omga质粒提取试剂盒_说明书_翻译
质粒中提中文版(Omega)
中提质粒步骤材料准备：灭菌250或500mL三角瓶，托盘天平，5mL移液枪及枪头，卫生纸，废液缸，记号笔，50mL 圆底离心管，15mL尖底离心管步骤：1.集菌将100mL菌液分批倒入50mL圆底离心管中，室温12000rpm离心1min，弃流出液体，打开盖倒置吸水纸上控干。
2.加入2.5mL solution I（提前加入RNase，4℃保存），重悬细菌沉淀（可使用5mL移液枪吹打）。
3.加入2.5mL solution II，轻柔混匀（颠倒离心管7-10次），以获得清亮的裂解物，室温静置3-5min。
（此步主要是碱裂解细菌，使其中的蛋白质和DNA变性，反应时间不能太长，否则容易使大肠杆菌的基因组DNA断裂成小片段，污染质粒DNA）4.加入1.25mL Buffer N3，轻柔混匀（颠倒离心管7-10次），直至形成白色沉淀，室温静置2-3min。
5.4℃12000rpm离心10min，使白色沉淀沉于底部。
6.取出一个Lysate Clearance Filter Syringe，抽出活塞，小心将5中液体全部转移至注射器中（注射器可不放活塞直接直立于4中的离心管中，液体不会出来），室温静置2min。
7.将6中注射器放置于一新的15mL离心管，轻推注射器活塞，使液体流入离心管中。
8.加入0.1倍体积的ETR（约600uL）至过滤后的液体中，混匀（颠倒离心管7-10次），冰浴20min，期间颠倒离心管几次。
（此期间准备一个Hind-Bind DNA midi Column加入2mL GPS Buffer，室温静置10min，4000rpm离心5min）9.42℃温浴5min，溶菌液变浑浊，室温4000rpm离心5min，则ETR沉入底部。
10.小心将上层液体转移至一新的15或10mL离心管中，加入0.5倍体积的EtOH（约2.5mL），轻柔混颠倒5-6次，室温静置2min。
11.将10中液体加入柱子中，室温4000rpm离心5min，弃液体，重新装好柱子，直至液体全部滤过。
(完整版)OMEGAdna提取说明书
材料与仪器：离心机（至少14000g）、1.5ml或2ml无核酸酶离心管、水浴锅、无水乙醇、氯仿、异戊醇、无酶水。
试验之前：先用absolute ethanol稀释DNA Wash Buffer Concentrate,每瓶DNA Wash Buffer Concentrate加80ml（200份装）试验步骤：1.使用mortar和pestle在liquid nitrogen中研磨样品（不超过50毫克），放入1.5ml microcentrifuge tube。
2.加350ulBuffer ML1和25ul Proteinase K,涡旋混匀，60℃孵育（最少30分钟），大多数孵育不超过4小时或者37℃孵育1晚。
3.裂解产物加350ul氯仿和异戊醇的混合溶液（24:1），涡旋混匀。
10000g室温离心2min，转移上清液到1.5ml microcentrifuge tube，避免含有污染物和抑制剂的乳白色界面。
4.估计步骤3 supernatant体积，加等集体的Buffer MBL，涡旋15s混匀，70℃孵育10min。
5.加步骤3等体积的无水乙醇，涡旋15s混匀。
（tips:300ul上清液+300ul Buffer MBL+300ul absolute ethanol）6.把柱子和提供的2ml收集管装配好，加步骤5的溶液750ul，10000g 室内离心1min,倒掉被离心的液体，重复利用提供的2ml收集管。
7.把步骤5剩余的混合物按照步骤6的方法离心，但抛弃提供的2ml 收集管。
8.把柱子放在新的2ml收集管，加500ul HB Buffer,10000g，30s，第一次洗柱子。
9.重复利用2ml收集管，加700ul DNA Wash Buffer,10000g,1min,抛弃被离心的液体，重新利用2ml收集管。
10.重复步骤9，加700ul DNA Wash Buffer,室温15000g,2min（这一步关键是去除微量的乙醇，以防其感染下游的实验）。
OMEGArna提取试剂盒中文说明
E.Z.N.A. Total RNA Kit I (R6834-01 50 preps)步骤A ． 真核细胞和组织自己需要的材料：β－巯基乙醇、70％乙醇（DEPC 水配置）、除RNase 的枪头和EP 管。
材料的最佳量想得到最佳的产量和好的Hibind RNA 柱的纯化效果，选用正确的细胞和组织量是最重要的。
Hibind RNA 柱的最大处理量是可变的，根据细胞和组织的类型。
最大的结合能力是100ug 的RNA 。
TRK 裂解缓冲液的最大裂解能力是1*107个细胞或30mg 的组织。
细胞的步骤1． 用500ul 的TRK 裂解缓冲液裂解细胞（≤1*107），使细胞团松散，轻轻弹EP 管或者用枪头吹旋，再用漩涡振荡混匀。
a) 使用前每1ml TRK 裂解缓冲液加入20ul 的β－巯基乙醇。
b) 如果是单层的组织培养细胞（成纤维细胞，内皮细胞等），可以直接在细胞培养器里裂解细胞。
完全吸去培养基后直接加TRK 裂解缓冲液至细胞中。
加700ul 的TRK 到T35细颈瓶或10cm 的培养皿中，更小的培养器加500ul 的TRK 。
将液体布满整个器皿表面，确保细胞裂解完全。
将裂解产物转移至1.5mlEP 管中。
c) 如果细胞是悬液培养，收集细胞（≤1,500rpm or 400*g ）*5min ，弃上清，加入TRK裂解液，漩涡振荡混匀。
2． 匀浆化裂解产物“裂解和匀浆化样品”－第四页有详细的说明，如果细胞≤1*105，漩涡振荡1min 。
不完全使样品匀浆化会显著的减少RNA 的产量还容易造成柱子堵塞。
a) 用匀浆器30 s ，使样品匀浆化。
b) 用钝的针头的注射器（0.9mm 直径），至少吹打5次是样品匀浆化。
注射器要除RNase 。
3． 将匀浆后的裂解产物转移至Homogenization Spin Column 中，离心，≥1,4000*g, 3min,室温。
将离心收集的流出液转移到新的EP 管中。
OMEGA小提试剂盒提取质粒步骤(无内毒)
OMEGA小提试剂盒提取质粒步骤(中文翻译版)1、将携带目的质粒的大肠杆菌接种于含10~15ul基础培养基/氨苄西林培养介质的50ml培养瓶中。
2、室温下500×g离心10min。
3、弃去上清，剩余沉淀物中加入500ul的SolutionⅠ/RNase A，彻底混匀。
4、将混悬液移至新的2ml离心管中，加入500ul SolutionⅡ，轻柔彻底混匀，可得清亮的细菌裂解物，室温下孵育2min（混匀时用力过大，可破碎出染色体DNA，使目的质粒纯度下降）。
5、向4中液体加入250ul预冷的Buffer N3，轻柔、彻底混匀，直到出现白色絮状沉淀，4℃≥12000×g离心10min（可室温，最好4℃）（Buffer应彻底混匀，若混合物粘稠呈棕色或呈球状，应多混匀几次以中和溶液，溶液的彻底中和对于获得好的产出是必要的）。
6、小心吸取并将上清液转移进新的1.5ml离心管1：0.1的比例向上清液中加入ETR Solution 混匀溶液并于冰上孵育10min，孵育过程中颠倒几次以混匀（加入ETR Solution后，细菌裂解物将出现浑浊，但冰上孵育后将变澄清）（勿用2ml离心管收集上清，因为2ml离心管中有太多液体时，ETR Solution将悬浮于溶液中）。
7、将6中液体于42℃孵育5min，溶液将再次变浑。
室温下12000×g离心3min，ETR Solution 将于离心管底部形成蓝色层。
8、将上层水相转移入新的2ml离心管中，按1：0.5的比例加入无水乙醇（室温，96~100％），轻柔混匀，室温下孵育1~2min。
9、将8中的溶液取700ul到柱子中，组装收集管，室温下1000×g离心1min，弃去收集管中通过柱子的液体，柱子和收集管重复利用。
10、重复9中步骤，直到收集的细菌裂解物全部用完。
11、将500ul Buffer HB加入柱子中，室温下1000×g离心1min，弃去收集管中废液（目的：将残存的蛋白污染物除去，是获得高质量DNA所必需的）。
OMEGA小提试剂盒提取质粒步骤
OMEGA小提试剂盒提取质粒步骤以下是使用OMEGA小提试剂盒提取质粒的步骤：1. 打开Omega小提试剂盒，并将试剂瓶放置在室温下15-30分钟，以使其达到室温。
同时，将所需试剂加热至37°C，并准备其他必要的材料和试剂。
2.使用无菌技术，取出含有目标质粒的菌落并转移到15mL离心管中。
注射100-500µL的STET缓冲液（一种细胞裂解缓冲液）至离心管中。
3. 使用无菌技术，将质粒菌落悬浮液均匀涂布到2% Made by Omicron小鼠胚胎或其他适当的琼脂糖琼脂糖板（SD盘）上。
将板培养在37°C的培养箱中，24-48小时。
4.在培养后，用移液器或吸管轻轻吹气将质粒菌落悬浮液从SD盘转移到1.5mL（或2mL）离心管中。
5.离心细胞，以将固体与培养上清分离。
将离心条件设置为13,000×g，4°C，5分钟。
6.丢弃上清液并用1mLSTET缓冲液洗涤菌落。
在洗涤步骤中，轻轻上下振荡离心管，以确保洗涤液均匀地覆盖菌落。
7.离心细胞，以将液体与固体分离。
将离心条件设置为13,000×g，4°C，5分钟。
丢弃上清液。
8.重新悬浮菌落，使用约200-500µLSTET缓冲液，并轻轻振荡离心管，直到完全悬浮。
9. 取1.5 mL离心管中的样品，加入等体积的Lysis Buffer G2，并快速倒置混合，以完全裂解细胞，并将细胞内容物释放到溶解液中。
10. 加入等体积的N3 Buffer，并轻轻倒置混合，以中和裂解反应。
11. 加入等体积的G3 Buffer，并轻轻倒置混合。
此时，样品已经准备好进行DNA纯化。
请注意，上述步骤仅提供了OMEGA小提试剂盒提取质粒的基本步骤。
根据具体实验要求和试剂盒的使用说明，步骤可能会有所不同。
在开始实验之前，请仔细阅读并遵守试剂盒的使用说明。
omega质粒提取试剂盒原理
omega质粒提取试剂盒原理
omega质粒提取试剂盒是一种快速提取质粒的试剂盒，原理基于离心法和碱裂解法。
质粒提取步骤如下：
1.细菌菌落挑选：选择莱茵氏或理光法制备的菌落，接种到含有复性2倍YT培养基中的管中，温育至15-18小时，使生长到中期即可。
2.洗涤菌体：离心收集菌体细胞，使用TE液洗涤菌体，通过离心去除菌体细胞内部的杂质。
3.裂解细胞：用离心的菌体用Alkali Lysis Buffer裂解细胞。
使得细胞壁和细胞膜破裂，游离出细菌的质粒和基因组DNA。
此时保持碱性能稳定质粒。
4.中和试剂添加：使用HCl溶液中和裂解碱的催化活性，维持实验体系pH值在7.0左右。
5.离心收集DNA：用NaCl把DNA从碱性溶液中析出，并通过离心将DNA沉淀下来。
6.洗涤DNA：用乙醇洗涤钠盐，去除残留的离子，甘油可保持溶液中的DNA
稳定性。
7.重悬质粒：将去除干扰物后的纯质粒在TE缓冲液中重悬，即可用于下一步实验。
OMEGArna提取试剂盒中文说明
OMEGArna提取试剂盒中文说明E.Z.N.A. T otal RNA Kit I (R6834-01 50 preps)步骤A ．真核细胞和组织自己需要的材料：β－巯基乙醇、70％乙醇（DEPC 水配置）、除RNase 的枪头和EP 管。
材料的最佳量想得到最佳的产量和好的Hibind RNA 柱的纯化效果，选用正确的细胞和组织量是最重要的。
Hibind RNA 柱的最大处理量是可变的，根据细胞和组织的类型。
最大的结合能力是100ug 的RNA 。
TRK 裂解缓冲液的最大裂解能力是1*107个细胞或30mg 的组织。
细胞的步骤1．用500ul 的TRK 裂解缓冲液裂解细胞（≤1*107），使细胞团松散，轻轻弹EP 管或者用枪头吹旋，再用漩涡振荡混匀。
a) 使用前每1ml TRK 裂解缓冲液加入20ul 的β－巯基乙醇。
b) 如果是单层的组织培养细胞（成纤维细胞，内皮细胞等），可以直接在细胞培养器里裂解细胞。
完全吸去培养基后直接加TRK 裂解缓冲液至细胞中。
加700ul 的TRK 到T35细颈瓶或10cm 的培养皿中，更小的培养器加500ul 的TRK 。
将液体布满整个器皿表面，确保细胞裂解完全。
将裂解产物转移至1.5mlEP 管中。
c) 如果细胞是悬液培养，收集细胞（≤1,500rpm or 400*g ）*5min ，弃上清，加入TRK裂解液，漩涡振荡混匀。
2．匀浆化裂解产物“裂解和匀浆化样品”－第四页有详细的说明，如果细胞≤1*105，漩涡振荡1min 。
不完全使样品匀浆化会显著的减少RNA 的产量还容易造成柱子堵塞。
a) 用匀浆器30 s ，使样品匀浆化。
b) 用钝的针头的注射器（0.9mm 直径），至少吹打5次是样品匀浆化。
注射器要除RNase 。
3．将匀浆后的裂解产物转移至Homogenization Spin Column 中，离心，≥1,4000*g, 3min,室温。
将离心收集的流出液转移到新的EP 管中。
OMEGA小提试剂盒提取质粒步骤(中文翻译版)
质粒提取（小提，mini kit）1、将携带目的质粒的大肠杆菌接种于含10~15ul基础培养基/氨苄西林培养介质的50ml培养瓶中。
2、室温下5000×g离心10min。
3、弃去上清，剩余沉淀物中加入500ul的SolutionⅠ/RNase A，彻底混匀。
4、将混悬液移至新的2ml离心管中，加入500ul SolutionⅡ，轻柔彻底混匀，可得清亮的细菌裂解物，室温下孵育2min（混匀时用力过大，可破碎出染色体DNA，使目的质粒纯度下降）。
5、向4中液体加入250ul预冷的Buffer N3，轻柔、彻底混匀，直到出现白色絮状沉淀，4℃≥12000×g离心10min（可室温，最好4℃）（Buffer应彻底混匀，若混合物粘稠呈棕色或呈球状，应多混匀几次以中和溶液，溶液的彻底中和对于获得好的产出是必要的）。
6、小心吸取并将上清液转移进新的1.5ml离心管1：0.1的比例向上清液中加入ETR Solution 混匀溶液并于冰上孵育10min，孵育过程中颠倒几次以混匀（加入ETR Solution后，细菌裂解物将出现浑浊，但冰上孵育后将变澄清）（勿用2ml离心管收集上清，因为2ml离心管中有太多液体时，ETR Solution将悬浮于溶液中）。
7、将6中液体于42℃孵育5min，溶液将再次变浑。
室温下12000×g离心3min，ETR Solution将于离心管底部形成蓝色层。
8、将上层水相转移入新的2ml离心管中，按1：0.5的比例加入无水乙醇（室温，96~100％），轻柔混匀，室温下孵育1~2min。
9、将8中的溶液取700ul到柱子中，组装收集管，室温下1000×g离心1min，弃去收集管中通过柱子的液体，柱子和收集管重复利用。
10、重复9中步骤，直到收集的细菌裂解物全部用完。
11、将500ul Buffer HB加入柱子中，室温下10000×g离心1min，弃去收集管中废液（目的：将残存的蛋白污染物除去，是获得高质量DNA所必需的）。
OMEGA质粒提取试剂盒操作步骤
OMEGA质粒提取试剂盒操作步骤1．在10-20ml试管中,将携带有所需质粒的E。
coli接种到5ml LB培养基LB（含氨苄青霉素50μg/ml），37℃振荡培养12-16h。
需特别指出的是：endA阴性的E。
coli菌株用于常规质粒提取,如DH5α和JM109。
2．取1.5～5ml菌液室温10000×g离心1min3．去上清，加250µl溶液Ⅰ（含RNase A），涡漩振荡器震荡至菌体完全悬浮。
4．加入250µl溶液Ⅱ，温和颠倒离心管4~6次，获得澄清的裂解液。
最好室温孵育2min，剧烈混合会使剪切染色体DNA，降低质粒纯度。
（储存溶液Ⅱ应拧紧瓶盖)5．加350µl溶液Ⅲ，温和颠倒数次混合,至出现白色絮状沉淀6。
室温13000×g离心10min。
7．特别小心吸取上清，移至洁净的装配好容积2ml离心管的吸收柱中。
要保证没有吸入沉淀和细胞碎片。
室温10000×g离心1min，至裂解物完全通过吸收柱8．弃滤过液,加500µl Buffer HB,10000×g离心1min，清洗吸收柱，除去残余蛋白质保证DNA的纯度。
如果接下来的步骤对质粒纯度要求不高，如酶消化法等其它筛选方法,此步可省略9．弃滤过液，再用100％乙醇稀释的700µl Wash Buffer清洗吸收柱，10000×g离心1min.注意：Wash Buffer浓缩液用前必须用纯乙醇稀释，方法见标签,如果经过冷冻，用前必须恢复室温10．此步可选：再加700µl Wash Buffer清洗吸收柱11.必须将吸收柱13000×g离心2min确保乙醇被去除,乙醇会影响下面的步骤.12。
将吸收柱放入干净1.5ml离心管，加30—50µl（取决于需要的终浓度)无菌去离子水或TE缓冲液在滤膜上,13000×g离心1min,一次可洗脱75-80%附着DNA（可进行再洗脱，但会降低DNA浓度）。
omega质粒小提protocol
Omega 质粒小提试剂盒protocol主要试剂1. 使用前，将RNase A全部加入Solution I中并于4度保存。
2. 按下表用无水乙醇稀释DNA Wash Buffer，并于室温保存。
D6942-00: 加入6 ml无水乙醇D6942-01: 加入120 ml无水乙醇3. 按下表用异丙醇稀释HBC Buffer，并于室温保存。
D6942-00: 加入1.6 ml无水乙醇D6942-01: 加入16 ml无水乙醇D6942-02: 加入32 ml无水乙醇试剂配方及作用Solution I组分浓度25 mM Tris-HCl（pH8.0）,10 mM EDTA,50 mM 葡糖糖（Glucose）溶液1的主要作用是将菌体沉淀悬浮起来。
25mM Tris-HCl是缓冲溶液，保证反应体系的pH 恒定。
EDTA是金属离子螯合剂,10 mM EDTA的作用是与微生物体内的金属离子相互结合，抑制DNase的活性。
50 mM葡萄糖的作用是增加溶液的粘度，保证菌体悬浮，延缓菌体沉降的时间。
溶液1在使用前通常要加入RNA酶（RNase A）,RNA酶的作用很清楚，降解掉溶液中的RNA。
由于RNA酶属于蛋白质，蛋白质稳定性很差，所以加了RNase A的溶液1需要低温4℃保存。
Solution II组份浓度250 mM NaOH,1％（W/V）SDS（十二烷基硫酸钠）溶液2的主要作用是细胞裂解。
溶液1将细胞悬浮后,就需要添加溶液2了,溶液2的作用就是对细胞进行裂解。
溶液2只包括两种成分：氢氧化钠和SDS。
真正起到到细胞裂解作用的是氢氧化钠,这也是为什么这个方法会被叫做碱裂解法。
氢氧化钠会破坏细胞膜的结构,使之发生bilayer（双层膜）结构向micelle（微囊）结构的相变化,从而导致细胞的裂解。
SDS的作用将在下一步提到。
添加溶液2后需要注意的一个是时间一定不能过长,另一个是不可以剧烈震动离心管。
时间过长以及剧烈震动都将导致氢氧化钠破坏基因组DNA,断裂的基因组DNA碎片将会与相似大小质粒一同被抽提,污染样品。
质粒提取试剂盒说明书
Low copy-number plasmid used
No DNA eluted.
DNA W ash Buffer Concentrate not dilute d w ith ab so lute eth an ol. Ov er m ixin g o f ce ll lysate upon addition of So lutio n II. Trace con tam inan ts eluted from column increase A 2 6 0. RNase A not added to S olu tion I. Ethanol traces not co m ple tely removed from column following wash steps.
Low Copy-Number Plasmids
Low copy-number plasmids generally give 0.1-1:g DNA per ml overnight culture. For routine screening of recombinant clones, 10-15 ml culture should provide ample material for agarose gel visualization or restriction digest analysis. However, the method can be modified to essentially double the yield if necessary. Start with 15-25 ml bacterial culture, centrifuge for 10 min at 5,000 x g in a 50 ml centrifuge tube. Proceed to Step 3 (Page 8) and double the volumes of Solutions I, II, and Buffer N3. Continue as above using only one HiBind DNA Mini Column II per 15-25 ml culture. There is no need to increase the volumes of Buffer HB and DNA Wash Buffer used. Note: This method is not recommended for high copy number plasmids because above 15 ml culture, the HiBind® DNA Mini Column II quickly becomes saturated. In this situation we recommend processing of multiple samples from the same culture.
OMEGA质粒提取试剂盒操作步骤
OMEGA质粒提取试剂盒操作步骤1.预处理：将待测细菌液培养在含有适当抗性选择性的LB培养基中，并在适宜条件下培养至细菌达到对数期。
使用适当的离心参数和时间离心，使得细菌达到沉淀准备。
2.应激液制备：向OMEGA质粒提取试剂盒中的应激液瓶中加入8mL已过滤的异丙醇试剂A，并充分混合。
此时，应激液瓶中的液体会变成粉红色。
注意：应激液不能加入异丙醇试剂A之前。
3.柱洗液制备：向OMEGA质粒提取试剂盒中的柱洗液瓶中加入25mL已过滤的异丙醇试剂B，并充分混合。
此时，柱洗液瓶中的液体会变成黄色。
注意：柱洗液不能加入异丙醇试剂B之前。
4.提取液制备：将OMEGA质粒提取试剂盒中的提取液瓶取出，充分振荡混合，使其中的液体变为均匀的浑浊状态。
5.细菌沉淀：使用离心机将培养好的细菌培养物离心，设置好适当的离心参数和时间，使细菌达到沉淀。
6.破细胞：将上述离心后的细菌沉淀转移到50mL离心管中，加入10mL提取液，并用转粉棒均匀悬浮细菌。
细菌悬浮液较黏稠，加入提取液后需充分混匀。
7.混合物平衡：将OMEGA质粒提取试剂盒中的A离心管插入破细胞悬浮液，盖上盖子，轻轻翻转转动10次，使混合物均匀。
8.吸附：将A离心管放置于试剂离心机上，以最大转速离心3-5分钟，使质粒DNA吸附到离心管壁上。
离心后离心管内会有质粒DNA沉积在管壁上，上清液中几乎没有DNA。
9.液体除去：将上清液倒出（若有残留无形的DNA，不会影响测量质粒DNA浓度和纯度）。
10.洗涤：向吸附质粒DNA的A离心管中加入0.8mL柱洗液，并放入离心机中以最大转速离心1分钟将柱洗液完全通过。
注意：此步骤中重要的是将柱洗液完全通过以去除杂质。
11.干燥：向A离心管中加入0.8mL柱洗液（保险柱)，并通过离心室加热器以60℃加热干燥10-30分钟，使水分从柱中蒸发。
注意：此过程必须在脱水状态下进行。
12.质粒DNA洗脱：向A离心管中加入50μL的去离子水，并计时5分钟，使质粒DNA从固相柱上洗脱出来。
Omega真菌RNA提取试剂盒R6840说明书(中文翻译版)
实验概要Omega真菌RNA提取试剂盒中文说明书(E.Z.N.A. Fungal RNA Kit)。
实验前准备高速离心机、无核酸酶的微量离心管（DEPC灭菌EP管）、β-巯基乙醇、无水乙醇、液氮（冷冻/破碎样品）、灭菌的研钵、65℃预热的DEPC水（每个样品100μl）。
实验前要用DEPC浸泡过夜并高压灭菌的东西有：蓝枪头、黄枪头、白枪头、5ml枪头及各枪头盒，小瓶（用来装乙醇等），EP管、玻棒、纱布（用来过滤菌丝）。
研钵用锡纸包裹180℃烘箱6h。
1. 取适量RB裂解液，按1ml裂解液加入20ul 2-疏基乙醇。
该混合液可于室温放置一周。
2. 用DEPC水配置一小瓶70%乙醇。
3. 按下表用无水乙醇稀释RNA Wash Buffer II，并于室温保存。
R6840-00: 加入8ml无水乙醇R6840-01: 加入48ml无水乙醇R6840-02: 每瓶加入48ml无水乙醇实验步骤1. 称取50-100mg经液氮研磨成粉末状的真菌样品至1. 5ml离心管，立即加入500ul RB/2-Me, 剧烈涡旋。
2. 转移液体至匀浆柱（试剂盒中提供的绿色柱子）中。
大于13,000×g离心5min。
3. 转移收集管中的上清(注意不要吸到沉淀)至新离心管，加入0. 5倍体积无水乙醇或，涡旋混匀15秒。
这一步如果发现有沉淀用注射器吹打或上下震荡10-15次。
(一般可转移450ul的上清液，可加入225ul 无水乙醇)。
这一步如果发现有沉淀用注射器吹打或上下震荡10-15次。
4. 把RNA柱套在新收集管，转移所有的混合液（即使有沉淀）至RNA柱子。
室温10,000×g离心30秒，弃去滤液。
如果出现堵柱现象，提高离心速度至14, 000xg。
(可选)膜上DNase消化:1) 加入300ul RNA Wash Buffer I至柱子中，按上柱条件离心，弃滤液；2) 配制DNase消化液( Digestion Buffer，73.5ul；RNase-Free DNase I，1.5ul)，混匀。
质粒大量抽提试剂盒说明书
宁波保税区西区创业大道7号2C-1,315800, 电话：+86-574-86822306 传真：+86-574-26893101, sales@质粒大量抽提试剂盒使用说明书质粒大量抽提试剂盒使用说明书（（离心法离心法））产品编号 产品名称包装 DNAP002质粒大量抽提试剂盒（离心法）6×包装清单包装清单：：Solution Ⅰ（溶液Ⅰ） 60ml Solution Ⅱ（溶液Ⅱ） 60ml Solution Ⅲ（溶液 Ⅲ） 84ml Wash Solution （冲洗液） 21ml Elution Buffer （洗脱液）9ml Affinity Column （质粒纯化柱）6个 Collection Tube （废液收集管） 6个 Instrution （说明书）1份操作步骤操作步骤：：1. 取40ml 过夜培养菌液，放于Collection Tube 中，11,000－13,000rpm 离心2分钟，离心速度低时应适当延长离心时间。
2. 弃上清，再加入40ml 菌液，重复步骤1。
弃上清，离心1分钟，用吸头吸干多余液体。
3. 加10 ml 含RNase A 的Solution Ⅰ，用吸头冲打沉淀或用振荡器使菌体充分混悬。
4. 加10 ml Solution Ⅱ，上下翻转混合6－10次，使菌体充分裂解，形成清亮溶液。
5. 加14 ml Solution Ⅲ，上下翻转混合6－10次，于4℃静置10分钟，应见大量白色沉淀生成。
6. 于4℃，11,000rpm 离心30分钟。
离心期间，将Affinity Column 放在Collection Tube 中。
7. 将上清倒入准备好的Affinity Column 中，11,000 rpm 离心2分钟。
也可将过柱液重新倒回AffinityColumn 中，11,000 rpm 离心2分钟，以增加回收率。
8. 弃过柱液，加8.4ml Wash Solution 于Affinity Column 中，11,000 rpm 离心2分钟。
OMEGA无内毒素质粒中提试剂盒中文说明书
E.Z.N.A. Fastfiler Endo-free Plasmid Maxiprep Protocol(OMEGA无内毒素质粒中提)依据该程序可从30-50ml过夜培养物中纯化100-250ug高拷贝数质粒或10-100ug低拷贝数质粒。
若要提高低拷贝质粒的产量，请第8页“Low Copy-Number Plasmids protocol”操作。
■细菌培养：1. 于200-400的培养瓶中加入30-50 LB培养基/AMP或KAN（50ug/ml）,然后接种含所需质粒的菌种于37℃摇床培养12-16小时；使用过夜培养物（0.3-0.5ml）可以获得最佳的结果。
强烈推荐使用E.coli(endA-)菌株用于常规的质粒提取，如DH5a和JM109。
细菌达到最佳生长条件对获得最高质粒DNA产量至关重要。
从新鲜转化平板或新鲜平板挑取单菌落接种于2-5ml含相应抗生素的初始培养基内，于37℃振荡培养（约300rpm）约8小时。
然后接种到合适体积的含相应抗生素预热好的液体培养基中。
于37℃振荡培养（约300rpm）12-16小时。
使用3-4倍于培养物体积的三角瓶或其它容器并以1/500-1/1000的比例稀释初始培养物到生长培养基。
这样可又获得最佳培养条件。
过夜培养后，OD600达1.5-2.0提示为较好的培养物。
建议每批培养物都测下OD600值可以得到最佳的结果。
稀释细菌培养物（10-20倍）使其分光光度测量值在OD6000.1-0.5范围内呈线形变化，该步也具有重要意义。
我们推荐细菌密度在OD6002.0-3.0之间。
若使用非营养丰富培养基，一定要确保细胞浓度不要超过OD600 3.0。
如果使用甘油冻存的菌种作接种物，则应在含有相应抗生素的琼脂糖平板上划线培养以获取间菌落。
然后按照上面步骤挑取单菌落接种于2-5ml初始培养基内。
■碱性SDS溶液裂解细菌：2. 收集20-50ml培养基至适当的离心管，室温3,500-5,000×g离心10分钟；3. 倒去或吸取培养基并弃去。
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omgaE.Z.N.A.质粒试剂盒操作规程说明书（译版）
1. 自新鲜划痕选择培养板中分离单菌落，接种含适当选择性抗生素的2-5ml的LB或YT培养基进行培养。
37℃强力摇动（~300rpm）孵育20-24h。
使用10-20ml培养管或容量至少4倍于培养容积的培养瓶。
强烈推荐使用endA阴性大肠杆菌菌株进行常规质粒分离。
此类菌株包括DH5α和JM109。
2. 将1.5-5.0ml细菌菌液室温13,000 g离心3min。
轻轻倒出或吸走培养基并丢弃。
3. 加入200μl 的溶液Buffer T 1/Rnase A重悬沉淀，涡旋或用移液器反复吹打。
充分重悬沉淀对于获得高质量的DNA非常重要。
4. 加入200μl溶液Buffer T 2，倒置、转动试管5-10次使之轻轻混匀，得到透明的裂解产物。
室温孵育5min。
不要用力混合，以免使染色体DNA断裂，减低质粒的纯度。
该步反应不要超过5min。
溶液II不用时要拧紧瓶盖，以免试剂被空气中的CO2酸化。
5. 加入200μl溶液Buffer T 3，立即倒置试管15-20次混匀，直至白色絮状沉淀物形成。
冰上孵育5min。
为避免形成局部沉淀，加入溶液III后应立即、充分混匀溶液。
6. 4℃13,000 g离心10分钟。
白色沉淀物形成，立即进行下一步操作。
7. 小心翼翼的吸取上清液，加入到新的1.5ml离心管（不是试剂盒提供的）中。
加入200ul 用异丙醇稀释的BAC 结合液（缓冲液），颠倒3-5次充分混匀。
BAC 结合液使用前必须用96%-100%的异丙醇稀释，详细的说明见瓶壁或第三页说明书
8.加入样本DNA（HiBind DNA MicroElute）到提供的2ml收集管中。
9. 室温8000g离心30s，丢弃收集管，将离心柱放入新的收集管中。
10. 将收集柱放回收集管并加入750ul SPM buffer（用乙醇稀释），室温8000g离心30s，丢弃收集管，将离心柱放入新的收集管中。
11. 将空柱子以最大速度离心2min，使柱子的基质干燥。
此步骤为关键操作，不可遗漏。
12. 将柱子放入干净的1.5ml微量离心管中。
将20-50μl（取决于终产物的期望浓度）洗脱液（Elution Buffer）或无菌去离子水直接加入柱子基质上，使之于室温下静置5min。
13.最大速度离心2min洗脱DNA。
可以进行二次洗脱，以收集残存的DNA。
14. -20℃保存洗脱的DNA。
15. DNA的产量和质量：分别在波长260nm和280nm处测定样品适当稀释液的吸光度。
DNA的浓度计算如下：
DNA浓度=A260×50×（稀释倍数）μg/ml
A260/A280的比率可以反映核酸的纯度。
比值大于1.8表明核算的纯度在90%以上。
或者，DNA的产量（及质量）有时可以通过琼脂糖胶/溴乙锭电泳与已知浓度的DNA样品相比较更好的予以确定。
通常情况下洗脱的大部分DNA是超螺旋单体形式，但也可能存在串联体形式。
适用于BACs，PACs，P1s和质粒分离步骤（标准）（D2156-00，D2156-01，D2156-02）彭伟翻译。