21微生物的实验室培养-吉林省长春市第二中学高中生物选修一课件2(共31张PPT)
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1.平板划线法
平板划线的操作
一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离 单菌落的目的；
二是存留在划破处的单个细胞无法形成规则的 菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条 状的菌落。
问题讨论
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧 接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？ 为什么？
根霉
曲霉
青霉
培养基的种类
据化学成根示分据 剂划微 或分生 化物 学天的 药然代品在抑培谢配培制养特制养不基点而基需，成中要在，加的培用入微养以某生基 鉴种物中 别化的不加学生同入物长种某质，类种，促的指以进 微生物。例合如成，所培在需养培要基养的基微中生加物入的伊生红长和。美蓝，如 果有大肠杆菌，菌落呈黑色，并带有金属光泽。
微生物的培养和应用
课题1 微生物的实验室培养
一、基础知识
（一）、培养基
1、概念：
人们按照微生物对营养物质的不同需求， 配置出供其生长繁殖的营养基质。
按
2、培养基的分类
物
固体培养基
理 性
微生物在固体培养基表面生长， 半固体培养基 可以形成肉眼可见的菌落。
质 液体培养基 划 分
（由一个细胞繁殖而 来的肉眼可见的子细 胞群体，就是菌落）
④待平 板冷却凝 固后，将 平板倒过 来放置。
问题讨论
1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。 你用什么办法来估计培养基的温度？
用手触摸，刚刚不烫手时
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
灼烧灭菌，防止瓶口的微生物的污染
3.为什么将平板倒置？
既可以防止皿盖上的水珠落入培养基， 又可以避免培养基中的水分过快的挥发。
4.灭菌： 培养基——高压蒸汽灭菌锅内灭菌 培养皿——干热灭菌箱灭菌
5.倒平板：待培养基冷却到50OC左右时倒平板，在
酒精灯附近倒平板。
①在火焰旁 右手拿锥形瓶 ，左手拔出棉 塞；
②右手拿锥 形瓶，使锥形 瓶的瓶口迅速 通过火焰；
③左手将培养 皿打开一条缝隙 ，右手将培养基 倒入培养皿，立 刻盖上皿盖。
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手
答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。
二、实验操作
㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
计算 称量 溶化 灭菌 倒平板
1.计算：（配置100ml）
物质 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水
重量
0.5g
1.0g
0.5g
4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之 间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？
不能，空气中的微生物可能会在此滋生。
倒平板后，将灭菌的培养基放入37℃的温室中 培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底，无杂菌污 染才可用来接种大肠杆菌 。
㈡.纯化大肠杆菌
微生物的接种的常用接种方法有： 平板划线法和稀释涂布平板法。
第一步:避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；
每次划线前:为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种， 使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末 端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐 渐减少，以便得到菌落。
结束后:及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和 感染操作者。
生长因子 如：乳酸杆菌的培养需添加维生素
霉菌的培养PH需调至酸性
细菌的培养PH需调至中性或微碱性
四类物质
Cncnc-micro
碳源、氮源 碳源、氮源
（二）.无菌技术
1.无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂 菌污染的方法。
获得纯净培养物的关键是：防止外来杂菌的入侵。
①空间、衣着、手 —— 清洁和消毒 ②器皿、接种用具、培养基 ——灭菌 ③操作在酒精灯火焰附近 ④避免已经灭菌的材料用具与周围物品相接触
加入青霉素的培养基:
分离酵母菌、霉菌等真菌
鉴别培养基 加入高浓度食盐的培养基:
据用途划分
分离金黄色葡萄球菌
选择培养基 不加氮源的无氮培养基:
分离固氮菌
不加含碳有机物的无碳培养基:
分离自养型微生物
3、营养成分：
一般都含有 碳源、氮源、水、无机盐 ，此外还要满足微生物生长对 PH 特殊营养物以质及 的要求。 O2
问题讨论
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？
以免接种环温度太高，杀死菌种。
3.在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一 次划线的末端开始划线？
划线后，线条末端细菌的数目比起始处要少，每 次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着 划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细 菌繁殖而来的菌落。
2.消毒与灭菌的概念及两wenku.baidu.com的区别
⑴消毒定义： 利用较为温和化学或物理方法，杀死物体表面或内
部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。
⑵灭菌的定义：
用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物 ，包括芽孢、孢子。
有些细菌在一定的条件下，细胞 里面形成一个椭圆形的休眠体。 芽孢的壁很厚，对干旱、高温等 恶劣的环境有很强的抵抗力。芽 孢又小又轻，可以随风飘散。当 环境适宜的时候，芽孢又可以萌 发，形成一个细菌
细菌、原生动物、真菌和植物 等产生的一种有繁殖作用的生 殖细胞。能直接发育成新个体。
(1)消毒的方法：
1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或
80 ℃ 下煮15min 3、化学药剂消毒法:用70%酒精;氯气消毒 水源 4、紫外线消毒 ……
(2)灭菌的方法：
2.0g
定溶至 100mL
2.称量: 准确称取各种成分 注意事项：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋 白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶 盖。
3.溶化：先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加少 量水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃 棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌 使之溶解，再加入琼脂，搅拌，待溶解后，加自来水 定溶至100mL。
1、灼烧灭菌
2、干热灭菌：160170 ℃下加热1-2h。
3、高压蒸汽灭菌： 100kPa、121 ℃下维 持15-30min.
1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物 被其他外来微生物污染外，还有什么目的？
答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。
2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒 或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。
平板划线的操作
一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离 单菌落的目的；
二是存留在划破处的单个细胞无法形成规则的 菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条 状的菌落。
问题讨论
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧 接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？ 为什么？
根霉
曲霉
青霉
培养基的种类
据化学成根示分据 剂划微 或分生 化物 学天的 药然代品在抑培谢配培制养特制养不基点而基需，成中要在，加的培用入微养以某生基 鉴种物中 别化的不加学生同入物长种某质，类种，促的指以进 微生物。例合如成，所培在需养培要基养的基微中生加物入的伊生红长和。美蓝，如 果有大肠杆菌，菌落呈黑色，并带有金属光泽。
微生物的培养和应用
课题1 微生物的实验室培养
一、基础知识
（一）、培养基
1、概念：
人们按照微生物对营养物质的不同需求， 配置出供其生长繁殖的营养基质。
按
2、培养基的分类
物
固体培养基
理 性
微生物在固体培养基表面生长， 半固体培养基 可以形成肉眼可见的菌落。
质 液体培养基 划 分
（由一个细胞繁殖而 来的肉眼可见的子细 胞群体，就是菌落）
④待平 板冷却凝 固后，将 平板倒过 来放置。
问题讨论
1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。 你用什么办法来估计培养基的温度？
用手触摸，刚刚不烫手时
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
灼烧灭菌，防止瓶口的微生物的污染
3.为什么将平板倒置？
既可以防止皿盖上的水珠落入培养基， 又可以避免培养基中的水分过快的挥发。
4.灭菌： 培养基——高压蒸汽灭菌锅内灭菌 培养皿——干热灭菌箱灭菌
5.倒平板：待培养基冷却到50OC左右时倒平板，在
酒精灯附近倒平板。
①在火焰旁 右手拿锥形瓶 ，左手拔出棉 塞；
②右手拿锥 形瓶，使锥形 瓶的瓶口迅速 通过火焰；
③左手将培养 皿打开一条缝隙 ，右手将培养基 倒入培养皿，立 刻盖上皿盖。
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手
答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。
二、实验操作
㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
计算 称量 溶化 灭菌 倒平板
1.计算：（配置100ml）
物质 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水
重量
0.5g
1.0g
0.5g
4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之 间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？
不能，空气中的微生物可能会在此滋生。
倒平板后，将灭菌的培养基放入37℃的温室中 培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底，无杂菌污 染才可用来接种大肠杆菌 。
㈡.纯化大肠杆菌
微生物的接种的常用接种方法有： 平板划线法和稀释涂布平板法。
第一步:避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；
每次划线前:为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种， 使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末 端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐 渐减少，以便得到菌落。
结束后:及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和 感染操作者。
生长因子 如：乳酸杆菌的培养需添加维生素
霉菌的培养PH需调至酸性
细菌的培养PH需调至中性或微碱性
四类物质
Cncnc-micro
碳源、氮源 碳源、氮源
（二）.无菌技术
1.无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂 菌污染的方法。
获得纯净培养物的关键是：防止外来杂菌的入侵。
①空间、衣着、手 —— 清洁和消毒 ②器皿、接种用具、培养基 ——灭菌 ③操作在酒精灯火焰附近 ④避免已经灭菌的材料用具与周围物品相接触
加入青霉素的培养基:
分离酵母菌、霉菌等真菌
鉴别培养基 加入高浓度食盐的培养基:
据用途划分
分离金黄色葡萄球菌
选择培养基 不加氮源的无氮培养基:
分离固氮菌
不加含碳有机物的无碳培养基:
分离自养型微生物
3、营养成分：
一般都含有 碳源、氮源、水、无机盐 ，此外还要满足微生物生长对 PH 特殊营养物以质及 的要求。 O2
问题讨论
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？
以免接种环温度太高，杀死菌种。
3.在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一 次划线的末端开始划线？
划线后，线条末端细菌的数目比起始处要少，每 次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着 划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细 菌繁殖而来的菌落。
2.消毒与灭菌的概念及两wenku.baidu.com的区别
⑴消毒定义： 利用较为温和化学或物理方法，杀死物体表面或内
部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。
⑵灭菌的定义：
用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物 ，包括芽孢、孢子。
有些细菌在一定的条件下，细胞 里面形成一个椭圆形的休眠体。 芽孢的壁很厚，对干旱、高温等 恶劣的环境有很强的抵抗力。芽 孢又小又轻，可以随风飘散。当 环境适宜的时候，芽孢又可以萌 发，形成一个细菌
细菌、原生动物、真菌和植物 等产生的一种有繁殖作用的生 殖细胞。能直接发育成新个体。
(1)消毒的方法：
1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或
80 ℃ 下煮15min 3、化学药剂消毒法:用70%酒精;氯气消毒 水源 4、紫外线消毒 ……
(2)灭菌的方法：
2.0g
定溶至 100mL
2.称量: 准确称取各种成分 注意事项：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋 白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶 盖。
3.溶化：先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加少 量水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃 棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌 使之溶解，再加入琼脂，搅拌，待溶解后，加自来水 定溶至100mL。
1、灼烧灭菌
2、干热灭菌：160170 ℃下加热1-2h。
3、高压蒸汽灭菌： 100kPa、121 ℃下维 持15-30min.
1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物 被其他外来微生物污染外，还有什么目的？
答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。
2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒 或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。