血小板分析仪原理
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比浊法(光学法)
原理:
将富血小板血浆(PRP)置于比色管中,加入诱聚剂(主要有ADP、肾上腺素,胶原,凝血酶、花生四烯酸、TXA2,PAF等),用一涂硅的小磁粒进行搅拌,血小板逐渐聚集,血浆浊度降低,透光度增加,记录此变化,形成血小板聚集的动态曲线,以PRP的聚集率和透光度为0%,乏血小板血浆(PPP)所测得的聚集率和透光度为100%,用血小板聚集仪进行自动测定、记录、描绘血小板聚集曲线
优点:
是目前应用最广的血小板聚集功能检测方法。
缺点:
检测结果重复性较差,cv值达到15%;
操作繁琐:必须分离贫血小板血浆、富血小板血浆,还需要调整血浆中血小板浓度;
溶血、高血脂样对检测有明显干扰;
检测样本去除血液主要细胞成份,不能完全反映体内真实的血小板聚集功能;
VerifyNow维梵纳抗血小板治疗检测仪[1](全血比浊法)
CHRONO700血小板聚集仪(美国Chrono-Log公司)
原理:
检测原理还是采用传统比浊法,没有本质突破,检测误差达15% (cv)优点:
无须制备血小板血浆的操作
术前血小板功能的快速筛选,全血/PRP/ATP释放检测
缺点:
耗材价格昂贵;
目前尚未在国内注册;
国外使用信息不多。
电极法
ChronoLog 590(美国ChronoLog公司)
简介:
590系列采用电阻法测血小板聚集,在全血中测血小板聚集功能,减少操作步骤节约了时间,反映了血小板的生理状态下的功能,具有重要的生理意义,可用于监测药物作用于血小板功能的功效,对相关血栓与止血药物的研究具有重要的意义。
原理:
可用全血或PRP进行检测。检测杯中有一对铂电极,血小板在诱导剂的诱导下发生聚集时,可覆盖在铂电极表面,导致电阻抗的改变,后者的变化程度与聚集程度有关。此信号经过放大传送到监测器或计算机上进行处理,将电阻抗的改变转换为聚集曲线从而计算出血小板的聚集率。
优点:
无需制备富血小板血浆的操作,使操作更简便省时,采血量仅为2ml ,完成操作仅需大约10 分钟。
全血中的其他血细胞同时存在,从而真正模拟了体内的生理环境
保存全部血小板,避免部分血小板因体积太大而在制备PRP时丢失对于脂血标本的检测,可以克服光学法检测时因过于浑浊而影响结果全血电阻聚集仪与光学法相比,检测高凝状态时的血小板功能更为敏感
全血电阻聚集是检测血小板高凝状态的更好办法,可鉴别产生血栓并发症的状况,在红细胞和白细胞存在的情况下,实验结果更敏感。缺点:
光学聚集仪耗时,对小聚集物的形成不敏感,,操作相对烦琐。
尚缺乏大量应用的经验。
检测结果质量不佳;电极反复使用,但用后清洗困难
血栓弹力图法
TEG5000(美国西芬斯)
简介:
是一种整个动态过程来监测凝血过程的分析仪。
原理:
使用全血作为检测标本
在体外加入高岭土激活,从而启动凝血机制,从内外源凝血系统的启动,纤维蛋白的形成,到血块溶解进行全程监测。
反映凝血机制中除血管内皮细胞和血管壁以外的所有凝血因素
优点:
TEG 能从一份血样完整地监测从凝血开始,至血凝块形成及纤维蛋白
溶解的全过程。对凝血因子、纤维蛋白原、血小板聚集功能以及纤维蛋白溶解等方面进行凝血全貌的检测和评估。结果不受肝素类物质的影响。15-20 分钟出结果,带有自动诊断功能。
TEG不需处理血样。
TEG能更为敏感的发现凝血异常
缺点:
检测耗时较长(20分钟/测试);
耗材价格昂贵;
检测结果重复性不高;
应用很少。
流式细胞法
BD流式细胞仪(BD公司FACSCalibur)
原理:
待测样本的细胞悬液在鞘液的包围和约束下细胞排成单列高速由流动室喷嘴喷出形成细胞液柱。当液柱通过检测区在入射的激光束照射下产生前向散射光FSC和侧向散射光SSC它们分别反映细胞大小和颗粒度根据这些特性可以将细胞分类。经一种或几种特殊荧光标记的样本,在激光束的激发下所产生的特定荧光可被光学系统检测并输送到计算机进行分析得到细胞相应的各种特性。
优点:
测量速度快、被测群体大、可进行多参数测量,即对同一个细胞做有关物理、生物化学特性的多参数测量,且在统计学上有效
缺点:
操作较复杂,需要人工标记血小板
仪器、试剂价格高昂
直接血小板连续检测法
PL-11 血小板分析仪[2,3](南京神州英诺华医疗科技有限公司)
原理:
采用“自动连续检测”的方法,直接对血样中诱聚剂加入后血小板数量、体积的变化进行持续监测,测得聚集前、后血小板数量的变化,计算得出血小板聚集功能水平。
优点:
采用抗凝全血作为测试样本,基本保持与体内血液组成状态一致,白细胞、红细胞参与检测过程,更符合体内真实的血小板聚集状况;仪器同时还能提供血小板平均体积(MPV )、红细胞数量、平均红细胞体积(MCV )等参数,一次测定,便可对样本多个方面分析评价,更加全面,准确。
仪器操作简便、快速、检测费用低廉。
血小板功能分析仪
PFA-100血小板功能分析仪[4]
原理:
在高切变率下,利用多种激活剂进行血小板功能的测定,在检测血小板功能的临床工作中取得较多进展。血小板功能分析仪模拟体内初期止血,又名“外出血时间测定”,检测与血小板黏附、聚集、栓子形成的
初期止血障碍相关的疾病,也可监测抗血小板药物治疗。
优点:
该方法操作简便易行、重复性好,与光学血小板聚集仪法相关性较好,比出血时间等方法更为敏感。而且能检测血小板功能失调是原发性因素还是药物影响所致。
缺点:
其对出血性疾病尚不能非常精确地预测,而且其结果也受很多因素影响,如血小板数量、红血细胞压积、血型及血浆中vWF水平等都会影响其结果。费用较高。
参考文献:
[1] VerifyNow抗血小板治疗监测系统检测氯吡格雷抗血小板聚集的应用价值[J].中华检验医学杂志2013, 36(5)
[2] 张有涛, 赵益明, 季顺东.PL-11 血小板分析仪检测功能的性能评价[J].中华检验医学杂志,2012,35(12) :1139-1141.
[3] 张玮,梁红.PL-11血小板分析仪检测功能的性能评价及应用研究[J].中国医疗前沿2013年12月8卷第23期
[4] 应用血小板功能分析仪PFA-100和血栓弹性描记仪评估健康孕妇和先兆子痫孕妇止血功能的比较研究[J].《麻醉与镇痛》2008年第2期