高效液相色谱中异常峰分析范文
高效液相色谱中异常峰分析
异常峰分析异常的色谱峰指的是色谱图中的无峰或出现负峰、宽峰、双峰、肩峰、峰形不对称等情况。
异常峰是色谱实验工作中最棘手的问题。
这些峰严重影响色谱分析的结果。
色谱图中不可能有纯正的高斯对称峰 , 轻微的拖尾是正常的 , 这是由分离系统所决定的。
在此仅对几种异常峰进行分析。
1.峰前或峰后有小峰的分析产生原因大致分为以下几种情形(1) 样品不纯。
可改变不同的流动相和色谱柱 ,对样品进行分离比较 , 选择合适的分离条件。
(2) 分析柱或保护柱柱头塌陷。
此情况较常见 ,可更换分析柱或保护柱后对峰形进行比较。
柱头塌陷时往往所有的峰都会出现峰分裂。
对色谱柱再生和清洗可以改善分离效果。
(3) 色谱柱柱容量下降。
当长时间使用后 , 有一些强保留组分吸附在柱子中 , 不大的进样量往往就会出现峰分裂。
用强洗脱能力的溶剂清洗色谱柱 , 或更换色谱柱可使问题得到改善。
(4) 样品溶剂与流动相不匹配或进样体积过大。
当样品溶剂比流动相极性大时 , 有时即使进样体积很小 , 也容易出现峰变形和裂分现象。
建议用流动相溶解样品。
(5) 流动相不恰当。
此情况较罕见 , 有些样品在特定的色谱条件下可能存在结构的动态平衡 , 而出双峰 , 这种双峰是无法分离完全的 , 改变色谱条件尤其是p H 值会使峰形正常。
(6) 样品分解。
不稳定的样品在色谱分离过程中变成其他物质而出现双峰。
这时需改变样品处理方法或色谱分离条件。
2.负峰分析在色谱分析中有时会出现负峰或倒峰 , 如图 3 中的大峰的左下就有一负峰。
出现这种现象可能是由以下几种原因引起的 , 可针对不同情况进行排除 , 进而使问题得到解决。
(1) 流动相吸收本底值过高。
此时可适当改变检测波长。
(2) 进样过程中进入空气。
进行排气处理 , 直到基线平稳再进样。
(3) 样品组分的吸收低于流动相。
可改变流动相或改变检测波长。
(4) 配制样品的溶液与流动相不一样。
重新配制样品 , 用与流动相一样的溶剂配制或稀释样品。
液相出峰异常解决方法
高效液相出峰异常解决方法一、保留时间变化可能的原因: 解决方法1.柱温变化: 柱恒温2.等度与梯度间未能充分平衡: 至少用10倍柱体积的流动相平衡柱3.缓冲液容量不够: 用>25mmol/L的缓冲液4.色谱柱污染: 每天冲洗柱5.柱内条件变化: 稳定进样条件，调节流动相6. 色谱柱快达到寿命: 采用保护柱二、保留时间缩短可能的原因: 解决方法1.流速增加: 检查泵，重新设定流速2.样品超载: 降低样品量3.键合相流失: 流动相PH值保持在3~7.5，检查柱的方向4.流动相组成变化: 防止流动相蒸发或沉淀5.温度增加: 柱恒温三、保留时间延长可能的原因: 解决方法1.流速下降: 管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡2.硅胶柱上活性点变化: 用流动相改性剂，如加三乙胺，或采用碱钝化柱3.键合相流失: 流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向4.流动相组成变化: 防止流动相蒸发或沉淀5.温度降低: 柱恒温四、出现肩峰或分叉可能的原因: 解决方法1.样品体积过大: 用流动相配样，总的样品体积小于第一峰的15%2.样品溶剂过强: 采用较弱的样品溶剂3.柱塌陷或形成短路通道: 更换色谱柱，采用较弱腐蚀性条件4.柱内烧结不锈钢失效: 更换烧结不锈钢，加在线过滤器，过滤样品5.进样器损坏: 更换进样器转子五、鬼峰可能的原因: 解决方法1.进样阀残余峰: 每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗2.样品中未知物: 处理样品3.柱未平衡: 重新平衡柱，用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) : 每天新配，用抗氧化剂5.水污染(反相) : 通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水六、基线噪声可能的原因: 解决方法1.气泡(尖锐峰) : 流动相脱气，加柱后背压2.污染(随机噪声) : 清洗柱，净化样品，用HPLC级试剂3.检测器灯连续噪声: 更换氘灯4.电干扰(偶然噪声) : 采用稳压电源，检查干扰的来源(如水浴等)5.检测器中有气泡: 流动相脱气，加柱后背压七、峰拖尾可能的原因: 解决方法1.柱超载: 降低样品量，增加柱直径采用较高容量的固定相2.峰干扰: 清洁样品，调整流动相3.硅羟基作用：加三乙胺，用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值，钝化样品4.柱内烧结不锈钢失效: 更换烧结不锈钢，加在线过滤器，过滤样品5.柱塌陷或形成短路通道: 更换色谱柱，采用较弱腐蚀性条件6.死体积或柱外体积过大: 连接点降至最低，对所有连接点作合适调整，尽可能采用细内径的连接管7.柱效下降: 用较低腐蚀条件，更换柱，采用保护柱八、峰展宽可能的原因: 解决方法1.进样体积过大: 用流动相配样，总的样品体积小于第一峰的15%2.在进样阀中造成峰扩展: 进样前后排出气泡以降低扩散3.数据系统采样速率太慢: 设定速率应是每峰大于10点4.检测器时间常数过大: 设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%5.流动相粘度过高: 增加柱温，采用低粘度流动相6.检测池体积过大: 用小体积池，卸下热交换器7.保留时间过长: 等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱8.色谱柱外体积过大: 将连接管径和连接管长度降至最小9.样品过载: 进小浓度小体积样品。
高效液相色谱技术中常见问题分析及解决方法
更换。
仪器管路液体泄漏是导致系统压力不稳定的最
常见情况。 漏液严重时,仪器自身会发出系统压力
过低的警报。 轻微泄漏则可用干燥的餐巾纸擦拭管
路外部,观察纸巾是否被渗入液体进行判断。 泄漏
孔璐璐,等:高效液相色谱技术中常见问题分析及解决方法
97
可能由管路松动或管路损坏引起,对于前者,重新拧
1. 1. 1 样品前处理不当
样品前处理不当可能会产生鬼峰,一般源于两
96
个途径:一是所用试剂被污染;二是测试容器不干
净。 鉴别起来比较简单:使用试剂稀释样品,如果待
测样品出峰明显减小而鬼峰变化不大,则鬼峰源自
试剂污染。 如果洁净容器后重新检测鬼峰消失,则
鬼峰源自容器的污染。
1. 1. 2 流动相污染
的空气。 这种情况可预先将流动相进行超声脱气处
每次补充流动相时以直接补给的方式,没有对贮液
理,然后再装入储液瓶中待用。 二是由于水相和有
瓶进行清洗更换,富集的污染物就会进入到仪器流
机相的物理化学性质存在差异,两者在相互混合时,
路中产生鬼峰。
增加了空气在两种流动相中的溶解度。 对于这种情
上述问题的解决方法是更换流动相,即使用干净
样品的相溶性,如没有特殊原因,一般选择流动相作
留以及色谱柱和仪器管路中污染物的富集。
为待测组分的溶剂,以降低由于待测样品在流动相
在不改变测试条件情况下,如果鬼峰每次有规
中溶解性差引入的空气量。
律地出现在色谱图的相同位置,则污染很可能来自
液相色谱仪采用动态混合器和静态混合器将不
于自动进样器端。 这时可将自动进样针和针座拆
Key words: high performance liquid chromatography; common problems; influence factors;
高效液相色谱仪常见故障分析及排除策略
—197—《装备维修技术》2021年第3期高效液相色谱是将气相色谱、液相色谱相结合的新型分离、分析技术，自20世纪问世以来，该技术得到了广泛应用，但使用者若操作不当，或是设备本身出现故障，就会对方法学的建立、结果验证造成一定影响，以下就高效液相色谱仪的常见故障进行分析，以提高分析工作效率。
一、高效液相色谱仪的原理高效液相色谱仪是利用混合物中各组份在不同的两相中吸附、分配、溶解等性能的差异，使各组份在两相中反复受到各种作用力从而相互分离，并按照一定的次序从固定相中流出。
高效液相色谱仪的两相分别为固定相（stationary phase ），又称色谱柱；流动相（mobile phase ），又称洗脱剂。
高效液相色谱仪由高压色谱泵、进样器、色谱柱、柱温箱和检测记录系统五大部分构成。
二、高效液相色谱仪常见故障及排除策略高效液相色谱仪五大部分中，最常发生的故障主要出现在泵压故障、基线故障、峰形故障和保留时间故障四个方面。
（一）泵压故障泵压故障主要表现为无压力、压力不稳、压力过低、压力过高四个方面。
造成无压力的原因及排除策略如下：①原因：流动相粘度过高、被污染。
排除策略：选择合适的流动相和比例，重新配置，用0.45微米滤膜进行过滤；②原因：流动相内的缓冲盐引起单向阀堵塞。
排除策略：将流速设定在5ml/min ，拧松排气阀并purge ；③原因：泵内有气体。
排除策略：将流速设定在5ml/min ，拧松排气阀并purge ；④原因：高压密封垫变形。
排除策略：更换新的高压密封垫。
造成压力不稳的原因及排除策略如下：①原因：单向阀被污染，如流动相中盐分析出导致球座上有微小颗粒，影响球座的密封性。
排除策略：将流速设定在5ml/min ，拧松排气阀并purge ；②原因：高压密封垫被流动相腐蚀，加速老化。
排除策略：更换新的高压密封垫；③原因：滤芯堵塞。
排除策略：用10%异丙醇超声30min ，再用纯净水冲洗干净；④原因：泵内、溶剂内有气体。
高效液相色谱中异常峰分析
异常峰分析异常得色谱峰指得就就是色谱图中得无峰或出现负峰、宽峰、双峰、肩峰、峰形不对称等情况。
异常峰就就是色谱实验工作中最棘手得问题。
这些峰严重影响色谱分析得结果。
色谱图中不可能有纯正得高斯对称峰, 轻微得拖尾就就是正常得, 这就就是由分离系统所决定得。
在此仅对几种异常峰进行分析。
1、峰前或峰后有小峰得分析产生原因大致分为以下几种情形(1)样品不纯。
可改变不同得流动相与色谱柱,对样品进行分离比较，选择合适得分离条件。
(2) 分析柱或保护柱柱头塌陷。
此情况较常见,可更换分析柱或保护柱后对峰形进行比较。
柱头塌陷时往往所有得峰都会出现峰分裂。
对色谱柱再生与清洗可以改善分离效果。
ﻫ(3) 色谱柱柱容量下降。
当长时间使用后, 有一些强保留组分吸附在柱子中, 不大得进样量往往就会出现峰分裂。
用强洗脱能力得溶剂清洗色谱柱，或更换色谱柱可使问题得到改善。
(4) 样品溶剂与流动相不匹配或进样体积过大。
当样品溶剂比流动相极性大时,有时即使进样体积很小, 也容易出现峰变形与裂分现象。
建议用流动相溶解样品。
(5)流动相不恰当。
此情况较罕见, 有些样品在特定得色谱条件下可能存在结构得动态平衡,而出双峰, 这种双峰就就是无法分离完全得, 改变色谱条件尤其就就是p H值会使峰形正常。
(６) 样品分解。
不稳定得样品在色谱分离过程中变成其她物质而出现双峰。
这时需改变样品处理方法或色谱分离条件。
２、负峰分析在色谱分析中有时会出现负峰或倒峰, 如图 3 中得大峰得左下就有一负峰。
出现这种现象可能就就是由以下几种原因引起得, 可针对不同情况进行排除,进而使问题得到解决。
（１）流动相吸收本底值过高。
此时可适当改变检测波长。
(2) 进样过程中进入空气。
进行排气处理, 直到基线平稳再进样。
（３）样品组分得吸收低于流动相。
可改变流动相或改变检测波长。
(4)配制样品得溶液与流动相不一样。
重新配制样品, 用与流动相一样得溶剂配制或稀释样品。
3、前沿、拖尾峰分析拖尾:1 干扰峰,优化条件分离；2色谱柱塌陷,更换色谱柱; 3 流动相pH不合适,调节ｐH值;4 管路没有接好,存在较大得死体积，可以重新接一下。
HPLC中异常峰的分析与处理
产生原因大致分为以下几种情形
(1)样品不纯 (2)分析柱或保护柱柱头塌陷 (3)色谱柱柱容量下降 (4)样品溶剂与流动相不匹配或进样体积过大 (5)流动相不恰当 (6)样品分解
负峰分析
在色谱分析中有时会出现负峰或倒峰, 如图 3 中的大峰的左下就有一负峰。
原因
• • • • (1)流动相吸收本底值过高 (2)进样过程中进入空气 (3)样品组分的吸收低于流动相 (4)配制样品的溶液与流动相不一样
结语
• 在高效液相色谱分析中, 良好峰形是分 析结果准确与否的关键, 上述几种异常 峰, 如在日 常工作中遇到, 可以参照文 中所述方法进行排除和解决。
Hale Waihona Puke HPLC中异常峰的分析与处理
高效液相色谱( H PL C) 具有分离效率高、 分析速度快和应用范围广等特点, 特 别适合 于高沸大分子 强极性和热稳 定性差的化合物 的分离分析自20 世纪 60 年代后期发展以来, 是现代分离测定的重要手段。目前高效液 相 色谱已成为 解决各种实际分析和分离课题必 不可少的工具之一。但在高效液相色谱分析 中因各种原因会经常出现异常峰形, 严重影响 对结果的分析。
异常峰分析
异常的色谱峰指的是 色谱图中的无 峰或 出现负峰、 宽峰、 双峰、 肩峰、 峰形 不对称等情况。异常峰是色谱实验工作 中最棘手的问题。这些峰严重影响色谱 分析的结果。在此仅对其中几种异常峰 进行分析。
峰前或峰后有小峰的分析
某个单组分样品的大峰附近带小峰, 如图 1 中的第 3 个峰右下的小峰以及图 2 中 第 2 个峰左下的小峰。
高效液相色谱仪使用过程中常见问题及其解决方法
８ ２００５．０５高效液相色谱仪使用过程中常见问题及其解决方法陈莲 高洪 肖啸（云南农业大学动物科学技术学院，云南 昆明 ６５０２０１）高效液相色谱（ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ， ＨＰＬＣ）技术是近３０年发展起来的一种具有高灵敏度、高选择性的高效快速分离分析技术。
它既能用于微量组分的分析测定，又能用于大量的制备分离，手段灵活多样，其应用范围已超过其它各种分离方法，尤其在生化医药样品的分析分离、食品卫生安全检验等方面更能充分发挥它的特长，为推动这些领域的进步和发展作出了巨大贡献。
液相色谱在使用过程中常会出现一些影响分析结果的小问题，如果使用人员了解了常见问题及其成因和相关解决方法，能做到早预防勤维护，使分析结果保持较好的稳定性与较高的精确性。
１ 液相色谱仪系统液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、色谱柱、柱温箱、检测器、数据处理系统组成。
对于整个系统而言，色谱柱、泵和检测器是核心部件同时也是容易出事故的主要部件。
２ 常见问题及解决方法２．１ 针对柱压问题柱压变化是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的指标，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效高低、分离效果及保留时间等密切相关。
所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在５０ＰＳＩ（针对Ｗａｔｅｒｓ高效液相色谱仪）之间。
压力过高、过低及波动较大都属于柱压问题，但柱压的高低与色谱柱的种类、品牌、液相系统本身及使用的流动种类相关。
值得注意的是在使用梯度洗脱进柱压的平稳缓慢的变化是允许的。
一般而言，柱压变化最先考虑的是柱子，在排除柱子因素后再考虑其它因素。
在实际应用中常见柱压问题可从以下几个方面来考虑（见表１）。
２．２ 针对保留时间漂移的问题保留时间的改变是很多液相色谱仪使用者常碰到的问题，包括了保留时间的延长或缩短。
它的产生与很多因素有关，可从以下方面进行考虑（见表２）。
图１ 液相色谱仪工作系统及流程２００５．０５ ９更换新的色谱柱。
液相色谱峰异常问题分析
HPLC色谱峰异常问题分析目录1、色谱峰问题的来源 (1)2、所有峰均为负峰 (2)3、一个或几个峰是负峰 (2)4、所有的峰都是宽峰 (2)5、较早洗脱的峰呈宽峰 (2)6、色谱峰峰形异常问题 (2)（1）、峰比预想的要小 (2)（2）、双峰或肩峰 (3)（3）、前伸峰 (3)（4）、平头峰 (3)（5）、拖尾峰 (3)（6）、分叉峰 (3)（7）、色谱图中未出峰 (3)（8）、色谱图中出峰比预想的少 (4)（9）、色谱图中出峰比预想的多(鬼峰) (4)7、色谱峰保留时间异常问题分析 (4)（1）、保留时间飘忽不定(各次运行之间) (4)（2）、保留时间增加或减少(各次运行之间) (4)（3）、保留时间改变到一个新的恒定值 (5)（4）、保留时间重现性：pH的影响 (5)8、HPLC系统压力问题分析 (5)（1）、系统压力高 (5)（2）、压力低或没压力 (5)（3）、压力不稳可能原因: (6)9、HPLC流路基线噪音问题分析 (6)（1）、基线不稳定(不重复) (6)（2）、基线漂移 (6)（3）、基线周期性噪声 (7)（4）、基线非周期性噪声 (7)（5）、基线周期性波动 (7)（6）、基线有无规律的尖峰 (7)1、色谱峰问题的来源①、色谱柱毁坏②、溶解样品的溶剂不当③、第二种相互作用④、色谱柱过载——质量过载——体积过载⑤、其他柱外效应⑥、管路连接2、所有峰均为负峰——信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒——光学装置尚未达到平衡。
3、一个或几个峰是负峰——流动相吸收本底高——进样过程中进了空气——离子对分离中的系统峰——样品组分的吸收（RI或UV）低于流动相4、所有的峰都是宽峰——系统未平衡或未达到化学平衡——溶样的溶剂比流动相强很多——色谱柱类型或尺寸不正确——色谱柱或保护柱被污染或降级——温度变化对色谱柱的影响5、较早洗脱的峰呈宽峰——进样体积过大或样品浓度太高——进样器有问题，定量环（Loop）大小不合适——在线过滤器，保护柱，色谱柱或管路堵塞——管路问题：内径不对或切管不正确——管路连接问题：接头或锥箍不正确——检测器时间常数不正确6、色谱峰峰形异常问题（1）、峰比预想的要小①、样品粘度过大②、进样器有问题或进样体积有误③、检测器设置不正确，定量环（Loop）体积不正确④、检测器输出未置零⑤、用了不正确的检测器输出信号⑥、检测池被污染⑦、检测器的灯可能有问题（2）、双峰或肩峰①、进样量或样品浓度过大②、保护柱或色谱柱进口堵塞③、保护柱或色谱柱污染或失效（3）、前伸峰①、进样量或样品浓度过大②、溶液的溶剂相对于流动相太强③、保护柱或色谱柱污染或失效（4）、平头峰①、检测器设置不正确②、进样体积过大或样品浓度太高（5）、拖尾峰①、保护柱或色谱柱问题：污染或失效②、进样问题③、检测器时间常数设置不正确（6）、分叉峰①、保护柱或分析柱污染②、样品溶剂不溶于流动相（7）、色谱图中未出峰①、进样问题:未进样或样品分解②、流动相问题:泵未输液或流动相不正确③、检测器设置不正确,或检测器有问题（8）、色谱图中出峰比预想的少①、样品分解②、色谱柱柱效丧失③、用错流动相④、梯度洗脱时平衡不足(例如,过早将手动进样器扳至Load位置) （9）、色谱图中出峰比预想的多(鬼峰)①、样品分解或制样时导入了杂质②、流动相被污染,或用错流动相③、流动相中含有稳定剂或稳定剂发生变化④、前次进样的后流出物(某些Rt值特别大的组分)⑤、进样器被污染,洗针系统出问题或注射器脏⑥、未充分平衡进样器Loop管⑦、保护柱脏,色谱柱被污染,分辨率下降或①、进样阀残余峰②、样品中未知物③、柱未平衡④、水污染⑤、三氟乙酸7、色谱峰保留时间异常问题分析（1）、保留时间飘忽不定(各次运行之间)①、系统不稳定或未达化学平衡②、泵压力不稳(泵头里有气泡)③、进样体积过大或样品浓度过大④、温度波动⑤、流动相混合不均匀⑥、色谱柱被污染（2）、保留时间增加或减少(各次运行之间)①、系统不稳定或化学平衡不足②、泵流速变化③、温度变化④、色谱柱污染,柱效下降⑤、流动相被污染⑥、溶剂入口过滤器堵或管路堵塞⑦、系统渗漏（3）、保留时间改变到一个新的恒定值①、流动相不正确或其组成不正确②、泵流速变化③、实际输液的流速不正确(泵失灵或故障)④、环境温度变化；柱温不正确⑤、色谱柱尺寸或类型不正确⑥、色谱柱被污染⑦、流动相含有稳定剂或稳定剂发生变化⑧、输液系统的梯度滞后体积不正确（4）、保留时间重现性：pH的影响化学因素——中性物质：无影响——酸性物质：pH增加，保留降低——碱性物质：pH增加，保留增加——0.1 pH的变化会导致高达10%的保留时间变化。
高效液相色谱常见故障及解决方案
清洗柱或更换柱 清洗六通阀 清晰检测器
管路污染
冲洗
流动相中含有稳定剂 或稳定剂变化
使用无防腐溶剂
8.保留时间变 化
现象
保留时 间不重 复
判断
系统不问或未达 到平衡
室温波动大
柱被污染 溶剂配比不合适 进样体积太大或 样品浓度太高
故障排除
分析之前应有足够的时间 使系统平衡 使用柱温箱、将系统置于 恒温、空气对流小的环境 冲洗柱或更换柱 调节溶剂配比
检测器内有气泡
用甲醇或其他强极性的溶剂 冲洗流通池
用强极性的溶剂清洗系统
清洗检测器，在检测器后面 安装背景压力调节器
检测器灯能量不足
更换灯
12.规则基线 噪音
现象
规则基 线噪音
判断
故障排除
流动相、检测 器或泵内有气 泡
流动相脱气，冲洗系统除去检 测器或泵内的空气
室温不稳
稳定环境温度。使用柱温箱、 将系统置于恒温、空气对流小 的环境
鬼
洗脱物
峰
注射器脏
故障排除
用标准品对照、检查样品处理过程， 换新样品
增加分析时间或梯度洗脱、提高流 速、如问题仍存在，两次进样间用 强溶剂冲洗色谱柱
清洗注射器、冲洗进样口
现象
判断
故障排除
流动相被污染
清洗溶剂贮液瓶、清洗溶剂入 口过滤器、使用HPLC级试剂
色谱图 出现鬼 峰
柱被污染 六通阀污染 检测器污染
峰变 宽
环境温度变化 漏夜
使用柱温箱 检查漏夜的位置并维修
出现两个或多个未被完 全分离的物质的峰
选择其它色谱条件以改善分 离效果
检测器时间常数太大
使用较小的时间常数
4.峰分叉
高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法
高效液相色谱仪使用中常见故障及解决方法1 高效液相色谱仪系统液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成。
对于整个系统而言，柱子、泵和检测器是核心部件同时也是易出问题的主要部位。
2 常见问题及解决方法高效液相作为一种高精密仪器，如果在使用过程中不按照正确操作的话，就容易导致一些问题。
其中最常见的就是柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。
2.1 柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。
所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI（3.3 Bar）之间（在使用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的）。
压力过高、过低都属于柱压问题。
2.1.1 压力过高这是高效液相在使用中最常见的问题，指的是压力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。
此时，我们应该分段进行检查。
(1).首先断开真空泵的入口处，此时PEEK管里充满液体，使PEEK管低于溶剂瓶，看液体是否自由滴下，如果液体不滴或缓慢滴下，则是溶剂过滤头堵塞。
处理方法：用30%的硝酸浸泡半个小时，在用超纯水冲洗干净。
如果液体自由滴下，溶剂过滤头正常，在检查；(2).打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤白头堵塞。
处理方法：将过滤白头取出，用10%的异丙醇超声半个小时。
如果压力降至100PSI (6.7 Bar)以下，过滤白头正常，在检查；(3).把色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。
处理方法：如果是缓冲盐堵塞，则用95%的水冲至压力正常。
如果是一些强保留的物质导致堵塞，则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。
假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降，则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上，用流动相冲洗柱子。
这时，如果柱压仍不下降，只有换柱子入口筛板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以尽量少用。
高效液相色谱常见问题原因及处理方法
高效液相色谱法一．仪器的维护与常见问题处理若液相出现规律性基线波动，长时间不平稳可能原因是什么？快速解决方法：一般为仪器系统出现气泡，最好使用纯甲醇长时间冲洗系统（不少于3小时，特殊情况要12小时左右）柱压逐渐升高可能原因是什么？快速判断①色谱柱出现堵塞②针座堵塞③进样针出现堵塞④系统管路中有未冲洗干净的盐⑤滤芯脏了解决方法①色谱柱出现堵塞：一种是将堵塞了色谱柱的位置拆卸，取出里面的筛网用水或甲醇超解（不建议采用，除非没有其他方法）另一种是将堵塞一头色谱柱链接在仪器上另一头不要链接，先用10%甲醇根据色谱柱柱压调节流速冲洗一小时左右，然后换成纯甲醇再以此方法继续冲洗，根据其柱压随时调整流速。
②针座堵塞与进样针出现堵塞：情况不严重则将它们拆卸后用水超解几分钟就可以了，若堵塞严重只有更换新的（堵塞不代表不能用，若无明显的质量损坏如：变形，滑口，开裂等，后续修好后还能做备件使用）③系统管路中有未冲洗干净的盐：用水或10%异丙醇对系统冲洗，冲洗后柱压正常，则可正常使用。
（注意不建议对系统反冲洗，会造成管路中的残留盐类物质重新回到系统中造成二次堵塞。
）④滤芯脏了：更换滤芯若出现保留时间飘移可能原因是什么？快速判断原因：①流动相混合不均匀②柱温不稳③压力不稳④密封圈松动⑤对于是四元泵的液相，其比例阀区域有堵塞情况（流动相是按比例配置，若比例阀区域堵塞，进样第一针时，可能有一个阀只进入25%另一个阀则是75%，进样第二针时则会变成一个阀进入20%，另一个阀80%）快速解决方法：①流动相重新配置，并按要求混匀②保证环境温度与仪器设定温度相差不大并稳定③系统冲洗平衡后方能实验④更换或调整密封圈⑤将出现堵塞区域的设备进行超声清洗。
1.气相检验化学残留：对照品重复性必须符合要求，但供试品重复性不做要求（上海海尼是对照品重复性必须符合要求，但配置两个供试品，各进一针不计算重复性。
目前海陵是对照品与供试品都要计算重复性）液相进样针无法正常采集?解决方法：一般为仪器机械故障，若进样器显示信号一直为红色，可能是进样针损坏或机械臂故障。
高效液相色谱中定量分析中的误差来源及消除
高效液相色谱中定量分析中的误差来源及消除高效液相色谱定量分析过程中一旦出现误差将影响结果的准确性，其误差来源主要为样品前的处理、标准品的配置，有效减小误差，可以提高分析结果的准确度，在操作过程中操作者尽量将操作误差减小到最低，有效消除误差的来源非常重要。
该文主要分析了高效液相色谱中定量分析中的误差来源以及消除方法，以期为提高实验的准确性提供帮助。
标签：高效液相色谱；定量分析；误差[Abstract] High performance liquid chromatography （HPLC）once appear in the process of quantitative analysis of the error will affect the accuracy of the results，the main error source as sample processing，in front of the standard configuration，effectively reduce the error，can enhance the accuracy of analysis results，the operator in the process of operation as far as possible to minimize the operating error，effectively eliminate the source of error is very important. This article mainly analyzes the quantitative analysis of error sources in high performance liquid chromatography （HPLC）and eliminate method，in order to offer help to improve the accuracy of the experiment.[Key words] High performance liquid chromatography （HPLC）；Quantitative analysis；Error高效液相色谱是色谱法的一个重要分支[1]，以液体为流动相，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相采用高压输液系统泵入装有固定相的色谱柱[2]，该方法已被广泛应用到医学、化学、农学、工业、法检等重要学科领域中。
高效液相色谱仪计量检定过程中常见故障分析及处理方法
高效液相色谱仪计量检定过程中常见故障分析及处理方法摘要：简述液相色谱仪的结构及工作原理，结合实际检定工作，对液相色谱仪计量检定过程中常见问题进行分析，给出常见故障的解决方法，有助于计量检定人员的计量检定工作。
关键词：高效液相色谱仪；计量检定；故障排除液相色谱仪是目前在食品安全、环境保护、生命科学、化学化工等领域最常用的分析仪器，也是被《中华人民共和国依法管理的计量器具目录》中的项目之一，目前全国在用的液相色谱仪大约有十几万台，因此对该类仪器的计量检定工作十分重要。
为了解决高效液相色谱仪使用常见故障，更好的使用和维护高效液相色谱仪，本人结合实际工作对液相色谱仪检定中常见故障作简要分析，并给出了常见故障解决方法。
高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相)内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
在计量检定过程中常见故障如下：一、进样后没有色谱峰出现对于进样后没有色谱峰出现情况，首先检查色仪谱泵和检测器是否打开，再检查废液管是否有液体流出，检查流速是否正常。
如果没有废液流出或者泵流量很小，原因可能是流路内有气泡或者过滤器堵塞。
解决办法：(1)流路内有气泡，断开色谱柱，以5ml/min流量冲洗管路，如果排除不掉气泡，在管路下端用针筒手动抽气，直到管路充满流动相。
（2）过滤器堵塞：过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内，过滤器内部由于霉菌的生长繁殖，形成菌团，阻塞了过滤器，缓冲液难以流畅地通过过滤器。
将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，超声清洗几分钟即可；亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小时，轻轻震荡几次，再将过滤器用纯水清洗几次，即可将过滤器清洗干净；然后断开色谱柱，以5ml/min流量冲洗管路5分钟即可。
高效液相HPLC常见故障分析及其排除方法
软件及数据处理问题
软件操作问题
操作失误、参数设置不当等，可能导 致仪器无法正常工作或数据处理错误 。
数据处理问题
数据采集异常、数据无法处理等，可 能原因包括数据处理软件故障、电脑 病毒等。
样品前处理与进样问题
样品前处理问题
样品处理不当、溶剂选择不合适等，可能导致色谱峰异常或 仪器故障。
进样问题
进样量不准确、进样针堵塞等，可能影响色谱分析结果。
定期检查和维护计划制定
01
制定全面的检查和维护计划，包括泵、进样器、色谱柱、检 测器等关键部件的定期检查和维护。
02
对流动相和样品进行定期的质量检查，确保其符合实验要求 。
03
定期检查并更换易损件，如泵密封圈、进样针等，以避免因 磨损或老化导致的故障。
培训操作人员提高技能水平
01
对操作人员进行专业的HPLC操作培训，包括仪器的基本原理、 操作规范、日常维护和故障排除等。
色谱柱使用与保养问题
色谱柱选择问题
色谱柱类型选择不当、色谱柱规格不匹配等，可能导致分离效果差或仪器故障。
色谱柱保养问题
未及时清洗色谱柱、未正确保存色谱柱等，可能导致色谱柱性能下降或损坏。 同时，使用过期或变质的色谱柱也会对分析结果产生负面影响。因此，需要定 期检查、清洗和更换色谱柱，以确保其性能和分离效果。
02 常见故障类型及原因分析
仪器硬件故障
01
02
03
泵故障
泵压力不稳、漏液等，可 能原因包括泵头磨损、密 封圈老化、单向阀堵塞或 损坏等。
检测器故障
信号异常、噪声大等，可 能原因包括光源老化、光 路污染、检测池污染或损 坏等。
自动进样器故障
进样不准确、漏液等，可 能原因包括进样针堵塞、 进样针座磨损、密封圈老 化等。
高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法
高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法1色谱柱跑干了，处理方法：将贮液瓶装入重蒸水，首先按purge键，将柱前气柱排出，若无法排出，可将色谱柱前拆下，用注射器抽吸。
待柱前气体排空后，连接色谱柱，用水高低流速交替冲洗色谱柱，直至柱压稳定为止。
2.基线不稳，有静电，处理方法：检查接地是否良好。
3.峰面积变化非常大，处理方法：检查是否进样阀堵塞。
4.基线突然提高，变粗，处理方法：检查样品池能量，若低于正常值，说明检测器污染。
5.柱压变动范围较大，处理方法：多为进气泡。
高低流速交替冲洗。
6.柱效或峰形突然变差，处理方法：更换预柱。
7塔板数低：色谱柱选择不对，二次保留、峰形不好的影响8色谱柱易变性：色说柱选择不对，二次保留的影响9色谱柱寿命短：色谱柱选择不对，样品需预处理(PH 3或PH 7)10保留值变化：色谱柱平衡不够，流动相比例改变11出现新的干扰峰：初始分离不够或初始样品无代表性选择波长要从以下几个方面考虑：1.检测波长要大于溶剂截止波长。
如果所选择的波长下溶剂有很强的吸收当然是不合适的。
溶剂有强吸收后，基线抬高，减小检测的线性范围而且会加大基线噪声，对溶质的检测灵敏度下降。
2.对各组分都要有适当的吸收。
一般是不可能做到的。
所以只要选择一个对大多数组分都有较大吸收的波长就可以了。
3.外标法定量时，要选择被测组份最大吸收波长。
254nm对常见的共轭结构和羰基官能团都有吸收。
对饱和基团也有弱的吸收。
而对于常见的乙腈、甲醇的透过率很高。
是在不知道用什么波长时最理想的试验波长。
(一)涡流扩散(Eddy diffusion)流动相碰到较大的固体颗粒，就像流水碰到石头一样产生涡流。
如果柱装填得不均匀，有的部分松散或有细沟，则流动相的速度就快；有的部位结块或装直紧密则流就慢，多条流路有快有慢，就使区带变宽。
因此，固相载体的颗粒要小而均匀，装柱要松紧均一，这样涡流扩散小，柱效率高。
(二)分子扩散(Molecular diffusion)分子扩散就是物质分子由浓度高的区域向浓度低的区域运动，也称纵向分子扩散。
高效液相色谱中异常峰分析
异常峰分析异常的色谱峰指的是色谱图中的无峰或出现负峰、宽峰、双峰、肩峰、峰形不对称等情况。
异常峰是色谱实验工作中最棘手的问题。
这些峰严重影响色谱分析的结果。
色谱图中不可能有纯正的高斯对称峰 , 轻微的拖尾是正常的 , 这是由分离系统所决定的。
在此仅对几种异常峰进行分析。
1.峰前或峰后有小峰的分析产生原因大致分为以下几种情形(1) 样品不纯。
可改变不同的流动相和色谱柱 ,对样品进行分离比较 , 选择合适的分离条件。
(2) 分析柱或保护柱柱头塌陷。
此情况较常见 ,可更换分析柱或保护柱后对峰形进行比较。
柱头塌陷时往往所有的峰都会出现峰分裂。
对色谱柱再生和清洗可以改善分离效果。
(3) 色谱柱柱容量下降。
当长时间使用后 , 有一些强保留组分吸附在柱子中 , 不大的进样量往往就会出现峰分裂。
用强洗脱能力的溶剂清洗色谱柱 , 或更换色谱柱可使问题得到改善。
(4) 样品溶剂与流动相不匹配或进样体积过大。
当样品溶剂比流动相极性大时 , 有时即使进样体积很小 , 也容易出现峰变形和裂分现象。
建议用流动相溶解样品。
(5) 流动相不恰当。
此情况较罕见 , 有些样品在特定的色谱条件下可能存在结构的动态平衡 , 而出双峰 , 这种双峰是无法分离完全的 , 改变色谱条件尤其是p H 值会使峰形正常。
(6) 样品分解。
不稳定的样品在色谱分离过程中变成其他物质而出现双峰。
这时需改变样品处理方法或色谱分离条件。
2.负峰分析在色谱分析中有时会出现负峰或倒峰 , 如图 3 中的大峰的左下就有一负峰。
出现这种现象可能是由以下几种原因引起的 , 可针对不同情况进行排除 , 进而使问题得到解决。
(1) 流动相吸收本底值过高。
此时可适当改变检测波长。
(2) 进样过程中进入空气。
进行排气处理 , 直到基线平稳再进样。
(3) 样品组分的吸收低于流动相。
可改变流动相或改变检测波长。
(4) 配制样品的溶液与流动相不一样。
重新配制样品 , 用与流动相一样的溶剂配制或稀释样品。
液相色谱基线出现有规律的峰
液相色谱基线出现有规律的峰
液相色谱基线出现有规律的峰可能有以下原因：
●色谱柱或检测器未平衡好。
氨基柱的平衡需要的时间比一般色谱
柱都要长一些。
●流动相比例发生变化。
混合器，比例阀出现故障。
●流动相，色谱柱污染。
●流动相缓冲盐因挥发或沉淀导致pH值发生变化。
●流速降低。
重新设定流速，检查仪器流速是否准确。
●系统漏液。
色谱柱接口，仪器接口，泵密封等发生漏液。
●柱温降低。
●泵、系统管路内有气泡产生。
●目标化合物不稳定，发生了变化。
液相色谱出现断头峰
液相色谱出现断头峰液相色谱出现断头峰的原因可能有以下几点：1.检测器或色谱柱未平衡：在进行分析之前，需要确保检测器和色谱柱已经充分平衡。
如果未平衡，可能会导致峰形异常或出现断裂。
2.流动相比例变化：流动相的比例变化可能导致色谱峰形异常。
需要检查流动相的配制和比例，确保其稳定性。
3.流动相污染：流动相受到污染或发生变质，也可能导致色谱峰形异常。
需要定期更换流动相，并进行清洁和过滤。
4.流速问题：流速的波动或不稳定可能导致色谱峰形断裂。
需要检查并确保流速的稳定。
5.系统漏液：色谱柱或管路漏液可能导致色谱峰形异常。
需要检查系统的密封性和连接处。
6.温度问题：色谱柱温度的波动可能导致色谱峰形异常。
需要确保色谱柱温度的稳定。
7.气泡问题：流动相中存在气泡可能导致色谱峰形异常。
需要检查并消除流动相中的气泡。
8.色谱柱故障：色谱柱出现故障或质量问题也可能导致色谱峰形断裂。
需要更换色谱柱或修复故障。
9.目标化合物不稳定：某些目标化合物在分析过程中不稳定，可能导致色谱峰形异常。
需要寻找更稳定的化合物或采用更合适的分析方法。
10.系统流路异常：如漏液、气泡、混合器比例阀故障等也可能导致色谱峰形异常。
需要检查系统的流路和各部件的工作状态。
为了解决液相色谱出现断头峰的问题，可以逐一排查上述可能的原因，并根据具体情况采取相应的措施进行解决。
同时，建议在日常使用中定期维护和检查液相色谱系统，确保其正常运行和稳定性，以获得更好的分析结果。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
异常峰分析
异常的色谱峰指的是色谱图中的无峰或出现负峰、宽峰、双峰、肩峰、峰形不对称等情况。
异常峰是色谱实验工作中最棘手的问题。
这些峰严重影响色谱分析的结果。
色谱图中不可能有纯正的高斯对称峰 , 轻微的拖尾是正常的 , 这是由分离系统所决定的。
在此仅对几种异常峰进行分析。
1.峰前或峰后有小峰的分析
产生原因大致分为以下几种情形
(1) 样品不纯。
可改变不同的流动相和色谱柱 ,对样品进行分离比较 , 选择合适的分离条件。
(2) 分析柱或保护柱柱头塌陷。
此情况较常见 ,可更换分析柱或保护柱后对峰形进行比较。
柱头塌陷时往往所有的峰都会出现峰分裂。
对色谱柱再生和清洗可以改善分离效果。
(3) 色谱柱柱容量下降。
当长时间使用后 , 有一些强保留组分吸附在柱子中 , 不大的进样量往往就会出现峰分裂。
用强洗脱能力的溶剂清洗色谱柱 , 或更换色谱柱可使问题得到改善。
(4) 样品溶剂与流动相不匹配或进样体积过大。
当样品溶剂比流动相极性大时 , 有时即使进样体积很小 , 也容易出现峰变形和裂分现象。
建议用流动相溶解样品。
(5) 流动相不恰当。
此情况较罕见 , 有些样品在特定的色谱条件下可能存在结构的动态平衡 , 而出双峰 , 这种双峰是无法分离完全的 , 改变色谱条件尤其是p H 值会使峰形正常。
(6) 样品分解。
不稳定的样品在色谱分离过程中变成其他物质而出现双峰。
这时需改变样品处理方法或色谱分离条件。
2.负峰分析
在色谱分析中有时会出现负峰或倒峰 , 如图 3 中的大峰的左下就有一负峰。
出现这种现象可能是由以下几种原因引起的 , 可针对不同情况进行排除 , 进而使问题得到解决。
(1) 流动相吸收本底值过高。
此时可适当改变检测波长。
(2) 进样过程中进入空气。
进行排气处理 , 直到基线平稳再进样。
(3) 样品组分的吸收低于流动相。
可改变流动相或改变检测波长。
(4) 配制样品的溶液与流动相不一样。
重新配制样品 , 用与流动相一样的溶剂配制或稀释样品。
3.前沿、拖尾峰分析
拖尾：1 干扰峰，优化条件分离；2 色谱柱塌陷，更换色谱柱； 3 流动相pH 不合适，调节pH值；4 管路没有接好，存在较大的死体积，可以重新接一下。
前沿：1 溶剂选择不合适，选择合适的溶剂；2 样品过载，降低进样量； 3 柱温太低，升高柱温；4 色谱柱损坏，更换色谱柱；
图谱前沿和拖尾的原因主要是流动相选择不合适，可以相应调整流动相的极性，或者适当加入酸来调整，可以得到较好的改善。
一般来讲，酸碱在流动相中对于前沿和拖尾影响较大。
柱前沿是可能因为柱超载，拖尾是可能因为样品被污染，选择合适的流动相，调节好PH能够改善这以情况。
前辈们总是会告诉我们，拖尾峰与柱子有关，可能是过载，稀释样品再做，或换新柱做。
有时候托尾峰往往是有机性相近杂质没有分开，此时，可以优化分析方法，或更换柱子试一试；也可能由于柱子使用时间太久柱效下降出现塌陷等原
因；再有也会根样品本身性质有关，基团需要流动相中添加能与之结合优化峰形的化学物质，要根据具体情况而定。
4.色谱双峰产生的可能及判断和处理
液相上有一句经典的话说得好“出两个峰肯定不是一种物质，出一个峰不一定是一种物质”。
而色谱双峰指的是明是一种物质，但在色谱图中出现双峰，而表明含二种物质。
我将这种情况分为四种原因。
1）色谱柱
如果你分析样品时发现每个色谱峰都双峰出现（出峰越快，双峰的可能性会减少），尤其采用单一纯物质时，可以肯定色谱柱出问题－柱头受损或柱头固定相变脏或流失。
如果进样量少，原来色谱柱正常，色谱峰的形状多为一大峰带一小峰，不一定拖尾，这一般应是柱头受堵，将色谱柱反过来接，用流动相冲洗或酸洗或其它溶剂，将堵在柱头的残留物冲掉，再反过来，一般情况下就行了。
当然不反冲，正冲有时也会正常的。
如果峰拖尾，双峰强弱相差不大，柱头固定相变脏或流失可能性更大，高频红外碳硫分析仪这是可以将进样那头拧开，将微孔滤片超声，柱头刮去一部分填料，重新填上新填料拧紧，不过这种活，需要一定技术，同时不能老干那种事，否则用不了几次，色谱柱就会应柱效很低而报废。
2）溶剂极性及进样量
许多HPLC分析者对此可能不以为然，一般的HPLC的书籍和文献都不会提到这方面的内容，而这确是双峰产生的一个很重要的原因。
目前HPLC分析多为反相色谱，流动相多为甲醇、乙腈、水，加各种添加剂以改善分离性能。
样品一般用与流动相相溶的溶剂溶解。
最佳的溶解方法是用流动相溶解，但是很多情况是不一致的。
当用溶剂极性强度大的试剂，如纯甲醇、纯乙腈，纯乙醇，而分析体系中以水为主，样品进样量大，如定量管为20ul，此条件下完全可以肯定，单一的纯物质出双峰，第二峰比第一峰小（每次都不太一样），且拖尾，保留时间会提前（相对进样量少而言），将进样量减少一半以上，峰型将变为正常。
这是样品的溶剂与流动相极性相差太大，而流动相来不及将其稀释达到平衡造成的。
上面提到进样量造成双峰的一个原因，另一个原因是，进样量不一定大，但绝对量很大，色谱图上的双峰紧靠在一起，基本上齐高，不拖尾（如果出峰很快，也可能是色谱柱问题）。
将样品稀释再进样就可以了，这是由于进样量过大，色谱柱过载造成的。
3）样品的特性
有些样品由于其化学结构的特点，存在互变异构现象，而这种互变异构体无法分开，而是以一个动态平衡存在。
在色谱分析时，在一个特定的条件下，一种物质将出现双峰，双峰靠的很近，基本齐高，不拖尾，条件稍一变化，尤其pH，双峰现象将消失，如红霉素等。
有的样品紫外的色谱图上看不到双峰，但在LC－
MS下，用质谱检测器，其质谱的总离子流图上较明显，例如我分析过的农药啶虫眯（吡虫清）。
4）参数
记录的参数一般都内定的，不必修改，但GC和HPLC的参数是不完全一致的，例如C－R3A数据记录仪上的一般记录时间间隔GC为2ms，HPLC 为5ms，如果记录间隔时间缩短，一个峰将变为二个峰或更多。
5.鬼峰、倒峰、未出峰
6.峰裂分
裂峰产生原因的确定
•样品基质复杂或分析多种样品——柱污染或部分阻塞滤片
•流动相 pH>=7——由于硅胶溶解导致柱塌陷(除非使用专门的柱子)
•溶剂比流动相的强度大——可能产生裂峰或宽峰，由样品量决定（溶剂化效应）
7.峰拖尾、峰展宽、峰前伸
峰拖尾原因的确定
•评价柱选择——使用高纯度硅胶柱或不同键合技术柱
•评价流动相效果——改变流动相pH和添加剂消除次级效应(流动相中组份与柱子相互作用)
•减小进样量
•消除柱外效应
•冲洗柱子——检查柱子老化/塌陷
易记小卡片来了：其它常见峰异常问题汇总
Q&A峰问答
进行HPLC分析时，怎样才能知道某一个色谱峰是否是单一峰呢？特别是分析中药成分的时候？标准品加入法、DAD、还有改变流动相的组成是否能说明呢？
1、多种不同原理的方法比较是首选。
2、其次采用DAD检测器进行光谱分析，如果提示不纯，估计有问题。
纯度阈值受仪器、流动相等影响，所以只能作为参考。
对于分子结构中差异有紫外吸收官能团的，dad检测器一般还是可以准确判断峰纯度的，但对于结构中无紫外吸收的那些差异，DAD检测器就无能为力了，比如某肽链中的氨基酸差异、或者一些对应异构体，dad也是无能为力的。
3、如果DAD不行，那么就需要采用质谱鉴别了，优选液质联用，如果是含盐流动相，可以采用收集不同时段的色谱流出物的方式，脱盐，进行质谱检测。
4、如果怀疑有异构体，这个就比较头疼了，非对应异构体需要二级（主要是对CID的能量有要求，可以打断侧链）的质谱才能判断侧链的区别。
对应异构体的辨别目前好像只有waters的离子淌度质谱（没做过）有一定的分辨能力，但也不是万能的。
所以峰纯度判定需要结合化合物及可能杂质的结构特点，来合理选择。