病毒病的生物防治.ppt
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② 通过高温处理获得弱毒苗
将带毒植株或某一部分组织在一定的高温下处理一定 时间，然后对处理过的植株或组织进行实验室检定，用 不同方法将已确认的弱毒株接种到无病的健康株上，使 植株得到保护。
③ 用化学诱变获得弱毒株系
张秀华等(1980)用提纯的番茄花叶病毒或粗 提病毒悬液2ml，加1ml 4mol/LNaNO2和1mol/L 醋酸盐缓冲液(pH4.0)1ml，使混合液pH维持4.3; 处理10～20分钟。
转外壳蛋白基因的病毒：
TMV 苜蓿花叶病毒(AlMV) 黄瓜花叶病毒(CMV) 烟草脆裂病毒(TRV) 马铃薯X病毒(PVX) 马铃薯Y病毒(PVY) 大豆花叶病毒(SMV)等
在烟草、番茄、马铃薯和大豆中得到表达， 这些转基因植株都获得了阻止或延迟相关病毒病 发生的能力。北京大学也用这种方法，成功地获 得了抗病的优质香料烟品种(贾士荣等，1993) 。
％。 Rast(1972)用亚硝酸处理番茄花叶病毒(Tomato Mosaic Virus，ToMV)获得了MII-16弱株系，美国的
Tomlinson等(1978)，应用HNO2诱变得到的花椰菜花叶 病毒的弱毒分离物V3对强毒株有良好的保护作用。
上世纪80年代， Moline等(1983)应用番茄不孕病毒
如烟草感染了烟草花叶病毒(TMV)的 绿色株系后，再接种ＴＭＶ的黄色株系， 就不能产生黄色株系的症状(Thung，Ｔ. Ｈ.，1931;Singh，Ｒ.Ｐ.etal，1970)。如 花椰菜花叶病毒(CaMV)的3个弱株系ＣＭ 4-184、ＰＫ和Ｖ3对强株系NVRS具有保护 作用(Tomlinson，Ｊ.Ａ. etal，1978)。
交互保护作用本质上是病毒之间的相生相克，从
而为病毒病的防治开辟了新途径。
2. 发展过程
在烟草病毒上首先发现交互保护作用 (Mckinney， Ｈ.Ｈ.，1929)，现已证明很多植物病毒有这种交互保护 作用。
上世纪60年代，日本、欧洲研究了使用弱毒疫苗防 治植物病害。
上世纪70年代，日本用高温诱变的番茄花叶病毒L11 系列的弱毒疫苗用用于防治该病毒病，在日本已成为番 茄病毒病常规防病措施，一般可增产10％以上，高达95
第七章 病毒病的生物防治
吴云锋
第一节 交互保护作用
一、概述
1. 概念
交互保护作用(cross‐protection)： 即如果有机体已感染了一种病毒或病毒株系后，对其
它病毒或病毒株系的侵害产生抑制作用。 先感染的病毒叫保护株系(protecting strain)，为
弱株系，致病力弱，对寄主影响小。而后侵入的病毒叫 攻击株系(challenge strain)，为强株系，具强致病力， 严重为害寄主。
处理完毕后，以0.066mol/L磷酸盐缓冲液 (pH7.0)稀释50～100倍，使反应液pH中和到7.0 以终止反应。然后经实验室反复接种试验，确诊 后，分离得到弱毒株系。再经田间试验，认为有 明显的交叉保护作用的就可大面积推广应用。
原理：HNO2处理引起碱基脱胺，使腺嘌呤 变为次黄嘌呤，鸟嘌呤为黄嘌呤，胞嘧啶变为尿 嘧啶，从而改变病毒核酸的遗传密码，使病毒产 生变异。
b. 转入病毒的卫星RNA基因，而使植株得到 保护。
1986年，英国科学家Harrison等首次 将CMV的卫星RNA反转录成cDNA，然后转 进植物中，获得了抗CMV的转基因植株。
马铃薯纺锤块茎病毒(PSV)温和株系
黄瓜花叶病毒（CMV）基因组和卫星RNA混合组成 CMV-S52生防制剂。在番茄和辣椒苗期接种，防治效果 分别为75.5%～100%和81.1%～82.7%，并促进增产和 早熟。
烟草花叶病毒卫星核糖核酸制剂S52和S54防治TMV。
3. 作用特点
（1）发生于同种病毒的株系间，RNA病毒或 DNA病毒，这种情况较为普遍。
4. 弱毒株系的获得
① 从病毒危害严重的田间植株中获得
在被害群体中生长最好的植株就最有可能为弱毒株 系。这一现象在柑桔等多年生的植物并由虫媒传播的病 毒病中较普遍。将这些健康的植株作为候选树，在实验 室试验检定确认是弱毒株系后，就可嫁接(或通过其它方 法)到无病的实生植株上，进行保护，从而得到被保护的 植株。如柑桔衰退病毒病的弱毒系就是如此获得。
（2.）发生于不同的病毒间。
如烟草蚀纹病毒(TEV)对马铃薯Ｘ病毒(PVX)具保护 作用(Kassanis，Ｂ. etal，1945)；
（3） 发生于类病毒之间。
如马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTV)弱株系对强株系产 生抵制作用(Fernow，Ｋ.Ｈ.，1967;Niblett，Ｃ.Ｌ. etal， 1979;Singh，Ｒ.Ｐ. etal，1989)；
(Tomato Aspermy Virus)的一个弱株系成功抵制了强株系。
我国田波等（1985）用化学诱变（HNO2）方法获 得烟草花叶病毒引起条斑病弱毒株系N14。
在长春、兰州、济南、上海、杭州五个城市进行防 治番茄花叶病的小区试验，证实了N14有防病作用，还 能促进果实早熟。
另外，
番木瓜环斑病毒(PRV)
（4）发生于原生质体之中。
如悬钩子环斑病毒(RRV)Ｓ株系接种于烟草原生质体 12小时后，对再接种的Ｅ株系产生排斥反应(Barhey，Ｈ. etal，1978)。
但并不是所有病毒或病毒株系间都可发生交互保护 作用。如甜菜曲顶病毒(BtCTV)株系间(Bennett，Ｃ.Ｗ.， 1955)、玉米矮缩花叶病毒(MDMV)株系间(Paulsen，Ａ. Ｑ. etal，1970)就没有这种作用。
பைடு நூலகம்
④ 用生物技术获得
a. 用生物技术将外壳蛋白基因(CP)导入植株得到 保护植株。
1985年美国科学家Beachy等就用类似交叉 保护的方法将病毒的外壳蛋白基因转入植物基因 中，从而使植株免受强毒系的再感染而得到保护。
至1986年，他们将烟草花叶病毒(TMV)1株 的外壳蛋白基因cDNA转入烟草细胞，转基因植物 及其后代都高水平地表达了外壳蛋白，这些植物 有明显的抗病性，甚至还可以有效地减轻和延缓 另一种相关的强毒株系为害的症状，转基因番茄 只有约5%的植株发病，几乎不减产，而对照植 株的发病率为99%，产量损失达26%～35。
将带毒植株或某一部分组织在一定的高温下处理一定 时间，然后对处理过的植株或组织进行实验室检定，用 不同方法将已确认的弱毒株接种到无病的健康株上，使 植株得到保护。
③ 用化学诱变获得弱毒株系
张秀华等(1980)用提纯的番茄花叶病毒或粗 提病毒悬液2ml，加1ml 4mol/LNaNO2和1mol/L 醋酸盐缓冲液(pH4.0)1ml，使混合液pH维持4.3; 处理10～20分钟。
转外壳蛋白基因的病毒：
TMV 苜蓿花叶病毒(AlMV) 黄瓜花叶病毒(CMV) 烟草脆裂病毒(TRV) 马铃薯X病毒(PVX) 马铃薯Y病毒(PVY) 大豆花叶病毒(SMV)等
在烟草、番茄、马铃薯和大豆中得到表达， 这些转基因植株都获得了阻止或延迟相关病毒病 发生的能力。北京大学也用这种方法，成功地获 得了抗病的优质香料烟品种(贾士荣等，1993) 。
％。 Rast(1972)用亚硝酸处理番茄花叶病毒(Tomato Mosaic Virus，ToMV)获得了MII-16弱株系，美国的
Tomlinson等(1978)，应用HNO2诱变得到的花椰菜花叶 病毒的弱毒分离物V3对强毒株有良好的保护作用。
上世纪80年代， Moline等(1983)应用番茄不孕病毒
如烟草感染了烟草花叶病毒(TMV)的 绿色株系后，再接种ＴＭＶ的黄色株系， 就不能产生黄色株系的症状(Thung，Ｔ. Ｈ.，1931;Singh，Ｒ.Ｐ.etal，1970)。如 花椰菜花叶病毒(CaMV)的3个弱株系ＣＭ 4-184、ＰＫ和Ｖ3对强株系NVRS具有保护 作用(Tomlinson，Ｊ.Ａ. etal，1978)。
交互保护作用本质上是病毒之间的相生相克，从
而为病毒病的防治开辟了新途径。
2. 发展过程
在烟草病毒上首先发现交互保护作用 (Mckinney， Ｈ.Ｈ.，1929)，现已证明很多植物病毒有这种交互保护 作用。
上世纪60年代，日本、欧洲研究了使用弱毒疫苗防 治植物病害。
上世纪70年代，日本用高温诱变的番茄花叶病毒L11 系列的弱毒疫苗用用于防治该病毒病，在日本已成为番 茄病毒病常规防病措施，一般可增产10％以上，高达95
第七章 病毒病的生物防治
吴云锋
第一节 交互保护作用
一、概述
1. 概念
交互保护作用(cross‐protection)： 即如果有机体已感染了一种病毒或病毒株系后，对其
它病毒或病毒株系的侵害产生抑制作用。 先感染的病毒叫保护株系(protecting strain)，为
弱株系，致病力弱，对寄主影响小。而后侵入的病毒叫 攻击株系(challenge strain)，为强株系，具强致病力， 严重为害寄主。
处理完毕后，以0.066mol/L磷酸盐缓冲液 (pH7.0)稀释50～100倍，使反应液pH中和到7.0 以终止反应。然后经实验室反复接种试验，确诊 后，分离得到弱毒株系。再经田间试验，认为有 明显的交叉保护作用的就可大面积推广应用。
原理：HNO2处理引起碱基脱胺，使腺嘌呤 变为次黄嘌呤，鸟嘌呤为黄嘌呤，胞嘧啶变为尿 嘧啶，从而改变病毒核酸的遗传密码，使病毒产 生变异。
b. 转入病毒的卫星RNA基因，而使植株得到 保护。
1986年，英国科学家Harrison等首次 将CMV的卫星RNA反转录成cDNA，然后转 进植物中，获得了抗CMV的转基因植株。
马铃薯纺锤块茎病毒(PSV)温和株系
黄瓜花叶病毒（CMV）基因组和卫星RNA混合组成 CMV-S52生防制剂。在番茄和辣椒苗期接种，防治效果 分别为75.5%～100%和81.1%～82.7%，并促进增产和 早熟。
烟草花叶病毒卫星核糖核酸制剂S52和S54防治TMV。
3. 作用特点
（1）发生于同种病毒的株系间，RNA病毒或 DNA病毒，这种情况较为普遍。
4. 弱毒株系的获得
① 从病毒危害严重的田间植株中获得
在被害群体中生长最好的植株就最有可能为弱毒株 系。这一现象在柑桔等多年生的植物并由虫媒传播的病 毒病中较普遍。将这些健康的植株作为候选树，在实验 室试验检定确认是弱毒株系后，就可嫁接(或通过其它方 法)到无病的实生植株上，进行保护，从而得到被保护的 植株。如柑桔衰退病毒病的弱毒系就是如此获得。
（2.）发生于不同的病毒间。
如烟草蚀纹病毒(TEV)对马铃薯Ｘ病毒(PVX)具保护 作用(Kassanis，Ｂ. etal，1945)；
（3） 发生于类病毒之间。
如马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTV)弱株系对强株系产 生抵制作用(Fernow，Ｋ.Ｈ.，1967;Niblett，Ｃ.Ｌ. etal， 1979;Singh，Ｒ.Ｐ. etal，1989)；
(Tomato Aspermy Virus)的一个弱株系成功抵制了强株系。
我国田波等（1985）用化学诱变（HNO2）方法获 得烟草花叶病毒引起条斑病弱毒株系N14。
在长春、兰州、济南、上海、杭州五个城市进行防 治番茄花叶病的小区试验，证实了N14有防病作用，还 能促进果实早熟。
另外，
番木瓜环斑病毒(PRV)
（4）发生于原生质体之中。
如悬钩子环斑病毒(RRV)Ｓ株系接种于烟草原生质体 12小时后，对再接种的Ｅ株系产生排斥反应(Barhey，Ｈ. etal，1978)。
但并不是所有病毒或病毒株系间都可发生交互保护 作用。如甜菜曲顶病毒(BtCTV)株系间(Bennett，Ｃ.Ｗ.， 1955)、玉米矮缩花叶病毒(MDMV)株系间(Paulsen，Ａ. Ｑ. etal，1970)就没有这种作用。
பைடு நூலகம்
④ 用生物技术获得
a. 用生物技术将外壳蛋白基因(CP)导入植株得到 保护植株。
1985年美国科学家Beachy等就用类似交叉 保护的方法将病毒的外壳蛋白基因转入植物基因 中，从而使植株免受强毒系的再感染而得到保护。
至1986年，他们将烟草花叶病毒(TMV)1株 的外壳蛋白基因cDNA转入烟草细胞，转基因植物 及其后代都高水平地表达了外壳蛋白，这些植物 有明显的抗病性，甚至还可以有效地减轻和延缓 另一种相关的强毒株系为害的症状，转基因番茄 只有约5%的植株发病，几乎不减产，而对照植 株的发病率为99%，产量损失达26%～35。