21微生物的实验室培养-吉林省长春市第二中学高中生物选修一课件2(共31张PPT)

2.0g
定溶至 100mL
2.称量: 准确称取各种成分 注意事项：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋 白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶 盖。
3.溶化：先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加少 量水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃 棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌 使之溶解，再加入琼脂，搅拌，待溶解后，加自来水 定溶至100mL。
加入青霉素的培养基:
分离酵母菌、霉菌等真菌
鉴别培养基 加入高浓度食盐的培养基:
据用途划分
分离金黄色葡萄球菌
选择培养基 不加氮源的无氮培养基:
分离固氮菌
不加含碳有机物的无碳培养基:
分离自养型微生物
3、营养成分：
一般都含有 碳源、氮源、水、无机盐 ，此外还要满足微生物生长对 PH 特殊营养物以质及 的要求。 O2
细菌、原生动物、真菌和植物 等产生的一种有繁殖作用的生 殖细胞。能直接发育成新个体。
(1)消毒的方法：
1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或
80 ℃ 下煮15min 3、化学药剂消毒法:用70%酒精;氯气消毒 水源 4、紫外线消毒 ……
(2)灭菌的方法：
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手
答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。
二、实验操作
㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
计算 称量 溶化 灭菌 倒平板
1.计算：（配置100ml）
物质 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水
重量
0.5g
1.0g
0.5g
2.消毒与灭菌的概念及两者的区别
⑴消毒定义： 利用较为温和化学或物理方法，杀死物体表面或内
部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。
⑵灭菌的定义：
用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物 ，包括芽孢、孢子。
有些细菌在一定的条件下，细胞 里面形成一个椭圆形的休眠体。 芽孢的壁很厚，对干旱、高温等 恶劣的环境有很强的抵抗力。芽 孢又小又轻，可以随风飘散。当 环境适宜的时候，芽孢又可以萌 发，形成一个细菌
第一步:避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；
每次划线前:为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种， 使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末 端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐 渐减少，以便得到菌落。
结束后:及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和 感染操作者。
根霉
曲霉
青霉
培养基的种类
据化学成根示分据 剂划微 或分生 化物 学天的 药然代品在抑培谢配培制养特制养不基点而基需，成中要在，加的培用入微养以某生基 鉴种物中 别化的不加学生同入物长种某质，类种，促的指以进 微生物。例合如成，所培在需养培要基养的基微中生加物入的伊生红长和。美蓝，如 果有大肠杆菌，菌落呈黑色，并带有金属光泽。
生长因子 如：乳酸杆菌的培养需添加维生素
霉菌的培养PH需调至酸性
细菌的培养PH需调至中性或微碱性
四类物质
Cncnc-micro
碳源、氮源 碳源、氮源
（二）.无菌技术
1.无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂 菌污染的方法。
获得纯净培养物的关键是：防止外来杂菌的入侵。
①空间、衣着、手 —— 清洁和消毒 ②器皿、接种用具、培养基 ——灭菌 ③操作在酒精灯火焰附近 ④避免已经灭菌的材料用具与周围物品相接触
微生物的培养和应用
课题1 微生物的实验室培养
一、基础知识
（一）、培养基
1、概念：
人们按照微生物对营养物质的不同需求， 配置出供其生长繁殖的营养基质。
按
2、培养基的分类
物
固体培养基
理 性
微生物在固体培养基表面生长， 半固体培养基 可以形成肉眼可见的菌落。
质 液体培养基 划 分
（由一个细胞繁殖而 来的肉眼可见的子细 胞群体，就是菌落）
1、灼烧灭菌
2、干热灭菌：160170 ℃下加热1-2h。
3、高压蒸汽灭菌： 100kPa、121 ℃下维 持15-30min.
1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物 被其他外来微生物污染外，还有什么目的？
答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。
2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒 或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。
4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之 间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？
不能，空气中的微生物可能会在此滋生。
倒平板后，将灭菌的培养基放入37℃的温室中 培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底，无杂菌污 染才可用来接种大肠杆菌 。
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㈡.纯化大肠杆菌
微生物的接种的常用接种方法有： 平板划线法和稀释涂布平板法。
1.平板划线法
平板划线的操作
一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离 单菌落的目的；
二是存留在划破处的单个细胞无法形成规则的 菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条 状的菌落。
问题讨论
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧 接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？ 为什么？
问题讨论
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？
以免接种环温度太高，杀死菌种。
3.在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一 次划线的末端开始划线？
划线后，线条末端细菌的数目比起始处要少，每 次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着 划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细 菌繁殖而来的菌落。
④待平 板冷却凝 固后，将 平板倒过 来放置。
问题讨论
1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。 你用什么办法来估计培养基的温度？
用手触摸，刚刚不烫手时
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
灼烧灭菌，防止瓶口的微生物的污染
3.为什么将平板倒置？
既可以防止皿盖上的水珠落入培养基， 又可以避免培养基中的水分过快的挥发。
4.灭菌： 培养基——高压蒸汽灭菌锅内灭菌 培养皿——干热灭菌箱灭菌
5.倒平板：待培养基冷却到50OC左右时倒平板，在
酒精灯附近倒平板。
①在火焰旁 右手拿锥形瓶 ，左手拔出棉 塞；
②右手拿锥 形瓶，使锥形 瓶的瓶口迅速 通过火焰；
③左手将培养 皿打开一条缝隙 ，右手将培养基 倒入培养皿，立 刻盖上皿盖。