常规细胞转染过程和常见问题

实验过程（以24孔板为例）

1.提前一天细胞铺板

提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞密度在60％左右为宜。

2.转染过程

⑴将0.8μg的DNA用25μl无血清稀释液稀释，充分混匀，制成DNA稀释液。

注意：无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。

⑵将2μl的Entranster TM试剂用25μl无血清稀释液体稀释，充分混匀，制成

Entranster TM试剂稀释液。室温静置5分钟。

⑶将Entranster TM试剂稀释液分别加入到DNA稀释液中，充分混匀（可用振

荡器振荡或用加样器吹吸10次以上），室温静置15分钟。转染复合物制备完成。

⑷将转染复合物加入到含细胞和完全培养基的培养容器上，轻柔混匀。

注意：①转染试剂，采用含血清的全培养基有助于提升转染效率。②完全培养基可加抗生素。

⑸培养4-6小时后更换培养基，继续培养24-48小时。

注意：①如细胞没有毒性等不良情况，转染后4-6小时可不必更换培养基。

注意：如用于同时共转染多种质粒，DNA的用量指每种质粒用量的总和，这时如需得到较高转染效率，建议将DNA的用量和转染试剂的用量同步提高1.5-2倍。

常见问题与解决方案