从琼脂糖凝胶中回收DNA
实验十一DNA凝胶回收
二、实验目的
1. 从含有目的基因片段凝胶块上回收 DNA。
2.回收目的基因片段为下步连接反应 作准备
三、实验仪器、材料和试剂
仪器及耗材：天平、台式离心机、微量移液器及 吸头、EP管。
材
料： 含有目的基因酶切产物的凝胶块
试
剂： AxyPrep DNA 凝胶回收试剂盒 ；无
水ห้องสมุดไป่ตู้醇；
四、实验步骤
2.低熔点琼脂糖
传统手工操作方法之一，低熔点琼脂糖制备凝胶，电 泳后切割目的条带，在TE溶液中65度保温融化，用传 统的酚氯仿抽提，乙醇沉淀。这个方法现在用的人已 经不多了。
以前经费紧张，低熔点琼脂糖贵，比较经济方法就是 常规琼脂糖电泳后，在目的条带前方挖槽，灌入低熔 点琼脂糖，凝胶后再电泳一小会儿，等条带进入低熔 点琼脂糖区域再切出来，这样就非常节约了。
1.在紫外灯下切下含有目的 DNA 的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽 凝胶表面液体并切碎。计算凝胶重量（提前记录 1.5 ml 离 心管重量） ，该重量作为一个凝胶体积（如 100 mg=100 μl 体积） 。
2. 加入 3倍凝胶体积的 Buffer DE-A，混合均匀后于 75°C加 热（低熔点琼脂糖凝胶于 40°C加热） ，间断混合（每 23 min） ，直至凝胶块完全熔化（约 6-8 min） 。 * Buffer DE-A为红色溶液。在熔化凝胶的过程中，可以帮 助观察凝胶是否完全熔化。
3. 加 0.5倍Buffer DE-A 体积的 Buffer DE-B，混合均匀。当分 离的 DNA 片段小于 400bp 时，需再加入 1个凝胶体积的 异丙醇。
加Buffer DE-B后混合物颜色变为黄色，充分混匀以保证形成均一的黄色 溶液。
一、实验原理
琼脂糖凝胶回收DNA片段
• 这是经典的DNA片段回收方法，现在一般 很少应用。
挤压法
• 1. 把封口膜剪下约24cm长、12cm宽的一 个膜片，然后沿着中线横向折叠成两片 (12cm×12cm)，并放在平的桌面上。
• 2.将切下凝胶块放在制备好的两片膜之间。 • 3. 用一小塑料平板用力挤压凝胶块以挤出
Qiagen 纯化柱
• 这是目前回收纯化DNA最方便的工具。 • 该方法相当于将Glass Milk 结合法中的硅粒
制成滤膜，从而可利用微型柱来使得DNA 的吸附更充分，洗涤更彻底，洗脱更简洁。
注意事项
• 1.提高电泳时的上样量。 • 2.判断DNA片段位置时，要尽可能使用长波
长UV，在UV下照射的时间应尽可能短。 • 3.切胶时只切有条带的胶，减少胶的体积。
DNA溶液。尽可能的将DNA溶液完全挤出。 • 4.将所有挤出溶液吸入离心管中，分别用苯
酚，氯仿各抽提一次。 • 5.用无水乙醇沉淀后悬浮于ddH20中。
Glass Milk (bead)法原理
• 1.琼脂糖凝胶在3倍体积的3mol/L NaI溶液 作用下于55℃会溶化，从而使DNA释放到 水溶液中
• 以下选择介绍其中三种。
低熔点琼脂糖凝胶电泳法
• 低熔点琼脂糖（LMP） 1.在水溶液中的溶解温度很低，62~65℃ 2.无抑制酶，可在胶内酶切、连接
低熔点琼脂糖凝胶电泳法
• 切割有目的DNA的琼脂糖凝胶块，加入适 量的缓冲液，加热到60℃。这时凝胶溶化， DNA进入水溶液中。最后通过等体积苯酚/ 氯仿抽提和乙醇沉淀可获得纯化的DNA片 段。
• 2.在这样的高盐浓度下有一种硅粒（glass bead 硅的细微颗粒，其水溶液呈牛奶状， 故亦称玻璃奶 glass milk）可特异性吸附 DNA。
实验十 DNA 片段从凝胶中回收
DNA浓缩，去盐及去除杂质 浓缩， 浓缩
加入3倍量的碘化钠溶液于样品DNA溶液中（若 DNA为固态，则先将之溶于适量水或TE中，再加 3倍体积的碘化钠溶液）。 加20ul或更多的“基因纯”试剂（每ul该试剂可 20ul ul 吸附0.3ugDNA，操作者可根据这一指标自行决 定“基因纯”试剂的用量，但不应少于10ul）。 以下步骤与“从琼脂糖凝胶中分离纯化DNA片段” 中步骤d到j相同。
从凝胶中分离回收ＤＮＡ的方法
现在常用的技术有： 电洗脱法 低熔点琼脂糖凝胶法 ＤＥＡＥ滤膜插片法等 其中电洗脱法，经济节省，操作方便， 对Ｄ ＮＡ的回收效果好。
低熔点琼脂糖凝胶法
65oC琼脂糖凝胶熔点 低熔点琼脂糖凝胶 37oC 液体
ＤＥＡＥ滤膜插片法
High efficient DNA high quality for microinjection <5kb fragment 100ng DNA fragment 10mmol/L EDTA(pH8.0) 5 minutes 0.5 mol/L NaOH 5 minutes 低盐缓冲液50mM/LTris .Cl 0.15M/L NaCl 10mM/L EDTA(pH8.0) 高盐缓冲液50mM/LTris .Cl 1M/L NaCl 10mM/L EDTA(pH8.0)
１３．12000g，4℃下离心１０分钟，得ＤＮＡ沉 淀。 １４．弃上清，加入７０％乙醇洗涤２次后弃干乙 醇。 １５．加入５０µl ＴＥ溶解ＤＮＡ。 １６．取１０µl ＤＮＡ溶液加入2µl Loading buffer 于０．８％琼脂糖上， ４０伏电泳，３小时。 １７．在紫外透射仪上观察结果。 １８．测定ＤＮＡ溶液OD260,OD280值。
实验七 琼脂糖凝胶中dna片段的回收
实验七琼脂糖凝胶中DNA片段的回收一．原理从琼脂糖凝胶中回收DNA片段．可得到大小一致的DNA片段。
有多种方法可用于琼脂糖凝胶中DNA片段的回收。
例如低融点琼脂糖法、洗脱法等。
本实验方法是先使凝胶被NaI溶解，然后DNA与玻璃粉结合，再从玻璃粉中洗脱出DNA片段。
二．方法1．在琼脂糖凝胶小电泳分离DNA片段，当DNA片段完全分开后，停止电泳。
2．在长波长紫外灯下观察凝胶，切下含所需的琼脂糖部分。
将胶放人预称重的微离心管中。
3．称含凝胶的离心管重量，每0.1g凝胶加200μl NaI溶液。
4．于50℃温育微离心管，每5min颠倒几次离心管混匀离心管，直到琼脂糖完全融解。
5. 每μg DNA加入5μl玻璃粉悬液。
轻轻颠倒使之混匀，于冰上放置10min，使DNA结合在玻璃粉上。
6．于室温离心5秒，收集结合有DNA的玻璃粉。
7．倒掉上清。
加700μl -20℃预冷的清洗缓冲液，轻轻地抽吸，使玻璃粉重悬浮。
冰上放置5min。
8．重复第6与7步两次，于室温离心10秒，使玻璃粉沉淀下来。
倒掉上清，重复离心，小心除去全部残存液体。
9．加入30～50μ1 TE，轻轻吹打使玻璃粉重悬浮。
于50℃温育10min，将DNA洗脱下来。
10．于室温离心l0秒，使玻璃粉沉淀下来。
将上清转移到另一管中。
小心，不要吸人玻璃粉，因为它可抑制许多酶的活性。
三．试剂1.玻璃粉(1)取30g玻璃粉（Sigma 325目二氧化硅）悬于200ml蒸馏水的烧杯中。
搅拌混匀后，静置9min。
(2)将上清转移到离心管中．于6000⨯g离心10min，沉淀玻璃粉。
(3)倒掉上清，将玻璃粉重悬于50ml 25％硝酸中，室温放置过夜。
(4)于6000⨯g沉淀玻璃，用无菌双蒸水洗涤，沉淀玻璃粉4一6次，直到pH值至中性。
(5)用无菌水重悬沉淀，配成10％的浆液。
(6)将此浆液分装成0.1ml一管．贮存于-70℃。
待用的样品呵贮存于-20℃或4⨯。
2．NaI溶液NaI 90.8gNa2SO3 15gddH2O至 100ml3．乙醇清洗液成分为：100mmol／L NaCIlmmol／L DETA，pH8．O10mmol／L Tris—HLc，pH7.550％乙醇四．说明1．本方法琼脂糖凝胶电泳缓冲液只能使用TAE，回收的DNA片段应在0.8～6kb之中。
DNA凝胶回收方法及常见问题
DNA凝胶回收方法及常见问题琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、鉴定和纯化核酸和蛋白质片断的标准方法。
聚丙烯酰胺凝胶电泳片段的回收将在以后的文章中介绍，在这里我先介绍一下琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法，方便大家学习交流。
从琼脂糖凝胶中回收DNA，是一种简单不过的常规实验操作。
但是由于胶回收的质量和数量直接影响后继的一系列实验――比如酶切连接、转化筛选、测序或者PCR扩增、标记乃至显微注射等等，所以这一步的操作也显得非常重要。
胶回收的质量好否直接影响后继实验的成功与否。
现今除了手工回收方法外，许多公司都开发了方便的回收试剂盒系列，但是无论借助何种方式，最基本的评定标准均包括: 回收产物质量：主要指纯度。
常规电泳过程中，普通级别的琼脂糖自带的一些性状不明的多糖，会连同DNA一起从凝胶中抽提出来，强烈抑制后继的连接、酶切、或者标记、扩增等实验。
对于大片断DNA回收，质量还包括产物的完整性；而对于较小片断回收，质量还包括回收产物的浓度；此外，极微量的纯化介质或者是某些试剂混入回收产物中也会对结果产生致命的影响。
回收率：由于上电泳样品量通常都很少，电泳过程本身也会导致样品的分散和损失，因而尽可能多的回收电泳凝胶条带中的目的片断，提高产物得率，对于后继实验来说是非常重要的。
回收率的多少通常和回收产物的大小以及量的多少有关，比如DNA片断越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就低；又如，DNA的量越少，相对损失越大，回收率越低。
因此，根据情况选择不同的方法是很重要的。
其他：操作方面，操作简单，快速，应用方便的方法或产品自然比较受欢迎。
如溶胶的缓冲液中添加指示剂，可以指示溶胶的溶液pH值就是很方便的设计；离心过柱就比离心沉淀要简单方便。
还有要注意载量问题，因为对于纯化柱或者一定量的纯化介质都有一定的吸附限度，过量的产物吸附不了即被损失掉。
以下是我总结的常见问题，希望对大家有所帮助。
Q1：利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段？A1: 可能有以下几个原因：1. 胶块未完全溶解，溶解凝胶时应置于55℃水浴，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数,确定胶块完全溶解后再进行下一步骤;2. 胶块体积太大,应使用枪头捣碎，还不能充分溶解，则应先将其切为小块，分多次回收或选用大量型回收试剂盒；3.紫外灯下切胶时间过长，导致DNA部分降解，应尽量把切胶时间控制在30s以内；4. 电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH值（pH≤7.5）时可结合DNA，在低盐及高pH 值（pH≥8）条件下洗脱。
从琼脂糖电泳凝胶中回收dna的几种简便方法
从琼脂糖电泳凝胶中回收dna的几种简便方法1、离心法：琼脂糖电泳回收 DNA 的最常用方法是使用离心法。
使用离心法可以有效地将终端的 DNA 从被琼脂糖共析的蛋白质中取出。
离心法能有效地将含有 DNA 的细胞和细胞渣分离开来。
使用离心机将DNA 扣离出来时，要确保转速足够慢，以免 DNA 粘在管壁上造成损失。
2、萃取法：萃取法通常应用于对密集的 DNA 示踪膜，这是因为此时DNA 的分析效果较好。
此外，萃取法还能够有效地将 DNA 从培养液中取出，并将浓缩液回收到原始膜中，以简化磁珠清洗和萃取物的溶解程序。
此外，也可以使用此方法进行 DNA 的脱除。
3、滴管抽提法：滴管抽提法是一种有效的自动化方法，用于回收从示踪膜中抽提出的 DNA。
此方法可以以有效的速度抽提出溶液中的 DNA，而且每次抽提都可以精确控制浓度，以避免 DNA 丢失。
使用滴管抽提法可以将 DNA 加入到 T-tubes 中，再将其冲洗，并将 DNA 从 T-tube中取出来。
4、超声消解：使用超声波可以将 DNA 从细胞渣中有效地冲解出来。
使用超声技术可以快速准确地提取细胞渣样品中的 DNA，而无需消耗大量的时间和钱。
此外，超声波提取技术具有成本低、时间短、提取收率高和简便操作等优点，特别适用于大批量和连续提取的技术。
5、四环素：四环素是一种能够定向处理 DNA 的有机化合物，其能有效地将DNA 从琼脂糖电泳凝胶上取出来，是DNA 的一种有效抽提剂。
四环素可以通过在 DNA 上形成“饼干层”，以形成介质层从而形成稳定的 DNA 呈平稳状态，从而彻底沉淀 DNA 杂质物质。
四环素可以将DNA 与蛋白质、酶、胆固醇等混合物清除，paramers，DNA 核苷酸和其他损害手性的添加剂；此外，它还可以去除其他 DNA 杂质，被证明是一种有效的 DNA 抽提剂。
胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理
胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理胶回收DNA试剂盒是一种常用的分子生物学实验工具，用于从琼脂糖凝胶中回收纯化DNA的方法。
其原理主要基于琼脂糖凝胶电泳的分离特性和DNA与硅胶膜亲和吸附的原理。
下面将详细介绍胶回收DNA试剂盒的原理和方法。
1.原理：1.1琼脂糖凝胶电泳分离：首先，将DNA样品与琼脂糖混合并加热使其溶解后，将混合物加入琼脂糖凝胶槽中，随后进行电泳。
由于琼脂糖具有分子筛的特性，DNA分子根据大小被分离在凝胶中的不同位置。
1.2硅胶膜吸附：电泳结束后，将琼脂糖凝胶取出，然后将硅胶膜放置在凝胶表面，使其与DNA分子接触。
由于硅胶膜具有强烈的亲和吸附性，它能够有效地吸附DNA分子。
1.3洗脱纯化：在硅胶膜上吸附的DNA分子可以通过洗脱的方式从硅胶膜上释放出来。
一般情况下，通过使用适当的缓冲液可以将DNA洗脱出来，得到纯化的DNA样品。
2.方法：2.1样品制备：将待分离和纯化的DNA样品进行适当的制备处理，如酶切产生的片段、PCR扩增产生的产物等。
根据需要，可以使用酶切缓冲液、PCR停止液等添加剂来优化样品的制备。
2.2琼脂糖电泳：将样品加入琼脂糖凝胶槽中，通过电泳操作进行DNA分离。
根据需要，使用适当的电泳缓冲液和电泳条件来获得所需的分离效果。
2.3硅胶膜吸附：电泳结束后，取出琼脂糖凝胶，将硅胶膜放置在凝胶表面，使其与DNA分子接触。
根据实验要求，可以根据需要对硅胶膜进行预处理，如加热、孵育等。
2.4洗脱纯化：通过使用适当的洗脱缓冲液，将硅胶膜上吸附的DNA 洗脱出来。
通常，洗脱缓冲液中包含盐和其他成分，以提高DNA的纯度和回收率。
2.5最终保存：将洗脱的DNA样品进行适当的保存和处理。
根据实验需求，可以进行浓缩、冻干或直接用于后续实验。
总结：胶回收DNA试剂盒通过利用琼脂糖凝胶电泳分离DNA，并利用硅胶膜的亲和吸附性，实现了从琼脂糖凝胶中回收纯化DNA的目的。
这种方法简便易行，能够在短时间内获得高质量的DNA样品，广泛应用于分子生物学研究和实验室应用中。
琼脂糖凝胶中DNA片段的分离和回收
玻璃奶法
实验原理：
• 玻璃奶(Glassmilk)：无毒、无味、无腐蚀作用的 白色硅颗粒，能专一性结合0.2kb至50kb大小的 DNA（双链、单链、线性、环状或超螺旋），不 结合RNA、蛋白质、寡核苷酸、有机溶剂、去污 剂及其他可能抑制酶活性的有机或无机物。 • DNA与玻璃奶结合原理：在高盐状态下，玻璃奶 周围的负电荷被打破，并允许DNA的磷酸负电荷 与玻璃奶特异性结合。在低盐（H2O/1×TE）时 溶解分离。
DEAE滤膜插片法
• 将DEAE纤维素膜裁成小条活化处理。 • 电泳后在目的条带前切一刀，将比条带略宽的 DEAE纤维素膜插入切口，不留气泡，继续电泳 一会儿，条带上的DNA被膜片截留。 • 取出膜片冲洗后转移到离心管中加缓冲液65度保 温洗脱，直到膜上没有DNA了，将溶液用酚氯仿 抽提沉淀。 • 这个方法不适合做较大的DNA，因为洗脱比较困 难。
DNA 结合率影响因素：
• 盐浓度：
– DNA<100bp:高盐状态下结合率高。 – DNA>100bp:低盐状态下结合率高。
• pH值：
– pH<7.0:结合率高。
应 用：
• 从琼脂糖凝胶中分离纯化DNA片段； • 从DNA反应物中纯化目的DNA片段，如回 收纯化PCR产物、酶切连接反应中的DNA 片段； • 从探针制备反应中去除未标记上的核苷酸 以及小的DNA片段（比如引物）； • DNA浓缩，去盐及去除杂质。
5．涡旋震荡悬浮Ultra-Sep Beads，加入10 µl Ultra-Sep Beads到样品EP管中。50～ 55℃温育10min或时间至完全熔解。在温浴 过程中，每隔2 min震荡EP管悬浮UltraSep Beads。 注意观察胶完全熔解后胶/ Binding Buffer混 合物的pH值。当混合物pH＞8.0则DNA的 产量将会显著减少。如果混合物变为橙色 或红色，则加入5 µl 5M NaAC（pH5.2）以 降低pH值。加入NaAC后混合物的颜色应该 变为淡黄色。
【精品】从琼脂糖凝胶中回收DNA
【精品】从琼脂糖凝胶中回收DNA琼脂糖凝胶是一种常用的生物分子分离纯化技术，它适用于分离分子大小差异较大的DNA、RNA、蛋白质等生物大分子。
在实验过程中，我们通常需要在琼脂糖凝胶中回收目标分子，接下来将以从琼脂糖凝胶中回收DNA为例，介绍琼脂糖凝胶分离和回收DNA的步骤。
I.琼脂糖凝胶电泳分离DNA1.制备琼脂糖凝胶：准备好琼脂糖粉末、TBE缓冲液或者TAE缓冲液、牛奶桶或者其他可用的模具等材料。
将适量的琼脂粉末与缓冲液混合均匀，然后煮沸并搅拌至完全溶解，待温度降至约60℃时，倒入模具内并加入DNA样品。
注意，样品需与样品量较大的样品间留有一定距离，以便于分离。
2.测量DNA迁移距离：在琼脂糖凝胶分离之后，需要用紫外线紫外检测器对每个DNA带进行测量，以确定其迁移距离。
3.切割琼脂糖凝胶：在确定每个DNA条带的位置之后，需要用刀子或切割器从琼脂糖凝胶上切下每个DNA条带，并收集在小管中备用。
切割时需要注意避免污染、损坏DNA。
1.准备回收DNA的缓冲液：一般来说，在回收琼脂糖凝胶中的DNA时，使用的缓冲液类型包括TE缓冲液、纯水、无菌去离子水等。
2.加入缓冲液并恢复DNA：将切下的琼脂糖凝胶条带投入含有缓冲液的离心管中，并在室温下静置10-15分钟，使得DNA从琼脂糖凝胶带上释放出来。
3.离心：恢复DNA的琼脂糖混合物取出后，需要进行离心处理，以使得DNA沉淀到离心管底部。
离心速度一般为12000ppm，离心时间15min。
4.去除上清：离心完毕之后，将上清取出，只保留离心管底部的沉淀。
上清可以用于其他实验。
5.重悬：加入恰当的缓冲液重悬DNA沉淀，例如TE缓冲液、纯水等。
如果需要，可以用比较温和的方法来提取DNA。
6.测量DNA浓度：用分光光度计或者其他光谱仪器，测量DNA的吸收光谱，从而确定DNA的浓度，以便于后续实验的操作。
以上就是从琼脂糖凝胶中回收DNA的步骤。
整个操作需要尽可能在无菌操作室中进行，以避免污染影响结果。
dna 琼脂糖凝胶回收
dna 琼脂糖凝胶回收琼脂糖凝胶回收是分子生物学领域中常见的实验技术，它能够有效地提取DNA，是DNA分析的重要一步。
在本文中，我们将详细介绍琼脂糖凝胶回收的整个过程，并提供一些实用的指导。
琼脂糖凝胶回收是一种通过电泳将DNA从琼脂糖凝胶上分离并回收的方法。
首先，在实验开始之前，我们需要制备琼脂糖凝胶，并在其中加入DNA样品。
随后，我们将琼脂糖凝胶与电泳缓冲液一同放置在电泳槽中并施加合适的电压，使DNA样品在琼脂糖凝胶中垂直迁移。
为了使得琼脂糖凝胶回收更加高效，我们需要根据DNA片段的大小调整电泳条件。
一般来说，小分子量的DNA片段迁移速度较快，而大分子量的DNA片段迁移速度较慢。
因此，为了避免DNA片段过度迁移或者导致DNA片段过度聚集，我们需要根据实验需要选择合适的电泳时间和电压。
在DNA片段迁移至所需位置后，我们可以将琼脂糖凝胶从电泳槽中取出。
此时，我们需要注意避免暴露琼脂糖凝胶于紫外线，以免对DNA造成伤害。
在取出琼脂糖凝胶之后，我们需要使用刮胶刀或者专用工具将 DNA 片段从琼脂糖凝胶上切割或刮下。
琼脂糖凝胶回收后的 DNA 片段可以用于各种实验，比如 PCR 扩增、限制性酶切等。
在进行后续实验之前，我们需要将 DNA 片段从琼脂糖凝胶中纯化出来，并去除琼脂糖残留物、电泳缓冲液等杂质。
其中，琼脂糖凝胶纯化技术有多种方法可以选择，例如利用商用纯化试剂盒、硅胶凝胶纯化法等。
总结起来，琼脂糖凝胶回收是一项关键的实验技术，能够高效地提取 DNA 片段。
通过合适的电泳条件和仔细的实验操作，我们可以获得高质量的 DNA样品。
这些 DNA 片段可以被广泛应用于基因克隆、基因组测序等实验中，为我们深入了解生命机制提供了重要的工具。
希望通过本文的介绍，读者们能够更加全面地了解琼脂糖凝胶回收的过程和原理，并在实验操作中获得更好的结果。
琼脂糖凝胶dna回收原理
琼脂糖凝胶dna回收原理
琼脂糖凝胶DNA回收是一种常用的蛋白质和核酸分离纯化技术，其原理如下：
1. 凝胶电泳：首先，将待回收的DNA样品经过凝胶电泳进行
分离。
在凝胶中，DNA分子根据尺寸和电荷迁移速度的差异
被分离开来。
2. 可视化：然后，用染料（如溴化乙锭）染色凝胶，使DNA
分子在紫外光下能够被可视化。
3. 切取DNA：通过使用灭菌的切割器具（如刮刀或剪刀），
将目标DNA条带切取下来。
注意要避免任何可能的污染。
4. 溶胶化：将切取下的DNA条带放入含有高浓度盐（如氯化
铵或碳酸锂）的洗涤缓冲液中，使DNA溶于溶液中。
5. 沉淀：将洗涤缓冲液中的DNA溶液与等体积的冷乙醇混合，形成DNA沉淀物。
6. 离心：将混合物进行离心，使DNA沉淀下来。
7. 溶解：去除上清液，用无菌蒸馏水洗涤DNA沉淀物，然后
用适当的缓冲液溶解DNA沉淀。
8. 储存：将回收的DNA溶液进行储存，以备后续实验使用。
总之，琼脂糖凝胶DNA回收是通过将目标DNA条带从凝胶中切取下来，然后对其进行溶胶化、沉淀、溶解等操作，最终得到纯化的DNA溶液的过程。
从琼脂糖凝胶中回收DNA
7. 加入DR-1 Buffer的1/2体积量的DR-II Buffer，均匀混合。 注：当分离小于400bp的DNA片段时， 应在此溶液中再加入终浓度为20%的 异丙醇。 8. 将试剂盒中的Spin Column安置于 Collection Tube上。 9. 将步骤7的溶液转移至Spin Column中， 12,000rpm离心1分钟，弃滤液。 注：如将滤液再加入Spin Column中离 心一次，可以提高DNA回收率。
五、实验结果与讨论
1. 实验结果 2. 讨论
附I： TaKaRa Agrose Gel DNA Purification Kit Ver2.0回收DNA 的操作步骤
1. 使用TAE或TBE缓冲液制作琼脂糖 凝胶，然后对目的DNA进行琼脂糖 凝胶电泳。 2. 在紫外灯下切出含有目的DNA的琼 脂糖凝胶。应注意尽量切除不含目 的DNA部分的凝胶，尽量减少凝胶 体积，提高DNA回收率。 注: 切胶时不要将DNA长时间暴露 于紫外灯下，以防DNA损失。
五、注意事项
切胶时不要将DNA长时间暴露于紫外灯下， 以防DNA损失。 胶块一定要充分融化,否则会严重影响 DNA的回收率。 混合振荡操作不要过于剧烈。 灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60゜C 使用时有利于提高洗脱效率。 DNA需长期保存时，建议使用Elution Buffer。 纯化的DNA用于序列分析时，最好使用灭 菌的双蒸水进行DNA的洗脱。
10.将500µ L的Rinse A加入Spin Column 中， 12,000rpm离心30秒，弃滤液。 11.将700µL的Rinse B加入Spin Column 中，12,000rpm离心30秒，弃滤液。 12.重复步骤11。 13.将Spin Column安置于新的1.5mL的离 心管上，在Spin Column膜的中央处加 入25µ L的灭菌蒸馏水或Elution Buffer， 室温静置1分钟。 注：把灭菌蒸馏 水或Elution Buffer加热至60゜C使用 时有利于提高洗脱效率。 14.12,000rpm离心1分钟洗脱DNA。
实验五 目的DNA片段的回收
Experiments of molecular biology
实验五 目的D．学习从琼脂糖凝胶中回收DNA的技术； 2．掌握从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的方法 ；
【实验器材】
电泳仪，水平电泳槽，微量移液器（10uL, 100 uL 1000uL），EP管，凝胶成像系统，水浴锅等。
DNA片段的胶回收常用的方法：
1、电泳洗脱法 2、低熔点琼脂糖凝胶电泳挖块法 3、冻融回收法 4、玻璃奶回收法 5、琼脂糖酶回收法 6、吸附柱回收法
待回收的PCR产物首先用1%的琼脂糖凝胶电泳纯化，然后在 紫外灯下小心切下目标条带，放入一干净的EP管中。
一、冻融法
1. 紫外灯下切下含待回收的DNA胶条，称量其重量后将其置于1.5ml离心管中 ； 2. -80℃放置10min; 3. 4℃离心12000rpm×5min，上层液转移到一新的离心管中;
4. 加入1/4体积H2O于含胶的离心管中，捣碎，加入等体积酚/氯仿抽提一次，
振荡混匀； 5. -80℃，放置10min；
6. 4℃离心12000rpm×5min，合并上清液；
7. 加入1/10体积3M NaAc(pH 5.2)充分混合，再加入2.5倍体积预冷的无水乙醇 混匀，在 -80℃静置10min； 8. 4℃离心12000rpm×10min，弃上清，再加入75%乙醇洗涤沉淀1次，4 ℃离 心12000rpm×5min，弃上清，倒扣在滤纸上室温晾干。 9.加入20ul的TE溶解沉淀，取5μ l进行电泳鉴定回收效果 。
二、纯化试剂盒法
1. 2. 3. 4. 切胶回收后，称重，将胶切碎或在离心管内捣碎。 加入等体积(1g/1ml)的溶液I（溶胶液）, 颠倒混匀。 60℃水浴约10min至胶全融，期间混匀3-4次，以加速凝胶融解。 将融后溶液冷却至室温后加入到DNA纯化柱内， 室温放置1分钟。(如果体 积较大，可以把样品分批加到纯化柱内，离心后，再加入剩余的样品。 5. 最高速(约12000rmp)离心1分钟，弃收集管内的液体。 6. 在DNA纯化柱内加入700μ l溶液II（75%乙醇），室温放置1分钟。 7. 最高速离心1分钟，洗去杂质。弃收集管内的液体。 8. 再次加入700 μ l溶液II，最高速离心1分钟，再洗一次。倒弃收集管内的 液体。 9. 最高速再离心2分钟，除去纯化柱内残留液体并让残留的乙醇充分挥发。 10. 将DNA纯化柱置于新的1.5ml离心管上，加入30 μ l溶液III（TE或无菌水 ）至管内柱面上，放置1min。 溶液III需要直接加至管内柱面中央，使液体被纯化柱吸收。也可以用重蒸水 或MiliQ级纯水替代溶液III，但是水的 pH应不小于6.5。 11. 最高速离心1min，离心管中所得液体即为高纯度DNA溶液。
琼脂糖凝胶 dna 回收试剂盒说明书
琼脂糖凝胶货号：D1200规格：50T/100T保存：常温干燥保存，复检期为一年。
试剂盒内容：产品说明：本试剂盒采用可以高效、专一结合的DNA硅基质材料和独特的缓冲液系统，从TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收DNA片段，同时除去蛋白质、其他有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。
可回收100bp-10kb大小的片段，回收率大于80%（小于100bp和大于100kb的DNA片段回收率为30-50%）。
使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等试验。
注意事项：在使用本试剂盒前请阅读此注意事项。
1.电泳前最好更换成新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。
2.如下一步实验要求较高，则应尽量使用TAE电泳缓冲液。
3.切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。
4.回收小于100bp和大于100kb的DNA片段时，应加大溶胶液的体积，延长吸附和洗脱的时间。
5.回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越小，回收率越低。
6.如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
操作步骤:（使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。
）1、琼脂糖凝胶电泳后，将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分），放入干净的离心管中，称取重量。
2、向胶块中加入3倍体积溶胶液（如果凝胶重为0.1g，其体积可视为100ul,则加入300ul溶胶液），50-55℃水浴放置10min，期间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。
注意：溶胶时，如果溶胶液变为红色（正常情况下为淡黄色），可向含有DNA的胶溶液中加入10-30ul 3M醋酸钠（pH5.2）将胶溶液调为淡黄色，否则将会影响DNA与吸附柱的结合，影响回收效率。
3、将上一步所得溶液加入一个吸附柱中（吸附柱放入收集管中），12000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放入收集管中。
从琼脂糖凝胶中回收DNA
• 琼脂糖凝胶电泳简介 • DNA回收的必要性 • DNA回收的方法 • 从琼脂糖凝胶中回收DNA的步骤 • DNA回收的注意事项
01
琼脂糖凝胶电泳简介
琼脂糖凝胶电泳的原理
琼脂糖凝胶电泳基于DNA分子在电场中的迁移率不同进行分离。DNA分子在电 场中移动的速度与其分子量大小成反比，因此可以通过琼脂糖凝胶将不同大小的 DNA分子分离。
酶解法
利用酶分解琼脂糖凝胶中的琼脂糖， 释放出DNA，然后用适当的方法回 收DNA。
04
从琼脂糖凝胶中回收DNA的步骤
切胶
切胶
使用干净的刀片将含有DNA的琼脂 糖凝胶切成小块，以便后续处理。确 保切下的凝胶块中包含目标DNA条 带。
注意事项
切胶时要避免交叉污染，使用一次性 刀片或对刀片进行消毒。
节约资源
回收DNA可以节约用于合成新凝胶和制备新试剂的资源，从 而降低实验成本。此外，回收的DNA可以重复使用，进一步 减少浪费和环境污染。
03
DNA回收的方法
Байду номын сангаас 传统方法
01
乙醇沉淀法
将切下的凝胶块与缓冲液混合，离心后去除上清液，加入无水乙醇，离
心收集沉淀，干燥后溶解于适量水中。
02
酚-氯仿提取法
THANKS
感谢观看
在琼脂糖凝胶中，DNA分子会受到电场的作用，产生定向移动。由于DNA分子 带负电荷，随着电场强度的增加，DNA分子的移动速度也会增加。
琼脂糖凝胶电泳的应用
分离和鉴定DNA片段
通过琼脂糖凝胶电泳，可以将混合的DNA片段分离成单 一的条带，并对其大小进行鉴定。
分离和纯化PCR产物
PCR产物可以通过琼脂糖凝胶电泳进行分离和纯化，以去 除未扩增的DNA片段和引物等杂质。
实验五 琼脂糖凝胶DNA片段回收
入500ul 平衡液BL，12,000 rpm，1min，倒掉收集 管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中，备用。 2）称取空离心管的质量，记为M1。 3）在紫外灯下，将目标DNA片段从琼脂糖凝胶中 切下（尽量切去多余部分），放入1.5ml离心管中， 再次称重，记为M2； 4）计算凝胶质量M=M2-M1，如凝胶重0.1g，其体 积可视为100ul，不足0.1g的按0.1光度法测定DNA的浓度
与纯度？
从琼脂糖凝胶中回收DNA片段
实验原理
在生物技术试验中，PCR反应获得的目的片段、
酶切后所得特定的DNA序列、分子杂交中所制 备的探针等，经过琼脂糖凝胶电泳后，目的片 段与其他的DNA分开，这就需要有一套方法将 目的DNA从凝胶中分离出来，通过处理后得到 春花的目的DNA，以用于以后分子杂交，重组 子构建，序列分析等。
DNA溶液浓度与纯度的测定
取待测DNA溶液20 ul，加入1980ul ddH2O
（相当于稀释100倍），混匀，在紫外分光 光度计上分别测定A260和A280 计算A260/A280. DNA浓度（ug/ml）=A260×50×稀释倍数 A260/A280显示核酸纯度，应为1.7~1.9。
1min，倒掉收集管中的废液。此步重复一遍。
8）将吸附柱放回收集管中，12,000 rpm离心2 min，倒
掉收集管中的废液，将吸附柱室温放置，彻底晾干。 （漂洗液中乙醇的残留会影响后续酶切、PCR等实验）
实验步骤
9）将晾干的吸附柱放到一个干净的离心管中，向
吸附柱中间位置悬空滴加 ddH2O 50 ul，室温放置 2 min，12,000 rpm离心2 min； 10）将离心管中的液体重新加回吸附柱中，向吸附 柱中间位置悬空滴加，室温放置2 min，12,000 rpm离心2 min，保留离心管。
琼脂糖凝胶dna回收实验报告
琼脂糖凝胶dna回收实验报告1.目的学会从琼脂糖凝胶中回收DNA片断的基本技术。
2.原理限制性内切酶切割后的DNA片断经过电泳后，按分子量大小被分开，排列在琼脂糖凝胶中，可以将特定的某条DNA带所在的凝胶切下来，加热或用特殊的试剂熔解凝胶，使DNA溶回到溶液中，再经过乙醇沉淀或过柱即可获得目的DNA酶切片断。
3.器材旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml微量离心管，双面微量离心管架，台式离心机，琼脂糖凝胶电泳系统，微波炉，水漂，恒温水浴。
4.试剂电泳缓冲液，溴化乙锭溶液，电泳级琼脂糖粉，10x加样缓冲液，DNA分子量标准，DNA凝胶回收试剂盒。
5.实验准备配制TAE电泳缓冲液（10x储存液），1000x溴化乙锭储存液（0.5mg/ml)，10x加样缓冲液，1.5ml离心管装入铝制饭盒（灭菌）、移液器吸头装入相应的吸头盒（灭菌）；6.操作步骤（1）用1xTAE配制1%琼脂糖凝胶。
DNA用合适的酶切。
（2）在胶上选定加样6孔，加入20ulDNA酶切产物，电泳。
（3）电泳结束后用刀片6切下含有少量DNA酶切产物的泳道（一般选择位于凝胶的边缘），EB染色，在紫外灯下找到目的DNA带，用刀片切在带的下上下边缘各切一个小口作为标记。
（4）将做好标记的凝胶条与未染色的凝胶原位对齐，根据小胶条上的标记估计未染色的大胶上DNA酶切产物的位置，用刀片切下大胶中DNA产物所在的凝胶（尽量不要多余的凝胶），转移至一个称量过得干净的1.5ml 微量离心管中。
（5）按照DNA凝胶回收试剂盒的说明书操作，回收DNA酶切产物：使用GENOMED公司提供的Gel Extraction Mini Kit凝胶回收试剂盒，操作步骤如下：1)在紫外灯的照射下，从已电泳15min左右的凝胶上切下目的条带，称得凝胶重量按1：3的比例加入L1溶胶；55-60℃条件下溶胶10min 左右；2)将凝胶已完全溶化的液体移入吸附柱内，室温静置2min，以使DNA片段充分结合到吸附柱上；12,000rpm转速下离心3min，弃废液；3)向吸附柱中加500ulL2，10,000rpm转速下离心1min，以洗掉吸附柱中残留的溶胶液L1，弃废液；4)重复上一步操作；5)12,000rpm离心1min，把吸附柱放入新的EP管中；室温放2-5min，以晾干残留的乙醇；向吸附膜中央滴加30ulddH-O，室温静置2min；6)12.000rpm离心2min，得到DNA片段回收液。
02 琼脂糖凝胶回收DNA片段及检测
3.操作步骤 3.操作步骤
1.在长波紫外灯下，用干净刀片将所需回收 1.在长波紫外灯下，用干净刀片将所需回收 的DNA条带切下，尽量切除不含DNA的凝 DNA条带切下，尽量切除不含DNA的凝 胶，得到凝胶体积越小越好。 2.将切下含有DNA条带凝胶放入1.5ml离心 2.将切下含有DNA条带凝胶放入1.5ml离心 管，称重。
6.将上一步所得溶液加入吸附柱AC中（吸 6.将上一步所得溶液加入吸附柱AC中（吸 附柱放入收集管中），12, 附柱放入收集管中），12,000 rpm离心30-60 rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液。
注意：如果总体积超过750µ 注意：如果总体积超过750µl，可分两次将溶液加入同一个吸 附柱AC中 附柱AC中。
1.试剂盒组成 1.试剂盒组成
溶胶/结合液DB 溶胶/结合液DB 漂洗液WB 漂洗液WB 洗脱缓冲液EB 洗脱缓冲液EB 3M醋酸钠（PH5.2） 3M醋酸钠（PH5.2） 异丙醇 吸附柱 收集管（2ml） 收集管（2ml）
2.原理简介 2.原理简介
在高盐情况下，DNA片断选择性地吸附于离心 高盐情况下，DNA片断选择性地吸附于离心 柱内的硅基质膜上，再通过一系列快速的漂洗 -离心的步骤去除杂质（引物、核苷酸、蛋白 酶等），最后低盐，高PH值 酶等），最后低盐，高PH值的洗脱缓冲液将 纯净DNA从硅基质膜上洗脱。 纯净DNA从硅基质膜上洗脱。
10. 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管 中，在吸附膜的中间部位加30µ 中，在吸附膜的中间部位加30µl洗脱缓冲液 EB（洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中加热 EB（洗脱缓冲液事先在65-70℃ 效果更好），室温放置2分钟，12,000rpm离 效果更好），室温放置2分钟，12,000rpm离 心1分钟。
琼脂糖凝胶DNA片段回收中的常见问题
1、未回收到DNA片段或回收效率很低A、原因：胶块未完全溶解建议：为加快凝胶的溶解，应将凝胶置于55度水浴中溶解，期间不断上下颠倒，待确定凝胶完全溶解后再进行后续操作。
每100 mg凝胶应加入100uL溶胶液，如果胶块过大，应将胶块切成小块，以便于凝胶溶解。
B、原因：加入溶胶液过少建议：对于PCR产物，或者酶切产物，应加入2倍体积的溶胶液。
对于凝胶回收，每100 mg 凝胶应加入不少于100uL溶胶液。
对小于200bp的片段应加入5倍体积的溶胶液。
C、原因：DNA Wash Buffer 中未加入无水乙醇建议：第一次使用前，按照说明书要求加入要求的无水乙醇。
DNA Wash Buffer使用后，应旋紧瓶盖，以防乙醇挥发，漂洗时损失DNA，降低回收效率。
D、原因：洗脱缓冲液不合适建议：洗脱液的pH值在7.0~8.5时，洗脱效率最高，洗脱液pH超出此范围，将会显著影响收获率，请使用试剂盒配套的Elution Buffer（pH 8.5，10mM Tris-HCl），或者使用使用pH 值在此范围的ddH2O。
E、原因：洗脱缓冲液未加到离心柱中间建议：因为在洗脱时使用较少的洗脱缓冲液，洗脱缓冲液应加在中间位置，并室温放置1~2分钟，然后再离心洗脱。
另外，采用65度预热的洗脱Buffer将显著提高回收效率。
F、原因：起始回收量太少建议：如果起始回收量很好的样品，应富集，最好使用不少于1ug的样品。
对于PCR产物，应事先电泳检测产量，在进行回收操作。
2、电泳时，产物漂出点样孔原因：洗脱时，柱子中残留乙醇建议：在进行洗脱前，如果柱子上残留乙醇，将会影响洗脱效率，在洗脱前应再次离心，或者空气中放置几分钟，再进行洗脱。
3、后续无法进行连接等实验操作原因：洗脱液中含有乙醇建议：洗脱前，确保柱子中乙醇已无残留乙醇。
原文地址:/biotech/exp/molbio/DNA/2011/i814562160.html。
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五、注意事项
切胶时不要将DNA长时间暴露于紫外灯下， 以防DNA损失。 胶块一定要充分融化,否则会严重影响 DNA的回收率。 混合振荡操作不要过于剧烈。 灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60゜C 使用时有利于提高洗脱效率。 DNA需长期保存时，建议使用Elution Buffer。 纯化的DNA用于序列分析时，最好使用灭 菌的双蒸水进行DNA的洗脱。
5. -- 700 µL 乙醇稀释的SPW洗涤缓冲液加 入柱中：静置2-3 min -- 10,000g, 1 min -弃去流出液（重复一次） 6. --空柱： 10,000g, 1 min （甩干！） 7. --柱子装入新的1.5mL EP 管中：30-50 µ L DNA洗脱缓冲液or无菌去离子水于柱基 质--静置1 min 8. -- 10,000g, 1 min 洗脱DNA.
实验三 从琼脂糖凝胶中 回收DNA片段
一、实验目的
1. 了解DNA片段回收的原理； 2. 掌握用多功能DNA纯化回收试剂盒 回收DNA的方法。
二、实验原理
本实验所用的回收试剂盒的原理是在溶胶 /结合液DB (DR-1 Buffer)存在的条件下， 使含有DNA片段的凝胶融化，使DNA片 段吸附于(Spin column)的滤膜上。
五、实验结果与讨论
1. 实验结果 2. 讨论
附I： TaKaRa Agrose Gel DNA Purification Kit Ver2.0回收DNA 的操作步骤
1. 使用TAE或TBE缓冲液制作琼脂糖 凝胶，然后对目的DNA进行琼脂糖 凝胶电泳。 2. 在紫外灯下切出含有目的DNA的琼 脂糖凝胶。应注意尽量切除不含目 的DNA部分的凝胶，尽量减少凝胶 体积，提高DNA回收率。 注: 切胶时不要将DNA长时间暴露 于紫外灯下，以防DNA损失。
最后用Elution Buffer或灭菌的双蒸水溶 出DNA。
三、实验仪器、材料与试剂
仪器 1. 高速台式离心机 2. 微量取液器；1.5，0.5和0.2ul的EP管 3. 水浴锅，电子秤 材料 PCR实验切下的含有回收片段的琼脂糖凝胶 试剂 多功能DNA纯化回收试剂盒所带；灭菌ddH2O， 无水乙醇
附II：H.Q.＆.Q .凝胶回收试剂盒II
H.Q.＆.Q .Gel Extraction Kit II
1. 0.7g（700mg）--700 µ (1mg=1µL) L 2. --700µL NJ缓冲液 3. --混合物：55-65 ゜C，7min(期间需振荡混 匀2-3min)(正常为浅黄色) 4. -- 700 µ L溶液转到Mu-Pu纯化柱，8,000g10,000g, 1 min --弃去流出液
7. 加入DR-1 Buffer的1/2体积量的DR-II Buffer，均匀混合。 注：当分离小于400bp的DNA片段时， 应在此溶液中再加入终浓度为20%的 异丙醇。 8. 将试剂盒中的Spin Column安置于 Collection Tube上。 9. 将步骤7的溶液转移至Spin Column中， 12,000rpm离心1分钟，弃滤液。 注：如将滤液再加入Spin Column中离 心一次，可以提高DNA回收率。
5. 将以上溶液（如超过750 μl ，将分到2 个吸附柱AC ）加到吸附柱AC中， 12000rpm离心30-60秒，倒掉废液； 6. 加700μl WB(已加入无水乙醇：15ml WB+60ml 无水乙醇)，12000rpm， 1min，去除废液； （加500μl WB，12000rpm，1min， 弃掉废液；） 7. 吸附柱AC放回至空收集管中， 12000rpm，2 min，尽量去除漂洗液；
四、百泰克DNA回收试剂盒 回收DNA的操作步骤
1. UV下切下DNA条带，尽量切除不含 DNA的凝胶； 2. 将切下的胶块放入1.5ml EP 管中，称 重； 3. 加2倍体积的溶胶/结合液DB(如凝胶重 0.1g，加200μl DB溶胶液)； 4. 56℃水浴4-6 min 至胶完全溶解，每2 min涡旋震荡一次帮助加速溶解 ； （每100mg最初的凝胶重量加150ul的异 丙醇，震荡混匀）
8. 取出吸附柱AC，至一新的EP管，在吸 附柱的AC膜中央加50 μl EB缓冲液（或 灭菌的双蒸水，EB最好现在65－70 ℃ 水浴加热，效果更好）。室温放置2 min；1ห้องสมุดไป่ตู้000rpm，1min。 9. 如需要较多量DNA，可将步骤10得到 的溶液重新加入吸附柱AC中， 12000rpm，1min。
10.将500µ L的Rinse A加入Spin Column 中， 12,000rpm离心30秒，弃滤液。 11.将700µL的Rinse B加入Spin Column 中，12,000rpm离心30秒，弃滤液。 12.重复步骤11。 13.将Spin Column安置于新的1.5mL的离 心管上，在Spin Column膜的中央处加 入25µ L的灭菌蒸馏水或Elution Buffer， 室温静置1分钟。 注：把灭菌蒸馏 水或Elution Buffer加热至60゜C使用 时有利于提高洗脱效率。 14.12,000rpm离心1分钟洗脱DNA。
3. 切碎胶块，可加快步骤6的胶块 融化时间，提高DNA回收率。
4. 称量胶块重量，计算胶块体积。 以1mg=1µ L进行计算。
5. 向胶块（1%）中加入3个凝胶体 积量的胶块融化液DR-1 Buffer。 6. 混合均匀后75゜C加热融化胶块。 并间断振荡混合，使胶块充分融 化（约6-10分钟）。