实验一溶菌酶的溶菌作用
溶菌酶
溶菌酶溶菌酶溶菌酶( Lysozyme，E．C．3.2.17)，全称为1，4-p -N -溶菌酶，又称为细胞壁溶解酶，是自然界普遍存在的一种酶，因其能溶解细菌细胞壁具有溶菌作用而得名。
（一）溶菌酶的结构及物理化学性质溶菌酶易溶于水，遇碱易破坏，不溶于丙酮、乙醚，是一种白色、无臭的结晶粉末。
相对分子质量为14.7ku，由129个氨基酸残基组成，碱性氨基酸残基及芳香族氨基酸如色氨酸残基的比例很高，含有4个二硫键，如图2 -24所示，其等电点为10~11。
在37℃条件下溶菌酶的生物学活性可保持6h，当温度较低时保持时间更长，利于溶菌酶在体内发挥作用。
禽蛋蛋清是溶菌酶的重要来源，蛋清溶菌酶的物理化学性质如表17 -1所示。
溶菌酶由两个区域组成，由一个长的α螺旋所联接，其二级结构大多是α螺旋。
N末端的区域( f40~80)由一些螺旋线组成，大多数是反平行的β折叠。
第二个区域由fl~39和f89~129氨基酸残基组成。
分子中的这两个区域被一个螺旋体（f87天冬氨酸- 114精氨酸）所分离，分子组成了内部疏水外部亲水的基本结构，对溶菌酶发挥抗菌功能起着巨大的作用。
表17 -1 蛋清溶菌酶的物理化学特性特性数值相对分子质量14 400亚基数 1氨基酸129等电点10.7二硫键数 4碳水化合物所占比例0E1%280nm 26.493℃时的D热值（每分钟破坏90%的活性）110酶活力的实验通过浑浊溶壁微球菌的细胞溶解（二）溶菌酶的来源溶菌酶在自然界中普遍存在，在人和许多哺乳动物的组织和分泌液中，均发现有溶菌酶存在，其物化性质基本相似，溶菌酶的来源如表17 -2所示。
溶菌酶主要分布于禽蛋和鸟类蛋清中，尤其是浓厚蛋白的系带膜状层中。
禽蛋中异常丰富，占整个蛋清中的 3.5%，鸡蛋蛋清是溶菌酶的主要商业来源。
表17 -2溶菌酶的来源溶菌酶的来源溶菌酶的含量鸡蛋清 2 500 ~ 3 500μg/mL鸭蛋清 1 000 ~ 1 300μg/mL鹅蛋清500 ~ 700μg/mL眼泪 3 000 ~5 000μg/mL人乳55~ 75 μg/mL牛奶10~ 15μg/mL脾脏50 ~ 160μg/kg胸腺60~ 80μg/kg胰腺20~ 35μg/kg花椰菜汁25~ 28μg/mL木瓜汁8~ 9μg/mL卷心菜汁7~8μg/mL（三）溶菌酶的溶菌机制溶菌酶是一种糖苷水解酶，专门作用于微生物细胞壁，可以破坏组成微生物细胞壁的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰葡萄糖胺之间的β-1，4-糖苷键，其作用机理见图17 -1。
溶菌酶作用机理范文
溶菌酶作用机理范文溶菌酶是一类具有溶解细菌细胞壁的酶，广泛存在于许多生物体中，包括人类、动物和细菌等。
它们是一种非特异性酶，能够降解各种不同类型的细菌细胞壁，对于防御和清除细菌感染至关重要。
溶菌酶通过破坏细菌细胞壁来诱导溶菌，从而导致细菌死亡。
溶菌酶可以作用于细菌细胞壁的主要成分，即胞外多糖网，其中包括纤维素、胆固醇、脂蛋白等。
溶菌酶通过特定的机制作用于细菌细胞壁，实现细菌死亡的目的。
溶菌酶大致可以分为两类，即内切型和外切型溶菌酶。
内切型溶菌酶通过将细菌细胞壁的多糖链切断，使得细菌细胞壁的强度降低，细胞壁变薄，从而导致细菌死亡。
外切型溶菌酶与细菌细胞壁结合后，结合蛋白将细菌细胞壁破坏，导致细胞壁的裂解，最终引起细菌死亡。
具体来说，溶菌酶作用于细菌细胞壁的机制包括以下几个方面：1.酶和细菌细胞壁的结合：溶菌酶通过结合到细菌细胞壁上的底物上，实现对细菌的精确作用。
这一步骤通常是通过溶菌酶的结构域与细菌细胞壁上的特定底物进行识别和结合。
2.切断多糖链：当溶菌酶与细菌细胞壁结合后，酶会将细菌细胞壁中的多聚糖链切断。
这些多聚糖链是细菌细胞壁的重要组成部分，主要由N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰穌氨酸组成。
溶菌酶通过切断细菌细胞壁中这些多聚糖链，导致细菌细胞壁的完整性破坏。
3.细菌细胞壁的溶解：溶菌酶的作用会导致细菌细胞壁的裂解和溶解。
这是由于细菌细胞壁的完整性依赖于多聚糖链的交联和分子间作用力。
一旦这些多聚糖链被切断，细菌细胞壁就会无法维持自身的完整性和稳定性，从而导致细菌细胞壁的破坏和裂解。
总的来说，溶菌酶通过与细菌细胞壁结合，并切断多聚糖链，导致细菌细胞壁的破坏和裂解，从而引起细菌死亡。
这一机制是一种高效的细菌防御机制，可用于治疗细菌感染和研究细菌细胞壁的结构和功能。
需要注意的是，溶菌酶作为一种非特异性酶，对细菌细胞壁有广泛的作用，但它在不同细菌中的作用机制可能略有差异。
此外，溶菌酶的活性和作用机制也受到多种因素的调节，包括温度、pH值以及溶菌酶与细菌细胞壁之间的特异性相互作用等。
高考溶菌酶常考知识点
高考溶菌酶常考知识点溶菌酶是一种可以破坏细菌细胞壁的酶类物质。
在高考生物考试中，溶菌酶是一个常见的知识点。
本文将介绍溶菌酶的基本概念、作用机理、应用领域以及相关实验方法。
一、溶菌酶的基本概念溶菌酶也被称为葡萄球菌溶菌酶，是一种能够裂解葡萄球菌细胞壁的酶类物质。
它主要存在于人类和动物体内的各种组织和分泌物中，是一种天然的防御机制。
溶菌酶是由细菌、真菌、植物和动物等生物体产生的一类酶，具有广泛的生物学活性。
二、溶菌酶的作用机理溶菌酶的作用机理主要是通过破坏细菌细胞壁而导致细菌死亡。
它能够降低细菌细胞壁的完整性，导致内部渗漏和细胞内容物外泄，最终导致细胞溶解。
在免疫防御中，溶菌酶可以识别病原菌细胞壁上的特定抗原，从而发挥抗菌作用。
三、溶菌酶的应用领域溶菌酶在医药领域具有广泛的应用价值。
首先，它可以作为一种抗菌剂用于治疗细菌感染性疾病。
其次，溶菌酶还可以作为一种重要的实验工具，用于细菌分子生物学研究中，如基因工程、DNA重组等领域。
此外，溶菌酶还广泛应用于食品工业、饲料工业、环境保护等领域。
四、溶菌酶相关的实验方法在研究溶菌酶时，有几种常用的实验方法可以用来检测其活性和测定其浓度。
首先是溶菌酶活性的检测，常用的方法有酶活性测定法和酒石酸盐凝胶电泳法。
其次是溶菌酶浓度的测定，常用的方法有比色法、生物学活性测定法和免疫学测定法。
五、总结通过对溶菌酶的基本概念、作用机理、应用领域和相关实验方法的介绍，可以看出溶菌酶在生物学领域中具有重要的研究和应用价值。
对于高考生物考试来说，了解溶菌酶的相关知识点，有助于理解细菌的抵抗机制以及抗菌药物的开发和应用。
同时，掌握溶菌酶相关实验方法，可以对细菌研究提供有力的实验手段。
本文对高考溶菌酶的常考知识点进行了概括性的介绍，希望对广大考生有所帮助。
在备考过程中，建议考生加强对溶菌酶相关知识的学习和理解，注重实验方法的掌握，提高解题能力和实验操作水平。
祝愿各位考生取得优异的成绩！。
溶菌酶作用机理
溶菌酶，又称胞壁质酶，微生物细胞壁的 水解酶，是一种碱性蛋白质
分 子 量 为14338Da，由129个氨基酸残基组 成 单 一 肽 链 ，整个分子大小约为.5*3*3nm.
等电点为 10.7-11 分子内含 4对二硫键
常见分类
• 目前大多根据来源进 行分类，其中研究最多、最具代表 性的是c-型溶菌 酶，鸡蛋清中天然c一型溶菌酶含量最丰 富，c一型溶菌酶也存在于多种动 物的组织和分泌物中 。 g一型溶菌酶，无脊椎动物中有i一型溶菌酶，此外，还
构象的改变而改 变，与酶活性关系不大。
• 溶菌酶杀灭革兰氏阳性 菌，除水解肽聚糖 外，还对微生物相关结构进行识 别，其中 的特定结构诱导细菌产生自溶酶，以非酶
机制激发微生物产生自溶酶而杀菌，但此 机理有待 于进一步研究。
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其细胞壁几乎全部由 肽聚糖组成。
• 革兰氏阴性菌G-也有 一定程度溶解作用，
• 革兰氏阴性菌(G-)，如 其最有效浓度为0.05%。
大肠杆菌、变形杆菌、
痢肽聚糖。
• 因此，溶菌酶对于破 坏G+细菌的细胞壁较
G-细菌强。
• 催化过程的要点：（The Critical Elements of
外膜作用机制
• 人工合成的HLH多肽和C一端螺旋区 域能通过自身促进吸 收穿透外膜并用形成通道的 方式破坏内膜。
• HLH结构中的a一螺旋发夹抗菌多肽以自身促进吸收途径 穿透大肠杆菌外膜 。
• 作用机制是：抗菌肽分子中的多价阳离子与结合在脂多糖 表面的二价阳离 子发生交互作用，由于这些多肽与脂多 糖的亲和力 比原来结合在脂多糖上的Ca 和Mg 的亲和力
• 肽“尾”则是通过D-乳酰羧基连在NAM的 第3位碳原子上，肽尾之间通过肽“桥”(肽 键或少数几个氨基酸)连接，NAM、NAG、 肽“尾”与肽“桥”共同组成了肽聚糖的 多层网状结构，作为细胞壁的骨架。
实验一 溶菌酶的溶菌作用
实验一溶菌酶的溶菌作用实验目的：1、掌握溶菌酶对革兰氏阳性菌溶解的原理及应用。
2、证实体液中溶菌酶的存在观察溶菌酶的溶菌现象。
基本原理：正常情况下，机体的唾液、泪液、痰、鼻腔分泌物以及白细胞和血清等均含有丰富的溶菌酶。
测定分泌物和体液中的溶菌酶含量及其变动情况，可作为评价机体非特异性免疫功能的指标之一。
溶菌酶的杀菌机理是其作用于细菌细胞壁的粘肽层，粘肽是细菌的细胞壁主要成分。
溶菌酶能切断粘肽结构中的N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸之间的β- 1,4糖苷键，破坏粘肽支架，使细胞壁破坏。
由于细菌细胞壁的重要功能之一是保护细菌，即抗低渗，故细菌失去细胞壁的保护作用后，在低渗环境中可发生溶解。
溶菌酶的主要作用对象是革兰氏阳性菌。
革兰氏阴性细菌细胞壁粘肽层外还有脂多糖、外膜和脂蛋白结构，故在一般情况下溶菌酶不易发挥直接作用。
实验材料：1、葡萄球菌：本菌是一种革兰氏阳性菌，普通琼脂培养基生长良好。
2、标准溶菌酶：称取溶菌酶标准纯品，用蒸馏水配制为1000ug/ml原液，并稀释为100、50、10 ug/ml标准液，用前保存在冰箱中。
3、唾液：用无菌平皿收集唾液，可在同学间收集。
（于饭后两小时，清水漱口3次，10分钟后，收集唾液于清洁烧杯中）；4、其它：无菌打孔器（孔径2mm），无菌毛细吸管、毫米尺等。
实验方法：1、制备含葡萄球菌的琼脂平板加热融化3%琼脂，冷至60℃~70℃时，加入1ml葡萄球菌菌液，混合均匀，倾注于无菌平皿内。
2、用无菌打孔器在葡萄球菌琼脂平板上打孔，孔径2mm左右，孔距5-20mm。
用针头挑出孔内琼脂，3、用毛细吸管取新鲜收集的唾液加入琼脂孔内，每孔加满唾液,同时加标准溶菌酶作阳性对照。
4、置24-28℃下12-18h观察结果。
观察各孔周围溶菌情况，测量溶菌环直径。
实验结果：用毫米尺或三角板量取小孔周围溶菌环直径，并作记录，可与标准溶菌酶阳性对照作对比观察。
机体的免疫功能是由免疫系统完成的，免疫系统由免疫器官（中枢免疫器官和外周免疫器官），免疫细胞（T细胞（胸腺依赖性淋巴细胞）、B 细胞（骨髓依赖性淋巴细胞）、K 细胞、NK 细胞、LAK 细胞、TIL 细胞和单核巨噬细胞）和免疫分子（免疫球蛋白、补体、细胞因子等）等组成。
溶菌酶的结构与功能
溶菌酶的结构与功能溶菌酶是一种酶类蛋白质，具有重要的生物学功能，能够降解细菌细胞壁，引起细菌细胞溶解。
溶菌酶通常由一个或多个结构域组成，包括N-端信号肽、结构域和C-端的结构域。
信号肽用于定位和导入溶菌酶进入细胞内部。
结构域通常由α-螺旋和β-折叠组成，并通过非共价相互作用稳定结构。
C-端结构域通常与细菌细胞壁成分MurNAc结合。
溶菌酶的功能:溶菌酶的主要功能是降解细菌细胞壁。
细菌细胞壁是由多糖和蛋白质组成的结构，其中包括MurNAc、N-乙酰葡糖氨基酸、N-乙酰酰氨基葡糖等。
溶菌酶能够酶解这些细胞壁成分，使细胞壁弱化甚至破裂，导致细菌细胞溶解。
溶菌酶的作用机制:溶菌酶通过与细菌细胞壁的MurNAc结合，进而使其降解。
在细菌细胞壁中，MurNAc和N-乙酰葡糖氨基酸之间由β-1,4-糖苷键连接。
溶菌酶能够切断此糖苷键，使得细菌细胞壁的结构破坏。
溶菌酶与免疫系统:溶菌酶是人体内免疫系统的重要组成部分。
人体产生的溶菌酶可以降解细菌细胞壁，促进细菌的溶解。
此外，溶菌酶还能够激活免疫系统中的炎症反应，吸引炎症细胞和其他免疫细胞到感染部位，增强免疫系统的抗菌效应。
溶菌酶在临床上的应用:溶菌酶在临床上具有广泛的应用价值。
首先，溶菌酶可以用作一种抗菌剂。
通过溶菌酶可以破坏细菌细胞壁从而引起细菌的溶解，具有较强的抗菌作用。
其次，溶菌酶还可以用于诊断菌感染。
通过检测患者体液中溶菌酶的水平可以判断其细菌感染的程度和严重性。
此外，一些研究还显示，溶菌酶可能还具有抗肿瘤作用，能够抑制肿瘤细胞的生长和扩散。
总结:溶菌酶是一种重要的酶类蛋白质，具有降解细菌细胞壁的功能。
其结构包括信号肽、结构域和与MurNAc相结合的C-端结构域。
溶菌酶通过酶解细菌细胞壁的MurNAc，导致细菌细胞的破裂和溶解。
溶菌酶在免疫系统中起着重要作用，并具有广泛的临床应用前景。
提取溶菌酶实验报告
一、实验目的1. 学习和掌握溶菌酶的提取和纯化方法。
2. 了解溶菌酶的生物学特性及其应用。
3. 培养实验操作技能，提高实验设计能力。
二、实验原理溶菌酶（Lysozyme）是一种广泛存在于生物体中的酶，主要作用于细菌细胞壁的肽聚糖，将其分解，导致细菌细胞壁破裂，从而杀死细菌。
溶菌酶在医药、食品、生物工程等领域具有广泛的应用。
本实验采用鸡卵清为原料，通过提取、分离纯化等方法获得高纯度的溶菌酶。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡卵清、NaCl、醋酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、硫酸铵、硫酸铜、氢氧化钠、硫酸锌、硫酸镁、EDTA、SDS、考马斯亮蓝、磷酸缓冲液等。
2. 实验仪器：离心机、分光光度计、电泳仪、凝胶成像系统、磁力搅拌器、超声波破碎仪、低温冰箱、恒温培养箱、移液器、容量瓶、烧杯、试管等。
四、实验步骤1. 溶菌酶粗提取（1）取一定量的鸡卵清，加入适量的磷酸缓冲液（pH 6.0），搅拌均匀。
（2）将混合液置于磁力搅拌器上，搅拌30分钟，使溶菌酶充分释放。
（3）将混合液在低温下（4℃）离心10分钟，取上清液作为粗提液。
2. 溶菌酶分离纯化（1）将粗提液用硫酸铵进行盐析，使溶菌酶沉淀。
（2）将沉淀用磷酸缓冲液（pH 6.0）溶解，再次离心去除杂质。
（3）将上清液用硫酸铜、氢氧化钠、硫酸锌、硫酸镁、EDTA等试剂进行亲和层析，进一步纯化溶菌酶。
（4）收集纯化后的溶菌酶，用SDS-PAGE进行电泳分析，鉴定溶菌酶的纯度。
3. 溶菌酶活性测定（1）取一定量的溶菌酶溶液，加入等体积的底物溶液，混匀。
（2）在特定波长下，测定溶菌酶催化反应产生的吸光度变化。
（3）根据吸光度变化计算溶菌酶的活力。
4. 溶菌酶纯度鉴定与分子量测定（1）将纯化后的溶菌酶进行SDS-PAGE电泳分析，观察蛋白质条带。
（2）通过凝胶成像系统对电泳图谱进行分析，鉴定溶菌酶的纯度。
（3）根据蛋白质分子量标准曲线，计算溶菌酶的分子量。
五、实验结果与分析1. 溶菌酶粗提取实验过程中，鸡卵清中的溶菌酶被充分释放，粗提液呈现出淡黄色。
添加溶菌酶原理的目的是
添加溶菌酶原理的目的是
添加溶菌酶的原理是为了实现溶菌作用。
溶菌酶是一种酶类物质，能够分解细菌细胞壁上的肽聚糖链，导致细菌细胞壁破裂和细菌死亡。
溶菌酶可以具有以下几个目的：
1. 研究细菌：溶菌酶可以被用来研究和识别特定类型的细菌。
通过观察细菌纯培养物中的溶菌现象，可以确定细菌的种类。
2. 细菌感染的治疗：溶菌酶可以作为抗菌剂，用于治疗由某些细菌引起的感染。
溶菌酶可以破坏细菌细胞壁，导致细菌死亡。
这种方法可以作为治疗细菌感染的一种选择。
3. 生物技术应用：溶菌酶在生物技术领域也有广泛的应用。
它可以被用于在实验室中裂解细菌细胞，从而释放出目标物质，如蛋白质、DNA或RNA。
这种方法被广泛应用于分离纯化细菌产物、制备基因组DNA或RNA等实验过程中。
总的来说，添加溶菌酶的目的是为了使用其溶菌作用来实现细菌的研究、治疗细菌感染以及在生物技术领域中的应用。
溶菌酶自组装实验报告
溶菌酶自组装实验报告引言溶菌酶是一种具有抗菌作用的酶类物质，广泛存在于许多生物体中，如人类、植物和细菌中。
溶菌酶能够通过水解细菌细胞壁上的β-（1，4）-N-乙酰葡萄糖胺键而引起细菌的溶解。
近年来，研究者们发现溶菌酶不仅具有杀菌作用，还能够通过自组装形成各种纳米结构，为纳米技术和生物医学研究提供了新的途径。
本实验旨在通过自组装方法制备溶菌酶纳米颗粒，并对其形貌和结构进行表征。
实验方法材料准备- 溶菌酶粉末- 磷酸盐缓冲液（PBS）- 无水乙醇- 离心管- 紫外可见分光光度计实验步骤1. 将一定量的溶菌酶粉末称取到离心管中。
2. 加入适量的PBS溶液，并用震荡仪将其均匀悬浮。
3. 把悬浮液置于40恒温水浴中，保持一定时间。
4. 向悬浮液中加入一定浓度的无水乙醇。
5. 用紫外可见分光光度计测量悬浮液的吸光度，记录下其数值。
结果与分析根据实验步骤，我们制备了不同浓度的溶菌酶纳米颗粒溶液，并对其进行了表征。
在实验中，我们发现随着乙醇浓度的增加，溶菌酶纳米颗粒的形貌和结构发生了明显的变化。
首先，当未加入乙醇的悬浮液经过自组装反应后，观察到溶菌酶纳米颗粒的分布较为均匀，颗粒大小均匀。
这说明溶菌酶在PBS溶液中能够自发地形成纳米级的聚集体。
然而，当加入一定浓度的乙醇后，我们观察到溶菌酶纳米颗粒的直径明显增大，而且形状变得不规则。
这可能是由于乙醇的存在改变了溶菌酶分子之间的相互作用，使其形成了更大的聚集结构。
同时，乙醇的加入也导致了纳米颗粒的聚集程度加剧，颗粒之间的空隙减少。
另外，我们通过测量纳米颗粒溶液的吸光度来评估溶菌酶纳米颗粒的质量。
实验结果显示，在乙醇浓度为10%时，纳米颗粒的吸光度最高，说明其质量最优。
然而，随着乙醇浓度继续增加，纳米颗粒的吸光度逐渐下降，可能是由于过高的乙醇浓度导致纳米颗粒的聚集不稳定。
结论通过溶菌酶自组装实验，我们成功制备了溶菌酶纳米颗粒。
实验结果表明，乙醇的加入对溶菌酶纳米颗粒的形貌和结构产生了明显影响。
溶菌酶(1)
1000.00
910.20
743.50
净利(元)
500.00
0.00
试验组
常规用药
176.70
空白组
2、抗菌谱广。
对耐药性菌株效果尤佳。采用纸片法和多点法 检定了“溶菌酶”对金黄色葡萄球菌的抑（杀）菌 作用，结果表明，对10株ß–内酰胺酶阴性菌，本品 和抗生素（青霉素、庆大霉素、头胞唑啉等）都有 明显的抑制效果，但对82株耐甲氧西林金葡萄 （MRSA）本品的敏感性显著高于其它抗菌素。最 低抑菌浓度（MIC）为120- 250μ/ml，相当于2450 μg / ml。
（2）皮肤和粘膜的刺激性试验及致热源试验反映为阴性。
（3）对鲜奶的发酵质量影响试验。
离体试验：即直接将药液加入鲜奶中。每20ml鲜奶中加 入 500、1000、2000 U ，相当于 100 μg 、200 μg 、400 μg 。经40℃ 2小时发酵后，酸度为63--73度，空白对照组 为61--73度。
四、社会效益和生态效益:
1、在畜牧业中推广应用，一方面将大大降低疫病造成的产量下降，
减少由此引起的巨大经济损失，大大提高畜牧业的经济效益。（若按 仔猪的死亡率达10——20%，鸡死亡率达20%左右，造成的直接经济损 失分别达到2.8亿元以上和4.44亿元左右。），另一方面，它的推广应 用能很好解决家禽家畜中的药害残留问题，改善人民用肉质量，确保 食品安全，同时，对于我国在加入WTO后，抗绿色壁垒，国产家禽家畜 肉制品参与国际市场竞争都有着十分重要的现实意义。
5、能提高机体的免疫力，加快机体损伤组织的修复
溶菌酶作为机体非特异免疫因子之一，参与机体多种免疫反映， 具有保持机体生理平衡的重要作用。可改善和增强巨噬细胞吞噬和消 化功能，激活白细胞吞噬功能，并能改善细胞抑制剂所导致的白细胞 减少,从而增强机体的抵抗力。溶菌酶本身具有T细胞表位，能诱导2 型(Th2) T辅助细胞反应；口服溶菌酶能诱导小鼠产生全身性的Th1 和Th2免疫反应，增强免疫功能。溶菌酶还具有激活血小板的功能,可 以改善组织局部血液循环障碍,分解脓液,增强局部防卫功能,从而体 现其止血、消肿、加快机体损伤组织的修复作用。它还可以作为一种 宿主抵抗因子,对组织局部起保护作用。从我们对使用过本产品的仔 猪眼踪调查来看,也证明了这一点。即用本产品治疗过的仔猪治愈后 在整个生长期内,下痢的复发率为0.5%。而用抗生素治疗治愈后复发 率为24.5%。
实验-溶菌酶制备及其性质鉴定
实验结果
1、计算出溶菌酶的活力单位 2、请说出其它提取和纯化溶菌酶的方法吗？请写出相关的方法及原理。
谢谢观看
实验步骤
（3）加完氯化钠细粉后，再用1mol/L的氢氧化钠溶。
低温下静置7d，溶菌酶结晶将慢慢析出，于72-96h 达到最高产率。
（4）将结晶溶液4000r/min，离心5min，倾去上清液，加入等体积预冷0℃丙酮， 再4000r/min，离心5min，洗涤后弃去上清液，即可得到粗制的溶菌酶晶体。
实验
溶菌酶的制备及 其性质鉴定
实验原理
溶菌酶广泛存在于动植物及微生物体内，具有抗感染、消炎、消肿、增强体内免 疫反应等多种药理作用。
鸡蛋清内含有丰富的溶菌酶，向鸡蛋清中加入一定量的中性盐，并调节pH至溶菌 酶的等电点，溶菌酶即可结晶析出。
如若结晶不纯，可以重结晶。
实验原理
溶菌酶之所以溶菌，因它能催化革兰氏阳性细菌细胞壁黏多糖水解的缘故。 测定溶菌酶的活力，可以用某些细菌细胞壁作为底物，以单位时间内被它水解的
细胞壁的量表示酶活力的大小。
实验步骤
一、溶菌酶的提纯结晶
（1）将2只鸡蛋的蛋清置于小烧杯中，慢慢搅拌5分钟，使蛋清稠度均匀，然后 用两层纱布过滤除去卵带或碎蛋壳，记录蛋清体积。
（2）按每100ml蛋清溶液加入5g氯化钠的比例，向蛋清溶液中慢慢加入氯化钠 细粉，边加边搅拌，促使氯化钠细粉及时溶解，以避免局部浓度过高或沉淀于容 器底部，否则会引起蛋白质的变性而产生大量的白色沉淀。
实验步骤
二、溶菌酶的活力测定
（1）酶液的制备 准确称取溶菌酶样品100mg， 用0.1mol/L，pH6.2磷酸缓冲液 配成1mg/ml的酶液，再将酶液稀释成50µg/ml。 （2）将酶液2mL和底物悬液2mL（短小芽孢杆菌）分别置于25℃水浴中保温1015min，然后吸取底物悬液4mL放入比色皿中，450nm波长读出吸光度，此为0 时读数。 1min后，再读吸光度，记下读数。
溶菌酶的研究进展
溶菌酶的研究进展溶菌酶概述溶菌酶，也称为裂解素，是一种在细菌、真菌、动物和植物中都存在的水解酶。
它们可以降解细胞墙材料，使细胞变为裸露状态。
溶菌酶广泛应用于医学、食品和制药等领域。
溶菌酶的来源溶菌酶存在于多种微生物和真菌中，如链球菌、金黄色葡萄球菌、葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、支原体和放线菌等。
通过培养和发酵技术，可以大规模制备纯净的溶菌酶。
此外，许多动植物也拥有溶菌酶，如人类唾液中的溶菌酶可以消化细菌、口腔扁桃体中的溶菌酶可以抵御病毒和细菌。
植物中的溶菌酶则是一种抗病毒和抗真菌的重要保护因子。
溶菌酶的作用溶菌酶的主要作用是降解细胞壁，使细胞膜完整性受到破坏，导致细胞死亡。
此外，溶菌酶也能辅助免疫反应，促进抗菌作用，调节免疫细胞的活动，增强自身的抵抗力。
在食品和制药领域，溶菌酶可以作为肉制品厌氧菌的灭菌方法，促进乳制品中的凝乳和定型，同时也可用于生产肝素和生物制剂等。
溶菌酶的研究进展溶菌酶研究的重点在于其抗菌作用和免疫调节作用。
近年来，溶菌酶的研究进展主要集中在以下两个方面。
溶菌酶与细菌感染溶菌酶可以降解细菌细胞壁，对于抗菌作用具有重要的意义。
近年来，科学家发现溶菌酶与多种细菌感染相关联，如肺炎球菌感染、链球菌感染等。
溶菌酶的研究有助于了解病原菌与免疫细胞之间的互动机制，为治疗细菌感染提供新的思路。
溶菌酶的免疫调节作用溶菌酶不仅有着明显的抗菌作用，还可以调节免疫细胞的活动，增强自身的抵抗力。
最新研究发现，溶菌酶还具有降低过敏反应和抗肿瘤等作用，将为临床治疗提供新的方向。
，溶菌酶具有广泛的应用价值和研究前景。
通过深入研究溶菌酶的结构、功能和作用机制，可为疾病的治疗和疫苗的研发提供新的思路，并推动溶菌酶在医药和食品等领域的应用。
溶菌酶的种类及其作用
溶菌酶的种类及其作用溶菌酶是一类具有溶解细菌细胞壁作用的酶，广泛存在于动物、植物和微生物体内。
它能够通过降解细菌细胞壁的主要成分——胆碱酸聚合物，从而使细菌失去保护屏障，进而导致细菌死亡。
溶菌酶在医学、食品工业和生物技术等领域具有重要的应用价值。
根据其来源和作用机制的不同，溶菌酶可以分为多个种类。
以下是常见的几种溶菌酶及其作用：1. 乳酸菌溶菌酶：乳酸菌溶菌酶是一类来源于乳酸菌的溶菌酶，主要作用于革兰氏阳性菌。
乳酸菌溶菌酶能够降解细菌细胞壁的胆碱酸聚合物，破坏细菌细胞壁的完整性，从而导致细菌死亡。
乳酸菌溶菌酶广泛应用于食品工业中的发酵过程和食品保鲜中，具有抑制细菌生长、改善食品质量的作用。
2. 枯草杆菌溶菌酶：枯草杆菌溶菌酶是一类来源于枯草杆菌的溶菌酶，主要作用于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
枯草杆菌溶菌酶具有较强的抗菌活性，能够迅速破坏细菌细胞壁，引起细胞内容物泄漏，最终导致细菌死亡。
枯草杆菌溶菌酶在医学领域被广泛应用于抗感染药物的研发和生产中。
3. 葡萄球菌溶菌酶：葡萄球菌溶菌酶是一类来源于葡萄球菌的溶菌酶，主要作用于革兰氏阳性菌。
葡萄球菌溶菌酶能够降解细菌细胞壁的胆碱酸聚合物，破坏细菌细胞壁的完整性，从而导致细菌死亡。
葡萄球菌溶菌酶在医学领域被广泛应用于抗感染药物的研发和生产中。
4. 嗜肺军团菌溶菌酶：嗜肺军团菌溶菌酶是一类来源于嗜肺军团菌的溶菌酶，主要作用于革兰氏阴性杆状菌。
嗜肺军团菌溶菌酶能够降解细菌细胞壁的胆碱酸聚合物，破坏细菌细胞壁的完整性，从而导致细菌死亡。
嗜肺军团菌溶菌酶在医学领域被广泛应用于抗感染药物的研发和生产中。
除了上述几种常见的溶菌酶外，还有其他一些来源于不同微生物的溶菌酶，如链球菌溶菌酶、肺炎克雷伯杆菌溶菌酶等。
这些溶菌酶在不同领域具有不同的应用价值。
总之，溶菌酶是一类具有溶解细菌细胞壁作用的重要酶类，在医学、食品工业和生物技术等领域具有广泛应用价值。
通过降解细菌细胞壁的胆碱酸聚合物，溶菌酶能够破坏细菌细胞壁的完整性，引起细胞内容物泄漏，最终导致细菌死亡。
溶菌酶的结构与功能
溶菌酶的结构与功能
溶菌酶又称裂菌酶，是一种酶类蛋白质，其主要功能是分解细菌细胞壁，从而造成细菌的死亡。
结构：
溶菌酶的分子量一般在10kDa左右，其分子结构一般由单个多肽链构成，由约100个氨基酸组成，形成一个不规则的α螺旋结构。
在这个不规则的α螺旋结构中，溶菌酶的N-端和C-端形成了两个球形蛋白结构，而中间部分则由α螺旋构成。
功能：
溶菌酶主要是通过对细菌细胞壁的水解作用来实现抑制感染的作用。
细菌细胞壁一般包括两层，内层是由多糖组成的，外层则是由蛋白质和糖组成的。
当溶菌酶进入细菌细胞中时，它会首先与内层的多糖产生结合作用，然后开始分解多糖分子，最终导致细菌细胞的死亡。
此外，在医学上，溶菌酶也被用于溶解血栓、治疗炎症和肿瘤等多种疾病。
溶菌酶的作用机理
溶菌酶的作用机理
1922年，英国细菌学家A. Fleming发现人的唾液、眼泪中存在一种可溶解细菌细胞壁的酶，因其具有溶解作用，就命名为溶菌酶。
溶菌酶（lysozyme）是一种能特异性地水解细菌细胞壁肽聚糖的糖苷水解酶。
是一种碱性、安全绿色的小分子蛋白质，已知在人的眼泪、鼻黏液、唾液、乳汁等分泌液中及肝、肾、淋巴组织含有此酶。
细菌细胞壁主要成分是肽聚糖（Peptidoglycan），又称粘肽(Mucopetide)。
细胞壁的机械强度有赖于肽聚糖的存在，溶菌酶主要作用于细胞壁的骨架物质肽聚糖部分，肽聚糖是由NAG和NAM以β-1,4糖苷键连接起来的多聚体，并通过连接NAM上的短肽链之间的肽键使聚糖部分交联成网状，以维持细胞结构的稳定性。
溶菌酶发生作用后，由于骨架物质的裂解，细胞壁结构发生坍塌、脱落，细菌细胞即形成原生质体结构，该结构受到内外渗透压变化影响较大，很容易造成胞内物质泄漏，最终导致菌体细胞破裂、溶解，直至死亡。
卵清溶菌酶是一种无毒性的蛋白质，能选择性地使对象微生物细胞壁溶解，而对其它物质无反应。
分子生物学实验原理
知道原理对实验出问题时分析很有益，所以列出来一起分享！1．溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。
当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。
葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。
EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase 作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。
2．NaOH－SDS液：NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。
但当pH＞12或pH＜3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。
在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1／L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6，因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
SDS：SDS是离子型表面活性剂。
它主要功能有：（1）溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
（2）解聚细胞中的核蛋白。
（3）SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。
但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中（用RNase去除RNA时）受到干扰。
3. 3mol／L NaAc（pH4.8）溶液：NaAc的水溶液呈碱性，为了调节pH至4.8，必须加入大量的冰醋酸。
所以该溶液实际上是NaAc-HAc的缓冲液。
用pH4.8的NaAc溶液是为了把pH12.6的抽提液，调回pH至中性，使变性的质粒DNA能够复性，并能稳定存在。
而高盐的3mol ／L NaAc有利于变性的大分子染色体DNA、RNA以及SDS-蛋白复合物凝聚而沉淀之。
前者是因为中和核酸上的电荷，减少相斥力而互相聚合，后者是因为钠盐与SDS－蛋白复合物作用后，能形成较小的钠盐形式复合物，使沉淀更完全。
溶菌酶的作用位点
溶菌酶的作用位点
溶菌酶是一种具有溶解细菌细胞壁作用的酶类，其作用位点是细菌细胞壁的N-乙酰氨基葡萄糖(N-acetylglucosamine)和N-乙酰穆
拉明酸(N-acetylmuramic acid)的β-1,4-糖苷键。
这些糖苷键是构
成细菌细胞壁的重要结构基元，形成了多肽链和肽聚糖链的支架结构。
溶菌酶可以水解这些糖苷键，导致细胞壁的破坏和溶解。
这使得细菌的细胞膜失去支撑，细胞内外环境的平衡被破坏，最终导致细菌的死亡。
除了其在细菌感染的治疗中的应用，溶菌酶还被广泛应用于生物学和生物技术领域。
对其作用位点的深入研究有助于更好地理解其作用机制，以及设计和优化其在生物工艺和医药领域中的应用。
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溶菌酶的作用位点
溶菌酶的作用位点溶菌酶（lysosome）是一种细胞内的酶，它能够分解细胞内外的多种生物大分子，对于细胞的正常代谢和维持细胞稳态具有重要作用。
在细胞内，溶菌酶主要位于溶酶体（lysosome）内，它的作用位点有三类，分别是内部能量耗散、吞噬作用和膜结构维持。
首先，溶菌酶作用的内部能量耗散位点是维持细胞代谢平衡的关键之一。
细胞需要大量的能量来维持其正常代谢活动，但是代谢过程也会产生一些废物和代谢物，这些物质需要及时清除以保证细胞的正常运作。
溶菌酶的作用就是将这些废物和代谢物分解为小分子物质，以便进一步利用或排出体外。
这个过程中，溶菌酶会吸收能量，将废物和代谢物分解为小分子物质，并释放出一部分能量来供细胞使用。
这种内部能量耗散是保证细胞代谢平衡的必要条件之一。
其次，溶菌酶作用的吞噬位点是维持细胞正常功能的重要位置。
细胞对于周围环境的变化不断作出响应，这个响应过程中，溶菌酶的作用很显著。
当细胞发现周围存在细小的异物、细菌等，细胞便利用其吞噬功能吞噬这些微生物，这个过程中溶菌酶就发挥了重要作用。
吞噬后的异物被包含在溶酶体中，并在此过程中被分解为小分子物质，以便细胞吸收。
这种吞噬作用对于维持细胞的正常代谢和保护细胞的健康都具有重要作用。
最后，溶菌酶作用的膜结构维持位点是维护细胞完整性的重要部位。
溶菌酶的存在和作用是有备无患的，细胞在其不同的阶段中通过不同的细胞器和生物大分子参与不同的活动。
溶菌酶的作用不仅能够保证细胞的正常代谢和健康，还可以通过作用于膜结构维持位点，保持细胞整体结构的稳定性。
这种稳定性可以确保细胞在各种条件下的稳定性、细胞内外物质交换的正常性、以及对于外界条件的吸收、响应和反应性等。
综上所述，溶菌酶的作用位点是多种多样的，它们各自在细胞的正常代谢、维护细胞的健康和稳态、参与各种活动等方面都起着至关重要的作用。
我们对于这种意义深远的酶应该更加了解和重视，同时通过科学的方法探索如何更好的利用和应用溶菌酶，以推动人类和生物科技的发展和进步。
溶菌酶生产实验报告
溶菌酶生产实验报告
一、实验目的
本实验的目的是通过对溶菌酶的生产实验，探索新型溶菌酶的生产方法，提高其产量和质量。
二、实验原理
溶菌酶是一种能够分解细菌细胞壁的酶，具有广泛的应用价值。
在本实验中，我们采用培养基发酵的方式，通过添加不同的氮源、磷源和碳源，寻找最适宜的生长条件，提高溶菌酶的产量。
三、实验过程
1. 制备培养基：将适量的蛋白胨、酵母浸出物、葡萄糖和磷酸盐溶解于适量的蒸馏水中，调节pH值至7.0，加入琼脂糖，煮沸并灭菌，制备成培养基。
2. 培养菌株：选取溶菌酶生产菌株，接种于培养基中，进行预培养。
3. 调节生长条件：在预培养的基础上，分别添加不同的氮源、磷源和碳源，调节生长条件，培养一定时间后，测定溶菌酶的产量和活性。
四、实验结果
通过实验，我们发现在添加尿素、硝酸铵和酵母粉的情况下，溶菌酶的产量明显增加，其中添加尿素的效果最好。
在添加不同磷源和碳源的情况下，发现添加磷酸二氢钾和葡萄糖的效果最好。
通过优化生长条件，溶菌酶的产量得到了显著提高。
五、实验结论
本实验通过对溶菌酶的生产实验，探索了一种新型的生产方法，优化了生长条件，提高了溶菌酶的产量和质量。
这为溶菌酶的产业化生产提供了新的思路和方法，具有重要的应用价值。
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实验一溶菌酶的溶菌作用
实验目的：
1、掌握溶菌酶对革兰氏阳性菌溶解的原理及应用。
2、证实体液中溶菌酶的存在观察溶菌酶的溶菌现象。
基本原理：
正常情况下，机体的唾液、泪液、痰、鼻腔分泌物以及白细胞和血清等均含有丰富
的溶菌酶。
测定分泌物和体液中的溶菌酶含量及其变动情况，可作为评价机体非特异性免疫功能的指标之一。
溶菌酶的杀菌机理是其作用于细菌细胞壁的粘肽层，粘肽是细菌的细胞壁主要成分。
溶菌酶能切断粘肽结构中的N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸之间的B - 1,4 糖苷键，破坏粘肽支架，使细胞壁破坏。
由于细菌细胞壁的重要功能之一是保护细菌，即抗低渗，故细菌失去细胞壁的保护作用后，在低渗环境中可发生溶解。
溶菌酶的主要作用对
象是革兰氏阳性菌。
革兰氏阴性细菌细胞壁粘肽层外还有脂多糖、外膜和脂蛋白结构，
故在一般情况下溶菌酶不易发挥直接作用。
实验材料：
1、葡萄球菌：本菌是一种革兰氏阳性菌，普通琼脂培养基生长良好。
2、标准溶菌酶：称取溶菌酶标准纯品，用蒸馏水配制为1000ug/ml 原液，
并稀释为100、50、10 ug/ml 标准液，用前保存在冰箱中。
3、唾液：用无菌平皿收集唾液，可在同学间收集。
（于饭后两小时，清水漱口3 次，10 分钟后，收集唾液于清洁烧杯中）；
4、其它：无菌打孔器（孔径2mm ），无菌毛细吸管、毫米尺等。
实验方法：
1、制备含葡萄球菌的琼脂平板加热融化3%琼脂，冷至60C ~70C时，
加入1ml 葡萄球菌菌液，混合均匀，倾注于无菌平皿内。
2、用无菌打孔器在葡萄球菌琼脂平板上打孔，孔径2mm 左右，孔距5-
20mm 。
用针头挑出孔内琼脂，
3、用毛细吸管取新鲜收集的唾液加入琼脂孔内，每孔加满唾液,同时加标准溶菌酶作阳性对照。
4、置24-28 °C下12-18h观察结果。
观察各孔周围溶菌情况，测量溶菌环直径。
实验结果：
用毫米尺或三角板量取小孔周围溶菌环直径，并作记录，可与标准溶菌酶阳性对
照作对比观察。
机体的免疫功能是由免疫系统完成的，免疫系统由免疫器官（中枢免疫器官和外周免疫器官），免疫细胞（T细胞（胸腺依赖性淋巴细胞）、B细胞（骨髓依赖性淋巴细胞）、K 细胞、NK 细胞、LAK 细胞、TIL 细胞和单核巨噬细胞）和免疫分子（免疫球蛋白、补体、细胞因子等）等组成。
（1 ）中枢免疫器官
胸腺：T细胞分化成熟的场所。
骨髓：是多种血细胞的发源地，也是B细胞、单核吞噬细胞、粒细胞、血小板和红细胞分化成熟的场所。
法氏囊：禽类B 细胞分化成熟的场所。
功能：是免疫细胞发生、分化和成熟的场所。
（2）外周免疫器官：淋巴结、脾脏和扁桃体、阑尾、肠壁集合淋巴结和消化道、呼吸道粘膜下层的淋巴小结。
功能：是成熟的T、B淋巴细胞定居的场所，也是发生免疫应答的重要部位。
免疫细胞：凡参与免疫应答或与免疫应答有关的细胞统称为免疫细胞。
包括：造血干细胞、淋巴细胞、单核吞噬细胞、粒细胞、红细胞。
免疫细胞泛指参与免疫应答或与免疫应答有关的细胞及前体细胞，主要包括造血干细胞、T、B 淋巴细胞、NK 细胞、单核吞噬细胞、粒细胞、红细胞、肥大细胞、单核-巨噬细胞和树突状细胞。
免疫分子包括抗体、补体、细胞因子、主要组织相容性抗原和分化群等。
1、抗体（antibody，Ab）:免疫系统受抗原刺激以后，B细胞转化为浆细胞，由浆细胞产生能与相应抗原发生特异性结合的球蛋白称抗体。
它们与相应抗原特异性结合后，并在补体、吞噬细胞和NK 细胞参与下，产生溶菌、促进吞噬杀菌的调理作用和抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用。
2、补体（complement ）：存在于人和动物的正常血清中，与免疫有关，具有酶活性的蛋白质。
在生理状态下，补体各成分以酶原或非活性的状态存在与体液中，只有被某些物质（如抗原抗体复合物）激活后，才能表现出细胞溶解、促进吞噬的调理作用、免疫调节作以及释放炎症介质参与炎症反应等作用。
3、细胞因子（cytokine , CK）是由多种细胞，特别是活化免疫细胞合成分泌的一类具有多种生物学活性的小分子蛋白。
细胞因子在免疫细胞分化发育、免疫应答及其调节、炎症反应和组织修复等过程中发挥重要的作用。
-可编辑修改 -
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