细胞融合与单克隆抗体 PPT课件
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动物细胞融合与单克隆抗体1ppt课件
B. C. 操作步骤基本相同
D. 都能形成杂种细胞
3. 单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是（ D ）
A.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成 C.由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成
4.只能使动物细胞融合的常用诱导方法是（ B ）
A．PEG
B．灭活的病毒
C．电刺激
D．离心
5. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合
后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能
存活增殖的细胞是
（C
）
①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融合细胞
④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞
A.②④
B.①③⑤
C.①②③④
可大量制备
1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞， 经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是 （ A）
A.经过免疫的B淋巴细胞 C.经过免疫的T淋巴细胞
B.没经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的Ｂ淋巴细胞
2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是
（D ）
A. 诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同
D.②③
6.“生物导弹”是指 A.单克隆抗体 B.杂交瘤细胞 C.产生特定抗体的B淋巴细胞 D.在单克隆抗体上连接抗癌药物
（D ）
有梦想，才会有创造！
生物种间杂交想像图 已成功的动物细胞融合实例有很多，如人—小鼠、人— 兔、人—鸡、鼠—兔、鸡—鼠等上百种融合细胞。甚至已成 功完成了酵母菌—鸡 、人—胡萝卜 等细胞的融合。
讨论：
公开课动物细胞融合与单克隆抗体ppt课件
目的获：得产生
相应抗体的B 细胞
（二选）：选 能产生所需专
一抗体的杂 交瘤细胞
体外培养 小鼠腹腔内培养
ppt课件.
√ BB 、B瘤 、瘤瘤
（B、瘤）
（一选）选 择性培养基：
只有杂交 瘤细胞才
能存活
14
2.2单克隆抗体的应用 特异性强
单克隆抗体最主要的优点：灵敏度高
并能大量制备
诊断试剂——最广泛应用
细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接
细胞融合，形成杂交细胞
（细胞膜具有一定的流动性）
ppt课件.
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1.2动物细胞融合过程
为什么灭活的 病毒能作诱导剂？
灭活丧失感染性 保留融合活性
ppt课件.
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1.3动物细胞融合技术的意义和应用
意义：
Hale Waihona Puke 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交 成为可能
应用： 制备单克隆抗体（最主要的应用）
但是体外
怎样大量
？ 获得单一 抗体
培养的细胞 不能无限增
殖
癌细胞
既能产生特异性抗体，
又pp能t课件大. 量增殖的细胞 12
你的设想
一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖
单克隆 动物细胞培养技术 杂交瘤细胞
抗体
动物细胞融合技术
既能产生特异性抗体， 又能大量增殖的细胞
ppt课件.
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细胞继承了_双__亲__细__胞__的__遗__传__物__质____ ，因此不仅能分泌 特异__性__抗__体_____ ，还有 大量增殖 本领。
（3）该方案的目的是__制__备__单__克__隆__抗__体___________。
细胞融合与单克隆抗体优秀课件
Norwood提出，含15%（V/V）DMSO的50% PEG4000，DMSO可增加膜的通透性，使细胞膜的 渗透压更易于与环境趋于平衡，从而提高融合频率。
细胞融合前的准备（2）
制备饲养细胞（feeder cell）：小鼠腹腔巨噬细胞，能分 泌生长因子促使单个细胞容易生长，还能清除死亡破碎细 胞及微生物。
另一辅助途径是在H、T存在的情况下，经次 黄嘌呤磷酸核糖转化酶（HGPRT）和胸腺嘧 啶核苷激酶（TK）的作用合成DNA。
HAT培养基：
次黄嘌呤（hypoxanthine，H）
氨基蝶呤（aminopterin，A）:叶酸的拮抗剂， 可阻断瘤细胞利用正常途径合成DNA。
胸腺嘧啶核苷（thymidine，T）
动物免疫：获得产生高效价特异性抗 体的B细胞
抗原：可溶性抗原（蛋白质、核酸、多肽、多 糖）、颗粒性抗原（细胞、细菌、真菌）。
可溶性抗原+佐剂
动物： 6周龄的雌性Balb/c小鼠
免疫途径：腹腔注射、静脉注射、皮内或肌肉内注射。 腹腔内注射尤其适合于颗粒性抗原；对于可溶性抗原 来讲，初次免疫一般选用弗氏佐剂和抗原的混合乳化 物进行背部皮下多点注射，加强免疫在首次免疫后 10～14天，一般是静脉或腹腔内注射，融合前还要进 行抗原冲击。脾内免疫法可获得更满意的免疫效果， 此法免疫周期短、抗原用量少 。
融合后五种细胞的命运：
B，瘤细胞（HGPRT缺陷），B-B，瘤-瘤（HGPRT 缺陷）， 瘤-B
B，B-B细胞能分泌抗体，含有HGPRT，能在HAT培 养基短期存活，但不能长期体外存活。
瘤细胞，瘤-瘤细胞能在体外长期存活，但不含有 HGPRT，不能在HAT培养基存活，不能分泌抗体。
只有瘤-B融合细胞具有亲代双方的遗传性能，在HAT 培养基存活，且能在体外长期存活，能分泌抗体。
人教版教学课件动物细胞融合与单克隆抗体(共20张PPT)
培养液中或小鼠腹腔中培养 从培养液或小鼠腹水中提
如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？
融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的 细胞就是杂交瘤细胞。 但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞， 通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释， 用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个， 通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分 泌的抗体。那些上清液可与特定抗原结合的培养 孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单 个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一 般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为 单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。
产生相应的B淋巴细 效应B淋巴细胞 胞
融合
培养骨髓瘤细胞 骨髓瘤细胞
多种杂交细胞
（只考虑两两融合） 骨髓瘤细胞---骨髓瘤细 培养液中细胞有几 胞 种类型？融合细胞 在具有筛选作用的培养基上培养 几种类型？ B淋巴细胞--- B淋巴细胞
专一抗体检验阳性 B淋巴细胞---骨髓瘤细胞 克隆上述杂交细胞
注射到小鼠体内
设计方案：
一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖
动物细胞融合技术 单克隆 动物细胞培养技术 杂交瘤细胞 抗体 既能产生特异性抗体， 又能大量繁殖的细胞
(1)、原理：杂交瘤细胞具有两个亲本的特性，即能
迅速大量增殖，又能足够数量的单一抗体。
(2)、过程
1、单克隆抗体的制备过程
注射特定 抗原蛋白
5、动物细胞融合过程
不同DNA的两个细胞
灭活病毒诱导细胞融合
融合后的细胞 进行有丝分裂
6、意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交 （种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。 7、应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物 新品种培育等的重要手段
细胞工程细胞融合与单克隆抗体技术PPT课件
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与多5克．隆2抗．体2（单P克cA隆b，抗p体ol的yc特lon性a（l a见nt图ib表od）y）
相比，MAb具有以下显著特点： 高度均质性——结构、亲和力、亲合力相同； 高度特异性——单一抗原决定簇， 不发生交叉反应； 高效价——ELISA（酶联免疫吸附测定法） 效价达成10.6-10.8； 来源稳定，可大量生产； 容易标准化。
药物治疗排异反应、TNF-αMAb治疗脓 毒症和类风湿性关节炎。
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5．2 单克隆抗体技术（杂交瘤技 术）
●杂交瘤细胞 ——是指肿瘤细胞与体细胞融合形成
的杂交细胞；它既保留了肿瘤细胞无限 增殖的能力，又具有参与融合的体细胞 的一些特征。
第30页/共58页
●杂交瘤技术（hydridoma technique，也称MAb制备技术） ——是指建立杂交瘤细胞系的技术；
成由亲本细胞同核体及异核体组成的细胞混 合
群体。不同的细胞在体外培养条件下有着不 同
的生长特性。在未融合的亲本细胞中，缺乏 增
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●由于杂交细胞在融合处理后的细胞群体中数量少，生长缓慢，往往受到优势 生长的亲本细胞抑制，需要筛选；
●杂交细胞在体外培养过程中，可能因为基因的丢失或突变，使其原有的遗传 表型消失或减弱，应定期检测杂交细胞遗传表现型，进行控制。
●狭义的杂交细胞遗传表型的控制——是指基于对杂交细胞的基因型和（或） 表型动态分析的基础上，使有利用价值或人们关注的表型得到维持的措施。
与多5克．隆2抗．体2（单P克cA隆b，抗p体ol的yc特lon性a（l a见nt图ib表od）y）
相比，MAb具有以下显著特点： 高度均质性——结构、亲和力、亲合力相同； 高度特异性——单一抗原决定簇， 不发生交叉反应； 高效价——ELISA（酶联免疫吸附测定法） 效价达成10.6-10.8； 来源稳定，可大量生产； 容易标准化。
药物治疗排异反应、TNF-αMAb治疗脓 毒症和类风湿性关节炎。
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5．2 单克隆抗体技术（杂交瘤技 术）
●杂交瘤细胞 ——是指肿瘤细胞与体细胞融合形成
的杂交细胞；它既保留了肿瘤细胞无限 增殖的能力，又具有参与融合的体细胞 的一些特征。
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●杂交瘤技术（hydridoma technique，也称MAb制备技术） ——是指建立杂交瘤细胞系的技术；
成由亲本细胞同核体及异核体组成的细胞混 合
群体。不同的细胞在体外培养条件下有着不 同
的生长特性。在未融合的亲本细胞中，缺乏 增
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●由于杂交细胞在融合处理后的细胞群体中数量少，生长缓慢，往往受到优势 生长的亲本细胞抑制，需要筛选；
●杂交细胞在体外培养过程中，可能因为基因的丢失或突变，使其原有的遗传 表型消失或减弱，应定期检测杂交细胞遗传表现型，进行控制。
●狭义的杂交细胞遗传表型的控制——是指基于对杂交细胞的基因型和（或） 表型动态分析的基础上，使有利用价值或人们关注的表型得到维持的措施。
细胞融合和单克隆抗体PPT教学课件
各种细胞器分布、结构、功能的比较归纳
分 布 有无膜
功能
线粒体
动 植 物 两层膜
细胞呼吸和能量代谢的中心
叶绿体 内质网
植物叶肉细 胞
动植物
两层膜 单层膜
光合作用的场所 蛋白质的运输通道
溶酶体
动植物
单层膜
消化细胞内颗粒和碎渣
高尔基体 动植物
单层膜 对蛋白质进行加工、分类和包装。
液泡
中心体 核糖体
溶酶体
单层膜。动物、真菌和某些植物细胞中由单位膜包被 的小泡。含有多种水解酶，起消化功能，能分解衰老、 损伤的细胞器、吞噬并杀死侵入细胞的病毒或病菌。 由高尔基体断裂形成。
问题
飞翔鸟类胸肌细胞中线粒体的数量比不飞 翔鸟类的多。运动员肌细胞线粒体的数 量比缺乏锻炼的人多。在体外培养细胞 时，新生细胞比衰老细胞或病变细胞的 线粒体多。为什么？
2、单克隆抗体的制备过程
思考与探究： 如何获得能产生特异抗体的杂交瘤细胞呢？
经免疫的小鼠
提取
B淋巴细胞
小鼠骨髓瘤细胞
灭活的病毒等手段
杂交 细胞
用特定的选 第一次筛选
择性培养基
杂交瘤细胞 第二次筛选
能产生特定抗体、培养条件 下能无限增殖的杂交瘤细胞
注射到小鼠腹腔
体外培养
提取单克隆抗体
（3）整个制备过程为何要经过两次筛选?
第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），
第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤 细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性 抗体的细胞群。
由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所 以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单 克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义， 只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。
高中生物选修三2.3细胞融合和单克隆抗体课件 共17张
突破有性杂交方法的局限，使远 缘杂交成为可能
最主要用途：制造单克隆抗体
植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
比较项目
植物体细胞杂交
动物细胞融合
细胞融合原理 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性
细胞融合的方 去除细胞壁后诱导原 使细胞分散后诱导
Байду номын сангаас
法
生质体融合
细胞融合
诱导方法
电刺激
电融合、PEG、灭
化学（聚乙二醇） 活的仙台病毒
较中，正确的是（ B ）
A．结果是相同的 B．杂种细胞的形成过程基本相同 C．操作过程中酶的作用相同 D．诱导融合的手段相同
2、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细
胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，
在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ C ）
①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身
4、生产单克隆抗体时，在培养液中加入某种试
剂能筛选出杂交瘤细胞，因为该试剂（ C ）
A.能抑制淋巴细胞和杂交瘤细胞的DNA复制 B.能阻止淋巴细胞的原癌基因被激活 C.选择性抑制骨髓瘤细胞的DNA复制 D.能阻止杂交瘤细胞核糖体上所有蛋白质合成
5、科学家们用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融 合，得到杂交瘤细胞，经培养可产生大量克隆
融合细胞 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂
交瘤细胞
A．②④
B．①③⑤
C．①②③④
D．②③
3、单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是（ D ）
A．由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合 B．由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成 C．由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D．由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成
最主要用途：制造单克隆抗体
植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
比较项目
植物体细胞杂交
动物细胞融合
细胞融合原理 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性
细胞融合的方 去除细胞壁后诱导原 使细胞分散后诱导
Байду номын сангаас
法
生质体融合
细胞融合
诱导方法
电刺激
电融合、PEG、灭
化学（聚乙二醇） 活的仙台病毒
较中，正确的是（ B ）
A．结果是相同的 B．杂种细胞的形成过程基本相同 C．操作过程中酶的作用相同 D．诱导融合的手段相同
2、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细
胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，
在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ C ）
①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身
4、生产单克隆抗体时，在培养液中加入某种试
剂能筛选出杂交瘤细胞，因为该试剂（ C ）
A.能抑制淋巴细胞和杂交瘤细胞的DNA复制 B.能阻止淋巴细胞的原癌基因被激活 C.选择性抑制骨髓瘤细胞的DNA复制 D.能阻止杂交瘤细胞核糖体上所有蛋白质合成
5、科学家们用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融 合，得到杂交瘤细胞，经培养可产生大量克隆
融合细胞 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂
交瘤细胞
A．②④
B．①③⑤
C．①②③④
D．②③
3、单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是（ D ）
A．由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合 B．由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成 C．由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D．由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成
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挑选能产生特定抗体的细胞后继续培养，以 获得足够数量的细胞后，怎样才能得到大量 的单克隆抗体？
注射到小 鼠体内
体外 培养
关
键
步
第1次筛选
骤
第2次筛选
2、单克隆抗体的特点
特异性强，灵敏度高，化学性质单一。 3、应用：
（1）临床诊断 准确、高效、简易、快速。 （2）用于治疗疾病和运载药物
比如“生物导弹”
B淋巴 细胞
骨髓瘤 细胞
融 合
如何筛选出能 产生特定抗体 的细胞？
多种杂交细胞
选择培养 基上培养
克隆杂交细胞
专一抗体 检验阳性
专一抗体检 验阳性
分开不同杂交细胞，克隆 专一抗体检验阳性细胞
有限稀释法
杂交瘤 细胞
培养后取上 清液（含抗 体）做抗原 抗体检测
计数 103/ml 102/ml 10/ml 0.5-2/孔
思考题 1.克隆动物是指？
2科.网 zxxk. 组卷网 细胞融合与单克隆抗体
一、动物细胞融合
1、概念：
也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结 合形成一个细胞的过程。 形成的细胞称杂交细胞
2、诱导方法：
细胞A
物理法
物理（离心、振动、电激）、 化学法
细胞B
灭活的病毒
学.科.网 zxxk. 组卷网
4、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
4、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
5、细胞融合技术应用
细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物 新品种培育及制备单克隆抗体。
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
二、单克隆抗体
单个 细胞
无性 繁殖
什么是抗体？抗体用在医学上有何作用？ 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗 原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 抗体存在于生物体的什么部位？ 血清、组织液及外分泌液中。
化学（聚乙二醇）、 生物（灭活的仙台病毒）
杂交细胞
灭活的病毒诱导细胞融合的原理是什么？ 灭活的含义是什么？（52页资料）学.科.网 zxxk. 组卷网
仙台病毒 紫外线
丧失感染性（不感染细胞） 保留融合活性（诱导细胞融合）
3、过程：
为何要用灭活的病毒？
动物细胞融合成功的 标志是什么？
此时细胞的核型特点？
传统方法如何得到抗体？ 反复向动物体内注射抗原，从血清中分离抗体。
这样得到的抗体在产量如何？纯度高吗？特异 性如何？
产量低、纯度低、特异性差。
什么细胞能产生抗体？每一个这样的细 胞能产生几种抗体？
如何产生大量的单克隆抗体？
1.单克隆抗体制备过程
免疫小鼠
注射特定 抗原蛋白
培养骨髓 瘤细胞
融合后可能什么 类型的细胞？如 何筛选？
能提高良种家畜繁殖能力的细胞工程技术是
Ａ．组织培养
Ｂ．细胞融合
Ｃ．胚胎移植
Ｄ．细胞核移植
动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中， 正确的是
Ａ．诱导融合的方法完全相同 Ｂ．所用的技术手段完全相同 Ｃ．所采用的原理完全相同 Ｄ．都能形成杂种细胞