第11章 弧菌科

第一节 霍乱弧菌——临床意义
霍乱弧菌是甲类传染病―霍乱的病原体 目前有155个血清群，其中O1群有古典和埃尔托 两种生物型 在自然情况下，人类是霍乱弧菌的易感者 自1817年以来，已发生七次世界性的霍乱大流行， 均由霍乱弧菌的O1群引起，前六次为霍乱弧菌的 古典生物型，第七次为埃尔托生物型 自1992年10月起分离到新的血清群O139，现在 世界各地均有流行或散发病例报告
第一节 弧菌属
主要引起人类腹泻，也可导致肠道外感染如伤口 感染、败血症等 能发酵葡萄糖，对弧菌抑制剂O/129敏感 钠离子能刺激其生长，有些菌种在无盐条件下不 能生长，称为嗜盐菌 多数能在血平板或普通琼脂平板上生长，在血平 板上可呈现α、β或不溶血菌落。 在肠道选择性培养基上如含乳糖或肌醇的麦康凯 平板，许多致病性弧菌可以生长，形成糖类不发 酵的菌落
标本的采集和运送 标本应避免接触消毒液 采取的标本最好就地接种碱性胨水增菌 不能及时接种者可用棉签挑取标本或将肛门拭子 直接插入卡－布运送培养基中 送检标本装在密封，不易碎的容器中，置室温由 专人输送 甘油盐水保存液不适合于弧菌的运送
第一节 霍乱弧菌——微生物检验学检验
标本直接检查 涂片染色镜检 观察有无“鱼群”样排列的革兰阴 性弧菌
第十一章
弧菌科
第十一章 弧菌科
一群菌体短小、弯曲成弧形或直杆状的革兰阴性 细菌 兼性厌氧，发酵葡萄糖 许多菌株生长需要2%~3%氯化钠 大多数菌株氧化酶阳性 具有一端单一鞭毛、运动迅速 弧菌科细菌广泛分布于自然界，以水中最为多见。 其中有一些种对人类致病。
第十一章 弧菌科
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弧菌属
气单胞菌属
邻单胞菌属
发光杆菌属
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第一节 弧菌属
弧菌属共有36个种，有12个种与人类感染有关 霍乱弧菌 副溶血弧菌 其他
第一节 弧菌属
霍乱弧菌
O1群霍乱弧菌 O139群霍乱弧菌 非O1群霍乱弧菌
副溶血性弧菌 其他：霍利斯弧菌、拟态弧菌、河弧菌、创伤弧 菌、溶藻弧菌、少女弧菌、麦氏弧菌、辛辛那提 弧菌、弗尼斯弧菌、卡佳丽弧菌
营养要求不高，在普通琼脂上生长良好 兼性厌氧，16~44℃均可生长，以37℃为适宜 具耐碱性，在pH6.8~10.2范围均可生长 在pH8.2~9.0的碱性胨水或碱性平板上生长迅 速，其他杂菌被抑制生长 在pH8.5的碱性胨水中经35℃4~6h增菌后可在 液体表面大量繁殖形成菌膜
第一节 副溶血性弧菌——生物学特性
形态 革兰阴性杆菌，有鞭毛（极单毛），无荚膜，无 芽胞 抗原结构 耐热的菌体（O）抗原，具有群特征性，副溶血 性弧菌的O抗原有13种 鞭毛抗原，不耐热，无型特异性
第一节 副溶血性弧菌——生物学特性
培养特性 营养要求不高 在无盐培养基上不能生长，最适合生长的氯化钠 浓度为3.5%，超过8%不能生长 最适pH为7.7~8.0，但pH9.5时仍能生长，最适生 长温度为30~37℃ 在碱性胨水中经6~9h增菌可形成菌膜 TCBS琼脂平板: 0.5~2.0mm大小，蔗糖不发酵而 呈蓝绿色菌落
其他培养特性 在血琼脂平板上菌落较大, El-Tor生物型可形成β 溶血环 在含明胶的培养基上O139群霍乱弧菌可形成不透 明的浅灰色菌落，周围有一圈不透明带，此菌落 涂片观察可发现荚膜
第一节 霍乱弧菌——生物学特性
生化反应 氧化酶阳性，发酵蔗糖，动力阳性，赖氨酸脱羧 酶阳性、鸟氨酸脱羧酶阳性，精氨酸双水解酶阴 性。 O/129敏感试验
第一节 副溶血性弧菌——生物学特性
培养特性 普通血平板: 不溶血或只产生α溶血 从腹泻患者中分离到的菌株95%以上在我妻琼脂 （含高盐7%的人O型血或兔血及以D-甘露醇为碳 源的琼脂平板）上产生β溶血现象，称为神奈川 现象，（该现象作为鉴定致病性与非致病性菌株 的一项重要指标） 嗜盐性选择平板: 较大，圆形，隆起，稍浑浊， 半透明或不透明，无粘性
第一节 霍乱弧菌——微生物检验学检验
O/129敏感试验
10ug O1群(CVC,EVC) O139群(BVC) 非O1群 副溶血弧菌 气单胞菌属 邻单胞菌属 S R S R R S 150ug S R S S R S
第一节 霍乱弧菌——微生物检验学检验
抗体检测 可用于霍乱的回顾性诊断和培养不能确定的霍乱 病例的辅助诊断 在感染发生后的10天内，特异性的杀菌抗体和抗 毒素抗体升高
第一节 霍乱弧菌——微生物检验学检验
在TCBS上形成黄色，4号琼脂或庆大霉素琼脂平 板上呈灰褐色中心的菌落，均为可疑菌落 用O1群和O139群霍乱弧菌多价和单价抗血清进 行凝集 结合菌落特征和菌体形态，作出初步报告
第一节 霍乱弧菌——微生物检验学检验
鉴定 将血清凝集确定的菌落进一步纯培养，依据全面 生化反应，血清学分群及分型进行最后鉴定 符合霍乱弧菌的菌株尚需区分古典生物型和ElTor生物型 对病原性弧菌的主要鉴定试验为赖氨酸脱羧酶、 鸟氨酸脱羧酶和精氨酸双水解酶 霍乱弧菌和拟态弧菌可在无盐普通肉汤和普通琼 脂平板上生长，而其他弧菌则不能
第一节 霍乱弧菌——微生物检验学检验
动力和制动试验 直接取“米泔水”样便，制成悬滴(或压滴)标 本后，观察有无呈穿梭样运动的细菌。 在悬液中加入1滴不含防腐剂的霍乱多价诊断 血清，可见最初呈穿梭状运动的细菌停止运动 并发生凝集，则为制动试验阳性。可推定为霍 乱弧菌存在
第一节 霍乱弧菌——微生物检验学检验
第一节 霍乱弧菌——临床意义
致病机制 正常情况下，胃液中的胃酸可消灭食物中的霍乱 弧菌，但在胃酸降低时，或摄入大量的霍乱弧菌 时，霍乱弧菌可以从胃进入肠道。进入肠道的霍 乱弧菌通过鞭毛运动穿过肠粘膜表面的粘液层， 通过菌毛定植于肠粘膜上皮细胞表面繁殖，产生 由染色体介导的对热不稳定的霍乱毒素（CT）而 致病。 O1群和O139群的致病机制和过程是一样的
第一节 霍乱弧菌——微生物检验学检验
鉴别试验 霍乱红试验（亚硝酸靛基质） 霍乱弧菌有色氨酸酶和硝酸盐还原能力。 霍乱弧菌和其他弧菌均有此种反应，非特异性 粘丝试验 弧菌属细菌除副溶血性弧菌部分菌株外，均有 此反应 耐盐培养试验
第一节 霍乱弧菌——微生物检验学检验
鉴别试验 O/129敏感试验 O/129 ：2,4二氨基-6,7-二异丙基喋啶 10ug及150ug纸片周围出现任何大小的抑菌环 均为敏感。 O1群和非O1群霍乱弧菌均敏感， O139群耐药
第一节 副溶血性弧菌——临床意义
具有嗜盐性 存在于近海的海水、海底的沉淀物、鱼虾类和贝 壳及盐渍加工的海产品中 主要引起食物中毒和急性腹泻 是我国沿海地区及海岛食物中毒的最常见病原菌 胃肠炎临床表现有：恶心、呕吐、腹痛、低热、 寒战等。腹泻呈水样便，偶尔血性，恢复较快， 病程2~3天，通常为自限性 还可引起伤口感染和菌血症
第一节 霍乱弧菌——生物学特性
O1群霍乱弧菌的O抗原 由A、B、C三种抗原因子组成，通过不同组合可 形成三个型别 AB——小川型(异型) AC——稻叶型(原型) ABC——彦岛型(中间型) 彦岛型的抗原性不稳定，各型之间可以相互转换。 以小川型和稻叶型为常见流行型别
第一节 霍乱弧菌——生物学特性
第一节 霍乱弧菌——生物学特性
抗原成分 不耐热的H抗原，为共同抗原 耐热的O抗原，具有群特异性和型特异性，是霍 乱弧菌分群和分型的基础。
第一节 霍乱弧菌——生物学特性
分型 根据O抗原的不同，现有155个血清群 O1群、O139群引起霍乱 O2群~O138群血清群 可引起人类的胃肠炎，不引起霍乱流行，称之 为非O1群霍乱弧菌。 以往wenku.baidu.com称不凝集弧菌或非霍乱弧菌
第一节 霍乱弧菌——生物学特性
特 羊红细胞溶血 鸡红细胞凝集 V-P 试验 多粘菌素B敏感试验 征 古典生物型 — — — + El-Tor生物型 D + + —
Ⅳ组噬菌体裂解
Ⅴ组噬菌体裂解
+
—
—
+
第一节 霍乱弧菌——生物学特性
抵抗力强 可在河水、井水及海水中存活20天左右 对热、干燥和光敏感；100℃1~2min即死亡 怕酸耐碱，在正常胃酸中仅能生存4min 对常用消毒剂敏感，0.5ppm氯15min能杀死 对庆大霉素耐药
第一节 霍乱弧菌——临床意义
霍乱毒素(CT)，对热不稳定，由A和B两个亚单位 A亚单在成熟过程中由蛋白水解酶切割成A1和A2 B亚单位与肠粘膜上皮细胞膜上的GM1受体结合 A1为毒素活性单位，通过B亚单位结合细胞膜上 GM1受体的通道或“内吞”进入细胞内，激活腺 苷酸环化酶，使细胞内cAMP大量增加。快速向 细胞外分泌水和电解质，使肠腔内水、钠潴留， 导致呕吐和腹泻，机体陷于缺水和电解质、酸碱 平衡紊乱状态。
第一节 副溶血性弧菌——临床意义
致病因素 菌毛、鞭毛 毒素 耐热直接溶血素(TDH) 耐热直接溶血素相关溶血素(TRH)
第一节 副溶血性弧菌——临床意义
耐热直接溶血素 能耐受100℃不被破坏。 溶血毒性，对人和兔红细胞的溶血性较高，对马 红细胞不溶血 细胞毒性，对多种培养细胞如有细胞毒性 心脏毒性，可导致心电图异常表现如ST-T改变、 房室传导阻滞、室颤或心跳骤停及心肌损伤 肠毒性，使肠粘膜的毛细血管通透性增高，向肠 腔分泌亢进
第一节 霍乱弧菌——临床意义
其他致病物质 El-Tor生物型能产生不耐热溶血素和血凝素 不耐热溶血素 具有溶血活性、细胞毒、心脏毒和致死毒性 El-Tor生物型的溶血特性可发生变异 血凝素 能凝集鸡红细胞 能被D-甘露糖抑制
第一节 霍乱弧菌——生物学特性
形态 新从患者标本中分离出的细菌革兰染色阴性，弧 形或逗点状 在患者“米泔水”样便中，可呈头尾相接的“鱼 群”样排列 菌体一端有鞭毛，悬滴观察时呈“穿梭”样运动， 可被相应的多价血清抑制——制动试验 有普通菌毛和性菌毛 O139群有荚膜
快速诊断 通过直接荧光抗体染色和抗O1群抗原的单克隆抗 体凝集试验，能够快速诊断霍乱弧菌感染 霍乱毒素的测定 用改良的ELISA法，将纯化的GM1包被，以俘获 标本中的CT。或采用乳胶凝集测定CT，有较高 的灵敏度和特异性
第一节 霍乱弧菌——微生物检验学检验
分离、培养 将标本直接接种于碱性胨水，或将运送培养基的 表层接种于碱性胨水中35℃6~8 h后，转种TCBS 琼脂平板、4号琼脂平板或庆大霉素琼脂平板， 35℃12~18h观察菌落形态
第一节 霍乱弧菌——生物学特性
常用的选择性培养基 TCBS 琼脂平板，霍乱弧菌发酵蔗糖产酸，菌落 呈黄色 含亚碲酸钾的选择平板有4号琼脂、庆大霉素琼脂， 将培养基中的碲离子还原成元素碲，形成灰褐色 菌落中心 可以在无盐培养基上生长，在含有高于6%氯化钠 的培养基上不能生长
第一节 霍乱弧菌——生物学特性
第一节 霍乱弧菌——临床意义
霍乱弧菌是烈性肠道传染病，法定甲类传染病― 霍乱的病原体
第一节 霍乱弧菌——临床意义
传染源 病人或无症状的感染者 传播途径 粪口途径，摄入污染的水源、食物；人 与人直接接触不常见。
第一节 霍乱弧菌——临床意义
病程 前驱期→吐泻期→脱水期（霍乱面容）→循 环衰竭→恢复期
第一节 霍乱弧菌——微生物检验学检验
第一节 霍乱弧菌——微生物检验学检验
标本采集和运送 霍乱是烈性传染病，凡在流行季节和地区有腹泻 症状的患者均应快速准确作出病原学诊断 在发病早期，尽量在使用抗菌药物之前采集标本 取患者“米泔水”样便，亦可采取呕吐物或尸体 肠内容物，或采取肛门拭子
第一节 霍乱弧菌——微生物检验学检验
第一节 霍乱弧菌——临床意义
O1群 古典生物型(CVC)——尚未灭绝 埃尔托生物型(EVC)——仍在流行 O139群(BVC)——新出现
第一节 霍乱弧菌——临床意义
致病因素 鞭毛 有助与细菌运动穿过肠粘膜表层进入肠上皮 细胞内 菌毛 有助于细菌粘附定植 霍乱毒素(CT) 目前已知的致泻毒素中，致泻效果 最强烈的