抗酸染色镜检的操作规程

抗酸染色镜检的操作规程

1.目的:通过抗酸染色鉴别结核杆菌.

2.原理:一般认为抗酸性菌体内含脂类物质较多,此物质具有抗酸的性质.染色时,它与石碳酸复红结合牢固,能抵抗酸性酒精的脱色作用,同时脂类又不易透过细胞膜,不能被脱色,因此抗酸菌能保持复红的颜色.相反,非抗酸性菌体内含脂类少,易被酸性酒精脱色,脱色时又易从细胞膜渗出而脱掉,最后被复染蓝色.

3.试剂:

3.1试剂来源:购买珠海贝索

3.2试剂盒组成:

R1:石碳酸复红溶液1χ100ml R2:酸性酒精溶液1χ100ml

R3:亚甲基蓝溶液1χ100ml

4.质量控制:室内质控包括痰标本收集,痰片染色和镜检结果复查.痰涂片应保存供上一级参比实验室质量控制检查.

5.标本采集与处理:

5.1病人留标本前用清水漱口,用力咳出来自支气管深部的脓样或粘液样痰,量不少于3ml避免留唾液或鼻咽部分泌物.

5.2夜间痰为就诊前一天晚睡前咳出的痰液.

5.3初诊病人应送3份痰标本(夜间痰、清晨痰和即时痰),痰液不合格者重送.

5.4涂片:取脱脂过的干燥、清洁、无油污的新玻片，在玻片背面的左端1/3处以记号笔编号,用折断的竹签挑取痰标本的脓样,干酪样0.1ML,于玻片上均匀涂抹成2ⅹ2.5CM卵圆形痰膜,自然干燥后待检.

6.染色方法:

6.1用片夹夹住涂片火焰固定,加石碳酸复红溶液,徐徐加热至有蒸汽出现染5分钟,水洗.

6.2加脱色剂,不时摇动玻片至无色脱落为止,水洗.

6.3加复染液,染0.5-1分钟,水洗涂片后镜检.

滴1-2滴香柏油,用油镜仔细观察.

8.结果的判断:结核杆菌呈红色,其它细菌呈蓝色.

9.实验完后的处理:

9.1先用擦镜纸将镜头上的油擦去,再用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2-3次,最后用干净擦镜纸擦2-3次,向一个方向擦拭。

9.2废弃玻片放入5% 84消毒液中浸泡60分钟,消毒液要每天更换。

9.3痰盒和废弃标本等污染物应弃于有盖的污物桶内,消毒后焚烧。

9.4痰检完成后,操作台面用5% 84消毒剂 液擦拭后,紫外线灭菌灯照射30分钟。

10.注意事项:

10.1脱色时间不易过长,否则影响结果。

10.2为了提高检出率,可增加涂片厚度。

10.3一张玻片只可涂抹一份标本,不得清洗后再次使用。

10.4收到标本后,仔细核对标本和痰标本是否合格,随后按顺序编号,

及时检查和登记。

11.报告方式:

萋纳氏染色镜检结果分析报告标准:

抗酸菌阴性(-):连续观察300个不同视野,未发现抗酸杆菌。 抗酸杆菌阳性(实报抗酸菌数):1-8条抗酸杆菌/300视野。 抗酸杆菌阳性(1+):3-9条抗酸杆菌/100视野。

抗酸杆菌阳性(2+):1-9条抗酸杆菌/10视野。

抗酸杆菌阳性(3+):1-9条抗酸杆菌/每个视野。

抗酸杆菌阳性(4+):≥10条抗酸杆菌/每个视野。

12.临床意义:痰涂片找到抗酸杆菌常见于肺结核病。

(中华人民共和国卫生部医政司)