骨髓细胞微核实验

微 核 实 验
无核细胞
红细胞
红细胞的分化成熟过程
小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的形成
环磷酰胺（CTX）
最常用的烷化剂类抗肿瘤药。 在体外无抗肿瘤活性，进入体内经转化、分解，生成酰 胺氮芥对肿瘤细胞有细胞毒作用。 副作用明显，有恶心、食欲减退、脱发、白细胞减少、 中毒性膀胱炎、肝功能损伤等。 具有显著的遗传、生殖毒性：停经或精子缺乏，妊娠初 期时给予可致畸胎。 用药后24-30小时，骨髓中微核形成达峰。
×1000
实验结果
组别
动物数
受检PCE总数
含微核PCE数
微核率
阴性对照组
模型组
结果分析与评价
本试验中只计数PCE中微核，微核率以千分率表示. PCE/NCE为评价细胞毒性的指标： 正常PCE/NCE比值约为l(正常范围为0.6～ 1.2)； 如PCE/NCE＜0.1，则表示PCE形成受到严重抑 制； 如PCE/NCE＜0.05，则表示受试化学毒物的剂 量过大，试验结果不可靠。
实验分组和染毒方法
对照组
等体积溶剂
模型组
环磷酰胺40mg/kg
染毒方法（30h两次给药法）：两次给受 试物间隔24h，第二次给药后6h取材
处死：小鼠颈椎脱臼处死；
取股骨：防止出血； 取骨髓：小牛血清1滴 推片：30度角；
晾干：一定要干；
固定：甲醇固定10min, 需要晾干；
染 毒 后 操 作 步 骤
NCE的核糖体 已消失，被染 成淡桔红色。
实验目的
1. 用化疗药（环磷酰胺）制备突变模型 2. 观察小鼠骨髓嗜多染红细胞（PCE）微 核
实验动物及试剂
【Animal】 小鼠是微核试验的常规动物，通常用7～12周龄， 体重18～20g的小鼠。 【Reagents 】 小牛血清 Giemsa染液 环磷酰胺
实验原理
机理：
1 有丝分裂毒物的作wenku.baidu.com使个别染色体或带着丝点的染色体 环和断片在细胞分裂后期被滞留在细胞质中
2
断片或无着丝点染色体在细胞分裂后期不能定向移动，
从而遗留在细胞质中
结论：
微核试验能检测化学或其他物质因素诱导产生的染色体 完整性改变和染色体分离改变这两种遗传学终点
有核细胞中 微核难与正常核分叶 及核突出物区别
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染色：Gimesa染液染色（10~15min）
冲洗：蒸馏水冲洗，晾干
阅片: 观察微核。
推 片 方 法
实验方法和步骤
观察与计数：低倍镜下选择分布均匀，染色较好的区域 油镜下观察计数 多染红细胞（PCE）呈灰蓝色，正染红细胞（NCE）呈 橘黄色。典型的微核多为单个、圆形、边缘光滑整齐， 嗜色性与核质一致，呈紫红色或蓝紫色 。 计数1000个PCE中含微核的PCE数，并且计数200个细 胞中PCE与NCE的比值。 微核率（‰）= 含微核PCE细胞数 PCE细胞总数
8
结果
示小鼠骨髓正常 嗜多染红细胞
示小鼠骨髓嗜多染 红细胞中一个微核
9
示小鼠骨髓嗜多染红细胞中两个微核
10
示小鼠骨髓嗜多染红细胞中多个微核
11
Giemsa染色
PCE胞质内含 有核糖体，染 色呈灰蓝色； MCN多数为圆 形，嗜色性与 核质一致，呈 紫红色或蓝紫 色
NCE PCE & MCN
骨髓细胞微核实验
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实验原理
微核试验是用于染色体损伤和干扰细胞有丝分裂的化学毒 物的快速检测方法。 微核(Micronucleus,MCN)是指细胞中主核之外的颗粒，染 色与细胞核一致，相当于细胞直径的1/20-1/5，呈圆形或 杏仁状。是细胞内染色体断裂或纺锤丝受影响而在细胞有 丝分裂时滞留在细胞核外的遗传物质。