第十四章 细胞增殖调控与癌细胞
细胞学作业第十四章 细胞增殖调与癌细胞
一、简述p34^cdc2/cyclin B蛋白激酶的发现过程。
Tim Hunt 为代表的科学家以海胆卵为材料，对细胞周期调控进行了深入研究。
JR.Evans 等人于1983年报道，在海胆卵细胞中含有两种特殊蛋白，它们的含量随周期过程变化而变化，一般在细胞间期内积累，在细胞分裂期内消失，在下一个周期有重复这一过程，因而它们将其命名为周期蛋白。
随后的研究证明：周期蛋白为诱导蛋白进入M期所必须。
各种生物之间的周期蛋白在功能上有着广泛的互补性。
将海胆cyclin B的mrna引入到非洲爪蟾卵非细胞系中，其翻译产物可诱导该非细胞体系进行多种细胞周期循环。
接下来的一系列实验提示周期蛋白可能参与MPF的功能调节。
二、举例说明CDK在细胞周期中是如何执行调节功能的？细胞周期调控包括正调控、负调控和信号反应。
CDK激酶是正调控因子，它是细胞沿周期运行的引擎蛋白。
以MPF为例阐述：MPF是一种使多种底物磷酸化的蛋白激酶，即CDK1激酶，由p34蛋白和周期蛋白B结合而成。
CDK1激酶活性首先依赖于周期蛋白B含量的积累。
周期蛋白B一般在G1期的晚期开始合成，通过S期，其含量不断增加，达到G2期，其含量达到最大值，CDK1激酶的活性随着周期蛋白B浓度变化而变化。
CDK1激酶的活化还受到激酶与磷酸酶的调节。
活化的CDK1激酶可使更多的CDK1激酶活化。
随着周期蛋白B 含量达到一定程度，CDK1激酶活性开始出现，到G2晚期阶段，CDK1激酶活性达到最大值并一直维持到M期的中期阶段。
活化的CDK1激酶促使分裂期细胞在分裂前期执行下列生化事件：（1）染色质开始浓缩形成有丝分裂染色体；（2）细胞骨架解聚，有丝分裂纺锤体开始组装；（3）高尔基复合体、内质网等细胞器解体，形成小的膜泡。
在有丝分裂的后期，活化的后期促进因子APC主要介导两类蛋白降解：后期抑制因子和有死分裂周期蛋白。
前者维持姐妹染色单体粘连，抑制后期启动；后者的降解意味着CDK1激酶失去活性，有死分裂即将结束，即染色体开始去凝集，核膜重建。
植物生理学第十四章 细胞增殖及其调控
• • • the 45 kDa protein and the cyclin B
Jean Gautier, Chris Norbury, Manfred Lohka, Paul Nurse and James Maller.
Purified Maturation-Promoting Factor Contains the Product of a Xenopus Homolog of the Fission Yeast Cell Cycle Control Gene cdc2+. Cell, 54, 433 , 1988 • • • the 32(34) kDa protein and the Cdc2
蛋白质合成抑制剂 蛋白质合成抑制剂
MPF的纯化 1988，James Maller
MPF含p32和p45 MPF为蛋白激酶
成熟卵细胞质移植发现ＭＰＦ的存在
二、p34cdc2激酶的发现及其与MPF的关系 p34cdc2激酶
催化亚单位 调节亚单位
MPF的结构组成
三、周期蛋白
部分周期蛋白分子结构特征 含有保守的氨基酸序列——周期蛋白框——介导周期蛋白与CDK结合 M期周期蛋白分子N端含有破坏框——参与泛素依赖的蛋白降解 G1期周期蛋白分子C端含有PEST序列——与周期蛋白更新有关
Lohka, M.J.; Hayes, M.K.; Maller, J.L. PNAS. USA 85: 3009-3013. 1988.
• • • 45 kDa and 32 kDa Proteins (3000-fold activity)
Cyclin is a component of maturation-promoting Jean Gautier, ……. James L. Maller. factor from Xenopus. Cell 60: 487-
第14章细胞增殖调控与癌细胞
Amphibian oocytes and early embryos of frogs
(引自翟中和等，2011)
Masui and Markert’s experiments (J. Exp. Zool. 1971, 177: 142)
What’s the role of hormone? Trigger protein synthesis
By cyclin
mitosis
mitosis
Cyclin concentration
interphase
interphase
By phosphatase and Kinase
Cell-cycle control system: cyclically activated protein kinases
2. MPF: transition from G2 to M
Maturation-promoting factor / Mitosis-promoting factor
(引自翟中和等，2011)
1978, MPF activity undergoes dramatic fluctuations in cleaving eggs that correlate with changes in the cell cycle
Mitosis
Mitosis
Mitosis
MPF activity
Cdc2
MPF has protein kinase activity
cyclin
M phase Cyclin-Cdk (MPF) (Cyclin-dependent protein kinase)
cyclin-dependent kinase (Cdk)
第十四章 细胞增殖调控与癌细胞
二、p34cdc2激酶的发现及其与MPF的关系
温度敏感株 cdc基因调控酵母细胞分裂和细胞周期（cdc2, cdc25, cdc28等) MPF催化亚单位(p32) cdc2基因突变导致细胞停留在G2/M期交界处
p34cdc2 p34cdc28
cdc28基因突变导致细胞停留在G1/S期交界处 或G2/M期交界处
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The pathogenesis of cancer metastasis
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二、癌基因与抑癌基因
癌症主要是由携带遗传信息的DNA的病理变化而引起的疾病 遗传病：生殖细胞DNA突变 癌症：体细胞DNA突变 （生殖细胞某些基因位点的突变会加大癌变的可能性） 癌基因（oncogene）：控制细胞生长和分裂的一类正常基因，其突变能引起 正常细胞发生癌变。
ATR/CHK1介导 DNA复制检验点
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六、其他因素在细胞周期调控中的作用
癌基因 抑癌基因 （p53, Rb）
细胞和机体的外在因素 离子辐射、化学物质作用、病毒感染、温度变化、PH变化等
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第二节 癌细胞
一、癌细胞的基本特征
动物体内因细胞分裂调节失控而无限增殖的细胞称为肿瘤细胞（tumor cell）； 具有转移能力的肿瘤细胞称为恶性肿瘤（malignancy）； 源于上皮组织的恶性肿瘤称为癌 （目前已成为恶性肿瘤细胞的通称）。
抑癌基因或其编码的蛋白质的主要功能可概括为3类： ① 偶联细胞周期与DNA损伤 ② 与细胞凋亡有关 ③ 与细胞黏着有关
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原癌基因- 显性突变
抑癌基因- 隐性突变
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控制细胞生长和增殖，并与肿瘤发生相关的7类蛋白
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细胞信号调控网络及肿瘤发生相关的主要调控因子
第14章+细胞增殖调控与癌细胞
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六、细胞周期运转调控
1. G2/M期转化与CDK1激酶的关键性调控作用 2. M期周期蛋白与分裂中期向后期转化 3. G1/S期转化与G1期周期蛋白依赖性Cdk激酶 4. S/G2期转化与DNA复制检验点
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1. G2/M期转化与CDK1激酶的关键性调控作用
• CDK1激酶即MPF，由p34cdc2蛋白和周期 蛋白B结合而成。p34cdc2蛋白在细胞周期中 的含量相对稳定，而周期蛋白B一般在G1 期的晚期开始合成，S期含量不断增加， 到G2期含量达到最大。因此，CDK1激酶 活性在G2期晚期达到最大并一直维持到M 期的中期阶段。
Cyclin B-Cdk1 (Cdc2)
G1 Substrates
S Substrates
G2/M Substrates
Growth and Morphogenesis
DNA Replication
Mitosis 26
五、Cdk激酶抑制因子
• 哺乳动物Cdk抑制因子 (Cdk inhibibitors, CKIs) ，包括Cip/Kip家族和INK4家族。
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三、细胞周期蛋白(cyclin)
1983年Evans等报道在海胆卵细胞中存在一种特 殊蛋白质，这种蛋白含量随细胞周期进程变化 而变化，将这种蛋白称为周期蛋白(cyclin)。
已从多种生物体发现细胞周期蛋白，如酵母的 Cln1、Cln2、Cln3、Clb1~Clb6，高等动物的周 期蛋白A1、A2、B1、B2、B3、C、D1、D2、 D3、E1、E2、F、G、H、L1蛋白在细胞周期 调控中的作用
在DNA出现损伤时，P53 作为转录激活因子诱导 P21基因的表达，P21蛋白 能够同CDK-周期蛋白复合 物结合并将细胞阻止在G1 期或G2期。同时，P21蛋 白与增殖细胞核抗原
植物生理学第十四章 细胞增殖及其调控
第二节 癌细胞
癌细胞的基本特征 癌基因与抑癌基因 肿瘤干细胞
动物体内因分裂调节失控而无限增殖的细胞称为肿瘤细 胞。
具有转移能力的肿瘤称为恶性肿瘤；上皮组织的恶性肿 瘤称为癌。
癌细胞与正常分化细胞明显不同的一点： 正常分化细胞：细胞类型各异，但都具有相同的基因组； 癌细胞：细胞类型相近，但基因组却发生不同形式的改变。
肿瘤的发生频率会高吗？
第一、绝大数基因突变位点不会致癌 第二、单一基因的突变不会发生癌症，多个基因突变逐 渐形成癌细胞的特征
癌症会遗传吗？
生殖细胞中原癌基因或肿瘤抑制因子发生致 癌突变——癌变发生所需要的基因突变数积 累时间减少，家族成员更易患癌症
白血病：血细胞恶性增生——少数基因发生 突变，便可导致癌症发生，患病年龄较早
Dr. Folkman’s War: endostatin（内皮他丁）
研究细胞增殖调控的意义
G1
S
G2
Cytokinesis
M
基于细胞周期的癌症治疗药物研发进展
本章小结
促成熟因子（MPF）=p34cdc2（周期蛋白依赖性激酶） +clyclin B （周期蛋白）
周期蛋白：不同的周期蛋白在细胞周期中表达的时间不同 ，与不同的CDK结合调节其活性
植物生理学第十四章 细胞增殖及其 调控
重点：MPF的组成及作用；细胞周期运 转调控；癌细胞的基本特征；癌基因与 抑癌基因；肿瘤干细胞
难点：细胞周期运转调控
第一节 细胞增殖调控
MPF（mitosis promoting factor）发现及其作用 p34cdc2激酶的发现及其与MPF的关系 周期蛋白 CDK激酶（cyclin-dependent kinase）和CDK抑制因子 细胞周期运转调控
第十四章 细胞增殖调控与癌细胞-yan
• • • the 32(34) kDa protein and the Cdc2 Cell, 54, 433-439 , 1988
非洲爪蟾：MPF : 裂殖酵母：P34cdc28 芽殖酵母 P34cdc2
P32+P45
+P56cdc13
CDK1
海胆卵：cyclinA cyclinB
MPF主要 成分
SCF底物特异性的识别是由F-box 蛋白来决定的
SCF通过降解不同时期不同底物从而在 整个细胞周期中都发挥作用
确保每一周期DNA只复制一次的机制
在G1期ORC（复制 起始点识别复合物）结 合起始复制点，Cdc6和 Cdt1被募集到ORC上， 在ATP供能下，促进6个 亚单位构成的Mcm复合 体和其他一些蛋白结合 到ORC上，形成前复制 复合体（pre-RC）， DNA复制获得执照。 Mcm 实际上就是 DNA解旋酶。随着DNA 的复制， Mcm逐渐减少， 复制结束消失。 Mcm存在于细胞质 中，只有在M期细胞核 膜破裂时才有机会和染 色质结合。
（二）M期周期蛋白与分裂中期向分裂后期转化
① M期周期蛋白A和B在分裂中期与CDK1分离，在激活APC （Anaphase Promoting Complex）的介导下，通过泛素依赖性途径降解)。 ② CDK1激酶活性消失，细胞由中期向后期转化，完成一个细胞周期。
。
APC至少由15种成分组成，分别为APC1-APC15。在人体和酵 母中都分别鉴定出13种. APC 正调控因子： Cdc20/Fizzy和Cdh1/Fzy; 负调控因子：Emi1、 Emi2、Mad2、BubR1等。 Cdc20 和Mad2蛋白位于动粒上，在微管与动粒结合以前，不 能从动粒上释放。 • 当微管正确结合到动粒上时,可能改变着丝粒相关蛋白的构象,从 而影响BubR1 等的活性,使Mad2 与Cdc20脱离动粒,这时APC才有活 性，启动细胞向后期转换.
第十四章细胞增殖调控与癌细胞
第十四章细胞增殖调控与癌细胞细胞周期的有序运转第十四章细胞增殖调控与癌细胞第一节细胞增殖调控Clock Theory Domino Theory一、MPF的发现及其作用研究背景1970s Rao和Johnson发现与M期细胞(Hela)融合的间期细胞染色体发生凝缩，称为早熟凝集染色体(prematurelycondensed chromosome，PCC)。
–G1期PCC为单线状，因DNA未复制。
–S期PCC为粉末状，因DNA由多个部位开始复制。
–G2期PCC为双线染色体，说明DNA复制已完成。
甚至不同类的M期细胞也可诱导PCC产生，说明M期细胞具有促进间期细胞进行分裂的因子，即成熟促进因子(maturation promoting factor，MPF)。
G期细胞与M期细胞融合S期细胞与M期细胞融合1G 2期细胞与M期细胞融合PCC成熟促进因子(maturation promoting factor，MPF ）,早期称为M-期促进因子(M-phase promoting factor, MPF)，是指M期细胞中存在的促进细胞分裂的因子MPF的发现及组成卵细胞提取物注射实验把M 期细胞的细胞质注射到卵细胞，发现可以促进卵细胞成熟分裂，继续用该卵细胞细胞质诱导新的卵细胞，仍然可以促进卵细胞成熟分裂。
因而他们推测M 期细胞中必然有一种物质可以诱导卵细胞成熟分裂，即促细胞成熟因子（maturation promoting factor, MPF ）。
1960s Leland Hartwell,1970s Paul Nurse 以芽殖酵母和裂殖酵母为实验材料，利用温度敏感突变株，发现许多与细胞分裂有关的基因(cell division cycle gene, CDC)。
如：–裂殖酵母cdc2、芽殖酵母cdc28突变型在限制温度下无法分裂；–wee1突变型则提早分裂，cdc25突变型细胞体积增大而不分裂；–cdc2和cdc28都编码一个34KD的蛋白激酶，促进细胞周期的进行，weel和cdc25分别表现为抑制和促进CDC2的活性。
第十四章 细胞增殖调控与癌细胞
结果 找到cdc基因，如cdc28,表达蛋白为 34kDa,称为p34cdc28
结论 第二个被分离出来的cdc基因； 突变后细胞停留在G1/S或G2/M期 。
cdc2: 第一个被分离出来的cdc基因，表达蛋白为p34cdc2 特点：突变后裂殖酵母细胞停留在G2/M期
cdc28: 第二个被分离出来的cdc基因，表达蛋白为p34cdc28 特点：突变后芽殖酵母细胞停留在G1/S或G2/M期
结论
在成熟的卵母细胞中，必定有一种物质，能诱导卵 母细胞成熟，这种物质称为成熟促进因子（MPF）
卵细胞细 胞质移植 实验
成熟卵母细胞中 的物质能诱导卵 母细胞成熟
实验三 时间 研究者 步骤
1988 Maller et al
以2和p45两种蛋白。p32和p45结合后， 表现出蛋白激酶活性，能使多种蛋白质底物磷酸化
1、CDK
通过Pdc2同类基因，不同物种的cdc2基因编 码的蛋白质都含有一段相似序列，并且都能和周期蛋白结合， 将其作为调节亚基，进而表现出激酶活性。它们被统称为周 期蛋白依赖性蛋白激酶(cyclin-dependent kinase)，简称 CDK。
A： G1期DNA未复制，超前染色体为单线性； B：S期DNA正在复制，超前染色体为点状，很多复制起始点；
C：G2期DNA复制完毕，超前染色体为双线性。
实验二 时间
研究者
1971 Masui和Markert
步骤
用解剖的方法分离非洲爪蟾第IV期卵母细胞， 孕酮诱导成熟后进行细胞质移植实验
结果
孕酮诱导成熟的卵母细胞的细胞质 能诱导其他卵母细胞的成熟
已经发现CDK1-CDK13等CDK激酶。
（1）与不同类型的周期蛋白相结合的CDK
细胞生物学：第14章 细胞增殖调控与癌基因
一、癌细胞的基本特征
1.细胞生长与分裂失去控制，具有无限增殖能力， 成为“永生”细胞，破坏正常组织的结构与功能；
2.具有侵润性和转移性 良性肿瘤仅存在于某些组织的特定部位，不会转移 恶性肿瘤的细胞间粘着性下降，容易转移到身体的 其它部位增殖，产生次级肿瘤（转移灶）
肝癌细胞的扩散性
转移灶
3. 细胞间相互作用改变 正常细胞通过相互识别，形成特定组织和器官；癌 细胞异常表达某些膜受体蛋白，与别处细胞粘着与 生长
调节亚基：周期蛋白(cyclin)
催化亚基: 丝氨酸/苏氨酸型蛋白激酶 其活性有赖于周期蛋白，故称周期依赖性蛋白激酶 (cyclin-dependent protein kinases, Cdks),
•CDK蛋白至少有12种：CDK1~CDK12 •周期蛋白也有多种：cyclin A1 A2 A3 B1 B2 B3 C D1等
第二节 癌细胞(Cancer cell)
癌症是一种严重威胁人类生命安全的疾病。动物体 内细胞分裂调节失控而无限增殖的细胞称为肿瘤细 胞(tumor cell)。具有转移能力的肿瘤称为恶性肿瘤 (malignancy)。上皮组织的恶性肿瘤称为癌。
正常细胞通过分化形成组织器官；而癌细胞的细胞 类型趋于一致，破坏有机体的组织器官，并且基因 组也发生不同形式的突变
第14章 细胞增殖调控与癌细胞
重点内容
•MPF的实质以及检验点 •癌细胞的基本特征 •癌基因与抑癌基因
第一节 细胞周期调控
一、MPF的发现及其作用
MPF（ maturation promoting factor，卵细胞促成 熟因子）或M期促进因子，是M期细胞中存在的促进 细胞分裂的因子
MPF的发现
4.mRNA表达谱及蛋白表达谱或蛋白活性改变
细胞13.细胞增殖调控与癌细胞
细胞13.细胞增殖调控与癌细胞●细胞增殖调控●调控因子●mitosis-promoting factor, MPF 细胞有丝分裂促进因子定义：也称卵细胞成熟促进因子或M期促进因子，是催化亚基cdc2蛋白和调节亚基周期蛋白共同组成的蛋白质复合物，具有蛋白激酶活性，促进细胞从G_2期进入M期●（1970年）Johnson&Rao将Hela细胞的M期细胞与间期细胞融合，发生了形态各异的早熟染色体凝缩（premature chromosome condensation, PCC）早熟凝缩染色体定义：将M期细胞与G_1、S、G_2期细胞融合并继续培养一定时间后，融合细胞的染色体提前凝缩，形态各异G_1期PCC为细单线S期PCC为粉末状G_2期PCC为双线染色体状提示可能存在诱导染色体凝缩的因子●（1971年）Masui&Markert，非洲爪蟾卵，孕酮刺激生发泡破裂注射诱导卵母细胞成熟●p34^{Cdc2}激酶（MPF的催化亚单位）●Cdc2：CDC基因调控酵母细胞分裂和细胞周期，Cdc2是第一个被分离出来的CDC基因，Cdc2基因突变导致细胞停留在G_2/M期交界处●p34^{Cdc2}是Cdc2基因的表达产物，具有蛋白激酶活性，在裂殖酵母细胞周期调控过程中促进G_2/M期转换●Cdc28：芽殖酵母中的一个关键性CDC基因，其产物p34^{Cdc28}也是一种蛋白激酶，调节G_2/M期和G_1/M期转换●验证得知p34^{Cdc2}是MPF的同源物●本身不具有激酶活性，只有当其与有关蛋白质结合后，其激酶活性才能够表现出来●cyclin 周期蛋白（MPF的调节亚单位）定义：在细胞中的含量随细胞周期进程变化而变化的蛋白质，对细胞周期循环具有调节作用●分类●G_1期周期蛋白定义：某些只在G_1期表达并只在G_1期和S期转化过程中执行调节功能的周期蛋白，如cyclin C、D、E、Cln1、Cln2、Cln3等●M期周期蛋白定义：某些虽然在间期表达和积累，但到M期时才表现出调节功能的周期蛋白，如cyclin A、B等●特点●存在时间：G_1期周期蛋白在细胞周期中存在的时间相对较短，M期周期蛋白在细胞周期中则相对稳定●结构●均含有一段相当保守的氨基酸序列，成为cyclin box 周期蛋白框，其功能是介导周期蛋白与CDK结合●M期周期蛋白近N端含有一段由9个氨基酸残基组成的特殊序列，称为destruction box 破坏框，参与泛素依赖性的cyclin A、B的降解●G_1期周期蛋白分子中不含破坏框，但其C端含有一段特殊的PEST序列，与G_1期周期蛋白的更新有关●与CDK结合特点：不同的周期蛋白在细胞周期中表达的时期不同，并与不同的CDK结合，调节不同的CDK活性●cyclin A在G_1期的早期即开始表达并逐渐积累，到达G_1/S期交界处，其含量达到最大值并一直维持到G_2/M期●cyclin B从G_1期的晚期开始表达并逐渐积累，到G_2期后期阶段达到最大值并一直维持到M期的中期阶段，然后迅速降解●cyclin D在细胞周期中持续表达●cyclin E在M期的晚期和G_1期早期开始表达并逐渐积累，到达G_1期的晚期其含量达到最大值，然后逐渐下降，到达G_2期的晚期，其含量降到最低值●cyclin-dependent kinase, CDK 周期蛋白依赖性蛋白激酶、（CKI）CDK抑制因子●CDK定义：可以与周期蛋白结合，并以周期蛋白作为调节亚单位，表现出蛋白激酶活性●mitosis-promoting factor, MPF 细胞有丝分裂促进因子是一种CDK（CDK1）●特点●各种CDK分子均含有一段类似的CDK激活结构域●不同的CDK所结合的周期蛋白不同，在细胞周期中执行的调节功能也不相同●细胞内存在多种因子，修饰CDK的分子结构，参与CDK活性的调节●CKI：对CDK活性起负调控的蛋白质●细胞周期运转调控●G_2/M期检查点（cyclin B-Cdk1）●Cdk1（MPF）由p34^{Cdc2}和cyclin B(A)结合而成●p34^{Cdc2}在细胞周期中的含量相对稳定，主要变化在于周期蛋白含量●（主）cyclin B(A)的含量呈现周期性变化在G_1期的晚期开始合成，通过S期，其含量不断增加，到达G_2期，其含量达到最大值●（副）进一步的修饰：在Wee1/Mik1激酶和CDK活化激酶作用下发生3次磷酸化，在蛋白磷酸水解酶Cdc25C作用下发生2次去磷酸化三个磷酸化位点：Thr14、Tyr15、Thr161 Thr161位点保持磷酸化使Cdk1活性表现所必需的●下游作用使某些底物蛋白磷酸化，改变其下游的某些靶蛋白的结构和启动其功能，实现其调控细胞周期的作用●磷酸化组蛋白H1：促进染色质凝缩●磷酸化核纤层蛋白：促使核纤层解聚●磷酸化核仁蛋白：促使核仁解体●磷酸化p60^{c-Src}蛋白：促使细胞骨架重排●磷酸化c-Abl蛋白：促使细胞形态调整●中/后期检查点（APC）●anaphase-promoting complex, APC 后期促进复合物●定义：在分裂间期表达，M期表现出活性，可以调节M期周期蛋白泛素化依赖降解途径，以及其他一些与细胞周期调控有关的非周期蛋白类蛋白质的降解●在APC的作用下，M期cyclin A&B通过泛素化依赖途径被蛋白酶体降解这一过程中破坏框起着重要的调节作用●Mad2的负调控作用（有丝分裂中后期转换）Cdc20能活化APC并降解抑制分离酶的securin，进而导致中后期转换●Mad2定位在早中期和错误排列的中期染色体的动粒上，纺锤体组装不完全，动粒不能被动粒微管捕捉，Mad2则不能从动粒上解离下来●当纺锤体组装完成以后，动粒全部被动粒微管捕捉，Mad2从动粒上消失，从而解除对Cdc20的抑制作用，促使APC活化，导致M期周期蛋白降解●G_1/S期检查点（cyclin E/A-Cdk2、cyclin D-Cdk4/6）●主要的G_1期周期蛋白-CDK●cyclin D-Cdk4/6●cyclin D为细胞G_1/S期转化所必需●Cdk4/6的底物Rb蛋白是转录因子E2F的抑制因子，是G_1/S期转化的负调控因子，在G_1期的晚期阶段通过磷酸化而失活如果细胞Rb突变，失去对E2F的抑制，使细胞无法停留在G_1期，会导致细胞过度增殖●cyclin E-Cdk2●主要出现在G_1期晚期到S期的早期阶段，为S期启动所必需●transforming growth factor β, TGFβ 转化生长因子β可以有效地抑制cyclin E-Cdk2活性，进而将细胞阻止在G_1期●cyclin E-Cdk2与类Rb蛋白p107和E2F结合形成复合物，Cdk2催化p107磷酸化，使其不能抑制E2F，E2F促进有关基因的转录，促使细胞周期由G_1期向S期转化●cyclin A-Cdk2●cyclin A的合成开始于G_1/S期转化时期●进入S期后，cyclin A-Cdk2激酶成为该时期主要的CDK●cyclin A-Cdk2与DNA复制有关，位于DNA复制中心●G_1期周期蛋白通过SCF泛素化途径降解●同时需要G_1期CDK活性的参与●SCF具有E3泛素连接酶的功能，它可以被F-box蛋白活化，进而催化底物蛋白的泛素化●其他DNA复制起始活动的调控●DNA复制起始点的识别（ORC、Cdc6、Cdc45）●DNA复制执照因子学说（Mcm蛋白）●S/G_2/M期转换与DNA复制检查点将细胞停滞在S期和G_2/M期●intra-S phase checkpoint S期内部检查点定义：在S期内发生DNA损伤如DNA双链发生断裂时，S期内部检查点被激活，从而抑制复制起始点的启动，使DNA复制速度减慢，S期延长，同时激活DNA修复和复制叉的恢复等机制●通过染色体结构维持蛋白Smc1的磷酸化，从而实现S期的延长●通过ATM/ATR介导的Cdc25A磷酸酶过磷酸化而降解，从而抑制cyclinE/A-Cdk2活性●replication checkpoint DNA复制检查点由于停滞的复制叉导致的S期的延长的机制，主要是由ATR/Chk1激活来介导的●ATR/Chk1介导Cdc25A降解进而抑制cyclin E/A-Cdk2的通路，减缓整体DNA复制的效率●DNA损伤检查点p53含量提高→ p21表达→ cyclin E-CDK2失活●抑癌基因p53表达产物p53蛋白对细胞增殖起负调节作用●调控机制：p53本在细胞中含量极少（被Mdm2泛素化降解），DNA受损后，Chk1&Chk2使p53磷酸化并与Mdm2解离，p53蛋白浓度上升，作为转录因子调控p21表达，使cyclin E-Cdk2失活，不能进入S期●多细胞生物：若DNA无法修复，则发生p53介导的细胞凋亡●癌细胞●cancer cell 癌细胞●定义：脱离了细胞社会制约，表现出细胞增殖失控，并且有侵袭和转移等特征的细胞，癌细胞会破坏组织和器官的正常生理功能●分类●tumor cell 肿瘤细胞动物体内因细胞分裂调节失控而无限增殖的细胞●malignancy 恶性肿瘤具有转移能力的肿瘤●cancer 癌源于上皮组织的恶性肿瘤●benign tumor 良性肿瘤分裂缓慢，具有结缔组织包膜而不扩散的肿瘤●基本特征●细胞生长与分裂失去控制癌细胞失去控制，称为“不死”的细胞，核质比例增大，分裂速度加快，破坏了正常组织的结构与功能●具有浸润性和扩散性癌细胞细胞间黏着性下降，易于浸润周围健康组织，或通过血液循环和淋巴途径转移并在其他部位黏着和增殖。
细胞周期调控与癌细胞增殖抑制
细胞周期调控与癌细胞增殖抑制细胞是生命的基本单位，具有自我复制和分化的能力。
正常细胞的增殖受到严格的调控，以保持组织和器官的稳态。
然而，在癌症中，这种调控机制发生了异常变化，导致癌细胞无限增殖并形成恶性肿瘤。
了解细胞周期调控与癌细胞增殖抑制之间的关系对于癌症治疗非常重要。
一、细胞周期调控的概述1. 细胞周期是指一个完整的细胞生命周期，包括从某个特定时刻开始直到其分裂为两个新生物体。
2. 细胞周期包括四个阶段：G1期（第一次生长期）、S期（DNA复制期）、G2期（第二次生长期）和M期（有丝分裂期）。
3. 细胞周期调控主要由多个蛋白激酶、蛋白激酶抑制剂和转录因子等调节因子共同作用完成。
4. 关键调控点包括G1/S转变处、G2/M转变处和M期的控制点，通过这些关键调控点，细胞周期得以严格控制。
二、癌细胞增殖过程中的异常细胞周期调控1. 高度失控的增殖：癌症细胞通过无限增殖、忽略外界信号和形成肿瘤来表现出对细胞周期调控失效。
2. 细胞周期检查点缺陷：某些癌症类型存在着与特定阶段检查点相关的突变，导致DNA损伤未能引发阻滞性减数分裂，使异常细胞得以存活和扩张。
3. 增强正常通路活性：研究表明，一些关键细胞周期调节蛋白在肿瘤中被过度表达或激活，从而促进异常增殖。
同时，异常信号传导也可以通过上调这些蛋白来促进癌症发展。
三、抑制癌细胞增殖的策略1. 靶向关键维持恶性转化所需功能的基因和蛋白质：如靶向TGF-beta信号通路、EGFR、HER2等相关分子，可以有效阻断癌细胞的生长和扩散。
2. 激活抗癌免疫应答：通过激发机体自身免疫系统，以克服肿瘤组织对宿主的免疫逃避和耐受性。
3. 抑制血管生成：肿瘤细胞通常具有促进血管生成的能力，靶向这些信号通路可以阻断癌细胞对氧气和营养物质的供应，限制其生长和扩散能力。
4. 抑制癌基因表达：通过RNA干扰技术或药物靶向转录因子等方式来阻断或降低癌基因在癌细胞中的表达。
四、细胞周期调控与治疗创新1. 组合治疗策略：针对多个调控位点同时使用治疗手段，可以增加治愈概率并减少药物抵抗性。
第十四章细胞增殖调控与癌细胞
1970年，Johnson and Rao将同步化的不同细胞周期的Hela细胞诱导融合 PCC（premature chromosome condensation）：即早熟染色体凝缩，主要是指与M 期细胞融合的间期细胞（G1、S和G2）发生的形态各异的染色体凝缩。
G1期检验点
细胞周期运转的抑制
在肿瘤治疗中，如果肿瘤细胞也发生p53基因突变，则放疗效果往 往不好，请问原因是什么？
第二节 癌细胞
癌症是一种严重威胁人类生命安全的疾病。动物体 内细胞分裂调节失控而无限增殖的细胞称为肿瘤细胞 (tumor cell)。 －良性肿瘤：生长缓慢，与周围组织边界明显。 －恶性肿瘤：癌症(cancer)，生长快、具有迁移性。
通常发生于功能丧失性突变(隐性突变)
抑癌基因失活往
往是隐性突变－
－两个等位基因
都失活时才会致 肿瘤
抑癌基因的种类
①转录调节因子（控制细胞周期或诱导细胞凋亡）： 如Rb、p53。Rb基因突变导致视网膜母细胞瘤形成 ；P53基因突变将导致细胞癌变或凋亡。
②负调控转录因子：如WT； ③周期蛋白依赖性激酶抑制因子（CDKI），如p21； ④ rasGTP酶活化蛋白(GAP)：如NF-1； ⑤ DNA修复因子：如BRCA1、BRCA2； ⑥ 磷酸脂酶： 如PTEN； ⑦ 细胞粘附分子： 如DCC。
associated antigen）
染色体非整倍性
2、癌细胞的生理、生化特征
1）细胞周期失控，生长和分裂失控； －具有无限增殖能力，成为“永生”细胞。 2）具有浸润性和扩散性（迁移性）； • 癌细胞的细胞间粘着性下降，具有侵润性和扩散
第十四章细胞增殖与癌细胞资料
（二） M期周期蛋白与分裂中期向分裂后期转化
细胞周期运转到中期后，M期周期蛋白A和B降解， CDK1激酶活性丧失，蛋白去磷酸化，细胞周期由 中期向后期转化。
（三） G1/S期转化与G1期周期蛋白依赖性CDK激酶
G1期周期蛋白主要包括周期蛋白D、E和A。 cyclinD－CDK4复合物：Rb蛋白 cyclinE－CDK2复合物：p107＋E2F cyclinA－CDK2复合物：DNA复制因子RF-A
第十四章 细胞增殖调控与癌细胞
MPF的发现及其作用
细胞周期运转的调控
细胞周期中的检验点
G1/S检验点：start点或R点，控制细胞由静止状态的G1进入 DNA合成期，检查DNA是否损伤？细胞外环境是否适宜？ 细胞体积是否足够大？
S期检验点：DNA复制是否完成？ G2/M检验点：是决定细胞一分为二的控制点，检查DNA是
MPF的结构组成
二、细胞周期运转调控
G2/M期转化与CDK1激酶的关键性调控作用 M期周期蛋白与分裂中期向分裂后期转化 G1/S期转化与G1期周期蛋白依赖性CDK激酶
（一） G2/M期转化与CDK1激酶的关键性调控作用
周期蛋白在CDK1激酶活性调节中的作用
CDK1激酶活性的调控
G1/S-CDK Cyclin E CDK2
Cln 1、2 CDK1(CDC28)
S-CDK
Cyclin A CDK2
Clb 5、6 CDK1(CDC28)
M-CDK
Cyclin B CDK1(CDC Clb 1-4 CDK1(CDC28) 2)
周期蛋白的结构
不同的周期蛋白与不同的CDK结合，调节不同的 CDK激酶的活性。
原癌基因
概念：是细胞内与细胞增殖相关的基因，是维持机体正常 生命活动所必须的，在进化上高等保守。当原癌基因的结构 或调控区发生变异，基因产物增多或活性增强时，使细胞过 度增殖，从而形成肿瘤。ห้องสมุดไป่ตู้
细胞周期调控与癌细胞增殖的联系
细胞周期调控与癌细胞增殖的联系细胞周期调控是维持正常细胞生长和分裂的关键机制之一。
准确无误的细胞周期调控是细胞代谢和生长的基础，也是细胞增殖的关键步骤。
然而，当某些异常事件发生，例如遗传突变或外部因素的侵袭，细胞周期调控可能失去平衡，导致癌细胞的不受控制的增殖。
本文将探讨细胞周期调控与癌细胞增殖之间的联系，并着重介绍几种常见的调控机制。
细胞周期分为四个主要阶段：G1阶段（细胞增长阶段）、S阶段（DNA 复制阶段）、G2阶段（前期）和M阶段（有丝分裂）。
这些阶段由多个调控因子和分子互相配合，确保细胞在合适的时间和环境下进行一系列的代谢和分裂过程。
一个重要的细胞周期调控机制是Rb蛋白（Retinoblastoma，遗传疾病）的功能。
在G1阶段，Rb蛋白与转录因子E2F结合，阻止细胞进入S阶段。
一旦细胞接受到外部刺激或内部信号，Rb蛋白被磷酸化并失去抑制E2F的作用，细胞便进入S阶段开始DNA的复制。
然而，在某些癌症中，Rb基因发生突变或功能缺陷，导致Rb蛋白无法正常发挥阻止细胞增殖的作用，进而使癌细胞无法受约束地增殖。
另一个重要的调控因子是p53蛋白。
p53蛋白作为一种转录因子，在细胞受到DNA损伤或其他压力时被激活。
一旦激活，p53蛋白能够抑制细胞周期的进展，通过调控相关基因的表达，如p21，从而启动细胞凋亡或修复受损的DNA。
然而，在许多癌症中，p53基因发生突变，导致p53蛋白功能失常。
这使得癌细胞能够逃避受损DNA的修复和凋亡信号，进而继续不受控制地增殖。
除了Rb蛋白和p53蛋白，细胞周期调控中还涉及一系列激活和抑制蛋白质的变化。
这些蛋白质包括细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）和其配体细胞周期蛋白（Cyclin）。
CDK与Cyclin结合形成复合物，通过相互作用和磷酸化调节细胞周期的进行。
当细胞准备进入下一个阶段时，特定的Cyclin将被合成并与CDK结合，促进细胞周期的进展。
然而，在某些癌症中，CDK或Cyclin的功能受到突变或异常表达的影响，导致细胞周期的失调和癌细胞的无限增殖。
细胞增殖及其在癌症发生中的作用分析
细胞增殖及其在癌症发生中的作用分析细胞增殖是一个复杂的生物学过程，它使原始单个细胞分裂成两个或更多细胞。
此过程十分重要，因为对于生命的生长、修复和更新都扮演着关键的角色。
但是，如果细胞增殖过程被扭曲或失调，无限制的细胞分裂可能会导致一系列的疾病，包括癌症。
细胞增殖的调控细胞增殖的调控是一个高度复杂的过程，需要许多不同的信号和因素的相互作用。
其中两种重要的调节因子是细胞周期和细胞增殖信号。
细胞周期涉及四个不同的阶段：G1、S、G2和M期。
在G1期，细胞获得必要的营养和生长因子，以为接下来的S期做好准备。
在S期，细胞增殖到DNA复制的阶段。
在G2期，细胞开始准备进入M期，核分裂和细胞分裂的阶段。
细胞增殖涉及许多生物分子的复杂互动，特别是细胞增殖信号。
生长因子和反义肽是细胞增殖信号的一部分，它们会通过与细胞表面上的受体相互作用，从而影响细胞增殖。
激素、神经递质和细胞因子等细胞增殖信号也能够通过细胞表面受体发挥同样的作用。
许多蛋白激酶也在细胞增殖调控中扮演重要的角色，包括MAPK和PI3K-Akt等。
这些激酶的一个常见作用就是在细胞外环境和内环境之间进行信号转导。
癌症细胞癌症是一种体内发生细胞突变的疾病。
癌症细胞继续增殖并扩散，导致脏器和组织的破坏。
癌症细胞的独特特征是它们能够无限制地增殖。
癌细胞的DNA突变可能导致癌症发生，而这些DNA突变可能是由不同的因素引起的，包括遗传、环境和生活方式因素等。
例如，吸烟、酗酒、过度暴露于紫外线和接触致癌物质等因素可能会导致癌症发生。
癌症细胞与正常细胞不同的一点是，它们忽略了体内的细胞周期和细胞增殖信号以及其他控制因素。
这意味着，癌症细胞可以无限制地分裂和增殖，导致肿瘤的形成。
除了无限制的细胞增殖，癌症细胞还具有不同的形态、结构和生理特征，与正常细胞不同。
治疗癌症在过去的几十年里，人们对癌症的治疗方法已经取得了重大进展。
这包括传统的化疗、放疗和手术治疗，同时也涉及到靶向治疗和免疫疗法等。
细胞增殖与癌症研究
细胞增殖与癌症研究细胞增殖是细胞分裂和增殖的过程，是生物体生长和发育的基础。
然而，当细胞增殖失控时，会导致癌症的发生。
癌症是一种恶性肿瘤，以不受控制的细胞增殖和恶性转移为特征，成为全球范围内最常见的疾病之一、因此，深入研究细胞增殖与癌症之间的关系，对于癌症的预防和治疗具有重要意义。
细胞增殖正常受到调控，其中关键的分子是细胞周期蛋白依赖激酶（CDK）与细胞周期蛋白（Cyclin）复合物。
CDK与Cyclin复合物促进细胞周期的进行，从而让细胞可以顺利进入细胞分裂的过程。
另一个重要的调控因子是肿瘤抑制基因p53，它在细胞受到DNA损伤时可以停止细胞增殖，保护细胞免受进一步的损伤。
然而，癌症中常常出现细胞周期调控异常或p53抑制失效的情况，导致细胞不受控制地增殖。
细胞增殖与癌症的研究中，一项重要的发现是肿瘤抑制基因和促癌基因的突变。
肿瘤抑制基因是一类正常的细胞基因，它们通过调节细胞周期以及DNA修复等机制来抑制肿瘤的发生。
突变会导致肿瘤抑制基因失去功能，从而不能有效地抑制细胞增殖。
促癌基因是另一类与细胞增殖紧密相关的基因，它们通过增强细胞增殖或抑制细胞凋亡来促进肿瘤发生。
这些突变使得细胞无法正常停止增殖，最终导致癌症的发生。
近年来，细胞增殖与癌症研究已取得了许多重要的进展。
例如，研究人员发现了一些与细胞增殖相关的调控信号通路，如细胞表面受体与细胞内信号通路之间的交互作用，这些通路可以调节细胞增殖和凋亡。
另外，针对癌症的新型治疗策略也在不断地发展，如靶向肿瘤细胞的药物、免疫疗法以及基因治疗等。
这些新的治疗手段有望在未来为癌症的治疗提供更多的选择。
总之，细胞增殖与癌症是一个复杂的研究领域，深入探索其机制对于癌症的预防和治疗具有重要意义。
随着研究的不断深入，相信我们能够更好地理解细胞增殖与癌症之间的关系，并为癌症的治疗提供更有效的策略。
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CDK activating
G2/M期转化与CDK1激酶的关键性调控作用
CDK1的调节与活化; CAK=CDK1-Activiting Kinase
（2）M期周期蛋白与细胞分裂中期向后期转换
在中期当MPF活性达到最高时，激活后期促进因子复合 体 (Anaphase Promoting Complex，APC)将泛素连接在 cyclinB上，cyclinB被蛋白酶体(proteasome)降解，完成 一个细胞周期。
•在动物中已知7种CDK。均含有一段相似的 CDK激酶结构域，这一区域有一段保守序 列，即PSTAIRE，与周期蛋白的结合有关, 且其活性被周期蛋白调控。 •细胞内存在多种因子参与CDK激酶活性的调 节。 •含有影响CDK激酶活性的位点，如CKI(CDKI) 的结合位点——其活性受CKI调节
(2)不同类型的CDK/cyclin复合物及其参与的细胞周期调控
• M期CDK1（p34cdc2）的激活起始于分裂期cyclinB的积 累。
• 结合cyclin B的CDK1被Wee1/mik1激酶将Thr14和 Tyr15磷酸化而不具有活性，使CDK1/cyclin B不断积累。 在M期，Wee1/mik1激酶的活性下降，在蛋白水解磷酸酶 cdc25c使CDK1的Thr14和Tyr15去磷酸化，去除了 CDK1活化的障碍。 • CDK1的激活需要Thr161的磷酸化，它是在CDK活化激 酶(CDK1 activating kinase CAK)的作用下完成的。
• 1960s Leland Hartwell,1970s Paul Nurse 分别以芽殖 酵母和裂殖酵母为实验材料，利用温度敏感突变株， 发现许多与细胞分裂有关的基因(cell division cycle gene, cdc基因)。
– 裂殖酵母cdc2、芽殖酵母cdc28突变型在限制温度下无
卵细胞细 胞质移植 实验
2、MPF与 CDK激酶 (周期蛋白依赖性蛋白激酶)
(1) MPF的构成
1988年， Maller实验室的Lohka将非洲爪蟾的MPF纯化。 由两个不同的亚基组成的异质二聚体: p32和p45(非洲 爪蟾)，使蛋白质底物磷酸化。
1983年 Tim Hunt发现海胆的卵裂过程中两种蛋白质的 含量随细胞周期振荡，命名为周期蛋白(cyclin A和B)。 后来发现各类动物来源的细胞周期蛋白mRNA均能诱 导蛙卵的成熟。
• CDK inhibitor, CDKI对细胞周期起负调控作用，分为：
– – ①Ink4(Inhibitor of cdk 4): P16ink4a, P15ink4b,
P18ink4c, P19ink4d。 P16ink4a特异性抑制cdk4· cyclin D1, cdk6· cyclin D1。 – – ②Cip/Kip (cyclin inhibition protein1) (Kinase inhibition protein) ：P21cip1/WAF1 , P27kip1、P57kip2，
• 在G1-S期，cyclinE与CDK2结合，促进细胞进由G1期向S期 转化，并直接参与中心体复制与调控。TGFβ抑制cyclinECDK2的活性使细胞抑制在G1期。CyclinE的抗体能使细胞 停滞于G1期。CDK2催化p107磷酸化，释放E2F。 • 在S期，cyclinA与CDK2结合为S期的主要激酶，参与DNA 复制，使复制因子RF-A磷酸化而活性增强。
法分裂；
– cdc2和cdc28都编码一个34KD的蛋白激酶，促进细胞 周期的进行。
MPF=p34cdc2(p34cdc28)+ p56cdc13 (cyclinB)
– weel和cdc25分别表现为抑制和促进CDC2的活性。
– wee1突变型则提早分裂，cdc25突变型细胞体积增大 而不分裂；
Cdc 25 & Wee1 mutant
DNA damage checkpoint: Cell-cycle progression is
blocked by DNA damage and p53
有两个这样的限制点: 1.一个在晚G1期: 阻止进入Ｓ期; 2.一个在晚G2期: 阻止进入Ｍ期; P53: 基因调控蛋白.DNA破坏通过 间接机制激活p53。 Mdm2 作为ubiquitin ligase起作用， 导致p53用于蛋白酶体 （proteasomes）引发的降解. P53磷 酸化降低了对Mdm2的连接. P21(CKI protein) 结合到 G1/S-Cdk 和S-Cdk，抑制其活性，因而 阻断 了期进入Ｓ期.
单一细胞癌变就会形成癌症。
一．癌细胞的基本特征
◆癌细胞有三个显著的基本特征即：不死性，迁
移性和失去接触抑制。
不死性，迁移性，失去接触抑制，生长信号的自 给自足，对程序性细胞死亡的逃逸，增长血管 的能力。最新研究表明，肿瘤还具备第七种特 征：肿瘤相关性炎症。
(Mitosis-promoting factor), 早期称为M期促
进因子(M-phase promoting factor, MPF)， 是指M期细胞中存在的促进细胞分裂的因子
1970年，Johnson and Rao将同化的不同细胞周期的细胞诱导融合 早熟染色体凝集（染色体超前凝集）(Premature chromosome condensation,PCC)——超前凝集染色体
How DNA damage arrests the cell cycle in G1.
Current model for regulation of the eukaryotic cell cycle
第二节
癌细胞
癌症是一种严重威胁人类生命安全的疾病。动物体 内细胞分裂调节失控而无限增殖的细胞称为肿瘤细胞 (tumor cell)。 －良性肿瘤：生长缓慢，与周围组织边界明显。 －恶性肿瘤：癌症(cancer)，生长快、具有迁移性。
第十四章 细胞增殖调控与癌细胞
G1期检验点：酵母——Start；动物细胞——Restriction Point
检验点（checkpoint）
在细胞周期中，决定细胞周期能否继续向前 运转的某一特定时期，称为检验点。 细胞周期检验点是细胞周期调控的一 种机制, 主要是确保周期每一时相事件 的有序、全部完成并与外界环境因素 相联系
G1期周期蛋白降解通过SCF（Skp-cullin-F-box protein）泛素化途径实现。
G1期周期蛋白不含破坏框序列，而含PEST序列， 对G1期周期蛋白降解起促进作用。 参与复制的调控因子，如p21, p27和p57等通过泛素 化途径降解。 SCF具有E3泛素连接酶的功能，由Skp1, Cul1和 Rbx1三种亚基构成。 SCF的底物特异性由F-box蛋白决定。
• 包括S期内部检验点和DNA复制检验点。
– S期内部检验点通过染色体结构维持蛋白SMC1 磷酸化实现（ATM-MDC1-MRNC等中介物的 系列催化过种实现），或通过ATM/ATR介导 的cdc25A磷酸酶过磷酸化而降解。
– 复制检验点由ATR/CHK1激活实现。
ATR/CHK1介导cdc25A降解，抑制cyclin E/ACDK2通路。
MPF：cyclin-Cdk 周期蛋白称为调节亚 基 催化亚基从ATP上转 移磷酸到丝氨酸和苏 氨酸残基上
●催化亚基
是丝氨酸/苏氨酸型蛋白激酶
其活性有赖于周期蛋白，故该蛋白称为周期蛋白 依赖性激酶(cyclin-dependent protein kinases,Cdks);
●调节亚基：周期蛋白(cyclin)
– 分裂期周期蛋白N端有一段序列与其降解有关，称降解盒 (destruction box)。 – 泛素由76个氨基酸组成，高度保守。共价结合泛素的蛋白质 能被蛋白酶体识别和降解，这是细胞内短寿命蛋白和一些异 常蛋白降解的普遍途径。 – 26S蛋白酶体是一个大型的蛋白酶，可将泛素化的蛋白质分解 成短肽。
• 分为4类：G1型、G1/S型、S型、M型。
• G1期: C, D, E; M期: A, B
•含有周期蛋白框：介导与不同CDK结合 •含有破坏框：将泛素（遍在蛋白）连接到破坏框上
cell cycle regulation
4、细胞周期运转调控 （1）G2/M期转化与CDKland Hartwell、英国人Paul Nurse、Timothy Hunt因对细胞周期调控机理的研究而 获诺贝尔生理医学奖。
Leland H. Hartwell R. Timothy (Tim) Hunt
Sir Paul M. Nurse
CDK的活性调节及多样性
• Cdc2与细胞周期蛋白结合才具有激酶的活性，故名 细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase， CDK)。
• CDK1（哺乳动物中的一种）可将特定蛋白磷酸化， 促进细胞周期运行，又称作细胞周期引擎。
– – 如将核纤层蛋白磷酸化导致核纤层解体、核膜消失； – – 将H1磷酸化导致染色体的凝缩等。
APC种类：15种，如cdc16, cdc23, cdc27和BimE等
APC活性调节：两类 正调控因子：cdc20/Fizzy, cdh1/Fzy等 负调控因子：Emi1, Emi2, Mad2, BubR1等
泛素与周期蛋白的降解： 多聚泛素化作用
(polyubiquitination)
●泛素活化酶(ubiquitin-activating enzyme, E1)
DNA复制活动调控
• 复制起始点识别复合物：6个亚基，ORC1-6
• cdc6 和cdc45也是复制所必需的
• “DNA复制执照因子学说”：存在于细胞质中， 随细胞分裂进行，“执照”信号与减弱直到消失。 DNA复制执照因子的本质为Mcm蛋白，分为6种。
（4） S/G2/M期转换与DNA复制检验点
细胞周期中的主要的检验点