《中国药典》2010年版2部高效液相色谱法
2010版《中国药典》二部明胶空心胶囊质量标准
明胶空心胶囊Mingjiao Kongxin JiaonangVacant Gelatin Capsules本品系由胶囊用明胶加辅料制成的空心硬胶囊。
【性状】本品呈圆筒状，系由可套合和锁合的帽和体两节组成的质硬且有弹性的空囊。
囊体应光洁、色泽均匀、切口平整、无变形、无异臭。
本品分为透明（两节均不含遮光剂二氧化钛）、半透明（一节含遮光剂，一节不含）、不透明（两节均含遮光剂）三种。
【鉴别】（1）取本品0.25g，加水50ml，加热使溶化，放冷、摇匀，取溶液5ml，加重铬酸钾试液-稀盐酸（4：1）的混合液数滴，即生产橘黄色絮状沉淀。
（2）取鉴别（1）项下剩余的溶液1ml，加水50ml，摇匀后，加鞣酸试液数滴，即发生浑浊。
（3）取本品约0.3g，置试管中，加钠石灰少许，产生的气体能使湿润的红色石蕊试纸变蓝色。
【检查】松紧度取本品10粒，用拇指与食指轻捏胶囊两端，旋转拔开，不得有粘结、变形或破裂，然后装满滑石粉，将帽、体套合、锁合，逐粒于1m 的高度处直坠于厚度为2cm的木板上，应不漏粉；如有少量漏粉，不得超过1粒。
如超过，应另取10粒复试，均应符合规定脆碎度取本品50粒，置表面皿中，移入盛有硝酸镁饱和溶液的干燥器内，置25±1℃恒温24小时，取出，立即分别逐粒放入直立在木板（厚度2cm）上的玻璃管（内径为24mm，长为200mm）内，将圆柱形砝码（材质为聚四氟乙烯，直径为22mm，重20±0.1g）从玻璃管口处自由落下，视胶囊是否破裂，如有破裂，不得超过5粒。
崩解时限取本品6粒，装满滑石粉，照崩解时限检查法(附录ⅩＡ)胶囊剂项下的方法,加挡板进行检查，各粒均应在10分钟内全部溶化或崩解。
如有1粒不能全部溶化或崩解，应另取6粒复试，均应符合规定。
黏度取本品4.50g，置已称定重量的100ml烧杯中，加温水20ml，置60℃水浴中搅拌，使溶化。
取出烧杯，擦干外壁，加水使胶液总重量达到下列计算式的重量(含干燥品15.0％)，将胶液搅匀后倒入干燥的具塞锥形瓶中，密塞，置40℃±0.1℃水浴中，约10分钟后，移至平氏黏度计内，照黏度测定法(附录ⅥＧ第一法,毛细管内径为2.0 mm)，于40℃±0.1℃水浴中测定，本品运动黏度不得低于60mm2/s。
2010版中国药典乳糖的高效液相色谱法检测
min
图2 乳糖对照溶液测试谱图
参数表
Compound Retention Time(min) Height
Water
3.76
227233
Lactos e
12.67
1176
Area 2442889 21884
Plate 2560 9046
Tailing 1.66 1.54
Res olution 23.14
3.76
225833
10.31
6802
12.59
1285
Area 2407840 97095 22279
Plate 2573 12605 10862
Tailing 1.67 1.35 1.33
Res olution
19.69 5.37
表1 乳糖样品含量测试结果
Injection N.O.
Reference substance (1 mg/mL)
实验方法
色谱条件
Column: HP-Amino ( 5 µm, 120 Å, 4.6 x 300 mm) Mobile phase: Acetonitrile : Water = 70 : 30 ( v/v ) Flow rate: 1.0 mL/min Detector: RI ( 40 ℃) Column temperature: 45 ℃ Injection volume: 10 µL Instrument: Agilent 1260 HPLC
在有关物质项下，供试品溶液的色谱峰除溶剂峰外 ，没有其他的杂质峰。
3.765 12.665
nRIU 14000 12000 10000 8000 6000 4000 2000
0 -2000
《中华人民共和国药典》利福平及制剂标准中有关物质测定方法的修改建议
·1356·Hemld of Medicine V01．31No．100ctober2012分平均总含量的80％～200％为限度范围，即每克含总转移率不是很高，这可能是制备过程中，麻黄采用水药膏体中含盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱两种成分的总煎煮工艺，而麻黄碱和伪麻黄碱均有一定的挥发性，在量应为0．090～0．230 mg。
约100℃因挥发损失而导致转移率偏低。
2010年版《中华人民共和国药典》一部麻黄项下参考文献规定，麻黄含水量不得过9．O％；按干燥品计算，含盐[1] 肖崇厚，杨松松，洪筱坤，等．中药化学[M]．上海：上海科学技术出版社，1997．酸麻黄碱(C。
H。
，N0·HCl)和盐酸伪麻黄碱(C，。
H。
，[2] 陈德昌．中药化学对照品工作手册[M]．北京：中国医药N0·HCl)的总量不得少于0．80％。
上述测定结果表科技出版社，2000．明，用于中试投料的麻黄饮片符合2010年版《中华人[3] 国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北民共和国药典》要求。
根据以上测定结果，可以计算3京：中国医药科技出版社，2010：1．批中试样品中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的平均总转[4] 梁生旺．中药制剂分析[M]．北京：中国中医药出版社，移率约46．81％。
2007．3讨论DO I lO．3870／vvdb．2012．10．034 3批中试样品盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的平均《中华人民共和国药典》利福平及制剂标准中有关物质测定方法的修改建议余忠1，朱江2，徐婷婷1(1．湖北省随州市中心医院药剂科，441300；2．湖北省随州市食品药品监督检验所，441300) 摘要目的对2叭0年版《中华人民共和国药典》中利福平及其制剂质量标准中有关物质测定方法存在的问题进行探讨。
方法采用反相高效液相色谱法，Si ncom C。
色谱柱(含碳量为11％)(150m m×4．6mm，5斗m)，甲醇一乙腈一0．075mol·L“磷酸二氢钾溶液一1．O mo l·L“枸橼酸溶液(10：50：36：4)为流动相，检测波长为254nm。
《中国药典》2010年版二部几项检验方法的讨论及建议
于 甲磺酸培氟沙星 ３ ｇ ，照 甲磺酸培氟沙星项下鉴别 （ ） ０ｍ ） １
项试验 ， 显相 同的反应 。 ３ 亚硫酸氢钠 甲萘醌注射液的含量测定 药典规定 ： …剧烈振摇 ３ ． ０ｓ静置 ． 分取 三氯 甲烷层 …依 法测定 口５ ］ 。测得含量仅 为 ３ ．％， ２ ６ ０５ 改为 时时振摇 ３ ｎ 静 ０ｍｉ， 置， 分取三氯 甲烷层 …测得含量为 ９ ．％， 合规定 。３ 太 ２９ 符 ０ｓ
２ 注射 用 甲磺 酸 培 氟 沙 星 的鉴 别
匀度 ， 是将空囊壳用 甲醇洗净 ， 将洗液并入量瓶 中后测定 的 ， 平均 含量就提高 了约 １％。 ０ 为保证贮藏过程 中内容物 的均匀
性， 生产工艺 以制粒较 为合理 ， 建议将性状项改成 ： 内容物为 白色 至类 白色 的颗粒和粉末 。
药典 规定 ： 取本 品 ， 照维 生素 Ａ测定 法 （ 附录 Ⅶ Ｊ 项下 ）
紫外一 可见分光光度法测定 ， 即得 ＿９ １４ ］ 。本 品系由维生素 Ａ醋 ８ 酸酯结 晶加精 制植物 油制成 的油溶液 ，是结 晶与油 的混合 物 。在含 量测 定时 ， 需特别注 意样 品溶 液的均匀性 与溶解情
６ 维 生 素 Ａ 的 含量 测 定
药典规定 ： １取本 品约 ３ ｇ 照 甲磺酸培 氟沙星项 下 （） ０ｍ ， 鉴别 （ ） １ 项试验 ， 相同的反应［ 。这样表述 对原料药是合 显 －
适 的， 对制剂似不够规范 ， 因为注射用粉针 中可 以含有 辅料 ， 取样时应 以平均装量来 折算 。建议改为 ： 取本 品适量 （ 约相 当
尚存 在一些不 够完善 的情况 ， 现提 出讨论 ， 以便 药典专家 们
在今后标准 的修订 中考虑予 以修订。
高效液相色谱法
高效液相色谱法高效液相色谱法(《中国药典》2010年版二部附录V D)系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带人柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
1 对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪，由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成，仪器应按现行国家技术监督局"液相色谱仪检定规程"定期检定并符合有关规定。
1.1 色谱柱最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。
反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶(如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷等〉也有使用。
正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。
离子交换色谱系统使用离子交换填充剂；分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂；对映异构体的分离通常使用手性填充剂。
填充剂的性能(如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等)以及色谱柱的填充，直接影响供试品的保留行为和分离效果。
孔径在15nm(lnm= lOA)以下的填料适于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。
除另有规定外，分析柱的填充剂粒径一般在3～10µm之间。
粒径更小(约2µm)的填充剂常用于填装微径柱(内径约2mm)。
使用微径柱时，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也需作适当的调整。
当对其测定结果产生争议时，应以品种正文规定的色谱条件的测定结果为准。
以硅胶为载体的键合固定相的使用温度通常不超过40°C，为改善分离效果可适当提高色谱柱的使用温度，但不宜超过60°C。
流动相的pH值应控制在2～8之间。
当pH值大于8时，可使载体硅胶溶解；当pH值小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。
中国药典2010年版
年版截图：中国药典20102010版中国药典word版pdf版exe版电子书2010版中国药典word版pdf版exe版电子书中国药典2010年版一部正文一枝黄花(p3)YizhihuanghuaSOLIDAGINIS HERBA本品为菊科植物一枝黄花Solidago decurrens Lour.的干燥全草。
秋季花果期采挖，除去泥沙，晒干。
【性状】本品长30～lOOcm。
根茎短粗，簇生淡黄色细根。
茎圆柱形，直径0.2～0.5cm；表面黄绿色、灰棕色或暗紫红色，有棱线，上部被毛；质脆，易折断，断面纤维性，有髓。
单叶互生，多皱缩、破碎，完整叶片展平后呈卵形或披针形，长1～9cm，宽0.3～1.5cm；先端稍尖或钝，全缘或有不规则的疏锯齿，基部下延成柄。
头状花序直径约0.7cm，排成总状，偶有黄色舌状花残留，多皱缩扭曲，苞片3层，卵状披针形。
瘦果细小，冠毛黄白色。
气微香，味微苦辛。
【鉴别】 (1)叶表面观：上表皮细胞多角形，垂周壁略呈念珠状增厚。
下表皮细胞垂周壁波状弯曲，气孔不定式，略下陷。
非腺毛有两类：表皮非腺毛由3个细胞组成，壁薄，顶端1个细胞常萎缩成鼠尾状，较小；叶缘非腺毛睫毛状由3～7个细胞组成，壁稍厚，长180～500μm。
(2)取本品粉末2g，加石油醚（60～90℃）50ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，弃去石油醚液，药渣挥干溶剂，加70%乙醇30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
另取一枝黄花对照药材2 g，同法制成对照药材溶液。
再取芦丁对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法（附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液5～10μl、对照药材溶液和对照品溶液各5μl，分别点于同一以含4%磷酸氢二钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水（8：1：2010版中国药典word版pdf版exe版电子书1：1）为展示剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
《中国药典》二部凡例和附录习题资料
中国药典（二部）凡例附录试题姓名：成绩：一．填空1.自建国以来共出版9版药典，现行版为2010年版，实行日期为 2010年7月1号。
2.《中国药典》现行版由一部、二部、三部及其增补本组成，内容分别包括凡例、正文、附录，《中国药典》英文缩写为 Ch.p 。
3.附录主要收载制剂通则、通用检测方法、指导原则。
4.对于生产过程中引入的杂质，应在后续的生产环节中有效去除。
5.任何违反GMP或有未经批准添加物质所生产的药品，即使符合《中国药典》或按照《中国药典》没有检出其添加物质或相关杂质，亦不能认为其符合规定。
6.除另有规定外，贮藏项下未规定贮藏温度的一般系指常温。
7.HPLC法测定有关物质，在保证灵敏度的前提下，一般以等度洗脱为主；必要时可采用梯度洗脱方式。
8.HPLC法流动相宜选用甲醇-水流动相，尽量不加缓冲盐。
9.“精密称定”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一；“称定”系指称取重量应准确至所取重量的百分之一；取用量为“约”若干时，系指取用量不得超过规定量的 10%；含量测定时，取供试品约0.2g，精密称定，应称取0.2XXXg 。
10.溶出度指活性药物从片剂、胶囊剂或颗粒剂等制剂在规定条件下溶出的速率和程度。
11.溶出度测定法量取溶出介质实际量取的体积与规定体积的偏差不超过±1% ，实际取样时间与规定时间的差异不得过±2% ，溶出介质温度控制在37°C±0.5°C 。
12.常用的波长范围， 200-400nm 为紫外光区， 400-760nm 为可见光区，2.5-25µm为中红外光区，其皆符合朗伯比尔定律，其关系表达式为A=lg1/T=Ecl 。
13.微生物限度检查中细菌及控制菌的培养温度为 30-35°C ℃，细菌培养时间为 2 天，霉菌和酵母菌的培养时间为 3 天，必要时可延长至 5-7天。
14.本版药典中附录电导率检查中，影响只要用水电导率的因素主要有：、、等。
高效液相法测药品中甲硝唑的含量
高效液相法测药品中甲硝唑的含量作者：张巍等来源：《黑龙江水产》 2013年第2期张巍1 刘万学2 李宁1 彭玮1（1.哈尔滨市兽药饲料监察所黑龙江哈尔滨 150070）(2.黑龙江省水产技术推广总站黑龙江哈尔滨 150018）摘要：采用高效液相色谱法（HPLC）测定甲硝唑片的含量，本法具有简便、快速、准确等优点，可用于甲硝唑片含量的测定。
关键词：高效液相色谱法、甲硝唑片、含量测定、注意事项1 引言甲硝唑（Metronidazole Tablets）（化学名称：2-甲基-5-硝基咪唑-1-乙醇）甲硝唑在水产养殖生产上常被用于治疗鱼类的几种滴虫感染。
但甲硝唑存在致癌性和致遗传变异等毒副作用，因此，许多国家禁止其在动物源性食品中使用，规定在所有食品动物可食性组织中最高残留限量（MRL）为零。
我国农业部（2002年农业部第227号公告）也有同样规定。
建立针对这种违禁兽药的简单、便捷、灵敏的检测方法非常必要。
甲硝唑片的常规检测方法为高效液相色谱法，参照标准《中国药典》2010年版二部。
2 实验部分2.1 仪器与试剂高效液相色谱仪，泵1525，紫外检测器2487，自动进样器（Waters公司）；AB265-S电子天平（Mettler公司）；AR2140D电子天平（赛多利斯公司）；101A-0S电热恒温鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）；甲醇（Fisher公司）和水（由Millipore公司超纯水器制得）为色谱试剂；甲硝唑标准品（含量100%，购自中国药品生物制品检定所）。
2.2 色谱条件及测定法用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（20:80）为流动相；检测波长320nm。
取甲硝唑片20片，精密称定，研细，精密称定细粉约0.3425g（约相当于甲硝唑0.25g），置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，振摇使溶解，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀虑过，精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取甲硝唑对照品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.25mg的溶液，同法测定。
高效液相色谱法测定草酸艾司西酞普兰片的含量
高效液相色谱法测定草酸艾司西酞普兰片的含量代亚;付涛;俞丽君;陈立萍;王贤广【摘要】目的采用高效液相色谱法测定草酸艾司西酞普兰片的含量.方法色谱柱为C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为磷酸缓冲液-甲醇(51 ∶49),检测波长为238 nm.结果艾司西酞普兰质量浓度在25 ～150 μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系(r＝0.999 9),平均回收率为99.60%,RSD为0.44%.结论该方法简便,专属性及重现性好,可用于测定草酸艾司西酞普兰片的含量.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2011(020)016【总页数】2页(P32-33)【关键词】草酸艾司西酞普兰片;含量测定;高效液相色谱法【作者】代亚;付涛;俞丽君;陈立萍;王贤广【作者单位】浙江海森药业有限公司,浙江,杭州,322104;浙江海森药业有限公司,浙江,杭州,322104;浙江海森药业有限公司,浙江,杭州,322104;浙江海森药业有限公司,浙江,杭州,322104;浙江海森药业有限公司,浙江,杭州,322104【正文语种】中文【中图分类】R927.2;R971+.43自从1985年第1个5－羟色胺再吸收抑制剂(SSRIs)上市以来，其在临床得到了广泛应用。
这类药物不产生三环类抗抑郁药的抗副交感神经作用、低血压、认知障碍或镇静等副作用，是一类性能优良的抗抑郁药。
草酸艾司西酞普兰(escitalopram oxalate)就是其中的一种，它是消旋体药物西酞普兰(由 R－西酞普兰和 S－西酞普兰按1∶1的比例组成)的 S－西酞普兰，S－西酞普兰药效优于R－西酞普兰[1]。
该药是由丹麦的Lundbeck公司首先研究开发，2002年8月首次被美国食品与药物管理局(FDA)批准，主要用于重型抑郁障碍的初始治疗和维持治疗。
笔者采用高效液相色谱(HPLC)法测定草酸艾司西酞普兰片的含量，按照2010年版《中国药典(二部)》附录中药品质量标准分析方法验证指导原则[2]进行了方法学试验，现报道如下。
3.2.S.4 原料药的质量控制(修改版)【范本模板】
他达拉非药学研究资料（CTD）目录3.2.S原料药 (1)3.2.S。
4 原料药的质量控制 (1)3.2。
S。
4。
1质量标准 (1)3。
2。
S.4。
2分析方法 (10)3.2。
S4。
3分析方法的验证 (26)3.2。
S。
4.4批检验报告 (138)3.2。
S。
4。
5质量标准制定依据 (142)3。
2。
S原料药3.2.S.4 原料药的质量控制3。
2。
S.4.1 质量标准第1页第2页第3页他达拉非药学研究资料（CTD） 3.2.S.4原料药的质量控制3.2.S.4.1质量标准临床研究用药品质量标准草案他达拉非TadalafeiTadalafil3C22H19N3O4389.40本品为(6R，12aR）—2，3，6，7,12，12a—六氢—2-甲基—6—[3,4—(亚甲基二氧）苯基］吡嗪并[1’，2'：1,6］吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4—二酮。
按干燥品计算，含C22H19N3O4应为98。
0%～102。
0%。
【性状】本品为白色至类白色粉末；无臭无味。
在N,N—二甲基甲酰胺、二甲亚砜中易溶，略溶于四氢呋喃和乙二醇单甲醚，微溶于甲醇和乙腈，极微溶解于乙醇和异丙醇，在正己烷、正庚烷和水中不溶。
比旋度取本品，精密称定，加二甲亚砜溶解并定容稀释制成每1mL中约含10mg的溶液，依法测定（附录ⅥE）,比旋度为+78°~+84°.【鉴别】（1）取本品，加0.1％三氟乙酸水溶液—乙腈（1：1)制成每1 ml中约含10 μg 的溶液，照紫外—可见分光光度法（附录Ⅳ A)测定,在221 nm、284 nm和291nm的波长处有最大吸收.（2）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致.（3）本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致。
【检查】有关物质取本品，精密称定，用0。
1%三氟乙酸水溶液:乙腈=1：1（v：v）溶解并定容稀释制成每1 ml中约含0。
高效液相色谱法法测定洛伐他汀片剂的有关物质
高效液相色谱法法测定洛伐他汀片剂的有关物质作者：郭瑞峰郄冰冰张西如高燕霞来源：《中国实用医药》2009年第15期[摘要]目的建立洛伐他汀片剂有关物质的HPLC测定方法,并同时考察了全国数批洛伐他汀片剂的有关物质。
方法使用C18柱,以乙腈-0.01%磷酸(60:40)为流动相采用线性梯度表洗脱,检测波长为238nm。
结果洛伐他汀片剂中主峰及其有关物质色谱保留时间适宜,分离良好。
结论方法准确、灵敏度高,本方法可有效地控制药品质量。
[关键词]洛伐他汀片剂;有关物质;高效液相色谱法洛伐他汀(Lovastatin)为降胆固醇药,能减少肝脏生成胆固醇量。
临床用于降低血清总胆固醇,低密度脂蛋白,极低密度脂蛋白和甘油三脂。
并能升高高密度脂蛋白。
本品口服制剂在临床上应用范围很广泛。
洛伐他汀系发酵产品,发酵液中含有与其结构功能相似的同类药物较多,各国药典均控制其有关物质。
其片剂虽收载于国家药品标准[1]和USP标准[2]中,但未对其有关物质进行控制。
本文所采用的梯度法流动相系统,对洛伐他汀片剂及有关物质实行了很好的分离。
实验结果表明,该方法准确、可靠、灵敏度高,可检测有关物质。
本方法将收载到中国药典2010年版二部。
1.实验部分1.1仪器与试药岛津LC-2010CHT高效液相色谱仪,Agilent1200高效液相色谱仪;乙腈为色谱纯,磷酸为国产分析纯,水为去离子水。
洛伐他汀对照品为中国药品生物制品检定所提供,批号为:100600-200502,辛伐他汀对照品为中国药品生物制品检定所提供,批号为:100601-200502,洛伐他汀片剂为国内药厂产品。
1.2色谱条件供试品溶液的制备:取本品20片,精密称定,研细,精密称取细粉适量(约相当于洛伐他汀40mg),置100ml量瓶中用乙腈溶解并稀释至刻度,摇匀。
对照溶液的制备:取上述供试品溶液1ml,置100ml量瓶中,加乙腈稀释至刻度,摇匀。
2.方法建立与评价2.1色谱条件的选择2.1.1色谱柱的选择由于洛伐他汀容量因子较大,故EP6.0及BP2008原料有关物质方法中均选用C8柱测定,USP31选用C18柱测定。
高效液相色谱法测定木通属植物苯乙醇苷B含量
高效液相色谱法测定木通属植物苯乙醇苷B含量高伟;幸伟年;敖婉初;徐林初;龚春;彭以元【摘要】以江西、湖南、四川、安徽4省的38份木通植物为试材,采用高效液相色谱法建立木通属植物苯乙醇苷B含量的测定方法,并测定木通藤茎中苯乙醇苷B的含量。
结果表明：1）采用85%甲醇回流提取1 h,可以完整提取木通苯乙醇苷B;木通苯乙醇苷B在0.04~1μg呈良好的线性关系,R2=0.9991,平均回收率99.44%。
2）木通苯乙醇苷B在三叶木通、五叶木通、白木通藤中均含有,含量0.01%~1.194%,其中在三叶木通中的成熟藤中含量最大。
【期刊名称】《南方林业科学》【年(卷),期】2015(043)005【总页数】4页(P48-51)【关键词】木通苯乙醇苷B;三叶木通;江西【作者】高伟;幸伟年;敖婉初;徐林初;龚春;彭以元【作者单位】[1]江西省林业科学院,江西南昌330013;[2]江西师范大学,江西南昌330029;;;;;【正文语种】中文【中图分类】S567双子叶植物白木通或三叶木通、木通（五叶木通）的木质藤是中药木通的原料来源。
中医药理论认为，木通味苦，性寒，具有清热利尿，活血通脉，抗菌消炎之功效，主治小便短赤，淋浊，水肿，风湿痹痛，乳汁不通，痛经等症［1］。
木通的这些药用价值与其所含的化学成分密切相关。
木通皂苷的结构单元苷元主要是从齐墩果酸的结构基础上氧化为去甲常春藤皂苷元、常春藤皂苷元、去甲阿江榄仁酸、阿江榄仁酸等4种皂苷元［2］。
目前从木通的干燥藤茎中除了分离得到齐墩果烷型三萜皂苷类成分，还分离到苯乙醇苷类成分，这类成分也是首次从木通属植物中发现。
苯乙醇苷类化合物（phenylethanoid glycosides）是一类含有羟基、甲氧基取代苯乙基和羟基、甲氧基取代肉桂酰基，通常以B-葡萄糖为母核的含有酯键及氧苷键的天然糖，广泛存在于双子叶植物中［3］。
目前对木通化学成分的研究主要集中在木通齐墩果酸、木通皂苷的药理作用及其结构的鉴定［4-9］，也有研究木通基因表达对各药用成分含量的影响［10-12］，而对木通中苯乙醇苷类化合物的研究鲜见报道。
乙酰半胱氨酸分析
乙酰半胱氨酸颗粒1性状本品应为可溶性细颗粒；气芳香，味酸甜。
1.2鉴别(1)取本品适量（约相当于乙酰半胱氨酸0.2g），加水20ml溶解，用1mol/L 氢氧化钠溶液调节pH值至6.5，并用水稀释至40ml,作为供试品溶液；另取乙酰半胱氨酸对照品0.2g，同法制备作为对照品溶液。
照薄层色谱法（附录ⅴB）试验，吸取上述两种溶液各5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（4:1:5）混合并平衡10分钟的上层液为展开剂，展开后，取出，在热气流下吹干，再于碘蒸气中显色，供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点相同。
（2）HPLC法：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
以上（1）、（2）两项可选做一项。
1.3 检查酸度检查方法：取本品，加水制成10%的溶液，依法测定（2010年版二部附录ⅥH），pH值应为2.0～3.0。
干燥失重检查方法：取本品，在70℃干燥4小时，减失重量不得过2.0%（2010年版二部附录ⅧL）。
溶化性检查方法：取供试品10g,加热水200ml，搅拌5分钟，可溶颗粒应全部溶化或轻微浑浊，但不得有异物。
装量差异检查方法：应符合规定（2010年版二部附录ⅠN颗粒剂-装量差异）。
有关物质检查方法：HPLC法色谱条件：色谱柱：C18流动相：硫酸铵缓冲液（取硫酸铵5.00g、庚烷磺酸钠4.04g，用水稀释至1000ml，用7mol/L的盐酸溶液调节pH值至2.0）：甲醇（93：7）柱温：30℃检测波长：205nm流速：1.0ml/min 进样体积：10µl理论塔板数：按乙酰半胱氨酸峰计算不低于1000。
测定法：取含量测定项下的细粉适量（约相当于乙酰半胱氨酸25mg），精密称定，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为自身对照溶液；另取胱氨酸（杂A）对照品和半胱氨酸（杂B）对照品适量，精密称定，（杂A需加1M盐酸使溶解），加流动相分别溶解稀释制成每1ml中约含有2.5μg的溶液，摇匀，作为杂质A，杂质B对照溶液；取自身对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰的峰高约为满量程的20%；精密量取杂A与杂B对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；再精密量取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分保留时间的5倍。
《中国药典》2010年版附录部分内容
通用检测方法和指导原则主要增修订内容
1、一部共16项，其中新增6项：
电泳测定法
渗透压摩尔浓度测定法
等离子体发射光谱法 大孔树脂有机残留物测定法 聚合酶链式反应法 中药特征图谱指导原则
通用检测方法和指导原则主要增修订内容
2、二部共45项，新增12项：
核磁共振波谱法 离子色谱法 电导率测定法 锥入度检查法 2-乙基己酸测定法 光学显微镜法 拉曼光谱法指导原则 溶出度测定指导原则 药物多晶型研究指导原则 蛋白质含量测定法 合成多肽中醋酸测定法 氨基酸测定指导原则
通用检测方法和指导原则主要增修订内容
离子色谱法
1、有机、无机阴阳离子和低分子量亲水性 有机分子的分离测定 2、氨基酸不经衍生化直接测定 3、某些抗生素的有关物质检查 4、金属的形态与价态分析
通用检测方法和指导原则主要增修订内容
拉曼光谱法指导原则 1、与红外光谱一样，同为分子的振动光谱 ∞ Ψ IR 与偶极矩变化相关│Mnm│= ∫ n ΡΨm dτ
紫外-可见分光光度法 1、波长校正 增加了高氯酸钬溶液的校正（以10% 高氯酸为溶剂，配制含4%氧化钬的溶液） λmax nm：241.13，278.10，287.18，333.44， 345.47，361.31，416.28，451.30， 485.29，536.64，640.52nm。 2、波长允差 紫外区 ±1nm 500nm ±2nm 700nm ±4.8nm
通用检测方法和指导原则主要增修订内容
酸败度检查法 羰基值的原计算公式有误 A 羰基值= 854 ×W V ×1000 V 1、854的各种醛的2,4-二硝基苯腙的ε ，而不是mε 2、V1 供试品稀释总体积 V2 测定用供试品稀释液体积 S 25ml
中国药典版--高效液相色谱法
色谱条件与系统适用性试验
按各品种项下的要求对仪器进行适用 性试验，即用规定的对照品对仪器进 行试验和调整，应达到规定的要求； 或规定分析状态下色谱柱的最小理论 板数、分离度、重复性和拖尾因子。
（1） 色谱柱的理论板数
色谱柱的理论板数(n) 在选定的条件下，注入 供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液， 记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰 的保留时间tR（以分钟或长度计，下同,但应 取相同单位）和半高峰宽(Wh/2)，按 n=5.54(tR／Wh/2)<2>计算色谱柱的理论板数， 如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小 理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长， 载体性能，色谱柱充填的优劣等），使理论板 数达到要求。
(3) 拖尾因子
为保证测量精度，特别当采用峰高 法测量时，应检查待测峰的拖尾因子 (T)是否符合各品种项下的规定,或不同 浓度进样的校正因子误差是否符合要 求。除另有规定外， (T) 应在0.95～ 1.05之间。
四重复性
取各品种下的对照溶液，连续进样5次， 除令有规定外，其峰面积测量值相对 标准偏差应不大于2.0％。也可按照规 定 配制相当于80％、100％和120％的 对照品溶液，加入规定量的内标溶液， 配成三种不同浓度的溶液，分别注样3 次,计算平均校正因子，其相对标准偏 差应不大于2.0％。
对氨基酸分离，用经典色谱法，柱长约 170cm，柱径0.9cm，流动相速度为 30cm3·h-1，需用20多小时才能分离出20 种氨基酸；而用高效液相色谱法，只需lh 之内即可完成。又如用25cm×0.46cm的 Lichrosorb－ODS(5μ)的柱，采用梯度洗 脱，可在不到0.5h内分离出尿中104个组
3.测定法
定量测定时，可根据样品的具体情 况采用峰面积法或峰高法。但用归一 法或内标法测定杂质总量时，须采用 峰面积法。
高效液相色谱法 中国药品检验标准操作规范 2010年版
高效液相色谱法高效液相色谱法（《中国药典》2010年版二部附录V D）系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
1 对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪，由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成，仪器应按现行国家技术监督局“液相色谱仪检定规程”定期鉴定并符合有关规定。
1.1 色谱柱最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。
反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷等）也有使用。
正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。
离子交换色谱系统使用离子交换填充剂；分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂；对映异构体的分离通常使用手性填充剂。
填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响供试品的保留行为和分离效果。
孔径在15nm（1nm=10Å）以下的填料适于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。
除另有规定外，分析柱的填充剂一般在3~10μm之间。
粒径更小（约2μm）的填充剂常用于填装微径柱（内径约2mm）。
使用微径柱时，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也需作适当的调整。
当对其测定结果产生争议时，应以品种正文规定的色谱条件的测定结果为准。
以硅胶为载体的键合固定相的使用温度不超过40℃，为改善分离效果可适当提高色谱柱的使用温度，但不宜超过60℃。
流动相的pH指应控制在2~8之间。
当pH指大于8时，可使载体硅胶溶解；当pH指小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。
中国药典2010版对应高效液相色谱图集
中国药典2010版对应高效液相色谱图集栀子分析栀子的高效液相色谱《中国药典》收载情况【来源】本品为菌草科植物栀子E lli s 的干燥成熟果实。
9-11月果实成熟呈红黄色时采收，除去 果梗及杂质，蒸至上汽或置沸水中略烫，取出，干燥。
【功能与主治】泻火除烦，清热利湿，凉血解毒；外用消肿止痛。
用于热病心烦，湿热黄疸，淋证涩痛，血热吐脑， 目赤肿痛，火毒疮疡；外治扭挫伤痛。
【含量测定】色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(15:85)为流动相；检测 波长为238nm。
理论板数按栀子苷峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备：精密称取扼子苷对照品适量，力卩甲醇制成每1mL含30 p g 的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品粉末(过四号筛)约0.1 g ，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25m L ,称定重量， 超声处理2盼钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10m L,置25mL量瓶中， 加甲醇至刻度，摇匀，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 ML ,注入液相色谱仪，测定，即得。
栀子样品来源：本品为菌草科植物栀子GWew'ayosTm'noWes Ellis 的干燥成熟果实。
9-11月果实成熟呈红黄色时采收，除 去果梗及杂质，蒸至上汽或置沸水中略烫，取出，干燥。
产地：江西。
对照品：栀子苷(含量：99.91%)供试品溶液的制备：取本品粉末(过四号筛)约0.1 g ,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25m L ,称定重量， 超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量職滤液10m L ,置25mL 量瓶中， 加甲醇至刻度，摇匀，取200 m L 加入800^ L 超纯水即得待测液。
对照品溶液的制备：精密称取栀子苷对照品适量，力卩入20%甲醇水制成每1mL含30 Mg的溶液，摇匀，即得。