系统：包括气源、净化干燥管和载气流速控制; 2) 进样系统：进样器及气化室；3) 色谱柱：填充柱（填充固定相）或毛细管柱（内壁涂有固定液）； 4) 检测器：可连接各种检测器，以热导检测器或氢火焰检测器最为常见； 5) 记录系统：放大器、记录仪或数据处理仪； 6) 温度控制系统：柱室、气化室的温度控制。
6、定量方法：归一化法：若试样中含有n 个组分，且各组分均能洗出色谱峰，则其中某个组分的质量可按下式计算：%100)'('%100%1i 21⨯⋅⋅=⨯+⋅⋅⋅++=∑=ni iiii ni A f A f m m m m C三、仪器与试剂1、色谱仪: 气相色谱仪，热导池检测器，微量注射器（2μL ）2、色谱柱：2 m ×5 mm3、固定相: 15%邻苯二甲酸二壬酯；102白色担体60~80目，载气：氮气4、苯（纯）、甲苯（纯）、乙苯（纯） 苯，甲苯，乙苯三组分混合样品。
高效液相色谱法测定水性涂料中苯、甲苯、乙苯、二甲苯残留量
高效液相色谱法测定水性涂料中苯、甲苯、乙苯、二甲苯残留量姚帮本;郭佳佳;李云;韩枫;陈碧云;宫雅雪;胡猛;丁媛丽【摘要】苯、甲苯、乙苯和二甲苯是涂料和油漆等工业中的主要原料和溶剂,使用极其广泛,危害极其严重.苯系物在水性涂料中含量较低,检测灵敏度要求高.建立了高效液相色谱测定水性涂料中苯、甲苯、乙苯、二甲苯残留量的分析方法.样品经甲醇提取,苯、甲苯、乙苯及二甲苯检出限均为5 mg/kg.在2个浓度水平上做回收试验,回收率分别在95.9％～ 102.0％之间,相对标准偏差(n=6)≤3％.【期刊名称】《安徽化工》【年(卷),期】2018(044)006【总页数】3页(P118-120)【关键词】苯;甲苯;乙苯;二甲苯;水性涂料;液相色谱【作者】姚帮本;郭佳佳;李云;韩枫;陈碧云;宫雅雪;胡猛;丁媛丽【作者单位】安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051【正文语种】中文【中图分类】O657.71;TQ630.7涂料使用的有机溶剂可能含有苯、甲苯、乙苯和二甲苯等有毒有害成分。
苯系物是属于极度危害的化学物质，可通过呼吸道、消化道和皮肤进入人体而产生危害，其毒性主要表现在对人体至畸、致突变和致癌等方面，可引起各种类型的白血病[1-2]。
由于气相色谱流动相单一，操作简便，分离良好，因此，关于苯系物的气相色谱检测方法层出不穷，不断成熟，并被应用在各个领域[3-4]。
气相色谱在苯系物的定性方面较为繁杂，准确性有待提高。
然而，液相色谱可以通过化合物因光学特性所产生的光谱而准确地界定属性。
高效液相色谱法分离测定废水中的苯和甲苯
高效液相色谱法分离测定废水中的苯和甲苯一、实验目的",1、了解LC-20AT高效液相色谱仪的流路和电路，学会仪器的基本操作；",2、掌握高效液相色谱基本的定性定量方法；",3、了解色谱参数N、K、R的意义和计算方法。
二、原理与技术方法简介：高效液相色谱是色谱分析的一个重要分支，是在经典液相色谱的基础上发展起来的一种现代仪器分析方法方法特点：高压、高效、高速、高灵敏度分析对象：高沸点、热不稳定有机及生化、环境试样等根据流动相和固定相的相对极性不同可以将高效液相色谱分为正相色谱和反相色谱。
正相色谱：流动相极性小，常为非极性的烷烃；固定相极性大，通常为硅胶、纤维素等；反相色谱：流动相极性大，通常为水-甲醇溶液、水-乙腈溶液等；固定通常为键合的C18、C8、C4、Phenyl等，极性较弱。
",反相高效液相色谱的应用相对较广泛。
定性依据：保留值定性、峰高增量法定性、与其它方法联用。
定量参数：峰高、峰面积、相对峰高、相对峰面积等。
定量方法：外标法、内标法、归一化法分配系数K在色谱法中，当样品加入后，样品中各组分在固定相和流动相间发生的吸附、脱附，或溶解、挥发的过程叫做分配过程。
在一定温度下，组分在两相间分配达到平衡时的浓度比，称为分配系数，用K表示。
如果各组分在固定相中的分配系数不同，它们就有可能达到分离。
1.一定温度下，组分的分配系数K越大，出峰越慢；2.试样一定时，K主要取决于固定相性质；3.每个组份在各种固定相上的分配系数K不同；4.选择适宜的固定相可改善分离效果；5.试样中的各组分具有不同的K值是分离的基础；6.某组分的K=0时，即不被固定相保留，最先流出。
分离度分离条件的选择主要是提高“难分离物质对”的分离度三、实验用品LC-20AT高效液相色谱仪超声波清洗器微孔过滤装置2、试剂：甲醇（AR）、苯（AR）、甲苯（AR）、二次蒸馏水四、操作步骤1、液相色谱分析条件检测器：二极管阵列检测器流动相：甲醇-水（体积比）=9：1流速：1mL/min检测波长：254nm进样量：20μL2、准备工作3、方法的编辑4、运行样品5、注意事项五、数据处理采用LC-20AT高效液相色谱仪化学工作站数据处理程序处理数据。
实验二 利用高效液相色谱测定混合样品中苯和甲苯
三、操作步骤
1、最佳分离条件的选择 启动仪器，先注入5微升的甲醇流动相，
观察检测器当峰斜率小于1000是，设定流动 相甲醇含量为60%，注入5微升的苯与甲苯混 合液，观察检测器显示的两峰的保留时间及 分离效果。双峰显示完毕后，改变流动相甲 醇含量为80%，观察检测器显示的两峰保留 时间及分离效果。
1．色谱条件优化
2.00μ色V(x谱100,000)
1.75 1.50 1.25 1.00 0.75 0.50 0.25 0.00
0.0
2.5
5.0
7.5
10.0
12.5
15.0
17.5
min
由上图可知，当甲醇的含量为85%时，能将两者分 开，且时间较短，因此可选甲醇含量为85%作为实验 条件。
2．苯、甲苯定性分析
Y = aX + b a = 264149.7 b = 98330.34 R^2 = 0.9978541 R = 0.9989265
甲苯
浓度
在最佳分离条件下，用10μL微量注射器， 分别注射5.0μL苯、甲苯的标准溶液，观 察记录保留时间，确定苯和甲苯的峰
10.0μ色V(x谱10,000)
9.0
8.0
7.0
甲苯
6.0
苯
5.0
4.0
3.0
2.0
1.0
0.0
-1.0
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
3.5
min
样品 保留时间
苯 3.177
苯、甲苯混合标准溶液浓度分别为：1 ul/ml, 2 ul/ml,5 ul/ml, 10 ul/ml。
高效液相色谱法分析环境水样中4种苯系物
高效液相色谱法分析环境水样中4种苯系物王兴益;陈兴舟;杨燕群;刘玉兰;李明刚;陈君雨;张仟春【摘要】建立了一种高效液相色谱测定水样中4种苯系物(苯、甲苯、乙苯、对二甲苯)的方法.分析柱为Diamonsil5μmC18,250×4.6mm,检测波长为259nm,流动相比例V(乙腈):V(水)=75:25,流量大小为1.000mL/min,色谱柱温度为35℃.方法的线性范围为0.0100～10.0mg/L,相关系数大于0.9997,4种苯系物的检出限(S/N=3)为1.9μg/L～3.2μg/L,方法的重复性良好,峰面积的相对标准偏差(n=7)小于4.6％.样品中未检出,采用加标浓度为0.100mg/L和1.00mg/L进行方法验证,实际水样的加标回收率为82.3％～97.6％,表明该方法可有效用于水样中苯系物的灵敏、准确分析.【期刊名称】《兴义民族师范学院学报》【年(卷),期】2017(000)003【总页数】6页(P119-124)【关键词】苯系物;高效液相色谱;环境水样【作者】王兴益;陈兴舟;杨燕群;刘玉兰;李明刚;陈君雨;张仟春【作者单位】兴义民族师范学院, 贵州兴义 562400;兴义民族师范学院, 贵州兴义562400;兴义民族师范学院, 贵州兴义 562400;兴义民族师范学院, 贵州兴义562400;兴义民族师范学院, 贵州兴义 562400;兴义民族师范学院, 贵州兴义562400;兴义民族师范学院, 贵州兴义 562400【正文语种】中文【中图分类】O656.9Abstract:A method for the simultaneous determination offour benzenes,(benzene,toluene,ethylbenzene,and p-xylene)in water samples was established using high performance liquid chromatography.The analytical column was performed on a Diamonsil C18(5μm×4.6 mm×250 mm),the quantitation analysis of four benzenes were achieved by UV detection at 259 nm,the mobile phase used wasacetonitrile/water(75:253,v/v),the flowrate of the mobile phase was 1.000 mL/min,and the column temperature was kept on 35°C.The linear rangesof four benzenes were in the range of 0.0100 mg/L-10.0 mg/L with correlation coefficients more than 0.9997.The method detectionlimits(S/N=3)off our benzenes were between 1.9 μg/Land 3.2 μg/L.The relative standard deviations(n=7)were less than 4.6%.The spiked recoveries at twomatrixspiked concentrations were in the range of82.3%～97.6%.The results showed that the developed method was sensitive and accurate，and was suitable for the analysis ofbenzenes in water sample．Key words:Benzenes;High Performance LiquidChromatography;Environmental Water Samples苯系物是苯及其衍生物的统称，是塑料、染料、合成纤维、橡胶、药物等的重要原料和有机溶剂，广泛应用于石油化工、医药、农药、塑料、制革等工业中，排放的废水可对环境造成严重的污染[1-2]。
高效液相色谱法同时测定水中的苯系物
用 保 留时 问定性 ， 外标 峰 面积 标 准 曲线法 定量 ，
按 下式 计算 苯 系物浓 度 。
Ｃ ｎ＝ 标×（ 样 Ａ标） Ｃ Ａ ／
Ａ ｉｎ Ｌ １２ 高效液相色谱仪 ， ｇｅｔ Ｃ ０ ｌ １ 配有 Ｖ ＷＤ检 测 器 、 ｇ ｅｔ Ｚ ｈｏ ｌｅＣ ｍ ａｔ Ａ ｉ ｎ Ｃ ｒｍ Ｅｉ ｏ ｐ ｃ 处理 软件 和 Ａ — ｌ Ｅ ｔ ｇ
ｉｎ Ｃ ０手 动 进样 器 ；０ｘ ｇｅｔ ｌ ｔ １２ ｅ Ｌ １ ５ ｔ Ａ ｉｎ 微量 注射 器 ； Ｌ ｌ
出限低 、 分离 度 好 、 品前 处 理 成 本 低 ， 于 水 环 境 样 适 中苯 系物 的检测 。
为 ５ ｇｍ ａ ｒ ／ Ｅ苯 、 甲苯 、 乙苯标 准储 备液 于 １Ｏ Ｌ容量 ０ｒ ａ
瓶 中， 用蒸 馏 水 定 容 并 摇 匀 ， 声 提 取 １ ｒ ｎ 配 成 超 ５ ｉ， ａ
引 言
苯 系物是 环 境 中常 见 的 污染 物 ， “ 致 ” 致 有 三 （ 癌、 致畸 、 突 变 ） 性 ， 致 毒 国家有关 饮用 水 的水质标 准 均将 其列 为监 测项 目¨ 。苯 系 物 的分 析 常 采用 气 ］ 相 色谱 法 ’ ， 相色 谱 法 测 定 空气 中苯 系 物 含量 ５气 Ｊ 是 一种 较理想 的方 法 ， 而水 中苯 系物 浓 度 低 且 成 分
贵 州 化
・
工
２１ ０ １年 ２月
３ ・ ４
Ｇｕｚ ｏ Ｃｈ ｍｊａＩ ｄ ｓｒ ｉｈ ｕ ｅ ｃ ｌ ｕ ｔ ｎ ｙ
第３ ６卷 第 ｌ 期
高 效液 相色谱法 同时测定 水中的苯 系物
包 娜 谭 红 谢 锋 徐 玮 杨鸿波 何锦林 ， ， ， ， ，
实验二 利用高效液相色谱测定混合样品中苯和甲苯
苯、甲苯混合标准溶液浓度分别为：1 ul/ml, 2 ul/ml,5 ul/ml, 10 ul/ml。
μV(x100,000)
3.5 色谱
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
-0.5
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0
min
面积(x1,000,000) 1.50
实验二 利用高效液相色谱 测定混合样品中苯和甲苯
一、目的要求
1．掌握高效液相色谱定性和定量分析的
原理及方法； 2. 了解高效液相色谱的构造、原理及
操作技术；
3．熟悉建立分析方法的基本思路。
二、仪器和试剂
岛津液相色谱仪LC-10AT、SPD-10A紫 外-可见光检测器、CDT-10AS贮温箱、 C18色谱柱、微量注射器10ul；
1．色谱条件优化
2.00μ色V(x谱100,000)
1.75 1.50 1.25 1.00 0.75 0.50 0.25 0.00
0.0
2.5
5.0
7.5
10.0
12.5
15.0
17.5
min
由上图可知，当甲醇的含量为85%时，能将两者分 开，且时间较短，因此可选甲醇含量为85%作为实验 条件。
2．苯、甲苯定性分析
甲苯 3.872
3．苯、甲苯定量分析
在最佳的分离条件下，用10μL微量注射器， 分别注射5.0μL的0.2μL/m L、2μL/m L、 4μL/m L、10μL/m L的混合标准溶液（各重复 实验2次），再分别测定苯和甲苯的峰面积， 求出平均值，以峰面积对浓度作图，作出标准 曲线。
在最佳的分离条件下，用10μL微量注射器， 分别注射5.0μL的试样（重复进样2次），观察 记录保留时间和峰面积。根据峰面积在工作曲 线上查出苯和甲苯待测夜的浓度，取两次平均 值为试样中苯和甲苯的含量。
反相高效液相色谱法分析甲苯反相高效液相色谱法分析甲苯
24
液相色谱基础知识
流动相的选择
采用“ HPLC ” 级溶剂 溶剂 避免使用会引起柱效损失或保留特性变化 的溶剂 对样品有适宜的溶解度 溶剂的粘度要小 与检测器相匹配
25
溶剂的等级
水的等级：
吸光率 纯化水 蒸馏水 去离子水 去离子水
纯化水
因为不纯物质的存在，去离子水的吸光率较高 纯化水中去除了无机和有机的污染物
3
实验任务
分离甲苯、萘、联苯3种芳烃的混合物， 由于苯环个数或分子的表面积有显著差 别，因此在反相高效液相色谱中得到很 好的分离。用保留时间定性，根据峰面 积标准工作曲线定量。
4
三、仪器与试剂 仪 与试剂
仪器：Shimadzu LC-10ATVP高效液相 色谱仪 检测器为SPD-M10Avp 色谱仪，检测器为 SPD M10A 二极管 极管 阵列检测器。
5
液相色谱流程图
进样器
流动相
输液泵
柱温箱
检测器 数据处理
6
Shimadzu LC-10ATVP LC 10ATVP高效液相色谱仪
7
三、仪器与试剂 仪 与试剂
色谱条件：
色谱柱：Shimadzu VO-ODS（4.6×150mm）C18分析柱 流动相 A液：水； 流动相： 液 水 B液：甲醇。用前用超声波脱气。 液 甲醇 用前用超声波脱气 UV-检测器，检测波长254nm。 进样体积：20uL;流动相流速：1.0mL/min。 样品：甲苯、萘、联苯的混合甲醇溶液。
31
岛津VP系列输液泵
本仪器配备了两个LC-10AT vp 输液泵， 流速范围 0.001-9.999 0 001 9 999 ml/min。 l/ i 可进行等度洗脱和高压梯度洗脱。
实验 高效液相色谱分离甲苯和乙苯
实验高效液相色谱分离甲苯和乙苯目的和要求1.熟悉高效液相色谱仪的结构，理解反相HPLC的原理和应用；2.掌握高效液相色谱法定性分析的原理。
基本原理高效液相色谱法（HPLC）是以液体作为流动相的一种色谱分析方法。
高效液相色谱采用细颗粒固定相，使流动相在色谱柱上渗透性大大减小，流动阻力增大，必须借助高压泵输送流动相。
同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。
它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。
不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。
其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。
所以分离最终效果则是热力学与动力学两方面的综合效益。
本实验中，采用化合物的保留值进行定性分析。
仪器高压泵紫外光度检测器六通进样阀色谱工作站柱温箱试剂甲苯、乙苯均为分析纯甲醇为色谱纯纯水为重蒸水标准溶液的配制配制含甲苯、乙苯为4‰（体积比）的甲醇溶液及混合溶液。
实验条件色谱柱：C18 柱(4.6 mm ×250 mm，5 µm)流动相：甲醇：水（9：1或8：2，v/v），流量：1.0 ml·min-1紫外分光检测器：测定波长254 nm进样量：20µl实验步骤1.将配制好的流动相于超声波清洗器上脱气15 min 。
2.根据实验条件，将仪器按照仪器的操作步骤调节至进样状态，待仪器液路和电路系统达到平衡，基线平直时，即可进样。
3.吸取20µl标准溶液进样，记录色谱图，重复进样。
数据及处理思考题1.紫外光度检测器是否适用于检测所有的有机化合物，为什么？2.若实验中的色谱峰无法完全分离，应如何改善实验条件？。
反相高效液相色谱法分析甲苯和联苯
反相高效液相色谱法分析甲苯和联苯反相高效液相色谱法使用的固定相通常是具有疏水性的材料，例如C18，C8和C4等。
这些材料常用于纯化和分离化合物，因为它们能够与疏水性化合物形成稳定的相互作用。
相对地，亲水性化合物则很容易从固定相中洗脱出来。
分析甲苯和联苯的反相高效液相色谱法通常是在HPLC仪器上进行的。
以下是一个可能的实验操作步骤：1.准备样品：将甲苯和联苯标准品溶解在合适的溶剂中，并通过过滤来去除悬浮物。
确保标准品的浓度适宜，以便进行定量分析。
2.准备流动相：选择合适的缓冲溶液和有机溶剂，并按照一定比例混合。
缓冲溶液通常用于调节流动相的pH值，以适应分析物的溶解度和静电相互作用。
有机溶剂用于控制流动相的极性，以便根据分析物的亲水性特征进行分离。
3.准备色谱柱：选择合适的色谱柱，并根据实验需要设置合适的温度。
色谱柱通常根据分析物的大小和极性选择合适的固定相。
温度的调节有助于控制反应速率和分离效果。
4.进样和分析：将样品注入HPLC仪器的进样口，并设置适当的进样量和进样方式。
进样量通常根据分析物的浓度和仪器灵敏度进行控制。
进样方式可以是固定体积，可变体积或连续进样。
进样后，样品会被推入色谱柱中进行分离。
5.检测和定量：通过检测器检测分子在色谱柱中的时间和强度，并根据标准曲线进行定量分析。
常见的检测器包括紫外-可见吸收检测器，荧光检测器，电导检测器等。
根据实验需要，也可以使用多种检测器进行同步或串联检测，以提高分析的准确性和灵敏度。
总之，反相高效液相色谱法是一种常用的分析甲苯和联苯的方法。
通过合适的固定相、流动相和操作条件的选择，可以实现甲苯和联苯的高效分离和定量分析。
该方法具有广泛的应用领域，可用于环境监测、质量控制、化学研究等领域。
高效液相色谱法测定水性涂料中苯、甲苯、乙苯、二甲苯残留量
高效液相色谱法测定水性涂料中苯、甲苯、乙苯、二甲苯残留量作者：于海鹏来源：《科学与财富》2020年第04期摘要：本文在利用高效液相色谱仪器检测特点，建立了一种检测水性涂料中苯、甲苯、乙苯和二甲苯（包括同分异构体）等苯系物定性定量的检测方法。
并通过分析实验考察了检测方法的精密度、水性涂料样品检测结果的重现性和样品中各个苯系物的含量。
结果表明，建立的方法精密度高、样品检测结果重现性好、样品苯系物含量满足标准要求。
关键词：高效液相色谱;水性涂料;苯系物;残留检测一、前言由于涂料组成复杂，因此对涂料苯化合物检测前需要对涂料进行溶剂萃取或者色谱柱分离，将苯类化合物富集、分离出来。
检测方法通常使用气相色谱法、高效液相色谱法和气质联用法。
气相色谱对苯类化合物的分离、检测准确性与高效液相色谱法存在一定差距。
为了提高检测结果的准确性和效率，本文在高效液相色谱仪器上建立一种能够定性、定量检测涂料苯系物的方法。
二、实验过程（一）材料与试剂实验使用的水性涂料样品采购于某品牌网店。
实验使用的苯、甲苯、乙苯、二甲苯标准试剂采购于阿拉丁公司;实验使用的甲醇流动相为色谱纯，其他试剂为分析纯，均采购于阿拉丁公司。
（二）实验仪器实验使用的高效液相色谱仪器采购于美国安捷伦公司，型号为Agilent 1290;实验使用的超声清洗仪采购于昆山市超声仪器公司，型号为KQ-220VDB;实验使用的万分之一天平采购于上海岛韩实验有限公司，型号为ABS 320-4N。
（三）溶液配制（1）准确称量苯、甲苯、乙苯、二甲苯各0.05g，分别使用甲醇溶液溶解稀释，并定容到100mL容量瓶中，配制得到浓度为0.5mg/mL溶液。
（2）使用移液枪准确移取配置好的苯、甲苯、乙苯、二甲苯标准溶液0.2mL、0.4 mL、1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、8.0 mL，使用甲醇定容到200 mL容量瓶中。
得到浓度分别为0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.5μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL的苯、甲苯、乙苯、二甲苯系列标准溶液。
实验 反相高效液相色谱法分离甲苯中的杂质
反相高效液相色谱法分离甲苯中的杂质1 实验目的(1) 掌握高效液相色谱仪的基本结构及基本操作；(2) 掌握反相色谱法的基本规律；(3) 了解甲苯中杂质种类。
2 实验原理液相色谱法就是同一时刻进入色谱柱中的各组分，由于在流动相和固定相之间溶解、吸附、渗透或离子交换等作用的不同，随流动相在色谱柱中运行时，在两相间进行反复多次（103～106次）地分配过程，使得原来分配系数具有微小差别的各组分，产生了保留能力明显差异的效果，进而各组分在色谱柱中的移动速度就不同，经过一定长度的色谱柱后，彼此分离开来，最后按顺序流出色谱柱而进入信号检测器，在记录仪上或色谱数据机上显示出各组分的色谱行为和谱峰数值。
测定各组分在色谱图上的保留时间（或保留距离），可直接进行组分的定性；测量各峰的峰面积，即可作为定量测定的参数。
流动相的极性大于固定相的化学键合相色谱称为反相色谱。
由于各种物质的极性不同，因而在反相色谱体系中的分配能力不同，因此保留时间不同，在色谱图上呈现不同位置的色谱峰。
反相色谱大部分以C18或C8为色谱柱，以甲醇或乙氰的水溶液为流动相。
高效液相色谱仪是实现液相色谱分离分析过程的装置。
贮液器中存贮的载液（用作流动相的液体常需除气）经过过滤后由高压泵输送到色谱柱入口（当采用梯度洗脱时，一般需用双泵系统来完成输送）。
样品由进样器注入载液系统，而后送到色谱柱进行分离。
分离后的组分由检测器检测，输出信号供给记录仪或数据处理装置。
如果需收集馏分作进一步分析，则在色谱柱出口将样品馏分收集起来，对于非破坏型检测器，可直接收集通过检测器后的流出液。
其中输液泵，色谱柱及检测器是仪器的关键部件。
3 仪器与试剂3.1 仪器1）LabTech LC600液相色谱仪（北京莱伯泰科仪器有限公司）2）微量注射器、容量瓶3.2 试剂甲醇（色谱纯）、二次蒸馏水、甲苯5 实验步骤（1）配制标准溶液以甲醇为溶剂，于容量瓶中配制甲苯溶液，浓度为0.02 mg/L。
液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯
液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯一、实验题目：液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯二、实验目的：1．掌握高效液相色谱仪的原理和仪器构成。
2．了解样品处理、测定和数据处理的全过程，掌握标准曲线定量方法。
三、实验原理：高效液相色谱和其化液相色谱技术一样，其基本原理：利用欲分离的诸组分在固定相和流动相间的分配有差异（即有不同的分配系数），当两相作相对运动时，这些组分在此两相中的分配反复进行，从几千次到百万次，即使组分的分配系数只有微小差异，随着液体流动相移动却可以有明显的差距，最后使这些组分都得到分离。
高效液相色谱法是常用的分析方法，由于组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，导致组分在固定相上的保留程度不一样。
按分离原理可将HPLC分为分配色谱、离子交换色谱、离子色谱、尺寸排阻色谱和亲和色谱等。
本次实验是利用分配色谱原理，根据各待测物在互不相溶的两相中的溶液解度不同。
因而具有不同的分配系数。
在色谱柱中，随着流动相的移动，这种分配平衡需用进行多次，造成各待测物的迁移速率不同，从而实现分离的过程。
四、仪器与试剂1．仪器高效液相色谱仪；微量注射器（1μL）；贮液胶管。
2．试剂甲醇（分析纯）、苯（2μL/L）、甲苯（2μL/L）、苯与甲苯（2μL/L）、苯与甲苯（4μL/L）、苯与甲苯（10μL/L）、样品。
五、实验步骤与内容1．仪器操作：依次打开高压泵、检测器、工作站。
参考色谱条件：流动相、甲醇-水、等梯度洗脱、流速、柱温、进样量（10μL）、紫外检测波长。
2．仪器达到稳定后，依次注射不同浓度的苯溶液、甲苯溶液、及苯与甲苯的混合溶液，根据计算机给出的数据，以溶液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线。
同时根据样品的峰面积在曲线上查出样品中苯与甲苯的浓度。
3．实验完毕，清洗色谱系统后，关机。
六、数据的记录及结果分析0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0min-25255075100125150175mAU0102030405060708090%254nm,4nm (1.00)3.660/1341665苯（2μL/L ）0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0min-25255075100125150175200225mAU0102030405060708090%254nm,4nm (1.00)4.711/1988903甲苯（2μL/L ）0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0min-25255075100125150175200225mAU0102030405060708090%254nm,4nm (1.00)3.669/13460994.725/2013398苯与甲苯（2μL/L ）0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0min-5050100150200250300350400450mAU0102030405060708090%254nm,4nm (1.00)3.676/26278404.732/3943152苯与甲苯（4μL/L ）0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0min-1001002003004005006007008009001000mAU0102030405060708090%254nm,4nm (1.00)3.672/58438114.730/8970976苯与甲苯（10μL/L ）0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0min-5050100150200250300350mAU0102030405060708090%254nm,4nm (1.00)3.660/20655784.710/3045297样品结果分析：根据实验原理，各待测物在互不相溶的两相溶解度不同，具有不同的分配系数，在色谱柱中，随着流动相的移动，这种分配平衡需进行多次，造成各待测物的迁移速率不同。
液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯
液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯
液相色谱法（HPLC）是一种高效的分离、定量和鉴定化合物
的方法。
在液相色谱法中，样品被溶解在一种流动相中，然后通过色谱柱进行分离。
在本例中，我们可以使用反相液相色谱法来分离混合物中的苯和甲苯。
操作步骤如下：
1. 准备反相液相色谱柱。
考虑到苯和甲苯的相似性，建议选择一种C18柱。
2. 准备样品。
将待测混合物加入适量的溶剂中，并用过滤器过滤，以去除悬浮物和杂质。
建议将样品浓度控制在100 μg/mL
左右。
3. 准备流动相。
在本例中，建议使用甲醇和水的混合物作为流动相，比例可根据需要进行调整。
常规建议采用50%甲醇-50%水的流动相。
4. 进行液相色谱分析。
将样品以一定的流速注入色谱柱，并通过检测器检测相应的信号。
在本例中，甲苯和苯可以通过紫外检测器或荧光检测器进行检测。
建议采用紫外检测器，检测波长为254 nm，以获得更好的检测结果。
5. 进行定量分析。
通过标准曲线和峰面积计算得出混合物中苯和甲苯的含量。
液相色谱法是一种快速、灵敏、选择性高的方法，可以用于分析各种复杂的混合物。
在本例中，采用反相液相色谱法可以有效地分离苯和甲苯，获得准确的定量结果。
甲苯与乙苯的分离
第一设计方案简介一：设计方案的论证精馏是将由挥发度不同的组分所组成的混合液，在精馏塔中同时进行多次部分汽化和部分冷凝的过程，使其分离成几乎纯态组分的过程。
根据塔内气、接触构件的结构形式。
塔设备可分为板式塔和填料塔两大类。
根据塔为逐板接触型气-液传质设备。
种类繁多。
根据塔板上气-液接触元件的不同。
可分为泡罩塔、浮阀塔、筛板塔多种。
筛板塔是传质过程常用的塔设备，它的主要优点有：结构简单，造价低廉，气体压降小，板上液面落差也较小，生产能力及板效率均较泡罩塔高。
精馏过程原理：精馏过程原理可用气液平衡相图说明。
若混合液具有如图的t-x-y 图，将组成为x，温度低于泡点的该混合液加热到泡点以上，使其部F分汽化，并将气相和液相分开，则所得气相组成为y，液相组成为1x，1且y>F x>1x，此时气相、液相流量可由杠杆规则确定。
若继续将组成1为y的气相混合物进行部分冷凝，则可得到组成为2y的气相和组成为1x的液相。
依此又将组成为2y的气相进行部分冷凝，则可得到组成为2y的气相和组成为3x的液相。
且3y>2y>1y.由此可见，气相混合物经3多次部分冷凝后，在气相中可获得高纯度的易挥发组分。
同时若将组成为x的液相进行部分汽化，则可得到组成为'2x的液相和组成为'2y的1气相。
若继续将组成为'x的液相进行部分汽化，则可得到组成为'3x的2液相和组成为'y的气相，且'3x<'2x<'1x。
由此可见，将液体混合物进行3多次部分汽化，在液相中可获得高纯度的难挥发组分。
工业上精馏过程是多次部分汽化和部分冷凝的联合操作。
二．设计流程简图三．设计流程说明原料液由料液输送泵将处于原料贮存罐里的低位液体送到高位贮槽内。
高位贮槽将原料液输到预热器，原料液经预热器加热到指定温度后，送入精馏塔的进料板，在进料板与自塔上部下降的回流液体汇合后，逐板溢流，最后流入塔底再沸器中。
液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯
液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯华南师范大学实验报告课程名称仪器分析实验实验项目液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯实验类型□验证□设计□综合实验时间 2010 年 3 月 31 日实验指导老师实验评分一、实验目的1.掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法；2.了解高效液相色谱的构造、原理及操作技术。
二、实验原理高效液相色谱由储液器，泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内。
由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动是，经过反复多次的吸附－解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，记录成数据。
液相色谱的定性依据是保留时间的相对性，通常相对误差不能大于5%。
定量参数常常采用峰高、峰面积、相对峰高、相对峰面积等。
定量方法通常采用外标法、内标法和面积归一化法。
外标法为标准物质标准溶液制定标准曲线法；内标法为在标准溶液、样品溶液中加入内标物质，以相对峰高、相对面积对标准物质的浓度制定标准曲线；面积归一化法假定所有出峰物质的吸光系数相同，计算某物质的峰面积占所有峰面积的百分比。
三、仪器与试剂：1.仪器：SCL-10A vp紫外可见双波长检测器；SPD-M10A vp柱温箱；LC-10AT高效液相色谱仪；10μL微量注射器2.试剂：2μL/mL苯标液；2μL/mL甲苯标液；0.2μL/mL、2μL/mL、4μL/mL、10μL/mL的苯与甲苯的混合标准溶液；甲醇溶液；待测试样溶液四、实验内容与步骤：1.选择合适的流动相配比，优化色谱条件设置有关参数：控制流速为1mL/min。
柱温30℃，检测波长354nm。
设置流动相配比（甲醇：水=1：1），用10μL微量注射器注射5μL的10μL/mL苯与甲苯的混合标准溶液进行测定，观察其分离度和出峰时间。
反相高效液相色谱法分析甲苯反相高效液相色谱法分析甲苯
5
液相色谱流程图
进样器
流动相
输液泵
柱温箱
检测器 数据处理
6
Shimadzu LC-10ATVP LC 10ATVP高效液相色谱仪
7
三、仪器与试剂 仪 与试剂
色谱条件：
色谱柱：Shimadzu VO-ODS（4.6×150mm）C18分析柱 流动相 A液：水； 流动相： 液 水 B液：甲醇。用前用超声波脱气。 液 甲醇 用前用超声波脱气 UV-检测器，检测波长254nm。 进样体积：20uL;流动相流速：1.0mL/min。 样品：甲苯、萘、联苯的混合甲醇溶液。
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六 结果处 六、结果处理
1. 以峰面积对各组分的含量绘制标准工作曲线。 2. 根据保留时间进行定性；对试样各组分依据峰 面积由标准工作曲线求得各组分的含量。 3. 计算不同流动相配比和柱温条件下，两峰的分 离度。
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七 注意事项 七、注意事项
正确使用微量进样注射器，并保持其洁净。 抽取试样时 注射器内部不得存留气泡 针 抽取试样时，注射器内部不得存留气泡，针 头残存液体要用滤纸吸干。 吸取不同试液时，先用甲醇冲洗干净，再用 次后 方能抽取进样 使 要抽取的试液抽洗3次后，方能抽取进样。使 用完毕，须用甲醇抽洗干净后存放。
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溶剂的等级
溶剂的等级 ：
HPLC级 优级纯 分析纯
都经过蒸馏和0 45 的过滤（除去纤维毛 未溶解的机械颗粒） 都经过蒸馏和0.45um的过滤（除去纤维毛、未溶解的机械颗粒） 优级纯的纯度比分析纯的大 但里面含有防腐剂和抗氧化剂 优级纯的纯度比分析纯的大，但里面含有防腐剂和抗氧化剂 HPLC级经过0 2um的过滤 且除去有紫外吸收的杂质 HPLC级经过0.2um的过滤，且除去有紫外吸收的杂质
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实验高效液相色谱分离甲苯和乙苯
目的和要求
1.熟悉高效液相色谱仪的结构，理解反相HPLC的原理和应用；
2.掌握高效液相色谱法定性分析的原理。
基本原理
高效液相色谱法（HPLC）是以液体作为流动相的一种色谱分析方法。
高效液相色谱采用细颗粒固定相，使流动相在色谱柱上渗透性大大减小，流动阻力增大，必须借助高压泵输送流动相。
同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。
它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。
不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。
其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。
所以分离最终效果则是热力学与动力学两方面的综合效益。
本实验中，采用化合物的保留值进行定性分析。
仪器
高压泵紫外光度检测器六通进样阀色谱工作站柱温箱
试剂
甲苯、乙苯均为分析纯
甲醇为色谱纯
纯水为重蒸水
标准溶液的配制配制含甲苯、乙苯为4‰（体积比）的甲醇溶液及混合溶液。
实验条件
色谱柱：C18 柱(4.6 mm ×250 mm，5 µm)
流动相：甲醇：水（9：1或8：2，v/v），流量：1.0 ml·min-1
紫外分光检测器：测定波长254 nm
进样量：20µl
实验步骤
1.将配制好的流动相于超声波清洗器上脱气15 min 。
2.根据实验条件，将仪器按照仪器的操作步骤调节至进样状态，待仪器液路和
电路系统达到平衡，基线平直时，即可进样。
3.吸取20µl标准溶液进样，记录色谱图，重复进样。
数据及处理
思考题
1.紫外光度检测器是否适用于检测所有的有机化合物，为什么？
2.若实验中的色谱峰无法完全分离，应如何改善实验条件？。