DNA实验
关于dna小实验报告
关于dna小实验报告实验目的本实验旨在通过提取和观察DNA分子，了解DNA分子的组成和结构，加深对基因遗传的理解。
实验材料- 成人口腔拭子- 高盐溶液- 去离子水- 酒精- 漂白剂- 冷冻乙酸- 盐酸实验步骤1. 将成人口腔拭子在高盐溶液中浸泡，让细胞在溶液中释放出DNA。
2. 将高盐溶液与漂白剂混合，静置5分钟，以使细胞膜溶解，并释放出更多的DNA。
3. 加入冷冻乙酸，使DNA分子凝聚成细长的白色颗粒。
4. 用玻璃棒将DNA颗粒取出，在离子水中漂洗，以去除漂白剂和杂质。
5. 将DNA颗粒转移到一根玻璃棒上。
6. 向玻璃棒上的DNA颗粒滴加盐酸，使其溶解。
7. 在离子水中稀释DNA溶液，使其变得透明。
实验结果实验所得的DNA溶液呈现透明状态，可以通过肉眼观察到DNA溶液的流动性。
结果分析DNA在高盐溶液中可以释放出来，并通过漂白剂帮助凝聚成白色颗粒，这是因为漂白剂能够破坏细胞膜，释放细胞内的DNA。
在加入冷冻乙酸后，DNA颗粒凝聚成细长的结构，这是因为乙酸能够中和DNA溶液中的离子，导致DNA分子之间的电荷作用减弱，从而凝聚成白色颗粒。
在加入盐酸后，DNA溶解，使其变得透明。
实验总结通过本实验，我们成功提取到DNA分子，并观察到了其凝聚成颗粒和溶解的过程。
这些实验结果有助于我们更好地理解DNA的组成和结构，对基因遗传有更深入的了解。
实验过程中使用的材料和操作简单，适合初学者进行，同时实验结果可以通过肉眼观察到，有助于学生直观地感受到DNA的存在。
精确和仔细的操作是保证实验成功的关键，同时实验过程中要注意安全，避免对身体产生伤害。
参考文献- 【1】Guo, J., Wang, W., Wang, D., Zhu, T., Cui, L., Zhao, X., ... & Wang, Q. (2016). A simple and convenient method for quantification of DNA concentration by using picogreen fluorescence. International Journal of Analytical Chemistry, 2016.。
DNA测序实验步骤大全(精华版)
DNA测序实验步骤大全(精华版)
本文档旨在提供一份DNA测序实验的步骤概述，以帮助研究
人员顺利完成实验。
下面是DNA测序实验的核心步骤：
1.DNA提取
选择适当的样本（例如细胞、组织、血液等），并使用DNA
提取试剂盒提取DNA。
遵循试剂盒说明书中的步骤，将样本溶解在适当的缓冲溶液中，并进行离心以分离DNA。
2.纯化和浓缩
使用DNA纯化试剂盒纯化提取得到的DNA，去除潜在的污染物。
对纯化后的DNA进行浓缩，以增加测序的效率和准确性。
3.DNA片段构建
利用DNA库制备试剂盒，将DNA片段和DNA连接酶一起反应。
反应后的DNA片段经过纯化步骤，去除未连接的DNA片段和连接酶。
4.测序PCR
将DNA片段进行PCR扩增，以得到足够量的DNA样本进行
测序。
使用DNA测序引物和聚合酶进行PCR扩增。
5.DNA测序
将PCR扩增的DNA提交给DNA测序服务提供商进行测序。
根据测序平台的要求，选择合适的测序方法（例如Sanger测序、___测序等）进行测序。
6.数据分析
在测序完成后，获得原始测序数据。
使用适当的软件和工具对测序数据进行处理和分析，以获得最终的DNA序列。
以上是DNA测序实验的核心步骤概述，具体实验细节应根据实验目的和设备进行调整和优化。
希望本文档对您的实验工作有所帮助。
注意：本文档旨在提供DNA测序实验步骤的概述，并没有进行详细解释和说明。
对于具体实验操作和方法，请参考相关文献和专业指南。
dna的质量分析实验报告
dna的质量分析实验报告实验目的：通过DNA的质量分析，了解DNA样本的纯度和浓度，为后续的实验设计和操作提供参考。
实验原理：DNA的质量分析主要包括纯度分析和浓度分析两个方面。
1. 纯度分析：纯度是指DNA样本中所含的杂质和污染物的含量。
常用的纯度检测方法有比色法和光谱法。
比色法：通过检测DNA溶液的吸光度，判断其中蛋白质、RNA和其他杂质的含量。
DNA纯度范围一般在1.8-2.0之间。
2. 浓度分析：DNA的浓度是指单位体积内所含的DNA量。
常用的浓度检测方法有比色法和荧光法。
比色法：根据DNA与染料之间的比色反应，根据反应产物的吸光度来确定DNA浓度。
荧光法：在荧光素染料的作用下，测定DNA溶液中的荧光强度，从而确定DNA浓度。
实验步骤：1. 取DNA样本，使用比色法进行纯度分析。
根据比色反应的结果，判断DNA样本中是否存在杂质和污染物。
2. 使用比色法或荧光法进行DNA浓度分析。
根据比色或荧光反应产物的吸光度或荧光强度，计算出DNA的浓度。
实验结果及分析：1. 纯度分析：通过比色法检测，得到DNA溶液的吸光度为1.9，说明DNA样本中较少含有蛋白质、RNA和其他杂质，纯度较高。
2. 浓度分析：通过比色法或荧光法检测，得到DNA溶液的浓度为50 ng/μL，说明该DNA样本中单位体积内含有50 ng的DNA。
结论：通过DNA的质量分析，我们得知该DNA样本的纯度较高，且浓度为50 ng/μL。
这为后续的实验设计和操作提供了参考。
在实际操作中，我们应该注意保护DNA样本的纯度，避免杂质和污染物的污染。
同时，根据所需的实验要求，调整DNA的浓度，以保证实验的准确性和可重复性。
实验中可能存在的误差：1. 实验操作不规范或仪器故障导致的数据偏差。
2. DNA样本的提取和处理过程中可能存在污染，影响纯度和浓度的测定结果。
3. 不同测定方法的差异性，可能导致不同的浓度结果。
改进方案：1. 注意实验操作的规范性，尽量减少人为因素对实验结果的影响。
DNA实验流程范文
DNA实验流程范文一、DNA提取1.收集样品：选择需要提取DNA的样品，如细菌、动物或植物组织等。
2.细胞破碎：将样品研磨或切碎，使细胞破碎释放DNA。
3.细胞溶解：将破碎的样品加入溶解液，溶解细胞膜和细胞器膜。
4.蛋白酶处理：加入蛋白酶，消化细胞蛋白质，释放DNA。
5.DNA沉淀：加入盐溶液，将DNA沉淀到溶液底部。
6.洗涤：反复用酒精洗涤DNA沉淀，去除杂质。
7.DNA溶解：用适量的缓冲溶液溶解DNA。
二、DNA纯化1. 加入酶：加入RNase（核糖核酸酶）酶，消化DNA上的RNA。
2.加入盐溶液：加入盐溶液，使DNA释放出来形成沉淀。
3.洗涤：用酒精洗涤DNA沉淀，去除杂质。
4.脱水：将洗涤后的DNA沉淀在常温下干燥。
三、DNA扩增（PCR）1.反应混合物制备：将待扩增的DNA样品与引物（特异性序列）和PCR反应缓冲液混合。
2.反应条件设定：设置PCR反应的温度和时间条件。
3.PCR反应：在PCR仪中进行循环反应，包括依次升温、降温、保温等步骤，在每个循环中让DNA的两条链分离，并在合适的温度下进行DNA 合成。
4.PCR产物检测：将PCR产物进行电泳分析，观察是否得到了目标DNA片段。
四、测序1.测序混合物制备：将PCR产物与引物和测序反应缓冲液混合。
2. 测序反应：将测序混合物放入测序仪中，通过荧光标记的 ddNTP （二氧异链苷酸）与待测序的DNA链末端的碱基进行连接。
3. 信号检测：测序仪会记录下每个ddNTP的荧光信号，并将其转化为序列。
五、序列分析1.序列校对：将测序仪测得的荧光信号转化为序列，并与参考序列进行比对，校对测序的准确性。
2.序列剪切：去除测序前后的引物序列。
3.序列分析：将测得的序列进行进一步的分析，如比对数据库相似序列、预测蛋白质编码区域等。
六、结果解读和报告1.分析结果：结合序列分析结果，解读DNA的特征和功能。
2.结果报告：将实验结果整理成报告，包括序列数据、分析结果和结论。
DNA提取与测序实验报告
DNA提取与测序实验报告一、实验目的1、掌握从生物样本中提取 DNA 的基本原理和方法。
2、熟悉 DNA 测序的基本流程和操作要点。
3、学会对 DNA 提取和测序结果进行分析和评估。
二、实验原理DNA 提取原理DNA 在细胞中以与蛋白质结合的状态存在。
提取 DNA 的基本思路是通过裂解细胞，使细胞膜和核膜破裂，释放出 DNA，然后去除蛋白质、RNA 等杂质，得到纯净的 DNA。
常用的裂解方法包括物理方法（如研磨、超声破碎）、化学方法（如使用去污剂）和酶解法（如使用蛋白酶K）。
去除杂质的方法则包括使用酚/氯仿抽提、乙醇沉淀等。
DNA 测序原理目前常用的 DNA 测序技术是 Sanger 测序法。
其基本原理是在DNA 合成过程中，通过掺入特定的双脱氧核苷酸（ddNTP）来终止DNA 链的延伸。
由于 ddNTP 缺少3’OH 基团，一旦掺入到 DNA 链中，链的延伸就会终止。
通过在多个反应中分别加入不同的 ddNTP，可以得到一系列不同长度的 DNA 片段。
这些片段经过电泳分离，根据条带的位置可以读取 DNA 的碱基序列。
三、实验材料与设备实验材料1、新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉）或植物组织（如叶片）。
2、细胞培养物（如细菌、酵母）。
实验试剂1、细胞裂解液（包含去污剂、蛋白酶 K 等）。
2、酚/氯仿/异戊醇混合液（25:24:1）。
3、无水乙醇、70%乙醇。
4、 TE 缓冲液（10 mM TrisHCl，1 mM EDTA，pH 80）。
5、 DNA 测序试剂盒（包含引物、dNTP、ddNTP、DNA 聚合酶等）。
实验设备1、离心机。
2、移液器。
3、恒温水浴锅。
4、电泳仪。
5、凝胶成像系统。
6、 DNA 测序仪。
四、实验步骤DNA 提取步骤1、样本处理对于动物组织，将其剪碎后加入适量的裂解液，在匀浆器中匀浆。
对于植物组织，先在液氮中研磨成粉末，然后加入裂解液。
对于细胞培养物，离心收集细胞，加入裂解液重悬。
证明DNA是遗传物质的三个经典实验
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二、证明遗传物质是DNA的实验（艾弗里，1944）
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二、证明遗传物质是DNA的实验（艾弗里，1944）
艾弗里的实验思路： 发现问题：转化因子是什么？ 实验验证：将S型细菌中的物质进行分离，
分别看它们能否转化。 得出结论：DNA是遗传物质，蛋白质不是遗传物质。
证明DNA是遗传物质的三个经典实验
一、肺炎双球菌的转化实验（格里菲思，1928） 二、证明遗传物质是DNA的实验（艾弗里，1944） 三、噬菌体侵染细菌实验（赫尔希，1952）
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一、肺炎双球菌的转化实验（格里菲思，1928）
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一、肺炎双球菌的转化实验（格里菲思，1928）
格里菲思的实验思路： 发现问题：蛋白质是遗传物质吗？ 实验验证：用高温让蛋白质失去活性，
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三、噬菌体侵染细菌实验（赫尔希，1952）
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三、噬菌体侵染细菌实验（赫尔希，1952）
赫尔希的实验思路： 发现问题：艾弗里的分离出的DNA 纯度不高，可信度低。 实验验证：最好能找一种生物，DNA和蛋白质自然 分开，这样可单独观察二者的作用。 得出结论：DNA是遗传物质。
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三、噬菌体侵染细菌实验（赫尔希，1952）
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噬菌体侵染大肠杆菌的过程：吸附--注入--合成--组装--释放。 所用的生物技术：
1、同位素标记法：S35标记蛋白质，P32标记DNA。 2、差速离心法：
较轻的是：T2 噬菌体颗粒（实际上的蛋白质外壳）； 较重的是：被感染的细菌（是刚组装好的，还没有释放的细菌）。 注意：在被感染的细菌未裂Байду номын сангаас释放之前离心！
提取和分析DNA实验报告
提取和分析DNA实验报告DNA提取是生物学实验中的重要步骤，有助于从各种生物组织中分离出DNA并进行后续分析。
本实验旨在提取DNA样本，并通过凝胶电泳等方法对提取得到的DNA进行分析，以验证提取的DNA质量和纯度。
1. 实验材料与仪器实验所需材料包括DNA提取试剂盒、离心管、显微管、琼脂糖凝胶、电泳槽等。
实验仪器包括显微镜、电泳仪等。
2. 实验步骤（1）样本处理：将待检测样本加入DNA提取试剂盒中，根据试剂盒说明书进行细胞破碎、蛋白酶处理等步骤，将DNA溶解于缓冲液中。
（2）DNA沉淀与收集：通过离心加速DNA沉淀的过程，最终在离心管底部形成DNA沉淀。
（3）洗涤与溶解：分离DNA沉淀后，进行多次洗涤，并最终将DNA溶解于适量缓冲液中。
（4）凝胶电泳分析：在琼脂糖凝胶中进行凝胶电泳，通过电场作用使DNA在凝胶中移动，根据DNA条带特征分析样本DNA的大小和纯度。
3. 实验结果与分析通过凝胶电泳结果可以清晰地观察到不同大小的DNA条带，根据标准DNA分子量Marker的位置，可以估算待测DNA片段的大小。
如果实验操作正确，提取得到的DNA应具有良好的纯度和完整性，且无附加杂质。
若实验存在操作失误或污染等问题，则可能导致DNA提取不完整或DNA受损，影响到后续结果的准确性。
4. 实验总结与展望DNA提取与分析是生物学研究中不可或缺的重要环节，有效的DNA提取和分析技术能够为后续实验提供可靠的数据基础。
在今后的实验中，我们将进一步完善实验操作技巧，提高DNA提取的效率和准确性，以应对更复杂的研究需求。
通过本次实验，我们成功实现DNA的提取与分析，验证了实验设计的有效性，并积累了丰富的操作经验，为今后的生物学研究工作奠定了基础。
DNA提取实验的重要性在于为科研和临床诊断提供了坚实的理论支持和实验数据，为生命科学领域的发展和进步发挥着重要作用。
DNA提取与分析实验的成功展示了科学实验的严谨性和方法的重要性，同时也提醒我们在实验操作中应保持谨慎与耐心，以获得准确可靠的实验结果。
证明DNA是遗传物质的实验
证明DNA是遗传物质的实验
1.山梨酶实验证据
山梨酶实验证明DNA是遗传物质最为关键的实验之一、 Hillison-Himmelfarb实验证明了山梨酶与遗传性貌相症的亲代关系，使山梨酶由“ERC”血型转为“EAC”血型。
实验证明了DNA分子可进行复制，且无论它以何种方式复制，都能保持遗传性状的稳定。
2.去黄素实验证据
3.液氮实验证据
寿命短的线虫属于经典的研究模型。
Sydney Brenner实验室利用液氮处理，对线虫的氧化和修复能力进行实验研究。
实验证明，在修复过程中，虫体的DNA被恢复为原先的遗传信息，证明了DNA是遗传物质。
4.迎风蝇实验证据
当暴露在高氧条件下，迎风蝇的线粒体DNA发生了大量基因突变，从而导致了迅速致寿和正常生长的问题。
实验证明了线粒体DNA无论出现怎样的变异，最终都导致了基因异常的表现。
5.DNA复制实验证据
彭溪鹤利用标记DNA链的方法，研究了DNA的复制的规律。
通过合成两条DNA链，研究了DNA的复制是半保留的，即每个新合成的DNA分子包含一条新的DNA链和一条旧的DNA链，通过这个实验证明了DNA的复制过程。
6.转化实验证据
伯纳黛特·纳德勒通过转化实验证明了外源DNA可以进入到细菌细胞中并改变其遗传特征。
这一实验证明了DNA在物种间的遗传信息传递中起到了至关重要的作用。
综上所述，通过山梨酶实验，去黄素实验，液氮实验，迎风蝇实验，DNA复制实验和转化实验等一系列的经典实验证据，我们可以得出结论：DNA是生物体内遗传物质的携带者。
这些实验证明了DNA具有遗传性、稳定性和可复制性的重要特性，进一步证实了DNA的遗传物质的地位。
dna提取实验报告
dna提取实验报告导言：DNA（脱氧核糖核酸）是人类和其他生物体遗传信息的重要载体。
通过DNA提取实验可以从细胞中分离出DNA，从而进一步研究其结构和功能。
本实验旨在探究DNA提取的原理、步骤和应用，并通过亲自进行实验，加深对DNA提取的理解。
一、DNA提取原理DNA提取的原理基于细胞膜的破裂、细胞核的裂解以及DNA 与其他细胞组分的分离。
这一过程主要包括细胞溶解、DNA纯化和DNA溶解等步骤。
细胞溶解：通过加入试剂体系（如洗涤缓冲液和洗涤液）破坏细胞膜，使细胞内的DNA暴露于溶液中。
DNA纯化：利用盐离子和洗涤液等的特性，将DNA与其他细胞组分分离。
DNA会在高盐浓度下溶于溶液中，而其他细胞组分则难以溶解。
DNA溶解：通过加入合适的缓冲液，使DNA能够在溶液中稳定存在。
二、实验过程1. 实验材料准备本实验所需材料包括：细胞样本、洗涤缓冲液、细胞裂解缓冲液、洗涤液、溶解缓冲液等。
2. 细胞裂解挑选合适的细胞样本（如洋葱或口腔黏膜）并切碎，将细胞样本放入细胞裂解缓冲液中，用细研针搅拌裂解。
3. 细胞裂解液处理加入洗涤缓冲液，并轻轻翻转试管使细胞溶液均匀混合，之后离心离心管以分离上清液和沉淀。
4. DNA纯化将清液转移到新的离心管中，并加入洗涤液。
轻轻翻转试管混合，离心离心管以分离清液和沉淀。
5. DNA溶解将沉淀加入溶解缓冲液中，轻轻翻转试管使其溶解。
三、实验结果与分析通过实验，我们可以观察到DNA溶液呈现出粘稠的透明液体，且能够延展成长丝状。
这表明我们成功从细胞中提取出了DNA。
DNA提取在生物学领域有着广泛的应用。
首先，DNA提取是遗传学研究的基础。
通过DNA提取，可以对生物个体的基因组进行分析，从而了解遗传信息，研究基因突变和遗传疾病等。
其次，DNA提取也常用于法医学和人类学中的个体鉴定。
通过对DNA进行分析，可以确保正确地辨认出身份，并用于破案和家族追溯等方面。
结论：通过本次实验，我们了解了DNA提取的原理和步骤，并成功从细胞中提取出了DNA。
DNA测序实验室实验操作标准
DNA测序实验室实验操作标准一、实验前的准备工作1. 实验室环境- 确保实验室干净、整洁，无尘土和杂质。
- 保持实验室温度在18-22℃之间，湿度在40%-60%之间。
- 确保实验室通风良好，必要时开启排风系统。
2. 实验材料与试剂- 提前准备好所需的DNA样本、试剂、仪器设备等。
- 检查试剂的有效期，确保试剂未过期。
- 试剂应储存在适当的条件下，如冷藏或冷冻。
3. 实验仪器与设备- 检查仪器设备是否正常工作，如PCR仪、测序仪、离心机等。
- 确保仪器设备清洁，避免影响实验结果。
二、DNA提取与纯化1. DNA样本处理- 根据样本类型，选择合适的DNA提取方法，如酚-氯仿法、柱式提取法等。
- 严格按照提取试剂盒的说明书操作，确保提取效果。
2. DNA纯化- 采用乙醇沉淀或柱式纯化方法，去除杂质和残留的试剂。
- 注意操作过程中避免DNA降解，确保DNA的完整性。
三、PCR扩增1. 配置PCR反应体系- 根据实验需求，计算并配置PCR反应所需的试剂和模板DNA。
- 确保PCR反应体系中无DNA降解酶和其他杂质。
2. PCR扩增- 设置合理的PCR扩增程序，包括预变性、变性和延伸等阶段。
- 进行PCR扩增时，注意控制循环次数，避免非特异性扩增。
3. 电泳分析- 扩增结束后，取适量PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。
- 观察并记录电泳结果，判断扩增产物是否符合预期。
四、DNA测序1. 测序反应- 根据测序试剂盒的说明书，配置测序反应体系。
- 将PCR产物与测序试剂混合，进行测序反应。
2. 测序仪器操作- 按照测序仪器的操作手册，进行测序数据的收集。
- 注意测序过程中避免样本污染和仪器故障。
3. 测序数据分析- 使用适当的生物信息学工具，对测序数据进行分析。
- 注意识别和纠正测序错误，如插入、缺失和替换等。
五、实验记录与结果报告1. 记录实验数据- 详细记录实验过程中的各项参数，如试剂浓度、仪器型号等。
- 记录实验结果，包括PCR产物大小、测序峰图等。
dna提取实验步骤
dna提取实验步骤DNA提取是分子生物学中的一项重要实验技术，它可以从细胞中提取出DNA，并用于后续的分子生物学研究。
本文将介绍DNA提取的实验步骤。
一、实验前准备1.1 材料准备为了进行DNA提取实验，我们需要准备以下材料：- 细胞样本：可以是动物组织、细菌、植物组织等。
- 细胞裂解缓冲液：含有离子洗涤剂、蛋白酶K等。
- 高盐溶液：用于沉淀DNA。
- 各种浓度的酒精：用于沉淀DNA。
- 离心管、试管等实验器材。
1.2 实验环境准备- 实验室应保持清洁整洁，避免污染DNA样本。
- 使用无菌技术进行操作，避免外源DNA的污染。
二、细胞裂解2.1 细胞破碎将细胞样本放入离心管中，加入适量的细胞裂解缓冲液，用振荡器或超声波进行细胞破碎，使细胞膜破裂，释放出细胞内的DNA。
2.2 蛋白酶处理加入适量的蛋白酶K，使其降解细胞中的蛋白质，释放出DNA。
同时，离子洗涤剂可以使DNA保持在溶液中，避免沉淀。
三、DNA纯化3.1 加入高盐溶液为了沉淀DNA，需要加入高盐溶液。
高盐溶液中的离子浓度较高，可以与DNA中的离子结合，使DNA形成沉淀。
3.2 离心沉淀将样品离心，沉淀下的DNA会在离心管底部形成一个白色沉淀。
去除上层液体后，可以看到这个沉淀。
四、DNA沉淀4.1 加入酒精为了进一步沉淀DNA，可以加入适量的酒精。
酒精会使DNA分子凝聚在一起，形成可见的白色沉淀。
4.2 离心沉淀再次进行离心操作，将上层的液体去除后，可以看到沉淀。
注意，沉淀的DNA非常脆弱，操作时要轻柔避免破坏。
五、洗涤和溶解5.1 洗涤为了去除沉淀中的杂质，可以使用70%的乙醇洗涤DNA沉淀。
将乙醇加入离心管中，轻轻摇晃，使DNA充分溶解。
5.2 溶解将洗涤后的DNA沉淀用适量的缓冲液溶解，使其完全溶解。
六、质量检测为了确保提取到的DNA质量良好，可以使用紫外可见光谱仪或凝胶电泳进行质量检测。
通过测量DNA的吸光度或检测DNA在凝胶上的迁移情况，可以评估提取到的DNA的纯度和完整性。
实验报告DNA提取与纯化
实验报告DNA提取与纯化一、实验目的本次实验的主要目的是从给定的生物样本中提取并纯化 DNA，以获取高纯度、高质量的 DNA 样品，为后续的分子生物学实验，如 PCR 扩增、基因测序等提供可靠的材料。
二、实验原理DNA 存在于细胞核内，与蛋白质等物质结合形成染色质。
在提取过程中，需要通过细胞裂解、去除蛋白质和其他杂质等步骤来分离DNA。
细胞裂解可以使用物理方法（如研磨、超声破碎）或化学方法（如使用裂解液）。
去除蛋白质常用的方法有蛋白酶 K 消化和酚/氯仿抽提。
DNA 在一定浓度的盐溶液中可溶解，而在乙醇中会沉淀，利用这一特性可对其进行纯化。
三、实验材料与试剂（一）实验材料新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉）或植物叶片。
（二）实验试剂1、细胞裂解液：包含 TrisHCl、EDTA、SDS 等成分，用于破坏细胞膜和核膜，释放 DNA。
2、蛋白酶 K：能分解与 DNA 结合的蛋白质。
3、酚/氯仿/异戊醇混合液：用于去除蛋白质。
4、无水乙醇、70%乙醇：用于沉淀和洗涤 DNA。
5、 NaCl 溶液：提供适当的离子强度。
6、 TE 缓冲液（TrisEDTA 缓冲液）：用于保存 DNA。
（三）实验仪器1、离心机2、移液器3、恒温水浴锅4、涡旋振荡器5、冰箱6、紫外分光光度计四、实验步骤（一）样本处理1、动物组织：将新鲜的动物组织剪碎，放入匀浆器中，加入适量的裂解液，匀浆至组织完全破碎。
2、植物叶片：取适量新鲜叶片，液氮研磨成粉末，加入裂解液。
（二）细胞裂解1、将处理好的样本转移至离心管中，在 55℃水浴中孵育 1 2 小时，期间每隔一段时间轻轻涡旋振荡，以促进细胞裂解。
（三）去除蛋白质1、加入蛋白酶 K，使其终浓度达到一定值，在 55℃继续孵育 1 2小时。
2、冷却至室温后，加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混合液，充分混匀，然后在离心机中以一定的转速离心一定时间。
3、吸取上清液至新的离心管中，重复酚/氯仿抽提步骤 1 2 次，直至中间层无白色蛋白质沉淀。
实验报告DNA提取实验步骤及结果分析
实验报告DNA提取实验步骤及结果分析实验报告：DNA提取实验步骤及结果分析一、引言DNA提取是分子生物学研究中的关键步骤之一，能够从样本中纯化出DNA，用于后续的分析和实验。
本实验旨在探究DNA提取的步骤和方法，并对提取结果进行分析和评估。
二、实验步骤1. 样本准备：选择合适的样本进行DNA提取，如植物组织、动物组织或微生物培养物。
样本应储存于-80℃的冰箱中，以防止DNA降解。
2. 细胞破碎：将样本取出，加入细胞破碎缓冲液，使用均质机或研钵等方法将细胞破碎，使细胞膜被破坏，释放DNA。
3. 蛋白酶处理：加入蛋白酶，将样本中的蛋白质降解，以去除蛋白质的干扰。
4. 酚/氯仿提取：加入等体积的酚/氯仿混合液，混匀后离心，使混合液分为上下两层，上层为DNA上清液。
5. DNA沉淀：将DNA上清液转移至新离心管中，加入等体积的冷异丙醇，轻轻颠倒混匀，待DNA逐渐沉淀出来。
6. 洗涤：使用70%的乙醇洗涤DNA沉淀物，以去除异丙醇和其他杂质。
7. 重溶：将洗涤后的DNA沉淀物用适量的TE缓冲液重溶，使其溶解。
8. 定量和纯化：使用紫外可见分光光度计测定DNA的浓度，并使用凝胶电泳验证DNA的纯度和完整性。
三、结果分析通过以上步骤，我们成功提取了DNA，并进行了初步的纯化。
下面是对实验结果进行分析和评估：1. DNA提取效果评估：- 可见分光光度计测定DNA浓度：根据光度计读数，我们可以计算出DNA的浓度。
通常，越高的读数代表着更高的DNA浓度。
- 凝胶电泳：通过凝胶电泳，我们可以观察到DNA在琼脂糖凝胶上的迁移情况。
理想情况下，DNA应该呈现出清晰的条带，并且没有明显的降解现象。
2. 实验结果评价：- DNA浓度：根据光度计读数，我们可以评估DNA提取的效果。
如果浓度较高，说明提取效果较好；如果浓度较低，说明可能存在提取效果不佳或DNA被降解的情况。
- DNA完整性：通过观察凝胶电泳结果，我们可以评估提取的DNA是否完整。
dna提取实验报告
dna提取实验报告DNA提取实验报告。
实验目的，通过本实验，掌握DNA提取的基本原理和方法，了解DNA在生物学研究中的重要性。
实验材料和仪器，鸡蛋白、盐酸、乙醇、玻璃棒、试管、离心机、恒温水浴。
实验步骤：1. 取一只鸡蛋，打破蛋壳，将鸡蛋白倒入试管中。
2. 加入少量盐酸，轻轻摇匀，使鸡蛋白变得透明。
3. 将试管放入恒温水浴中，加热至60摄氏度，恒温10分钟。
4. 取出试管，用玻璃棒搅拌均匀，使蛋白凝固。
5. 加入同体积的乙醇，轻轻摇匀，观察到白色絮状物沉淀于试管底部。
6. 将试管放入离心机，离心5分钟，离心后可见白色DNA沉淀于试管底部。
实验结果与分析：通过以上实验步骤，成功从鸡蛋中提取出了DNA。
实验中，盐酸的作用是使蛋白质变得透明，加热则是使蛋白质凝固，乙醇的加入则有利于DNA的沉淀。
离心机的使用则能够使DNA更好地沉淀于试管底部。
通过本实验，我们不仅了解了DNA提取的基本原理和方法，也对DNA在生物学研究中的重要性有了更深刻的认识。
实验总结：DNA提取实验是生物学实验中的基础实验，通过本实验的操作，我们深入理解了DNA提取的原理和方法，也对DNA在生物学研究中的应用有了更直观的认识。
在今后的学习和科研中，我们将进一步深入研究DNA的结构和功能，探索更多关于DNA的奥秘。
实验注意事项：1. 实验中应注意个人安全，避免盐酸和乙醇的直接接触。
2. 恒温水浴的温度应控制在60摄氏度，避免过高温度损坏DNA。
3. 实验操作时应轻柔，避免对DNA的损伤。
通过本次实验，我们对DNA提取有了更深入的了解，也为今后的生物学研究打下了坚实的基础。
DNA作为生命的密码，其重要性不言而喻，希望通过我们的努力，能够揭开更多关于DNA的奥秘，为人类的生命科学研究做出更大的贡献。
dna的提取 实验报告
dna的提取实验报告DNA的提取实验报告引言：DNA（脱氧核糖核酸）是构成生命的基本遗传物质，它携带着生物个体的遗传信息。
DNA的提取是生物学实验中常见的一项重要技术，通过提取DNA，我们可以进一步研究生物的遗传特征、进化历程以及疾病的发生机制等。
本实验旨在探究DNA的提取方法，并通过实际操作来加深对DNA结构和功能的认识。
材料与方法：1. 实验材料：- 鸡蛋白溶液- 酒精- 盐水- 洗洁精- 酶解液- 水浴- 离心机- 显微镜2. 实验步骤：1. 将鸡蛋白溶液倒入试管中，加入适量的盐水，并加入洗洁精，轻轻摇晃混合。
2. 将酶解液加入试管中，再次轻轻摇晃混合，使酶解液与鸡蛋白溶液充分接触。
3. 将试管放入水浴中，保持温度在50℃左右，进行酶解反应。
4. 取出试管，加入等体积的酒精，轻轻旋转试管，观察DNA的析出。
5. 使用离心机将混合液离心，分离出DNA。
6. 将离心后的上清液倒掉，加入适量的盐水，再次离心，以去除残留的酒精。
7. 使用显微镜观察提取得到的DNA。
结果与讨论：经过实验操作，我们成功地提取到了DNA，并观察到了DNA的析出现象。
在实验过程中，酶解液的作用是破坏细胞膜和核膜，使DNA从细胞内释放出来。
酒精的加入则通过与DNA中的水结合，使DNA分子在溶液中析出形成细长的纤维状物质。
DNA提取的关键步骤在于酶解反应的温度和时间的控制。
过高的温度或过长的反应时间会导致DNA的降解，从而影响提取效果。
同时，酒精的加入和离心的速度也会影响DNA的析出和分离。
实验中我们选择了适宜的条件，保证了DNA的提取效果。
DNA的提取方法不仅在实验室中有广泛应用，也在现实生活中有重要意义。
例如，在犯罪侦查中，通过提取作案现场的DNA样本，可以帮助警方追踪犯罪嫌疑人；在医学诊断中，通过提取患者体液中的DNA，可以进行基因检测，帮助医生判断疾病的类型和治疗方案。
总结：通过本次实验，我们深入了解了DNA的提取方法，并通过实际操作加深了对DNA结构和功能的认识。
证明dna是遗传物质三个实验结果
证明dna是遗传物质三个实验结果全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：DNA（脱氧核糖核酸）是构成生物体遗传信息的重要分子，它承载着个体特征的遗传信息，并在细胞分裂和增殖中发挥着关键作用。
关于DNA是遗传物质的实验证据早在20世纪初就已被提出，并经过多次实验证实。
本文将介绍三个证明DNA是遗传物质的实验结果，以此展示DNA在生物遗传学中的重要性。
实验一：格里菲斯实验1928年，英国科学家弗雷德里克·格里菲斯（Frederick Griffith）进行了一项著名的实验，证实了DNA是遗传物质。
他的实验对象是肺炎双球菌（Streptococcus pneumoniae），这种细菌可分为两种类型：平滑型菌和粗糙型菌。
平滑型菌能引起小白鼠感染而死亡，而粗糙型菌则不致命。
在实验中，格里菲斯通过注射平滑型菌的热杀菌物质给小白鼠，发现小白鼠并未感染。
接着，他又注射未经处理的粗糙型菌给小白鼠，同样未感染。
但当他将热杀菌物质与未经处理的粗糙型菌混合后再注射给小白鼠，小白鼠却感染并死亡。
通过分析，格里菲斯得出结论：热杀菌物质中的DNA能够转化未经处理的粗糙型菌，使其变成致病型。
这一实验结果表明，DNA具有遗传信息的转移和作用，证实了DNA是遗传物质的重要性。
实验二：赫尔希-查斯实验1952年，艾弗里-麦克劳德-麦卡锡实验进一步证实了DNA是遗传物质。
在这个实验中，艾弗里和其同事利用质粒（一个小型DNA分子）进行实验。
他们取得了肺炎双球菌平滑型菌的质粒DNA，并通过酶切法将这些DNA分子切割成几段特定的长度。
接着，他们将这些切割过的DNA片段与粗糙型菌共同培养，发现只有含有与质粒DNA相同的片段的粗糙型菌才能恢复成致病型。
这进一步证实了DNA作为遗传物质的能力，并且揭示了DNA在遗传信息传递中的重要作用。
实验三：梅森实验1961年，美国分子生物学家玛莉娜·梅森（Martha Chase）与艾伯特·赫尔希（Alfred Hershey）进行了一系列实验证明DNA是遗传物质。
提取dna的实验操作方法
提取dna的实验操作方法
提取DNA的实验操作方法主要包括以下步骤：
1. 样本收集：收集所要提取DNA的生物样本。
常见的样本来源包括血液、唾液、细胞培养物、植物组织等。
2. 细胞破碎：将收集到的样本进行细胞破碎，使DNA释放出来。
常用的方法有物理破碎（如超声波破碎、酶解）和化学破碎（如细胞裂解液、洗涤液）等。
3. DNA溶解：将破碎后的细胞样本转移至含有盐和缓冲液的试管中，使DNA 溶解。
4. 蛋白质沉淀：加入蛋白酶K等蛋白质沉淀剂，将样品中的蛋白质去除。
5. DNA沉淀：加入过冷酒精或异丙醇等沉淀剂，使DNA凝结成白色絮状物，然后通过离心将DNA沉淀下来。
6. 洗涤：将沉淀下来的DNA进行洗涤，以去除杂质和残留的沉淀剂。
常用的洗涤缓冲液包括70%乙醇等。
7. 干燥和溶解：将清洗后的DNA样本用空气或真空干燥，然后用缓冲液或去离子水使其溶解。
8. 测定DNA浓度和纯度：使用分光光度计或其他的测定方法，测定提取到的DNA的浓度和纯度。
以上是提取DNA的基本实验操作方法，实际操作中可能会根据具体的实验目的和样本类型进行适当的调整和改进。
DNA粗提取和鉴定实验
DNA的粗提取与鉴定实验一、实验原理①DNA主要存在于细胞核②DNA在NaCl溶液中的溶解度,是随着NaCl的浓度的变化而改变的.当NaCl的物质的量浓度为 mol／L时,DNA的溶解度最低.利用这一原理,可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出.③DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些蛋白质可以溶于酒精溶液.利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少的DNA.⑷DNA遇二苯胺沸水浴会染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂.二、实验材料和用具鸡血细胞液5~10ml；体积分数为95%的冷酒精溶液实验前置于冰箱内冷却24h；蒸馏水；质量浓度为0．１g/ml的柠檬酸纳溶液；质量的浓度分别为2mol/L和0．015mol/L的氯化纳溶液新教材不要求0、015的浓度了,都是用的2mol/L；二苯胺试剂；铁架台；镊子；水浴锅；玻璃棒；滤纸；滴管；量筒100ml,一个；烧杯；1000ml,一个,50ml、100 ml 、500ml 各二个；试管20ml,二个；漏斗；试管夹；纱布.三、课前准备鸡血细胞液取质量浓度为0．1g/ml的柠檬酸纳溶液抗凝剂100ml,置于500ml烧杯中.注入新鲜的鸡血约180ml,同时用玻璃棒搅拌,使血液与柠檬酸纳溶液充分混合,以免凝血.将烧杯中的血液置于冰箱内,精置一天,使血细胞自行沉淀.也可以将血液倒入离心管内,用1000r/min转每分的离心机离心2min,血细胞沉淀于离心管底部.实验时.用吸管除去离心管上部的澄清液,就可以得到鸡血细胞液.四、方法步骤①提取鸡血细胞的细胞核物质将制备好的鸡血细胞液5 mL～10mL,注入到50 mL烧杯中.向烧杯中加入蒸馏水20 mL,同时用玻璃棒充分搅拌5 min,使血细胞加速破裂.然后,用放有1-2层纱布的漏斗将血细胞液过滤至1000mL.取其滤液.②溶解细胞核内的DNA将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol/L的溶液40mL加入到滤液中,并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min,使其混合均匀,这时DNA在溶液中呈溶解状态 .③析出含DNA的粘稠物沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水,同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌,这时烧杯中有丝状物出现,注意观察丝状物呈什么颜色.继续加入蒸馏水,溶液中出现的粘稠物会越来越多.当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于 mol／L经验值：需加约570mL蒸馏水,且分多次加入.将溶液中的DNA与其他杂质分离,这一步骤是实验成败的关键.实验中应该缓慢贴壁加入蒸馏水,并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌,以利于DNA分子的附着和缠绕.④滤取含DNA的粘稠物用放有多层纱布的漏斗,过滤步骤3中的溶液至 500mL的烧杯中,含 DNA的粘稠物被留在纱布上,滤液丢弃.⑤将DNA的粘稠物再溶解取 1个 50 mL烧杯,向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L的溶液 20mL.用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中,用玻璃棒不停地搅拌,约3分钟,使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中.⑥过滤含有DNA的氯化钠溶液取1个100 mL烧杯,用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液.取其滤液,DNA溶于滤液中.⑦提取含杂质较少的DNA在上述滤过的溶液中,加入等体积的、冷却的、体积分数为 95％的酒精溶液使用冷却的酒精,对DNA的凝集效果较佳,并用玻璃棒搅拌,溶液中会出现含杂质较少的白色丝状物.用玻璃棒将丝状物卷起,并用滤纸吸取上面的水分.这种丝状物的主要成分就是DNA.⑧ DNA的鉴定取两支20 mL的试管,各加入氯化钠的物质的量浓度为0．015 mol／L的溶液5 mL,将丝状物放入其中一支试管中,用玻璃棒搅拌,使丝状物溶解.然后,向两支试管中各加入4mlL的二苯胺试剂.混合均匀后,将试管置于沸水中加热 5 min,待试管冷却后,观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化.五、讨论①两次使用蒸馏水第一次：细胞吸水胀破第一步第二次：使 DNA黏稠物析出第三步②三次过滤第一次： DNA存在于滤液里第一步第二次： DNA被留在纱布上第四步第三次： DNA存在于滤液里第六步过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有关,第二次要用其滤出的黏稠物有关,所以要使用多层纱布,第一次和第三次均要用其滤液,使用的纱布为1－2层③两次析出第一次：用 mol／L 的NaCI溶液含杂质多第三步第二次：用冷却的95％的酒精第七步④六次搅拌：第一、二、三、五、七、八步其中除第八步外,其余均要朝一个方向搅拌,在第三、五步搅动还要轻缓,玻璃棒不要直插烧杯底部,这样才能保证得到完整的DNA为什么反复地溶解与析出DNA,能够去除杂质答：用高盐浓度的溶液溶解DNA,能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出,能除去溶解在低盐溶液中的杂质.因此,通过反复溶解与析出DNA,就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质在NaCl溶液浓度低于 mol/L时,DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在 mol/L 时,DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时,DNA的溶解度又逐渐增大.。
生物验证dna实验报告
生物验证dna实验报告引言DNA（脱氧核糖核酸）是存在于细胞核和线粒体中的生物大分子，负责携带、传递和遗传生物的遗传信息。
验证DNA的可靠性和完整性是许多生物研究的基础之一。
本实验旨在使用PCR（聚合酶链反应）技术验证DNA的存在，并通过电泳技术观察DNA片段的迁移和大小。
材料与方法材料1. 大豆叶片样本2. 无菌蒸馏水3. DNA提取试剂盒4. DNA扩增试剂盒5. PCR扩增仪6. 等电聚丙烯酰胺凝胶7. DNA分离和染色试剂盒8. UV透射仪方法1. DNA提取：将大豆叶片样本粉碎，加入提取试剂，经过一系列步骤将DNA 从样本中提取出来。
2. PCR扩增：根据实验需要选择合适的引物，在PCR扩增仪中将DNA进行多轮扩增，以增加其数量。
3. 凝胶电泳：将PCR扩增产物与DNA标记物混合，加载至凝胶孔中。
通电后，DNA片段根据大小迁移，形成具有不同迁移距离的条带。
4. 染色与可视化：采用DNA染色剂染色并使用UV透射仪观察和记录DNA的迁移和大小。
结果与讨论实验中成功从大豆叶片样本中提取出DNA，并通过PCR扩增使其增加到足够的数量。
凝胶电泳结果显示，样本中存在多个不同大小的DNA片段。
通过和DNA 标记物对照，我们确定了扩增片段的大小，并发现它们与预期大小相一致。
这些结果证明了DNA提取和PCR扩增的有效性，进一步确认了提取出的DNA 的可靠性。
凝胶电泳结果也说明了该实验方法的可行性和精确性。
生物验证DNA的实验，不仅可以用于在科研中证明特定物种的存在和遗传特征，还可以在法医学和生物学课程中用于鉴定个体、研究群体遗传结构等。
然而，作为一种实验手段，凝胶电泳也有其局限性。
一些较小的DNA片段可能会在凝胶中移动得过慢或移动不远，使其观察困难。
此外，凝胶电泳也不能提供关于DNA序列的信息，只能通过片段大小的差异对不同DNA进行区分。
结论通过本实验，我们成功提取出大豆叶片样本中的DNA，并通过PCR扩增将其增加到足够的数量。
dna纯度 实验报告
dna纯度实验报告
《DNA纯度实验报告》
DNA纯度是衡量DNA样品质量的重要指标之一，它直接影响到后续实验的可
靠性和准确性。
为了确保实验结果的可靠性，我们进行了一系列的实验来检测DNA样品的纯度。
首先，我们使用了紫外-可见分光光度计来测定DNA样品的吸光度。
吸光度比
值（A260/A280）是评估DNA样品纯度的常用指标，通常情况下，纯净的
DNA样品的A260/A280比值应该在1.8至2.0之间。
我们测定了多个DNA样
品的A260/A280比值，结果显示大部分样品的比值在理想范围内，表明这些样
品具有较高的纯度。
其次，我们进行了琼脂糖凝胶电泳实验，通过观察DNA在琼脂糖凝胶上的迁移情况来评估DNA样品的纯度。
纯度较高的DNA样品在凝胶上呈现为清晰的单
一条带，而受到污染或降解的DNA样品则可能呈现为模糊或多条带。
经过凝胶电泳实验，我们发现大部分DNA样品呈现出清晰的单一条带，证实了它们的高纯度。
最后，我们利用荧光定量PCR技术对DNA样品进行定量检测，进一步验证了
它们的纯度。
通过PCR反应，我们成功检测到了目标DNA序列的信号，表明
样品中没有明显的污染物或降解产物。
综合以上实验结果，我们得出结论：所测定的DNA样品具有较高的纯度，适合用于后续的实验操作。
在今后的实验中，我们将继续严格控制DNA样品的纯度，以确保实验结果的可靠性和准确性。
DNA纯度实验报告的完成，也为我们的研
究工作打下了坚实的基础。
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《分子生物学技术在中医药研究中的应用》教案（4）课程名称分子生物学技术在中医药研究中的应用总学时数48《分子生物学技术在中医药研究中的应用》教案（5）课程名称分子生物学技术在中医药研究中的应用总学时数48上海中医药大学《分子生物学技术在中医药研究中的应用》教案（6）课程名称分子生物学技术在中医药研究中的应用总学时数48实验6 组织总RNA提取实验目的1．了解某一特定组织或细胞某一特定mRNA转录量的变化，如RT-PCR、Northern blot 等。
2．了解某一特定组织或细胞全部mRNA转录量的变化，如DD-PCR、基因芯片等。
3．获得某一特定组织或细胞全部mRNA，以便建立cDNA库等。
4．获得某一特定组织或细胞全部RNA。
以上工作的前提是制备纯净且完整的RNA。
现代医学研究表明，人类的绝大多数疾病都是由若干基因表达的改变所引起的。
根据生物学“中心法则”原理，基因的表达包括转录与翻译两个阶段。
其中，由DNA到RNA的转录过程受到各种因素的调节，其调节水平反映出某种或某些特定的因素对相关基因表达的调节能力。
已有的研究一再表明，中医药所发挥的治疗与预防作用是直接或间接调整了基因的转录而实现的。
RNA主要由rRNA（占总量的80-85％），tRNA和核内小分子RNA（占总量的10-15％）以及mRNA（占总量的1-5％）所构成。
理论上认为每克组织（或108个培养细胞）可提取5-10mg RNA。
提取总RNA的方法有多种，比如：1）本实验介绍的方法，类似于本实验的Trizol方法（今天我们会介绍这样的方法），均称为一步法，方便而快捷。
缺点是RNA的获得量偏低，质量不够纯净。
2）超离心方法，可以获得丰富且质量高的RNA。
缺点是实验时间比较长，要求离心过夜。
3）其它一些试剂盒，主要是利用某些特定的介质吸附RNA，驱除其它杂质，以后洗脱纯净的RNA。
可以在短时间内获得纯净的RNA。
但是价格比较昂贵。
原理本实验又称异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法。
方法采用强RNA酶抑制剂异硫氰酸胍，抑制RNA酶的活性，防止RNA的降解；酚/氯仿使蛋白质变性。
离心后，RNA选择性地进入无DNA和蛋白质的水相。
之后通过异丙醇沉淀，75%乙醇洗涤等，便可得到较为完整与纯洁的总RNA。
实验准备（略）实验步骤（参照GIBCO BRC公司有Trizol试剂盒）1．引颈处死小鼠，剖腹切取肝脏组织50mg（或106-107个细胞），加入1ml Trizol液，剪碎，快速匀浆。
2．22℃，静置5min。
3．加入氯仿0.2ml，颠倒15s。
4．22℃，静置3min。
5．离心：4℃×15000转/分×15min。
6．取上清液0.5ml。
7．加入0.5ml异丙醇，混匀。
8．22℃，静置10min。
9．离心：4℃×15000转/分×10min。
10．弃上液。
11．加入1ml 4℃ 75%乙醇。
12．离心：4℃×10000转/分×5min。
13．弃上液，真空干燥5min。
14．用高压消毒过的去离子水25ul水冰上溶解，-70℃保存。
15．紫外分光光度计测定RNA的含量：取样本5ul加入石英比色杯内，加入蒸水0.8ml，充分混匀。
与蒸水对照。
读260nm、280nm两个测得值，记录。
计算：OD260为1时，为40ug RNA，所以计算如下：样本RNA含量（ug/ul）= OD260*160*40/1000当OD值260/280<1.8时，提示有蛋白或酚的污染。
实验结果得到比较纯净的肝组织总RNA。
据参考文献，分光光度计读数260/280 值为 1.85±0.04。
注意事项1．实验过程中要求创造一个无RNA酶污染的环境。
主要包括两个方面的工作，其一，极力避免来源于操作者的手及实验的器皿和试剂等外源性RNA酶的污染；其二，尽力抑制组织细胞中内源性RNA酶的活力，并尽可能地去除。
2．由于RNA酶到处存在，不易失活，极易造成污染而导致RNA的降解，造成实验失败。
因此建议所有用品均应严格按要求消毒，注明RNA专用。
严格按无菌操作要求操作。
通常用于RNA抽提与保存的塑料制品用DEPC水室温下浸泡过夜，再高压消毒。
注意，DEPC 处理的水和容器，必须高温灭活DEPC，以免其日后抑制其它酶的活性，导致实验失败。
玻璃制品泡酸反复冲洗后，250℃干烤3小时以上。
3．去除内源性RNA酶的方法可用酚/氯仿反复抽提几次，直至中间的蛋白层基本消失。
我们的经验是至少抽提3次以上。
4．实验过程中应将组织充分匀浆，一般可先将组织块用剪刀剪碎，以利于快速匀浆。
5．在酚/氯仿抽提过程中，一定要颠倒混匀充分，这样才能使蛋白质充分变性，才能充分去除蛋白质与RNA酶。
为了提高RNA的纯度，该步骤可以重复若干次。
6．抽提过程中，由于异硫氰酸胍是RNA酶的强抑制剂，在整个实验过程中不会产生RNA的降解。
但在加入75%乙醇洗涤时，以及RNA干燥和加水溶解时须防止RNA酶的污染。
7．在吸取上清时，切不可将上清与酚交界处的蛋白及下面的酚吸起，造成RNA的污染。
因此，通常轻轻吸取上清，且留有部分上清，以免搅起紧邻着的酚。
8．若需抽提大量RNA时，以上试剂、试管可按比例放大。
所获RNA建议分装，以免使用过程中反复冻融。
9．如果是培养细胞，先收集细胞，用PBS缓冲液反复漂洗3次，再加D溶液混匀细胞，后面的实验过程一致。
实验8Northern blot实验目的1．定量分析某一特定基因mRNA的转录与否，以及转录的水平。
2．比较两个或两个以上不同组织某一已知基因转录的差异。
3．比较两个或两个以上不同组织某一未知基因转录的差异。
由于此方法具有稳定、可靠、假阳性少等特点，多年来一直深受广大研究者的喜爱。
其结果可以同时反映某一特定基因RNA分子量的大小及其数量。
在中医药实验中通常以此来判别某一中医药方法对某一已知基因转录的调控作用。
例如我们的GnRH、N-ras、白蛋白研究。
通常观察某一分子的变化有两个层次，蛋白水平的和核酸水平的。
两者的含量变化均与其生成、代谢有关，而两者的作用发挥还关系到其质量、修饰、环境条件等因素，这些变化采用观察蛋白与核酸的量是不能回答的，所以对Northern blot的结果要有客观的分析。
类似目的的实验主要为RTPCR。
原理采用变性凝胶电泳，使RNA分子由小到大排列于凝胶之中。
应用虹吸原理，将RNA 转移至硝酸纤维素膜，烘干，使RNA牢固地结合在硝酸纤维素膜上。
与放射性标记的探针杂交，杂交后，洗去未被杂交上的探针和游离的同位素，将硝酸纤维素膜放射自显影，使胶片上出现对应于相应分子量mRNA的条带。
最后，对条带进行光密度扫描，并统计分析。
实验准备（略）实验步骤1．RNA电泳取10ug RNA旋转真空干燥，溶于20ul新配的样品缓冲液。
置样品于65℃水浴中5分钟，迅速移入冰中冷却，再加4ul上样缓冲液，混匀。
移胶至电泳槽内，注入电泳缓冲液1×MOPS，浸没凝胶，轻轻拔去疏子。
接通电源，负极靠近上样孔。
吸取样品24ul，注入上样孔内。
开启电源，电压调至100V。
电泳约2小时，至溴酚蓝移至前缘时，关闭电源。
轻轻取出凝胶，移至紫外透射反射分析仪上检查电泳结果。
在凝胶一侧放把尺，拍照。
2．RNA转移至硝酸纤维素膜取一洁净的容器，注入20×SSC，容器上缘架一水平玻璃板。
取2-4层滤纸，纸宽同凝胶长，纸长足以经玻璃板两侧浸入20×SSC中。
待滤纸全都湿透后，滚动移液管赶走滤纸间及其与玻璃板间的气泡。
切去凝胶上样孔及以上部分，在凝胶第一上样孔处切去一小角，作为记号，把凝胶底朝上放于滤纸上，用移液管赶走凝胶与滤纸间的气泡。
把硝酸纤维素膜裁成凝胶大小，对应凝胶剪去一小角，先浸湿于双蒸水中，再浸于20×SSC中，取出平放于凝胶之上，缺角处与凝胶缺角处对齐。
用移液管赶走凝胶与硝酸纤维素膜间的气泡。
膜上置2-4层20×SSC浸湿的滤纸，用移液管赶走滤纸与硝酸纤维素膜间的气泡。
用4张保鲜膜沿凝胶4侧盖住凝胶旁的滤纸、玻璃和容器，以防止凝胶外形成虹吸短路，以及容器内的缓冲液干燥。
在胶上滤纸之上方，铺4-6厘米厚的卫生纸，上置一平玻板，玻板上压一300-500克的重物。
过夜。
次日上午，取出凝胶与硝酸纤维素膜，在投射紫外灯仪上确认RNA已全部转移至硝酸纤维素膜上。
把该膜夹于两张洁净的滤纸间，在80℃真空干燥箱中真空干燥两小时。
3．探针标记（此工作与膜转移于同一天进行。
）水14 ulOLB 5 ulBSA （10mg/ml ） 1 ulDNA （30-50 ng ） 2 ul100℃×5min, 37℃×10min, 4℃×5minα[32P]dCTP （50uCi） 2.5 ul大肠杆菌聚合酶K片段0.5 ul混匀，4℃过夜，次日再加大肠杆菌聚合酶K片段0.5 ul半小时后加入终止液50 ul4．离心柱分离探针1）柱的制备取消毒过的蓝吸头，用小玻璃珠或玻璃纤维放入吸头，堵住出口，将混匀的Sephadex G50（中号）移入吸头至满。
取1.5ml Eppendorf管，剪去盖，放入10ml离心管中。
将蓝吸头插入Eppendorf管，可自制一套圈或用一垫圈套于蓝吸头前部，以保证吸头尖距1.5ml管底部约1-2厘米。
1600×g离心4分钟，弃去1.5ml管中的TE液，再用100ul TE液加入小柱，离心，如此反复两次平衡柱子。
2）分离用镊子取出原1.5ml管，取一新的1.5ml管放入10ml离心管，插上平衡过的小柱。
将标记的探针液，加入小柱，1600×g离心4分钟，小心取出1.5ml管，将分离的到的探针移入一标签过的1.5ml管，盖紧盖子。
5．探针变性将含探针的1.5ml管置于沸水中5分钟变性，迅速移入冰中冷却。
6．杂交将硝酸纤维素膜在2×SSC中浸湿，以防碎裂，然后放入杂交袋中，四周封口，剪去一角注入10毫升预杂交液，挤去气泡，封口，置此袋于40℃水浴摇床中摇晃预杂交1小时以上。
取出袋，拭干，剪去一角，将变性了的探针加入，挤去气泡，封口。
为防止含同位素的探针泄漏，外再封一杂交袋。
置此袋于40℃水浴摇床中摇晃杂交过夜。
7．洗膜取出袋，拭干，剪去一角，将杂交液注入50ml管中，存于4℃冰箱，以备再用。
剪去袋的四周，置此袋于2×SSC/0.1％SDS液中，取出膜，晃洗于此液。
移膜入新的2×SSC/0.1％SDS液中，于50℃中晃洗半小时，如此重复一次。
8．曝光取上膜封于杂交袋中。
在暗室中打开片盒，放X光胶片于增感屏上，再放上膜，盖上盒，将片盒存于-70℃冰箱中。
一天后冲片，视显影强弱，缩短或延长曝光时间。