Waters 515高效液相色谱仪使用方法
Waters高效液相色谱系统操作规程
Waters高效液相色谱系统操作规程1. 目的规范Waters高效液相色谱系统的使用和维护。
2. 范围本规程适用于Waters高效液相色谱系统的使用和维护。
3. 职责质检室仪器分析员负责Waters高效液相色谱系统的日常使用和维护。
4. 系统组成本系统由Waters 600E多溶剂输送系统（有梯度控制器的高压输液泵）、Waters在线脱气机、Rheodyne 7725i 手动进样阀、Waters 2487双通道紫外检测器、Millennium32色谱工作站/电脑等组成，另外还包括打印机、断电保护器和通风柜等辅助设备。
5. 程序5.1. 准备5.1.1. 使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用0.45μm滤膜过滤）、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。
5.1.2. 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
5.2. 开机和泵操作5.2.1. 开机5.2.1.1. 接通断电保护器的电源，依次打开断电保护器、脱气机、600E泵、2487检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。
5.2.1.2. 打开Millennium32软件，按「Login...」，输入用户名和密码，按「OK」注册进入系统主界面。
在Project档内选择所需的项目，右击『Run Samples』图标，选择色谱系统“600_2487”后打开QuickSet窗口。
5.2.2. 更换溶剂5.2.2.1. 打开600E泵后，转动进口集合管阀手柄（以下简称手柄）至RUN位置；5.2.2.2. 将一塑料烧杯放在参照阀出口管下以收集分流的溶剂，向右打开参照阀（断开柱和进样器）；5.2.2.3. 按［Direct］键使其显示直接控制屏幕，设流速为1ml/min（梯度配比阀在0ml/min时不工作）；5.2.2.4. 选择欲使用的某一溶剂通道，设其比例为100%，其它为0%；5.2.2.5. 将输液管从原有溶剂瓶中取出，放入一干净的空瓶中；5.2.2.6. 逆时钟转动手柄至DRAW位置，用启动注射器从进口集合管阀的接口抽出约2ml溶剂；5.2.2.7. 再将输液管放入新溶剂瓶内，继续抽吸直到新溶剂出来并无气泡为止；5.2.2.8. 转动手柄至RUN位置，将启动注射器取下并排掉筒内的溶剂。
1waters高效液相色谱仪操作标准
【目的】：制定高效液相色谱仪的操作标准，确保操作人员正确操作。
【范围】：本标准适用于高效液相色谱法进行的检测。
【责任】：高效液相色谱仪的操作人员。
【内容】：1 组成: 高压输液泵、柱箱、检测器、系统控制器、数据工作站及打印机。
2 使用要求：2.1 按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室高效液相色谱仪检定规程（JJG705-90）”的规定作定期检定，应符合规定。
2.2 仪器各部件应能正常工作，管路为无死体积连结，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。
2.3 仪器的一般要求及系统适用性试验见“高效液相色谱法检验操作标准”项下规定。
2.4 若需要梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。
2.5 使用前详细参阅各操作说明书。
3 操作方法：3.1 基本操作说明3.1.1 将溶剂输半空塑料管置溶剂瓶内液面下，打开电源开关，机器开始作自我检查，注意是否有任何故障讯息出现，屏幕出现在设定“FLOW”的界面上。
3.1.2 以反时钟方向转松“溶剂抽取阀门”，以10ml针筒插入阀门洞口，抽取约20ml，然后在阀门下方放置一小烧杯，准备接废液。
3.1.3 在“FLOW”设定界面上，按一下“EDTT/ENTER”键，数字光标开始闪烁，连续按压“▲▼”键设定流速至8.0ml/min，再按一下“RUN/STOP”键，启动PUMP流速来挤压排除气泡。
3.1.4 约等待30秒钟后，再按一下“RUN/STOP”键，停止PUMP流速，然后再将“溶剂抽取阀门”以顺时针方向转紧。
3.1.5 按上色谱柱，调整FLOW设定，逐步递增流速至所需条件，平衡稳定系统。
3.2准备工作：3.2.1 流动相的配制：用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法项下对溶剂的要求进行检查，应符合要求。
水应为新鲜配制的高纯水，可用超级纯水器制得或用重蒸馏水；凡规定PH值的流动相应使用精密PH计进行调节。
waters超高效液相色谱仪操作步骤
第一部分：仪器准备1. 确保waters超高效液相色谱仪处于正常工作状态，检查仪器是否连接电源，是否有故障指示灯显示。
2. 打开色谱仪软件，检查仪器参数设置是否符合实验要求，包括流速、温度、检测波长等。
3. 准备所需的色谱柱、色谱柱连接器、进样器以及其他实验所需的耗材。
第二部分：样品准备1. 准备实验所需的样品，确保样品已经滤过或者处理过以去除杂质。
2. 根据实验要求，将样品溶解在适当的溶剂中，并进行稀释或者稀释。
第三部分：超高效液相色谱仪操作步骤1. 开始操作前，先进行系统平衡。
具体操作步骤为：将色谱柱连接至色谱柱连接器上，然后连接至色谱仪，用洗脱液平衡色谱柱。
2. 设置色谱仪的操作参数，包括流速、温度、检测波长等。
3. 进行样品进样，具体操作步骤为：将进样器连接至色谱仪，将稀释好的样品注入进样器中，设置好进样量。
4. 开始进行实验，监控色谱图谱的变化，记录实验数据。
5. 实验结束后，对色谱柱和色谱仪进行清洗和维护，确保仪器干净、整洁。
第四部分：数据处理和分析1. 对实验获得的数据进行处理和分析，比对标准曲线，计算样品中所含物质的浓度或者纯度。
2. 对实验结果进行统计分析，进行数据呈现，如绘制色谱图谱、制作数据统计图表等。
3. 通过数据处理和分析，得出实验结论，对实验结果进行解释和讨论。
第五部分：实验安全及注意事项1. 在操作过程中，注意个人安全，避免发生化学品溅泼或者接触有害物质。
2. 操作过程中需严格按照实验要求和操作规程进行，如有疑问请及时向实验指导老师或专业人士请教。
3. 实验结束后，及时清理实验台面和仪器设备，妥善存放试剂和耗材。
通过以上步骤的操作，可以保证在使用waters超高效液相色谱仪进行实验时，能够得到准确、可靠的实验结果，为科研工作和学术研究提供有力支持。
第六部分：精密控制与调试1. 在进行实验操作前，要确保色谱仪的各项参数已经精确调试完毕。
这包括流速、温度、压力、检测波长等参数的精准控制。
高效液相色谱仪的操作步骤
高效液相色谱仪的操作步骤高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分离和分析技术。
它利用液体流动相和固定相之间的相互作用，将样品中的混合物分离出来，并通过检测器进行定量分析。
本文将介绍高效液相色谱仪的具体操作步骤。
1. 准备工作在进行高效液相色谱仪的操作之前，首先需要进行一些准备工作。
检查色谱柱是否安装正确，确保色谱柱是干净的，并检查流动相的配制是否准确。
2. 样品制备根据需要分析的物质，准备好待测样品。
样品制备可以包括溶解样品、过滤样品等步骤，以确保样品的纯净度和稳定性。
3. 仪器开机将高效液相色谱仪接通电源，打开仪器的电源开关。
等待仪器初始化，并确保仪器各个部分正常工作。
4. 设置参数在仪器上设置分析所需的参数。
包括选择适当的检测器类型和检测波长、设置流量、温度等。
5. 启动系统启动高效液相色谱仪系统，等待系统稳定。
通常需要一段时间使得流动相在管路中充分平衡，并确保流量稳定。
6. 校正进行色谱柱的校正。
校正过程包括流量校正、波长校正等。
通过校正可以保证仪器输出结果的准确性和可靠性。
7. 注射样品将样品通过注射器引入色谱柱中，控制样品的注射量，通常在微升至毫升的量级。
确保样品的注射量稳定和准确。
8. 分离分析开始运行高效液相色谱仪系统，进行样品的分离与分析。
在此期间，流动相通过色谱柱，将样品中的化合物根据它们与固定相之间的相互作用进行分离。
9. 监测结果通过检测器对分离后的化合物进行监测。
根据检测器的信号，可以得到每个化合物的峰面积、保留时间等数据。
10. 数据处理将监测到的信号输入到数据处理软件中，进行结果的计算和分析。
通常可以得到各个化合物的峰高、峰面积等数据，从而实现对样品的定量分析。
11. 关机分析结束后，关闭高效液相色谱仪的电源开关，并进行必要的清洗和维护工作。
确保仪器的正常运行，并延长其使用寿命。
总结：高效液相色谱仪的操作步骤涵盖了仪器准备、样品制备、仪器设置、校正、样品注射、分离分析、结果监测和数据处理等多个方面。
Waters 515高效液相色谱仪使用方法
Waters 515高效液相色谱仪使用方法一、打开仪器与工作站：1.按要求配制流动相，经过滤、超声波脱气后装入贮液瓶中，然后将恒流泵上末端带有过滤器的输液管分别插入对应贮液瓶中。
2.打开电脑及色谱输液泵、二极管阵列检测器电源开关，在输液泵控制面板中，按向上或向下箭头，找到“Local”，按“Edit”进入可编辑状态，再按向上或向下箭头，调至“Rem.”状态，按“Edit/Enter”确认，按下面板左面的“Run/Stop”，此时屏幕右上角“Local”与“Run”相继闪动。
（接通电源前，应先用专用注射器从排液阀抽去泵前管路中可能存在的气泡）。
3.双击电脑桌面上“Empower”图标，输入用户名“system”与密码“manager”，确定，进入工作站主窗口。
二、运行样品：1.在主窗口中点击运行样品，选择采集数据的项目与色谱系统后，点击“确定”打开运行样品窗口。
2.运行样品窗口中，在左面写入样品名称与合适的运行时间，左下部分上下两个按钮分别为“改变流速”与“停止流液”，右下部分的“仪器方法”的下拉框中可以选定仪器方法，“编辑”可以对选定仪器参数进行编辑，“设置”用于将编辑好的仪器参数下载到色谱主机，“监视器”用于察看色谱基线情况，色谱图在窗口右侧显示。
3.分析样品之前应设定压力上限，以保护色谱柱。
4.设置各参数后，待基线平直才可进样。
5.将进样阀手柄置于“Load”(右上)位置，用微量注射器吸取一定量的试样溶液，插入进样口(插到底)并将试样溶液缓慢推入。
6.点击运行窗口左半部分中右侧的按钮“进样”，待窗口下面的状态栏中出现“等待进样”时，扳下进样阀手柄，进样运行即开始。
7.运行时间结束后自动停止运行，或可以单击上面的红色快捷按钮“停止运行”用以手动停止。
三、测定数据的察看1.在工作站主窗口中点击浏览项目，在右侧窗口选定相应方法组后确定，打开数据列表，在表中第一行选定“进样”，在表中找到相应数据，双击打开。
Waters高效液相色谱仪使用及维护
• 待系统平衡后，单击“中断” 监视基线。
，终止
单进样
• 待系统平衡好，在此页面输入进样信息，
点击
进样
序列进样
确认样品组名称正确，其他选项保持默认值，点击运行
• 跳出该窗口，点击确定，进行修改序列。
• 修改完毕点击
继续运行样品组。
•
图谱处理
•
图谱打印
图谱处理
• 选择所要处理的项目名称，点击确定
• 30%磷酸溶液，超声30分钟
一、每周一次，仪器面板操作。
• Purge Injector：面板操作: 打开状态 (Statas)画面→ →按右下角Direct Function功能键→ →选Purge Injector命令 → →选OK即可进行注射器的排气。
• Seal Wash：面板操作: 打开状态(Statas) 画面→ 按下面板上Menu/ Statas 键→按右 下角Diiag功能键→ →选Prime Seal Wash 命令→ →选Start即可，默认运行10分钟。
出现如下窗口
• （2.）编辑仪器方法 • （3.）保存方法：
• （4.）关闭“仪器方法编辑器”窗口
• 6.创建方法组：①选中所要的仪器方法，单 击“下一步” ②出现如下窗口选择处理方法、
报告方法以及导出方法，单击“下一步”
• ③命名
方法调用及平衡基线
•在
选择仪器方法，并点击
“监视器”，平衡系统监视基线
创建项目
• 在此对话框下需要确定项目根目录下还是项目层次结构的 一部分（作为父项目的一个子项目）。这种层次结构允许 将多个项目组织在一个公用项目结构中。
• 注：要将项目创建为新的顶级项目（父项目），单击“项 目”文件夹；要将项目创建为现有项目的子项目，单击现 有父项目的文件夹。
Waters超高效液相色谱仪操作规程f
浙江省制药工程重点实验室超高效液相色谱仪安全操作规程一、自检开主机和二极管阵列检测器（PAD），仪器进入自检阶段，自检完成后打开Empower软件。
二、配置系统管理数据（相当于新建文件夹），鼠标右键选新建，设定项目名（设定后将出现在运行样品中）。
三、运行样品在采集数据项目栏中选定项目（即将此次实验数据选择存放位置）→确定左栏可以设置有关样品的信息（样品名，功能，方法组，样品瓶，进样体积，运行时间）右栏出图，左下栏给出仪器信息，最下栏显示仪器状态。
步骤：创建方法组→选择仪器方法（新建→编辑仪器方法，包括主机和选定的检测器的参数的设置→设置好选另存为保存此仪器方法→关闭）此时上述编辑的仪器方法出现在列表中→下一步→出现“缺省方法项”对话框，点下一步→出现“命名方法组”，设置方法名（与刚才的仪器方法名相同）对话框→完成。
返回“运行样品”对话框，选方法组和仪器方法。
选定好仪器方法后即可监视基线，基线稳定后→中断按钮→仪器空闲后→点运行按钮，出现运行样品组对话框，设置好后点运行。
（运行过程中可以点中断按钮，也可在编辑下拉菜单中选“改变正在测试的样品”）→运行完后点文件中的“退出”。
四、数据处理点开“浏览项目”，选定要要浏览的项目，确定后进入的界面中有如下内容：样品组、进样、通道、方法、结果组、结果等。
“通道”里存的是原始的数据，这些数据要经过处理后才能得到“结果”，有结果才能打印报告。
PDA数据处理点“通道”→双击要处理的原始数据（点查看图标）→进入查看主窗口（此时点窗口中的工具栏可以看到等高图或3D图）→提取光谱图，找到最大吸收波长→提取色谱图→点“处理方法向导”图标→新建处理方法→用建立的处理方法处理→点“方法组”图标，选好后点“文件”下的“另存为”→“方法组”，设定即可。
至此选好处理方法。
注意事项：每隔24至48小时制备一次新鲜的水溶性流动相；样品进样前要用0.2µm的滤膜过滤以充分去除颗粒杂质；如果所使用的流动相中含有缓冲盐，用10倍柱体积的95%乙腈水溶液冲洗柱子；1。
Waters高效液相色谱系统操作规程
Waters高效液相色谱系统操作规程一. 准备1. 使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用滤膜过滤）、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制）。
2. 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
3. 接通电源，依次打开1525泵、2487检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。
4. 打开Breeze软件，进入系统主界面。
二. 操作步骤1.更换流动相。
2.在主界面中点击“Manage Breeze”按钮，选择system选项，出现系统连接示意图，观察各个部件是否连接好。
若未连接好，则需点击“Diagnostics/Reconfigure”进行诊断。
3.回到主界面，选择“Manage Breeze”中的project选项，单击“Make a new project”，“Next”，在“Project Name”中输入名称，单击“Finish”。
单击“Change a project/User”，在“Project”中选择输入的名称，单击“OK”。
4.单击“View Method”按钮，点击“Pump”图标，设置泵的参数。
点击“UV Det”图标，设置紫外检测器的波长。
单击“Save Method”按钮保存设置方法。
5. 打开泵的抽液阀，使用灌注注射器抽取一定量的洗脱剂。
单击Purge图标，出现“Purge Wizard”对话框，选中“Purge Pump”选项，点击“Next”“Next”，调节A、B泵的流量分别为约3ml/min。
打开泵的参考阀，点击“Next”。
Purge结束后关闭参考阀。
6.点击主界面中的“press to equilibrate system/ monitor baseline”按钮，平衡系统0.5－1h，直至基线稳定。
7.点击“press to make a single injection”按钮，进入“Specify Single Inject Parameters”对话框，设置参数，点击“inject”。
Waters 515泵 操作说明书
515 泵操作说明书515泵的显示屏❀515泵的LCD显示屏：菜单区设定参数区实际参数区状态区显示压力区515泵的启动❀515泵接通电源后，首先运行自检程序，然后LCD短暂显示初始屏幕，显示型号，泵头规格，版本号。
最后屏幕显示菜单区，状态区，设定参数区，参数区，压力显示区（前图）。
515泵的面板及功能键❀515LCD显示屏幕及键盘功能简介✎515泵键盘有四个功能键（如图）Run/Stop Up/Down Edit/Enter Menu515的面板功能键✎RUN/STOP: 在run与ready间切换➠在Local方式下，按此键，泵所设定的参数开始运行，屏幕显示run状态。
➠在Remote方式下，按此键，泵开始接受M32的指令，屏幕显示run状态。
➠无论何种方式，只要run状态，按此键，泵运行停止，屏幕显示Ready状态。
✎EDIT/ENTER: 用于设定各项参数➠按此键，在菜单显示项会出现一闪动的光标，再用Up/Down键选择所需的参数，参数设定后，按Menu键储存或生效。
515的面板功能键(续)✎MENU：用于选择选项或储存各项参数➠反复按此键，屏幕依次显示FLOW（流速）－PURGE（冲洗）－HPL（高压限）－LPL（低压限）－MODE（方式）－COMP（压缩因子）－CALIBRATE(校正）－UNIT（压力单位）－FLOW（流速）的参数选项，用EDIT/ENTE键和UP/DOWN键设定具体参数后，再按MENU键储存，生效。
✎UP/DOWN: 用于更改具体参数或选择参数项515泵的组成部件❀熟悉515各部件的名称515的开机操作❀开机顺序✎检查515泵的电路和流路已按要求正确连接。
✎将吸液头浸没在已过滤和脱气的流动相中。
✎打开电源开关。
✎待泵通过自检，LCD面板显示READY状态后，即可进行排气操作。
515的排气操作❀排气操作✎断开泵出口与其后仪器的流路。
✎逆时针旋开DRAW OFF VALVE，用注射器抽气，直至流动相流出，关闭VALVE。
WATERS高效液相的标准操作规程
【资料】WATERS高效液相的标准操作规程（SOP）WATERS高效液相的标准操作规程（SOP）适用于所有使用此仪器者1 流动相的处理1.1 过滤溶剂溶剂在使用前一定要用0.5μm的过滤器过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。
本实验室有水溶性和脂溶性两种过滤膜供选择（反光面朝上），过滤水溶性流动相时（如甲醇/水），先用1-2ml甲醇润湿过滤膜，有助于快速抽滤。
1.2 保持储液瓶的清洁用普通溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子，最后一次应用HPLC级的水或溶剂清洗，不能在清洗过程中留下污迹。
1.3 保证溶剂的质量一定要用HPLC级的溶剂，水也应达到HPLC级，同样也要使用高纯度的缓冲盐。
1.4 故障及解决方法1.4.1 流动相脱气不充分流动相受热，或者流动相不同组分混合时会有气体产生，气泡进入泵内引起压力波动，增加噪音，色谱图上出现毛刺。
可试用下列方法解决问题：流动相再脱气；采用更有效的脱气方法或两种方法配合使用；改系统内混合为系统外预混合。
1.4.2 流动相供给不畅流动相用完，管道中吸入气体引起泵压力不稳。
应经常观察储液器中流动相的量，加足流动相保证所有的样品分析完毕。
输液管道上装沉子沉至瓶底，储液器盖上留一小孔正好夹住进液管，使其不能上下移动。
过滤器阻塞引起管道和泵腔空化，压力不稳。
过滤器被微粒所阻塞或长霉，去掉过滤器后如果系统运转正常，说明已找出问题，换上新的过滤器则可。
有时候换上新的过滤器仍然不畅，那就需要查查流动相的制备过程，或者换大孔径的过滤器。
不管如何，流动相都需要重新过滤。
流速过高、阻力大，造成空化现象，这是由于过滤器孔径、管道内径、流速和溶剂黏度等引起的。
如果流速大于10ml/min，常会出现这种现象。
使用下列方法解决：（1）使用低流速；（2）换大孔径的过滤器；（3）增加进液管道内径；（4）抬高或加压储液器；（5）不用过滤器，但流动相一定要先过滤；（6）储液器盖子太紧，在储液器内形成真空，打出的流动相不连续。
waters515标准操作程序
Waters 515高效液相色谱仪使用方法一、打开仪器与工作站：1.按要求配制流动相，经过滤、超声波脱气后装入贮液瓶中，然后将恒流泵上末端带有过滤器的输液管分别插入对应贮液瓶中。
2.打开电脑及色谱输液泵、二极管阵列检测器电源开关，在输液泵控制面板中，按向上或向下箭头，找到“Local”，按“Edit”进入可编辑状态，再按向上或向下箭头，调至“Rem.”状态，按“Edit/Enter”确认，按下面板左面的“Run/Stop”，此时屏幕右上角“Local”与“Run”相继闪动。
（接通电源前，应先用专用注射器从排液阀抽去泵前管路中可能存在的气泡）。
3.双击电脑桌面上“Empower”图标，输入用户名“system”与密码“manager”，确定，进入工作站主窗口。
二、运行样品：1.在主窗口中点击运行样品，选择采集数据的项目与色谱系统后，点击“确定”打开运行样品窗口。
2.运行样品窗口中，在左面写入样品名称与合适的运行时间，左下部分上下两个按钮分别为“改变流速”与“停止流液”，右下部分的“仪器方法”的下拉框中可以选定仪器方法，“编辑”可以对选定仪器参数进行编辑，“设置”用于将编辑好的仪器参数下载到色谱主机，“监视器”用于察看色谱基线情况，色谱图在窗口右侧显示。
3.分析样品之前应设定压力上限，以保护色谱柱。
4.设置各参数后，待基线平直才可进样。
5.将进样阀手柄置于“Load”(右上)位置，用微量注射器吸取一定量的试样溶液，插入进样口(插到底)并将试样溶液缓慢推入。
6.点击运行窗口左半部分中右侧的按钮“进样”，待窗口下面的状态栏中出现“等待进样”时，扳下进样阀手柄，进样运行即开始。
7.运行时间结束后自动停止运行，或可以单击上面的红色快捷按钮“停止运行”用以手动停止。
三、测定数据的察看1.在工作站主窗口中点击浏览项目，在右侧窗口选定相应方法组后确定，打开数据列表，在表中第一行选定“进样”，在表中找到相应数据，双击打开。
Waters液相色谱仪操作规程doc
Waters液相色谱仪操作规程1、开机：打开脱气机、泵、检测器和电脑开关（如需控制温度，还要打开柱温箱开关）2、脱气：点击Setup键，—clirect键进入isocratic窗口，拔掉废液出口堵头，接上废液杯，打开排气阀，设定流速5ml/min，调流动相比例，按光标键“▲”至光标出现在A%（甲醇）下方，按数字键，输入输入数字如80，按Enter键，光标出现在B%（水）的下方，按数字键，输入数字如20，按Enter键继续按Enter键，一直到使光标出现在左下角的OFF为止，进行排气（若气泡太多，短时间内排不完就用针管抽气：将旋钮旋至DRAW位，抽气至气泡没有为止，然后将旋钮旋至RUN位），排完气泡后，将流速调至0，关闭排气阀，然后将流速设置为1ml/min。
3、双击桌面上的Empower图标，输入用户名和密码①创建新项目：双击“配置系统”—新项目（选择菜单“文件—新建—项目）—选择父项目（选”项目”文件夹）—“下一步”—表空间100，不选“支持，全面审计追踪”—“下一步”—“下一步”（接受默认选项）—“下一步”（接受默认选项）—“下一步”（接受默认选项）—输入项目名—“完成”②运行样品双击“运行样品”—选“项目名***”—“确定”输入样品名：***功能：方法组：样品瓶：进样体积：进样时间：点击“创建方法组”—“新建”（出现仪器方法编辑器）点击“W600”图标—“流量”—泵模式：等度；流量比例设定—“事件”—启用事件监视—点击“W2998”图标，—点“通用”—启用3D数据设定“采样速度1—2”—“2D通道”—选“通道1”设定波长（编辑完成后保存）击“文件”—“另存为”—输入仪器方法名称—“保存”关闭“仪器方法编辑器”窗口选中所要的“仪器方法”—单击“下一步”—“下一步”—完成在“运行样品”页选中刚建立的“仪器方法”—点“监视器”（观察基线平滑无毛刺）待系统平衡后，即基线平滑无毛刺时，单击“终止监测”图标，（此时屏幕下边显示”系统空闲”),点击“进样图标”，屏幕下部出现“正在设置”—“等待进样”—这是扳动进样阀可以进样—进样后屏幕下边出现“正在运行”③数据处理A 双击“浏览项目”—项目—“确定”B在“通道”中查看，选中要处理的数据C选择“工具”—“查看”—打开（出现“查看”主窗口）D单击菜单中“文件”—“新建”—“处理方法”（出现新处理方法对话框）选使用处理方法向导—“确定”（出现“积分—峰检测1”）—设定“峰宽”—“下一步”（出现“积分—峰检测2”）—设定“阈值”（50）—“下一步”（出现“积分—积分区域”），输入保留时间：“开始时间—结束时间”—“下一步”（出现“积分—剔除峰”）—设定最小面积，最小高度，（或不做任何改动）—“下一步”—“下一步”，选择“否”，在“名称”栏中输入组分的名称（或不改动）—“下一步”—“下一步”输入“方法名”—”完成“。
沃特世基本操作515-2487
Waters 高效液相色谱仪（515+7725i+2487）基本操作方法1） 打开515泵及2487 UV 检测器电源开关，等待自检结束。
2） 在溶剂瓶中加入充足的，脱过气的，用0.45μm 滤膜过滤过的，新配制的流动相。
将515泵的入口塑料管带滤头的一端插入溶剂瓶液面以下。
3） 逆时针旋转515泵的排液阀（Draw off Valve ）半圈，用注射器抽取适当体积的流动相直到气泡排净并且流动相置换完成。
4） 确认色谱柱未安装在系统中，将进样器手柄板到Inject 位置。
按下515泵的键，用来清洗整个系统，注意在泵出口处收集废液。
约5分钟后，再次按下键，停止清洗系统。
5） 将色谱柱连接在系统中，按下515泵的键两次，看到屏幕上的光标在小数点后第一位闪烁时，按或键将流速设定为0.100，按下键，泵开始运行，随时注意观察压力变化。
排液阀泵头出口单向阀 入口单向阀柱塞杆指示棒 泵出口泵入口 压力传感器清洗孔（看不见）高压过滤器（看不见） 泵入口塑料管6) 将光标（黑框）移至λ后，按数字键输入需要的波长数，按回车键确认。
7）将光标（黑框）移至AUFS前，按数字键输入需要的灵敏度数，按回车键确认。
8）系统已经平衡好后，启动工作站软件，当工作站处于等待进样时，用微量注射器抽取所需体积的，过滤过的标准品或样品，将微量注射器针头插入进样器的进样口，针头至进样器的底部插不动为止，将进样器手柄板到Load位置，把样品推入到进样器中，迅速扳下进样器手柄至Inject位置。
9）收尾工作：用适当的流动相清洗系统，色谱柱的最终保存液为甲醇或乙腈。
缓慢的降低流速至0.100，停泵流速，关闭515泵及2487检测器电源开关。
10）若超过3天不使用仪器，应该将色谱柱清洗干净后取下，两端用堵头封好。
11）仪器若长时间不使用，应该泵入甲醇清洗系统，以防系统长菌。
然后将溶剂头从溶剂瓶中取出，用干净的塑料袋封好。
Waters高效液相的标准操作规程(SOP)
Waters高效液相的标准操作规程（SOP）一、操作前准备1. 流动相准备：流动相所用试剂必须是色谱纯。
必须经过滤，脱气。
2. 检查色谱柱的链接：色谱柱出入口不能颠倒，出口螺帽必须拧紧防漏液。
二、色谱仪的启动、设置和应用操作流程图图1.开机进入breeze系统：依次打开泵以及检测器、柱温箱的电源，等到检测器自检完毕后，打开计算机登录windows，并进入breeze软件。
2.选择系统:在“选择项目和系统”对话框中，选择所需的项目和色谱系统，然后单击“确定”。
（色谱系统2489为紫外检测器；2414为示差折光检测器）3.创建方法:(1):管理→项目→创建项目→defaults→输入自建的项目名称和注释名→确定→项目创建完毕(2):切换系统：在窗口下切换系统→系统名称空白→确定管理→切换系统→系统名称（选择要用的检测器）→确定。
（可通过节点属性来检查和确定目标检测器是否处于在线状态）(3):调用方法组编辑器→新建→单击PCM泵按钮→高压限制:4000→泵模式（等度/梯度）→（设置各流动相流速）（C18反相柱总流速限定在2mL/min以内）单击TCM柱温箱按钮→区域1：设定柱温单击W2489：→设定波长（紫外可见光波长）→模式（单/双波长）→采样速率（1-2）文件→另存为→名称→保存。
新方法组→请选择用使用该方法组的数据有关的仪器方法→自建方法→下一步→完成。
4.灌注、清洗泵、清除系统、平衡系统4.1灌注和清除泵：1.在灌注和清洗泵之前的准备工作•如果泵处于干燥状态，在继续操作前应进行干灌注。
•将泵的参比阀旋钮向右旋转 1/2 圈，确保洗脱液流（绕过泵下游的所有连接组件）引至废液。
2.在“选择项目和系统”对话框中，确认色谱系统已完成配置并在线。
•确保已在“节点属性”中正确配置泵。
•将系统设置为在线。
3.在“运行样品”窗口中，单击“开始流量”图标，然后为泵流量和梯度设置输入适当的值。
提示：要快速灌注和清除以下型号的泵•对于 1525 泵，将流量设置为 4.0 毫升/分，并将梯度设置为 50% A、 50% B。
高效液相色谱仪常规分析操作步骤及规程
高效液相色谱仪常规分析操作步骤及规程高效液相色谱仪操作步骤（原文摘录自网络）：1)．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。
2)．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3)．打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4)．进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5)．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。
冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6)．调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。
点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。
7)．设计走样方法。
点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。
若需建立一个新的方法，点击new method。
选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。
选完后，点击protocol。
一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8)．进样和进样后操作。
选定走样方法，点击start。
进样，所有的样品均需过滤。
方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。
全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9)．关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10)．填写登记本，由负责人签字。
注意事项：1)．流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。
脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。
2)．柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。
3)．所有过柱子的液体均需严格的过滤。
4)．压力不能太大，最好不要超过2000 psi。
waters高效液相色谱操作规程
Waters高效液相色谱操作规程1、用途：进行样品纯度和杂质的分析，可以满足双波长采集数据。
2、系统组成：本系统由2个Waters 515 HPLC Pump溶剂输送泵, 7725i手动进样阀、Waters2489紫外-可见检测器、Waters原装色谱数据工作站和电脑等组成，柱温箱、不间断电源等辅助设备。
3、准备3.1 准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤（水相用水膜，含有机相用有机膜），超声脱气20min。
3.2根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（注意方向，顺序是从进样器流经色谱柱进入检测器方向，色谱柱箭头方向为流速方向）。
3.3倒掉废液瓶中的废液。
3.4检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
4、操作规程4.1启动仪器：4.1.1首先打开柱温箱并设置柱温箱温度为40℃按柱温箱控制界面上的ready键启动柱温箱。
4.1.2依次开启电脑、检测器和泵控开关。
4.1.3将泵1、泵2吸滤器相应的放入到准备好的流动相中。
4.1.4泵的排气：逆时针方向将泵前置阀门旋转180。
并用烧杯进行收集，按MENU键进入到PURGE状态，点击EDIT ENTER键进行脱气排空处理(约3-5分钟)，排空结束后再按RUN/STOP键关闭，顺时针方向将泵前置阀门旋转180。
拧紧。
4.1.5五分钟后打开电脑桌面上的Empower工作站，进行仪器与电脑的连接。
本机用户名：system 密码：manager。
4.2参数设置：4.2.1建立新的分析方法（详情见Waters原装色谱工作站操作规程）。
若为已有方法的分析项目，直接调用即可（详情见Waters原装色谱工作站操作规程）。
4.2.2泵的设置4.2.2.1等度洗脱：将泵1的吸滤器放入准备好的流动相的储液瓶中，设置流速，按RUN/STOP键开启流速。
4.2.2.2梯度洗脱：1、分别按照工作站设置将泵1、泵2的吸虑器放入到相应的准备好的流动相储液瓶中。
2、将两个泵的流速分别设置到初始流速相应的数值。
waters高效液相操作规程
Waters 高效液相操作规程1. 简介高效液相色谱（High-performance liquid chromatography，HPLC）是一种广泛应用于化学、生物、医药等领域的分析技术。
Waters 公司是高效液相色谱仪器和耗材的主要供应商之一，本文将介绍 Waters 高效液相操作规程，以确保用户能正确、高效地操作 Waters 高效液相色谱仪器。
2. 仪器准备在进行高效液相色谱操作之前，首先需要准备好仪器。
以下是准备步骤：2.1 仪器检查检查仪器是否处于正常工作状态，确保所有液体泵、进样器、检测器等部件均正常联通。
2.2 操作软件启动启动 Waters 高效液相色谱仪器的操作软件，并连接仪器。
确保软件能够正常与仪器通讯。
2.3 样品准备根据分析目的，准备好待测样品溶液，并根据需要进行适当稀释或前处理。
3. 方法设置3.1 选择方法根据分析目的选择合适的方法。
在 Waters 高效液相色谱仪器操作软件中，点击“Method”（方法）选项卡，选择已有方法或新建方法。
3.2 参数设置根据分析需求设置方法参数，包括流速、柱温、分析时间等。
在操作软件的方法设置界面中进行参数设置。
3.3 样品进样选择进样器类型（自动或手动），设置进样体积和进样方式。
将样品溶液注入进样器，并进行相关设置。
4. 色谱柱操作4.1 切换柱根据需要，选择合适的色谱柱，并确保柱已经连通到色谱系统中。
4.2 柱平衡对于新柱，需要首先进行柱平衡。
在操作软件中选择柱平衡功能，根据提示进行操作。
5. 运行实验5.1 实验开始确认实验条件设置正确后，点击操作软件中的“Run”按钮，开始实验运行。
5.2 监控运行在实验运行过程中，密切监控柱压、流速和检测器信号等参数，确保实验正常进行。
5.3 数据记录实验运行结束后，保存实验数据。
点击操作软件中的“Save”按钮，选择保存路径和文件名。
6. 仪器关闭6.1 实验结束实验完成后，点击操作软件中的“Stop”按钮，停止实验运行。
(完整)Waters高效液相色谱仪标准操作规程
1.目的描述 Waters 高效液相色谱仪标准操作规程。
2.适用范围化验室3.责任者化验员应严格遵照该操作规程 , QC 主管负责监督本规程的实施。
4.定义HPLC High Performance Liquid Chromatography , 高效液相色谱仪。
5.安全注意事项5.1有机溶媒有害健康，各溶剂瓶口应封严。
5.2注意检查废液桶中废液应避光，防止废液桶满外溢。
6.规程6.1.Waters HPLC的组成：贮液器输液泵自动进样器分离柱 (柱温箱 )紫外检测器控制及数据处理系统 (Millennium 32化学工作站 )。
6.2. HPLC系统的打开及关闭顺序6.2.1打开顺序•对于分体式：请按泵、进样器、柱温箱、检测器的顺序打开开关，待各部分分别显示初始化完毕后，最后打开M i l l e nn i um32化学工作站。
泵与色谱工作站的连接：对于 510 泵，因为此泵与色谱工作站是单向联系，如要使泵在 Remote 状态下由工作站控制，首先要在泵的键盘上按 Menu 键，待显示屏切换至 Mode 状态下，其状态是Loca ，按 Edit/Enter 键，在 Local 的L 前有闪动的光标显示，按键，Local 转换成Rem，再按Edit/Enter 键，此命令已输入进去, 最后按Stop/Run 键，使泵处于Run 状态这时泵和工作站的连接即告成功。
泵的任何动作都可由工作站来控制。
还应注意这一步工作在每次开机时都要进行。
对于 Alliance 2690 系统：先打开 Alliance 2690 主机、检测器电源开关，待初始化完毕后，再进入 Millennium 32化学工作站。
对于流动相的要求：对于液体试剂应尽量采用色谱纯试剂；对于所用到的固体试剂应采用分析纯试剂；对于水，应采用经纯水机处理过的超纯水；流动相在使用前一定要经 0.45m 的滤膜（滤膜分为水相膜与有机相膜，确保使用正确的滤膜，参见附表 ) 过滤、超声真空脱气方可使用，严禁含盐的流动相未经过滤直接使用。
waters高效液相色谱操作Waters 515泵、Waters 486紫外检测器
Waters 515型高效液相色谱仪标准操作规程本仪器由Waters 515泵、Waters 486紫外检测器和EChrom98工作站及连接电脑组成，四个部件均有电源插头。
1首先检查泵的流路，电路接线均无问题后方可操作。
2接通电源将电源插头分别插入插座后，依次打开泵、检测器、EChrom98工作站的电源开关。
3 Waters 515泵操作3.1接通系统电源，控制器开通后进行自检，短暂显示型号泵头规格版本号，数秒后通过，显示READY后，便可进行排气操作。
3.2断开泵出口与后续仪器连接的流路，逆时针旋开DRA W OF V AL VE,用注射器抽气，直到流动相流出，关闭V AL VE。
3.3 反复按MENU键，直至出现PURGE参数，按ENTER键运行PURGE 参数5ml/min 5min冲洗泵。
4打开EChrom98工作站软件，查看实时信号情况，在Waters 486紫外检测器上设定检测样品所需的波长参数。
5 重新连接泵出口与其后仪器，按照测定样品所需要的流动相的流速及比例，设定泵的参数，冲洗管路30min以上，直至检测器输出的信号基线平稳后方可进样，采集数据，并保存数据。
测定操作5.1按检测器Auto zero键置零，进样阀手柄置“LOAD”位置，将供试液注入进样阀。
5.2进样阀手柄迅速转到“INJECT”位置，注入样品，开始采集色谱数据。
5.3出峰完毕，如果不到设定时间，可使用“退出”菜单中“结束实验”选择框停止数据采集，屏幕上显示确认结束对话窗，选中“是”选择框，则中止数据采集。
6实验结束后，更换甲醇清洗流路30min以上，如流动相中有缓冲盐，则需用HPLC级纯化水冲洗管路。
同时需要用纯水清洗柱塞。
停泵如果超过一天，则需要用水/甲醇冲洗整个系统流路。
7冲洗结束后关闭电源，并填写仪器使用记录。
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Waters 515高效液相色谱仪使用方法
一、打开仪器与工作站：
1.按要求配制流动相，经过滤、超声波脱气后装入贮液瓶中，然后将恒流泵上末端带有过滤器的输
液管分别插入对应贮液瓶中。
2.打开电脑及色谱输液泵、二极管阵列检测器电源开关，在输液泵控制面板中，按向上或向下箭头，
找到“Local”，按“Edit”进入可编辑状态，再按向上或向下箭头，调至“Rem.”状态，按“Edit/Enter”
确认，按下面板左面的“Run/Stop”，此时屏幕右上角“Local”与“Run”相继闪动。
（接通电源前，应先用专用注射器从排液阀抽去泵前管路中可能存在的气泡）。
3.双击电脑桌面上“Empower”图标，输入用户名“system”与密码“manager”，确定，进入工作站主窗
口。
二、运行样品：
1.在主窗口中点击运行样品，选择采集数据的项目与色谱系统后，点击“确定”打开运行样品窗口。
2.运行样品窗口中，在左面写入样品名称与合适的运行时间，左下部分上下两个按钮分别为“改变流
速”与“停止流液”，右下部分的“仪器方法”的下拉框中可以选定仪器方法，“编辑”可以对选定仪器参数进行编辑，“设置”用于将编辑好的仪器参数下载到色谱主机，“监视器”用于察看色谱基线情况，色谱图在窗口右侧显示。
3.分析样品之前应设定压力上限，以保护色谱柱。
4.设置各参数后，待基线平直才可进样。
5.将进样阀手柄置于“Load”(右上)位置，用微量注射器吸取一定量的试样溶液，插入进样口(插到底)
并将试样溶液缓慢推入。
6.点击运行窗口左半部分中右侧的按钮“进样”，待窗口下面的状态栏中出现“等待进样”时，扳下进
样阀手柄，进样运行即开始。
7.运行时间结束后自动停止运行，或可以单击上面的红色快捷按钮“停止运行”用以手动停止。
三、测定数据的察看
1.在工作站主窗口中点击浏览项目，在右侧窗口选定相应方法组后确定，打开数据列表，在表中第
一行选定“进样”，在表中找到相应数据，双击打开。
2.在数据显示窗口中，中间上半部分为等高图区，中间下半部分为色谱图区，右上部分为光谱图区；
点菜单“处理”－“提取色谱”后，等色谱图区中出现一白色数据框，上下拖动或双击－输入相应波长值－回车后，在色谱图区出现相应色谱图；点菜单“处理”－“提取光谱”，可以在窗口色谱图区中出现一白色数据框，左右拖动或双击－输入相应波长值→回车后，光谱图区出现相应光谱图；
中间最下面的部分是峰表，表中有峰号、保留时间、峰面积、峰高等项目。
四、关机：
1.在运行样品窗口中，点击左下方两个按钮中的“停止流液”钮，退出工作站。
2.依次关闭检测器与输液泵电源，关闭电脑及其它相关电源。
3.冷却10min后，盖上仪器罩。
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