人胰腺导管上皮细胞的原代和传代培养

人胰腺导管上皮细胞的原代和传代培养

解剖学报 2000年第2期第0卷短篇报道

作者：侯敏陈元方柯杨孔燕国陆国钧

单位：侯敏陈元方孔燕国陆国钧（中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院消化内科，北京 100730）；柯杨（北京医科大学北京市肿瘤医院，北京 100034）

关键词：原代培养；传代培养；人胰腺导管上皮细胞

【摘要】目的完成胰腺导管上皮细胞的原代及传代培养，建立能够体外长期培养的胰腺导管上皮细胞系。方法用含有胶原酶IA型的消化液消化分离胎儿胰腺组织为细小、均匀的细胞团进行接种，接种的细胞团用含10%胎牛血清、4.0mmol/L谷氨酰胺、0.01%大豆胰酶抑制剂、0.02%牛血清白蛋白、5.0mg/L牛脑垂体提取物、2.5×10-3mg/L表皮生长因子、25.0×10-2mg/L霍乱毒素、5.0mg/L胰岛素、10.0mg/L转铁蛋白、1.0mg/L地塞米松、50mg/L 庆大霉素的完全培养基培养24h后，换含2%胎牛血清的完全培养基继续培养，在细胞团达到80%～90%的细胞汇合时，1∶2传代培养。结果获得的原代培养细胞不含有淀粉酶，表达细胞角蛋白，可初步认定为胰腺导管上皮细胞。原代培养的胰腺导管上皮细胞已传代培养到第3代。结论我们的原代培养和传代培养的方法、条件适宜于胰腺导管上皮体外细胞培养。完成胰腺导管上皮细胞的原代及传代培养，建立能够体外长期培养的胰腺导管上皮细胞系。方法用含有胶原酶IA型的消化液消化分离胎儿胰腺组织为细小、均匀的细胞团进行接种，接种的细胞团用含10%胎牛血清、4.0mmol/L谷氨酰胺、0.01%大豆胰酶抑制剂、0.02%牛血清白蛋白、5.0mg/L牛脑垂体提取物、2.5×10-3mg/L表皮生长因子、25.0×10-2mg/L 霍乱毒素、5.0mg/L胰岛素、10.0mg/L转铁蛋白、1.0mg/L地塞米松、50mg/L庆大霉素的完全培养基培养24h后，换含2%胎牛血清的完全培养基继续培养，在细胞团达到80%～90%的细胞汇合时，1∶2传代培养。结果获得的原代培养细胞不含有淀粉酶，表达细胞角蛋白，可初步认定为胰腺导管上皮细胞。原代培养的胰腺导管上皮细胞已传代培养到第3代。结论我们的原代培养和传代培养的方法、条件适宜于胰腺导管上皮体外细胞培养。

【中图分类号】R322.4+91;R329.2【文献标识码】 A

【文章编号】0529-1356(2000)02-180

PRIMARY CULTURE AND SUBCULTURE OF HUMAN

PANCREATIC DUCTAL CELLS

HOU Min,CHEN Yuan-fang,KONG Yan-guo, LU Guo-jun

（Chinese Academy of Medical Sciences,Peking Union Medical College,PUMC Hospital,Department of Gastroenterology,Beijing 100730；）

KE Yang

（Beijing Medical University,Beijing Institute for Cancer Research,Bijing 100034,China）

【Abstract】Objective To establish a normal pancreatic ductal epithelial cell line for further study.Methods The human fetal pancreas was dispersed with the solution containing collagenase type IA. Then cells were maintained in a complete media consisting of 10% fetal bovine serum(FBS), 4.0mmol/L glutamine, 0.01% soybean trypsin inhibitor, 0.02% bovine serum albumin, 5.0mg/L bovine pituitary extract, 2.5×10-3mg/L epithelial growth factor, 25.0×10-2mg/L cholera toxin, 5.0mg/L insulin, 10.0mg/L transferrin, 1.0mg/L dexamethasone, and 50mg/L gentamycin. Twenty-four hours later, they were cultured successively in a complete media of 2% FBS. When the cultured cells reached 80%-90% confluence, they were subcultured in 1∶2.Results Expression of cytokeratin and absence in amylase proved that the cultures were pancreatic ductal cells. These pancreatic ductal cells had been subcultured for three generations.Conclusion Our culture methods and conditions used in the experiments are suitable for the primaryculture and subculture of human pancreatic ductal cells.

【Key words】Primary culture; Subculture; Human pancreatic ductal cell

正常人上皮细胞的培养较困难，传代培养更不易。我们在对人胚胰腺导管上皮细胞的原代和传代培养的工作中获得了一些经验和体会，现总结如下。

材料和方法

1. 细胞分离及培养所需液体

，调节pH值至7.2，基础培养基：DMEM/Ham F-12(1:1, Gibco)，按要求加入NaHCO

3

过滤除菌，分装备用。

消化液：Hanks平衡液中加入胶原酶IA型(Sigma)0.5g/L，大豆胰酶抑制剂(Sigma)使

其终浓度为0.01%，过滤除菌，分装备用。